检测试剂盒，在具体实例中，半成品通过W下工序组 装而成：由样品垫、巧光结合垫、包被膜、吸水纸顺次搭接粘贴在底板上，构成试纸条，可再 用现有技术中的7卡外壳，如图3所示，固定成检测卡，所述卡外壳涂有可供巧光仪扫描识 别的产品信息喷码。与写入信息的ID巧片。现有技术中的ID巧片采用的定量计算公式为 检测信号值与计算浓度的半对数直线方程式或其他计算方程式，可自动进行结果判定。分 装好的样本稀释液和其他配件组装成试剂盒。
[0096] 本发明所述巧光定量检测M化的免疫层析试剂盒，在使用时，如图3所示，可将巧 光试纸条组装在由塑料上壳和塑料下壳扣合而成的塑料卡外壳7 (检测卡）中，塑料上壳设 有两个开孔，加样孔9和显示窗8,加样孔9正对着巧光试纸条的样品垫1，结果显示窗8对 着包被膜3的检测区和质控区，该巧光试纸条可W从该塑料卡外壳7中取出。
[0097] 用来测试免疫层析试纸条的巧光定量光谱检测系统（免疫巧光检测仪），主要包 含巧光光源系统、检测系统及自动软件分析控制系统。
[009引本发明的一个实施例中，检测样本需要通过W下操作：吸取一定量例如lOul的样 本（血清或血浆）与990ul样本稀释液混合，混匀后吸取lOOul，往水平放置检测卡加样孔 加入，不要带入气泡，开始层析反应。反应15分钟，由巧光检测仪读取测试结果。
[0099] 本发明的实施例1-3所述的定量MBL免疫层析检测试剂盒与免疫巧光检测仪对 200例样本（血清/血浆）的测定结果比较表明：在0.2-l(K)ng/ml范围内测定MBL的准 确性高：定量曲线线性系数均大于0. 99,样本中含0. 5与Ing/ml浓度的MBL其准确度为 80%-120%，试剂盒检出限为0.化g/ml。相对一般采用的胶体金法（定性）和酶联免疫检 测法检测试剂盒的检测结果具有更好的灵敏度和特异性。具体如下表。
[0100]
【主权项】
1. 荧光定量检测MBL的免疫层析试剂盒，其特征在于：包括荧光试纸条和样本稀释液， 荧光试纸条包括底板（7)，底板（7)的上表面自一端至另一端依次粘贴有样品垫（1)、荧光 结合垫（2)、包被膜（3)和吸水纸（6)，样品垫（1)的里端和荧光结合垫（2)的一端搭接相 连，荧光结合垫（2)的另一端与所述包被膜（3)的一端搭接相连，包被膜（3)的另一端与所 述吸水纸（6)搭接相连，所述包被膜（3)包括检测区（4)和质控区（5);所述检测区（4)包 被有抗MBL单克隆抗体，所述质控区（5)包被羊抗兔IgG;所述荧光结合垫（2)中含有荧光 标记的MBL单克隆抗体和荧光标记的兔IgG。
2. 根据权利要求1所述的荧光定量检测MBL的免疫层析试剂盒，其特征在于：所述检 测区（4)包被的抗MBL单克隆抗体由用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交 瘤细胞株产生，用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株的保藏号为 CGMCC No. 10091，所述荧光结合垫（2)中含有荧光标记的MBL单克隆抗体由用作标记抗甘 露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株产生，用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克 隆抗体的杂交瘤细胞株的保藏号为CGMCC No. 10092,用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克 隆抗体的杂交瘤细胞株与用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株具 有不同的结合表位。
3. 根据权利要求2所述的荧光定量检测MBL的免疫层析试剂盒，其特征在于：所述质 控区（5)包被羊抗兔IgG的包被液浓度为0. 2-4mg/ml，用量为30 μ l/30cm ;所述检测区（4) 的MBL单克隆抗体的包被液浓度为0. 2-4mg/ml，用量为30 μ l/30cm。
4. 根据权利要求3所述的荧光定量检测MBL的免疫层析试剂盒，其特征在于：所述质 控区（5)包被羊抗兔IgG的包被液浓度为0. 5-1. 5mg/ml，所述检测区（4)的MBL单克隆抗 体的包被液浓度为l_2mg/ml。
5. 根据权利要求1至4中任何一项所述的荧光定量检测MBL的免疫层析试剂盒，其特 征在于：所述焚光结合垫（2)材质为玻璃纤维，焚光结合垫（2)由焚光标记的MBL单克隆抗 体和荧光标记的兔IgG混合后喷涂于玻璃纤维上经冻干制成，玻璃纤维上标记物中的荧光 标记的MBL单克隆抗体的浓度为2-5 μ g/ml，荧光标记的兔IgG的浓度为2-5 μ g/ml。
6. 根据权利要求5所述的荧光定量检测MBL的免疫层析试剂盒，其特征在于：所述样 本稀释液包括磷酸氢二钠浓度20mmol，氯化钠浓度150mmol，牛血清白蛋白浓度1% -2%， 吐温-20浓度0. 1 %，其余为水。
7. 根据权利要求6所述的荧光定量检测MBL的免疫层析试剂盒，其特征在于：所述荧 光结合垫（2)上焚光标记的激发电磁波的波长为310_550nm，发射波长为340_620nm的电磁 波。
8. 根据权利要求7所述的荧光定量检测MBL的免疫层析试剂盒，其特征在于：所述荧 光结合垫（2)采用以下方法制成： 制备荧光微粒标记的MBL抗体： 将18-22mg的荧光素或480-520mg荧光微球与50mgMBL单克隆抗体混合后，边搅拌边 缓慢加入1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基）-碳化二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，使其整个反 应体系中1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基）-碳化二亚胺含量为0. 1-0. 3mg，N-羟基琥珀酰亚 胺的含量为〇. 1-0. 2mg，在4°C避光反应过夜；用S印hadex G25凝胶柱将抗体荧光标记物进 行纯化，去除杂质，用荧光保护剂复溶；经冻干保存备用； 制备荧光微粒标记兔IgG : 将18-22mg的荧光素或480-520mg荧光微球与50mg兔IgG混合后，边搅拌边缓慢加入 1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基）-碳化二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，使其整个反应体系中 1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基）-碳化二亚胺含量为0. 1-0. 3mg，N_轻基瑭泊酰亚胺的含量 为0. 1-0. 2mg，在4°C避光反应过夜；用Sephadex G25凝胶柱将抗体焚光标记物进行纯化， 去除杂质，用荧光保护剂复溶；经冻干保存备用； 将上述制备好的荧光标记的MBL抗体和荧光微粒标记兔IgG混合，以使两种抗体浓度 分别都为2ug/ml，按500ul/30cm均匀铺涂在条形的玻璃纤维上，再将条形的玻璃纤维截断 制成所述荧光结合垫（2)。
9. 根据权利要求7所述的荧光定量检测MBL的免疫层析试剂盒，其特征在于：所述荧 光结合垫（2)亦可采用以下方法制成： 制备荧光微粒标记的MBL抗体： 将18-22mg的荧光素或480-520mg荧光微球标记物与65mgMBL单克隆抗体，置于4°C， 调节体系pH6. 8-9. 0, 一边搅拌一边缓慢加入0. 2-1 %戊二醛；反应2-5小时，用Sephadex G25凝胶柱将抗体荧光标记物进行纯化，去除杂质，用荧光保护剂复溶；经冻干保存备用； 制备荧光微粒标记兔IgG : 将18-22mg的荧光素或480-520mg荧光微球标记物与兔IgG混合后，置于4°C，调节体 系pH6. 8-9. 0, 一边搅拌一边缓慢加入0. 2-1 %戊二醛；反应2-5小时，用S印hadex G25凝 胶柱将抗体荧光标记物进行纯化，去除杂质，用荧光保护剂复溶；经冻干保存备用； 将上述制备好的荧光微粒标记的MBL抗体和荧光微粒标记兔IgG混合，以使两种抗体 浓度分别都为2ug/ml，按500ul/30cm均匀铺涂在条形的玻璃纤维上，再将条形的玻璃纤维 截断制成所述荧光结合垫（2)。
10. 根据权利要求7所述的荧光定量检测MBL的免疫层析试剂盒，其特征在于：所述荧 光结合垫（2)还可采用以下方法制成： 制备荧光微粒标记的MBL抗体： 用pH8. 0-pH9. 6碳酸盐缓冲液溶解45mg MBL单克隆抗体，用pH8. 0-pH9. 6碳酸盐缓冲 液溶解或悬浮18_22mg荧光素或480-520mg荧光微球；边搅拌边将上述溶解的荧光素或荧 光微球渐渐加入抗体溶液中，加完后，继续避光搅拌10-14小时，结合完毕后，装入透析袋 中，用上述碳酸缓冲盐水透析过夜，用荧光保护剂复溶，经冻干保存备用； 制备荧光微粒标记兔IgG : 用pH8. 0-pH9. 6碳酸盐缓冲液溶解45mg兔IgG，用pH8. 0-pH9. 6碳酸盐缓冲液溶解或 悬浮18-22mg荧光素或480-520mg荧光微球；边搅拌边将上述溶解的荧光素或荧光微球渐 渐加入球蛋白溶液中，加完后，继续避光搅拌10-14小时，结合完毕后，装入透析袋中，用上 述碳酸缓冲盐水透析过夜，用荧光保护剂复溶，经冻干保存备用； 将上述制备好的荧光微粒标记的MBL抗体和荧光微粒标记兔IgG混合，以使两种抗体 浓度分别都为2ug/ml，按500ul/30cm均匀铺涂在条形的玻璃纤维上，再将条形的玻璃纤维 截断制成所述荧光结合垫（2)。
【专利摘要】一种荧光定量检测MBL的免疫层析试剂盒，包括荧光试纸条和样本稀释液，荧光试纸条包括底板，底板的上表面自一端至另一端依次粘贴有样品垫、荧光结合垫、包被膜和吸水纸，样品垫的里端和荧光结合垫的一端搭接相连，荧光结合垫的另一端与包被膜的一端搭接相连，包被膜的另一端与吸水纸搭接相连，包被膜包括检测区和质控区；检测区包被有抗MBL单克隆抗体，质控区包被羊抗兔IgG；荧光结合垫中含有荧光标记的MBL单克隆抗体和荧光标记的兔IgG。其目的是提供一种特异性强，灵敏度高，获得检测结果的时间短，操作方式简便，检测结果准确可靠的荧光定量检测MBL的免疫层析试剂盒。CGMCC NO.1009120141125
【IPC分类】G01N33-542, G01N33-577
【公开号】CN104569411
【申请号】CN201510005651
【发明人】杨明非, 张庶民
【申请人】佛山市天海医药科技有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2015年1月7日