：浓硫酸（30:70, v/v) lh， 依次用超纯水、无水乙醇和超纯水彻底冲洗；其目的是为了进行清洁和形成粗糙表面。
[0011] (2)硅烷化反应：将玻璃棒下半部分浸入ATPES (3-氨丙基三乙氧基硅烷，有市 售。）乙醇溶液中，其中ATPES:超纯水：无水乙醇的体积比为5:5:90,室温下反应24h ; (3) 氨基的固定：超纯水和纯乙醇依次冲洗玻璃棒，放入真空干燥箱中80°C并通入氮 气氮吹15h ; (4)玻璃棒的活化：玻璃棒浸入2. 5%的戊二醛PBS (磷酸盐缓冲液，即1L中含有0. 2g KH2P04,0.2 g KC1，2.9 g Na2HP04.12H20,8.8 g NaCl的溶液，配制缓冲液时所需的试剂均有 市售。）溶液中5h，之后用超纯水(超纯水机制备）冲洗； (5) 偶联反应：玻璃棒浸入单克隆杂交瘤细胞株SMZ-5D3分泌的单克隆抗体PBS溶液， 0? 5mg/mL抗体+0? 05 mg/mL似队中4°C轻微揽祥24 h ; (6) 将玻璃棒上未反应的戊二醛用乙醇胺水溶液（0. 3M)去活化1 h ; (7) 稳固共价键：置于PBS+0. 05 mg/mL NaN3+0. 2mg/mL恥0他113混合溶液中4°C反应 48h，将酰亚胺还原为胺使共价键结合更加牢固；所述固相载体为高硼硅玻璃棒、高纯硅玻 璃棒或石英玻璃棒。
[0012] 所述的单克隆抗体指的是对磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺间二 甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶和磺胺 噻唑有特异性反应的单克隆杂交瘤细胞株SMZ-5D3分泌的。
[0013] 其中SMZ代表磺胺甲噁唑，5代表细胞融合过程使用第5块96孔板，D3代表96孔 板的横纵编号，96孔板中1-12为横向编号，A-H为纵向编号。D3代表融合后的杂交瘤细胞 株在96孔板中的位置。
[0014] 本发明进一步公开了吸附磺胺类药物的免疫亲和搅拌棒在制备吸附10种磺胺类 药物的应用。所述吸附磺胺类药物指的是磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺 间二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶和 磺胺噻唑。
[0015] 本发明的方法对组分净化的同时还可提供定性信息。本发明的提纯方法结合色谱 法可以使样品中的待测组分得到有效分离和浓缩，便于10种磺胺类药物的含量的检测，弥 补了单纯免疫测定技术直接测定样本的信息量太少、定量准确差，或理化方法选择性低等 不足，体现了免疫学技术和常规理化技术在分析机制的互补性。
[0016]
【主权项】
1. 一种吸附磺胺类药物的免疫亲和搅拌棒，其特征在于是由固相载体和与其偶联的 磺胺甲噁唑单克隆抗体组成，其中固相载体与偶联的磺胺甲噁唑鼠单克隆抗体的偶联长度 与重量比为Icm:2mg;所述的单克隆抗体是由单克隆杂交瘤细胞株SMZ-5D3注入小鼠腹 腔，纯化小鼠腹水得到；所述的固相载体为10cmX4mm玻璃棒，偶联抗体的有效长度为2. 5 cm。
2. -种权利要求1所述吸附磺胺类药物的免疫亲和搅拌棒的制备方法，其特征在于按 如下的步骤进行： (1) 固相载体表面的处理：将玻璃棒下半部分浸入到双氧水和浓硫酸的混合溶液中 Ih,依次用超纯水、无水乙醇和超纯水彻底冲洗；其中双氧水：浓硫酸的体积比30:70 ; (2) 硅烷化反应：将玻璃棒下半部分浸入ATPES乙醇溶液中，其中ATPES:超纯水：无水 乙醇的体积比为5:5:90,室温下反应24h; (3) 氨基的固定：采用超纯水和纯乙醇依次冲洗玻璃棒，放入真空干燥箱中80°C并通 入氮气氮吹15h; (4) 玻璃棒的活化：玻璃棒浸入2. 5% (w/w)的戊二醛PBS溶液中5h，之后用超纯水冲 洗； (5) 偶联反应：玻璃棒浸入单克隆杂交瘤细胞株SMZ-5D3分泌的单克隆抗体PBS溶液 (0? 5mg/mL抗体 +0? 05mg/mLNaN3)中 4°C轻微揽祥 24h; (6) 将玻璃棒上未反应的戊二醛用0. 3M乙醇胺水溶液去活化Ih; (7) 稳固共价键：置于PBS+0. 05mg/mLNaN3+0.2mg/mL恥0他113混合溶液中4°C反应 48h，将酰亚胺还原为胺使共价键结合更加牢固；所述固相载体为高硼硅玻璃棒、高纯硅玻 璃棒或石英玻璃棒。
3. 权利要求2所述吸附磺胺类药物的免疫亲和搅拌棒的制备方法，其特征在于所述的 固相载体表面使用体积比30:70的双氧水：浓硫酸进行清洁和形成粗糙表面。
4. 权利要求2所述吸附磺胺类药物的免疫亲和搅拌棒的制备方法，其特征在于所述的 单克隆抗体指的是对磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺 间甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶和磺胺噻唑磺胺类药 物具有特异反应的单克隆杂交瘤细胞株SMZ-5D3分泌的单克隆抗体。
5. 权利要求1所述吸附磺胺类药物的免疫亲和搅拌棒在制备吸附10种磺胺类药物方 面的应用。
6. 权利要求5所述的应用，其中所述的磺胺类药物指的是磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噁唑、 磺胺甲基嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺嘧啶、磺胺甲氧哒 嗪、磺胺对甲氧嘧啶和磺胺噻唑。
【专利摘要】本发明公开了一种吸附磺胺类药物的免疫亲和搅拌棒及其制备方法与应用，其特征在于是由固相载体和与其偶联的磺胺甲噁唑组成，其中固相载体与偶联的磺胺甲噁唑的偶联长度与重量比为1cm:2mg。本发明的提取方法结合色谱法可以使样品中的待测组分得到有效分离和浓缩，便于磺胺类药物含量的检测，弥补了单纯免疫测定技术直接测定样本的信息量太少、定量准确差，或理化方法选择性低等不足，体现了免疫学技术和常规理化技术在分析机制的互补性。
【IPC分类】G01N33-577
【公开号】CN104698177
【申请号】CN201510116426
【发明人】李存, 张春元, 骆鹏杰, 姚凯, 秦顺义, 张明霞, 何建丽
【申请人】天津农学院
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2015年3月18日