吸附磺胺类药物的免疫亲和搅拌棒及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品安全检测技术领域，涉及一种免疫亲和搅拌棒及其制备方法。特 别是一种吸附磺胺类药物的免疫亲和搅拌棒及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0002] 随着我国经济的发展，人们生活水平的日益提高，对各种动物源性食品的需求量 也逐渐增大，食品安全问题自然成为大家关注的焦点。近年来关于兽药残留引起的对人身 体健康造成危害的报道屡见不鲜，相关食品安全部门也致力于检测方法的研究。由于生物 样品的成分复杂、药物与样品成分之间易互相结合和残留药物浓度低等均给样品中药物的 提取净化带来了很大的困难，因此分析方法的选择性和灵敏度直接决定了检测的成功与 否。
[0003] 免疫亲和搅拌棒（Imunoaffinity stir bar)是免疫亲和固相微萃取 (Immunoaffinity solid phase microextraction, Immunoaffinity SPME) 的一种 装置形式，将固相微萃取（Solid phase microextraction, SPME)与免疫亲和色谱 (IAC, immunoaff inity chromatography)相结合，既具有SPME易于操作、使用溶剂少和节 省时间的优点，又有免疫亲和色谱高度选择性和高亲和性的特点，使SPME在兽药残留分析 中，选择性、亲和性和灵敏度方面得到了很大的提升。Immunoaffinity stir bar常被用作 样品的萃取，尤其适用于复杂基质中痕量分析物的提取，与多种检测手段结合使用进行分 析测定，具有广阔的应用前景。
[0004] 磺胺类药物是一类传统的人工合成抗菌药物，用于预防和治疗细菌感染性疾病； 根据Wood-Fields学说，对氨基苯甲酸（p-aminobenzoic acid, PABA)是叶酸的组成部分， 叶酸是微生物生长的必要物质，也是构成体内叶酸辅酶的基本原料。磺胺类药物与PABA的 结构相似，与PABA产生竞争性拮抗，干扰细菌的酶系统对PABA的利用，抑制细菌中二氢叶 酸的合成，影响细菌核酸生成，进而阻止了细菌的生长繁殖。
[0005] 磺胺类药物的抗菌谱包括革兰氏阴性菌及阳性菌，还包括少数真菌和衣原 体，另外，磺胺喹噁啉对球虫有着良好的治疗效果，而磺胺间甲氧嘧啶能有效抑制弓形 虫。目前常用的磺胺类药物主要有磺胺二甲嘧啶（Sulfamethazine，SM 2)、磺胺甲噁 唑（Sulfamethoxazole, SMZ)、横胺甲基啼陡（Sulfamerazine, SM!)、横胺间二甲氧 啼陡（Sulfadimethoxine，SDM)、横胺间甲氧啼陡（Sulfamonomethoxine, SMM )、 磺胺喹噁啉（Sulfaquinoxaline, SQ)、磺胺啼陡（Sulfadiazine, SD)、磺胺甲氧咕嗪 (Sulfamethoxypyridazine, SMP)、横胺对甲氧啼陡（Sulfamethoxydiazine, SMD)和横胺 噻唑（Sulfathiazole, ST)等。由于性质稳定，抗菌谱较广，成本小，磺胺类药物被广泛用 于防治食源性动物的细菌感染性疾病如球虫感染，呼吸道和消化道感染，伤寒和副伤寒，脑 膜炎，猪萎缩性鼻炎，马腺疫以及家畜子宫炎等。
[0006] 但是随着药物的广泛使用，越来越多的问题不断显现出来。畜禽养殖过程中使用 兽药未遵循停药期、大量过量地使用预防治疗用药以及将磺胺类药物用作畜禽生长添加剂 等，不当的使用造成磺胺类药物在食源性动物组织中残留，而长期食用含有磺胺类药物残 留的食品，就可能引起磺胺类药物在体内的逐渐蓄积，使人类健康受到威胁，主要影响有： (1)导致细菌耐药性以及破坏生态平衡，（2)引起过敏反应，（3)损害免疫系统和血液系统， (4)损害泌尿系统，（5)制畸致癌致突变。 近几十年来，各种食品安全监测机构、各类从事相关工作的研究人员针对食品和饲料 中磺胺类药物的残留分析进行了深入全面的研究。目前用于磺胺类药物检测的主要技术 有：酶联免疫吸附分析（ELISA)、毛细管电泳法（CE)、气相色谱法（GC)、和气相色谱-质 谱联用分析法（GC/MS)及高效液相色谱（HPLC)等方法。ELISA法主要用于半定量快速筛 选；GC和GC/MS由于需衍生化，操作较为麻烦；HPLC分析较准确且过程相对较简便，但检 测限比较高。本由于样品基质成分复杂，在萃取过程中很容易将待测药物与其他性质相 似的成分一起提取出来，给检测造成困难。因此，在检测之前"净化"工作是必不可少的， 通常采用净化方法主要有液-液萃取（LLE)和固相萃取（SPE)。LLE过程需要使用大量有 机溶剂，而一些有机溶剂性质稳定，不易降解，对环境造成污染，而且操作繁琐。SPE操作 简单、省时，但特异性不强是其主要的缺点。Immunoaffinity SPME技术首次于2001年 被提出，用Immunoaffinity stir bar净化磺胺类药物目前还尚未见报道，更无商品化的 Immunoaffinity stir bar 出售。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供一种吸附10种磺胺类药物的免疫亲和搅拌棒及其制备方 法。
[0008] 为实现上述目的本发明公开了如下的技术内容： 一种吸附磺胺类药物的免疫亲和搅拌棒，其特征在于是由固相载体和与其偶联的磺胺 甲噁唑单克隆抗体组成，其中固相载体与偶联的磺胺甲噁唑鼠单克隆抗体的偶联长度与重 量比为1 cm :2 mg;所述的单克隆抗体是由单克隆杂交瘤细胞株SMZ-5D3注入小鼠腹腔， 纯化小鼠腹水得到；所述的固相载体为10 cmX4 mm玻璃棒，偶联抗体的有效长度为2.5 cm。
[0009] SMZ-5D3中SMZ-磺胺甲噁唑，5代表细胞融合过程使用第5块96孔板，D3代表96 孔板的横纵编号，96孔板中1-12为横向编号，A-H为纵向编号。D3代表融合后的杂交瘤细 胞株在96孔板中的位置。
[0010] 本发明进一步公开了吸附磺胺类药物的免疫亲和搅拌棒的制备方法，其特征在于 按如下的步骤进行： (1)固相载体表面的处理：将玻璃棒下半部分浸入到双氧水