一种测定水产品中间氨基苯甲酸乙酯残留量的方法
【技术领域】
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[0001]本发明涉及水产品中药物残留的理化检测技术领域，具体涉及一种测定水产品中间氨基苯甲酸乙酯残留量的方法。
【背景技术】
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[0002]我国是渔业大国，水产品的总产量多年来居世界首位，极大满足了人们对水产品消费的需求。但是，高密度、规模化的养殖也带来的一些负面影响，如水环境的污染，水产品中各种药物残留超标等。水产品体内的药物会通过食物链在生物体内累积浓缩并最终传递到人体，对人的食用安全带来了潜在危害。间氨基苯甲酸乙酯商品名称为鱼安定，常以间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐形式存在，其已经广泛应用到水产品的麻醉过程中。虽然水产品体内间氨基苯甲酸乙酯残留的分析方法有高效液相色谱法(HPLC)和高效液相色谱三重四级杆串联质谱法(HPLC-MS/MS)，但由于水产样品的脂肪和蛋白质等干扰物质含量高，导致样品制备方法复杂:需采用溶剂萃取、固相萃取、氮气吹干、悬蒸浓缩等多种前处理技术进行纯化、富集。
【发明内容】
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[0003]本发明的目的是提供一种测定水产品中间氨基苯甲酸乙酯的残留量方法，它克服了现有的方法前处理复杂或要使用多种固相萃取小柱净化的缺点，提供一种混合溶液提取，QuEChERS试剂包净化，离心后用配置有自动进样器的HPLC-MS/MS直接测定水产品中氨基苯甲酸乙酯残留量的方法，该方法干扰较少，前处理简便、快捷、节省溶剂，准确、灵敏。
[0004]为了解决【背景技术】所存在的问题，本发明是采用以下技术方案:先将水产样品经混合溶液提取，QuEChERS试剂包净化，离心后用HPLC-MS/MS分析测定水产品中的药物残留量，具体步骤如下:
[0005]1、制备:鱼体解剖、匀浆，_20°C冰箱中低温保存；
[0006]2、提取:实验过程中，鱼糜室温下融解。称取鱼糜样品于具盖离心试管中，加提取溶液充分浸润，漩涡振荡，加入QuEChERS试剂盒一振荡，离心；
[0007]3、净化:移取样品提取液上清液于离心管中，加入QuEChERS试剂盒二，涡旋振荡，离心，吸取上清液经0.22 μ m有机相滤膜过滤后进行HPLC-MS/MS分析。
[0008]所述的混合溶液由30% (V/V)醋酸钠缓冲液(PH4.0)的乙腈组成；所述的QuEChERS试剂盒一由4g无水硫酸镁、Ig氯化钠组成；所述的QuEChERS试剂盒二由300mgN-丙基乙二胺键合固相吸附剂组成。
[0009]本发明的仪器参数为:液相色谱:带自动进样器，毛细管电压3.2kV ;壳气45Arb ；辅助气1Arb ;毛细管温度350°C ;蒸发温度200°C ;峰宽Q10.7Da、Q30.7Da，碰撞气压力1.5mTorr ;反相色谱柱为kromasil C18反相色谱柱(2.1mmX 50mm, 3.0 μ m);液体自动进样器:进样体积5 μ L ;三元流动相，流动相A:0.5%甲酸溶液(V/V)、流动相B:甲醇、流动相C:乙腈。
[0010]本发明具有以下有益效果:它克服了现有的方法前处理复杂或要使用多种固相萃取小柱净化的缺点，提供一种混合溶液提取，QuEChERS试剂包净化，离心后用配置有自动进样器的HPLC-MS/MS直接测定水产品中氨基苯甲酸乙酯残留量的方法，该方法干扰较少，前处理简便、快捷、节省溶剂，准确、灵敏。
【具体实施方式】
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[0011]本【具体实施方式】采用以下技术方案:先将水产样品经混合溶液提取，QuEChERS试剂包净化，离心后用HPLC-MS/MS分析测定水产品中的药物残留量，具体步骤如下:
[0012]1、制备:鱼体解剖、匀浆，_20°C冰箱中低温保存；
[0013]2、提取:实验过程中，鱼糜室温下融解。称取鱼糜样品于具盖离心试管中，加提取溶液充分浸润，漩涡振荡，加入QuEChERS试剂盒一振荡，离心；
[0014]3、净化:移取样品提取液上清液于离心管中，加入QuEChERS试剂盒二，涡旋振荡，离心，吸取上清液经0.22 μ m有机相滤膜过滤后进行HPLC-MS/MS分析。
[0015]所述的混合溶液由30% (V/V)醋酸钠缓冲液(PH4.0)的乙腈组成；所述的QuEChERS试剂盒一由4g无水硫酸镁、Ig氯化钠组成；所述的QuEChERS试剂盒二由300mgN-丙基乙二胺键合固相吸附剂组成。
[0016]本【具体实施方式】的仪器参数为:液相色谱:带自动进样器，毛细管电压3.2kV ;壳气45Arb ;辅助气1Arb ;毛细管温度350°C ;蒸发温度200°C ;峰宽Q10.7Da、Q30.7Da，碰撞气压力1.5mTorr ;反相色谱柱为kromasil C18反相色谱柱(2.1mmX 50mm, 3.0ym);液体自动进样器:进样体积5 μ L ;三元流动相，流动相A:0.5%甲酸溶液(V/V)、流动相B:甲醇、流动相C:乙腈。
[0017]本【具体实施方式】克服了现有的方法前处理复杂或要使用多种固相萃取小柱净化的缺点，提供一种混合溶液提取，QuEChERS试剂包净化，离心后用配置有自动进样器的HPLC-MS/MS直接测定水产品中氨基苯甲酸乙酯残留量的方法，该方法干扰较少，前处理简便、快捷、节省溶剂，准确、灵敏。
[0018]实施例:
[0019]实施例一:1、水产品样品制备:鲤鱼组织经过匀浆，保存在_20°C冰箱中；
[0020]2、提取:鱼糜室温下融解，称取2g样品于50mL具盖离心管中，加1mL混合溶液充分浸润，涡旋混匀；加入QuEChERS试剂盒I (由4g无水硫酸镁、Ig氯化钠组成)，立即手持振荡，防止无水硫酸镁结块，以10000r/min离心1min ；
[0021 ] 3、净化:移取样品提取液上清液ImL于2mL离心管中，加入QuEChERS试剂盒2 (由300mg N-丙基乙二胺键合固相吸附剂组成)，祸旋振荡2min,以10000r/min离心5min,吸取上清液经0.22 μ m有机相滤膜过滤后进行HPLC-MS/MS分析；
[0022]仪器参数:HPLC_MS/MS:带自动进样器，毛细管电压3.2kV ;鞘气45Arb ;辅助气1Arb ;毛细管温度350°C ;蒸发温度200°C ;峰宽Q10.7Da、Q30.7Da，碰撞气压力1.5mTorr ；反相色谱柱为kromasil C18反相色谱柱(2.1mmX 50mm, 3.0ym);液体自动进样器:进样体积 5 μ L ;
[0023]液体自动进样器:进样体积5 μ L。
[0024]实施例二:将氨基苯甲酸乙酯标样稀释配成0.001?lmg/L共7档浓度的系列混合工作液，以浓度一氨基苯甲酸乙酯SRM离子峰面积绘制标准曲线，得到相关系数(R2);以不断降低进样浓度直至峰面积高于基线噪音3倍作为检出极限(LOD);分别在空白鱼样品中添加0.025、0.05、0.5mg/kg三档浓度的氨基苯甲酸乙酯标样,提取、净化后进样,计算回收率，重复3次。
【主权项】
1.一种测定水产品中间氨基苯甲酸乙酯残留量的方法，其特征在于先将水产样品经混合溶液提取，QuEChERS试剂包净化，离心后用HPLC-MS/MS分析测定水产品中的药物残留量，具体步骤如下: (1)、制备:鱼体解剖、匀浆，-20°C冰箱中低温保存； (2)、提取:实验过程中，鱼糜室温下融解。称取鱼糜样品于具盖离心试管中，加提取溶液充分浸润，漩涡振荡，加入QuEChERS试剂盒一振荡，离心； (3)、净化:移取样品提取液上清液于离心管中，加入QuEChERS试剂盒二，涡旋振荡，离心，吸取上清液经0.22 μ m有机相滤膜过滤后进行HPLC-MS/MS分析。2.一种测定水产品中间氨基苯甲酸乙酯残留量的方法，其特征在于所述的混合溶液由30% (V/V)醋酸钠缓冲液(pH4.0)的乙腈组成；所述的QuEChERS试剂盒一由4g无水硫酸镁、Ig氯化钠组成；所述的QuEChERS试剂盒二由300mg N-丙基乙二胺键合固相吸附剂组成。3.一种测定水产品中间氨基苯甲酸乙酯残留量的方法，其特征在于仪器参数为:液相色谱:带自动进样器，毛细管电压3.2kV ;壳气45Arb ;辅助气1Arb ;毛细管温度350°C ;蒸发温度200°C ;峰宽Q10.7Da、Q30.7Da，碰撞气压力1.5mTorr ;反相色谱柱为kromasil C18反相色谱柱(2.1mmX 50mm, 3.0 μ m);液体自动进样器:进样体积5 μ L ;三元流动相,流动相A:0.5%甲酸溶液(V/V)、流动相B:甲醇、流动相C:乙腈。
【专利摘要】一种测定水产品中间氨基苯甲酸乙酯残留量的方法，它涉及水产品中药物残留的理化检测技术领域，先将水产样品经混合溶液提取，QuEChERS试剂包净化，离心后用HPLC-MS/MS分析测定水产品中的药物残留量，具体步骤如下：制备：鱼体解剖、匀浆，-20℃冰箱中低温保存；提取；净化：吸取上清液经0.22μm有机相滤膜过滤后进行HPLC-MS/MS分析；它克服了现有的方法前处理复杂或要使用多种固相萃取小柱净化的缺点，提供一种混合溶液提取，该方法干扰较少，前处理简便、快捷、节省溶剂，准确、灵敏。
【IPC分类】G01N30/06, G01N30/02
【公开号】CN105021717
【申请号】CN201410174995
【发明人】李晋成, 刘欢, 宋怿
【申请人】中国水产科学研究院
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2014年4月29日