08年第7版，第454-455页）。 阳133] 示例性的Gal。、Gall和Gal2结构如下所示，其中，GlcNAc代表N-乙酷葡萄糖胺， Man代表甘露糖，Gal代表半乳糖，Fuc代表岩藻糖。 阳 134]
[0135] 如本文所用，术语"特异度"、"灵敏度"、"符合率"均与相对应的医学统计学术语具 有相同的含义。"特异度"（specificity)是指诊断为"非癌症"的病例中经试剂盒检测为 阴性的比例。"灵敏度"（sensitivity)是指病理学诊断为"癌症"的病例中，经试剂盒检测 为阳性的比例。"符合率"（accuracy)是指真阳性样本量与真阴性样本量之和占总样本量 的比例，反映试剂盒检测结果与受试者是否罹患癌症的真实情况相符合的程度。 阳136] 如本文所用，术语"阔值"、"cut-off值"、"截断值"、"界值"和"参考值"、可W互换 使用，指的是用来判断检测结果的标准，即临界值，检测结果高于阔值即视为阳性，低于阔 值即视为阴性。
[0137] 如本文所用，术语"临床获益"，指经过某种治疗达到病情稳定或缓解的情况，其中 CR、PR和SD具有与实体瘤疗效评价标准（RECIST标准）中相应术语完全相同的含义，即CR(Completeresponse)肿瘤完全缓解、PR(Partialresponse)肿瘤部分缓解和SD(St油le disease)疾病稳定。CR、PR和SD运Ξ项指标作为临床获益人群的界定，与此相反的是PD(Progressivedisease)即疾病进展。 阳13引如本文所用，术语"健康人/对象"是指无任何已知的良性和恶性疾病、外表正常， 无任何可见疾病症状的人/对象。
[0139] 本文所用术语"恶性肿瘤患者"是指经组织病理报告确诊为患有恶性肿瘤的患者。 所述恶性肿瘤包括但不限于：肝癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、肠癌、食管癌、膜腺癌、胆管癌、肾 癌、乳腺癌、前列腺癌、鼻咽癌、宫颈癌、膀脫癌、子宫内膜癌。在本发明的一些实例中，所述 恶性肿瘤处于选自下组的阶段：早期癌症、中晚期癌症等。
[0140] 如本文所用，术语"非癌相关疾病患者"或"良性疾病患者"是指：经病理学诊断 (例如临床生化、影像或组织病理报告）确诊为不是癌症但患有良性相关疾病的患者，如在 肺癌试验中指确诊为不是肺癌但患有肺炎、肺结核等肺部良性相关疾病的患者，在肝癌试 验中指确诊为不是肝癌但患有肝炎、肝硬化等肝部良性相关疾病的患者，在结直肠癌试验 中指确诊为不是结直肠癌但患有炎症、结直肠息肉等结直肠良性相关疾病的患者，在乳腺 癌试验中指确诊为不是肺、乳腺癌癌但患有乳腺炎、乳腺增生等乳腺良性相关疾病的患者。 阳14U如本文所用，术语"非恶样本"是指：健康人化及良性疾病患者（即经病理学诊断 确诊为不是癌症但患有良性相关疾病的患者）。
[0142] 如本文所用，术语"高危人群/群体"是指有发生肿瘤的高度危险度的人群/群体， 尤指根据年龄和生活习惯等条件筛选出来的自觉没有罹患肿瘤的人群，不W临床指标作为 划分依据。在肿瘤的高危人群中发生肿瘤的可能性远远高于一般人群。W肺癌为例，多年 吸烟的男性老年人是高危人群；再如肝癌，乙型肝炎病毒感染者为高危人群。
[0143] 如本文所用，术语"恶性肿瘤筛查"是指：通过特定检测方法定期地对健康人群/ 群体进行检查，将外表健康的可能患病者和处于亚临床症状的人/对象鉴别出来，并期望 通过进一步的诊断程序能早期发现患者，经早期治疗达到预防疾病发生或减缓疾病造成的 残疾和死亡，使患者获得较好的预后和生存质量（方积乾，柳青，《中国肿瘤》，2002,11(1): 10-11)。
[0144] 如本文所用，术语"恶性肿瘤早期诊断"是指：一种专口针对肿瘤早期患者的诊疗 方法，其目的在于早发现早治疗，从而减轻患者痛苦和精神、经济负担，并争取通过肿瘤早 期诊断、治疗让肿瘤患者早日康复。
[0145] 血液（巧巧血清、血浆巧仓血）I施及其分离巧纯化 阳146] 在本发明的实施方式中，可采集对象的血液样品并用本领域中已知的常规方法分 离和保存全血、血清和/或血浆。可采用新鲜或冻存血液、血清或血浆进行本发明的测试。 所述血液样品可获自各种哺乳动物对象，优选人、猴、狗、马、牛、羊、猪、鼠、兔等。本领域技 术人员可W理解，由于在成分上的区别，当采用受试者的血浆样本和血清样本分别进行检 测时，Gal比可能会略有不同。出于便于定量和比较的目的，在本发明中血清样本是优选的。 阳147] 分离IgG的方法是本领域普通技术人员已知的，所述方法包括但不限于：IgG纯化 柱、盐析法、有机溶剂沉淀法、聚乙二醇置换法、液相层析、亲合层析（例如蛋白A亲合法、聚 酷胺复合膜亲合法），只要所述方法不破坏IgG上所连N-糖链即可。可市售获得IgG分离 试剂盒，例如购自ThermoFisherScientific。
[0148] 在本发明的一个实施方式中采用了IgG纯化柱来分离样品中的IgG,优选采用蛋 白A纯化柱，并采用与纯化柱配套的弱碱性结合缓冲溶液和弱酸性淋洗缓冲溶液，更优选 所述纯化柱为高通量纯化柱，例如可同时处理96个样品的纯化柱。
[0149] I施表而N-糖链及其分离、纯化巧分析
[0150] 可采用本领域中已知的方法从IgG上分离N糖链，包括但不限于：酶法，例如采用 糖巧酶，优选糖巧酶PNGaseF;化学法，例如采用糖蛋白阱解试剂，如ADM0155A阱解试剂 盒。 阳151] 从IgG上分离N糖链后，可采用本领域中已知的方法对N糖链进行分离和/或纯 化，所述方法包括但不限于：多孔石墨化碳PGC固相萃取法、多糖纯化柱、凝集素亲合法（如 连续凝集素亲合色谱SLAC)、毛细管电泳、高效液相色谱等。
[015引在本发明的一个实施方式中，采用了多孔石墨化碳PGC固相萃取法分离N糖链，其 中采用了乙腊：水：Ξ氣醋酸=80:19. 9:0. 1活化PGC，采用水：Ξ氣醋酸=99. 9:0. 1平 衡PGC，并采用乙腊：水：Ξ氣醋酸=25:74. 95:0. 05的混合溶剂洗脱糖链（所述比例为体 积比）。
[0153] 可采用本领域中已知的方法对IgG表面水平双天线复杂型N糖链末端去半乳糖 (Gal。)、半乳糖糖链（Gall和Gal2)的丰度进行测定，只要所述方法可对N-糖链中半乳糖化 水平进行定量。所述方法包括但不限于：质谱法，例如基质辅助激光解析飞行时间质谱法 MLDI-MS、快原子轰击质谱FAB-MS、电喷雾质谱ES-MS;液相色谱法；液相色谱-质谱联用 法；糖忍片技术；核磁共振NMR或W上方式的任合组合。
[0154] 在本发明中优选采用基质辅助激光解析离子化（MALDI)质谱（M巧技术对IgG表 面双天线复杂型N糖链的末端半乳糖化程度进行高通量快速检测。该技术具有如下优点： 阳1巧]1)实现了对N-糖链游离后的直接快速检巧U，与高效液相色谱（HPLC)W及液相色 谱-质谱化C-M巧联用相比，避免了长时间的色谱分离过程；
[0156] 2)与常规的MLDI质谱技术分析糖链相比，无需糖链的衍生化步骤，不但简化了 分析步骤，节省了分析时间，特别是避免了衍生化步骤带来的实验误差； 阳157] 3)采用复杂型N糖链末端去半乳糖与含半乳糖的糖链丰度比值作为半乳糖量变 指标，可W避免平行样品的预处理等操作过程产生的偏差，减小平行样本进入质谱检测时 的误差，确保分析的高重现性和准确性。总之，上述特性使该指标具备快速，通量，准确的特 点，为其作为一种潜在的临床诊断指标提供了条件。
[0158] 在本发明的一个实施方式中采用了基质辅助激光解析飞行时间质谱法MLDI-MS， 优选所述测试所用质量校正标准品为TOFmix，所用基质为2, 5-二径基苯甲酸D皿和/或所 用均一化试剂为乙醇。 阳1别撒据分析方法 阳160] 在本发明中，将Gal比，即对象血液IgG表面双天线复杂型N糖链的末端去半乳糖 (Gal。）与半乳糖糖链（Gall和Gal2)的丰度比值，作为恶性肿瘤筛查、早期诊断、预后评估、 风险评估、病情监测和/或疗效评估的指标。 阳161] 可根据需要采用不同的计算公式来计算Gal比，例如所述公式可选自： 阳 16引 公式 1:Gal比值=GaV(Gali+Gal2);或 阳 163]公式 2:Gal比值=Gal〇/(Gali+2Gal2);或
[0164] 可显示对象血液IgG表面双天线复杂型N糖链的末端去半乳糖（Gal。）与半乳糖 糖链（Gall和Gal2)的丰度比值的任何其它公式，如其倒数、对数等其他变换形式。 阳1化]值得注意的是，上述用于丰度比值的Gale、Gali和Gal2优选均来源于同一样本、同 次检测和/或同一谱图。因此，采用该指标可W避免平行样品的预处理等操作过程产生的 偏差，从而减小平行样本进入质谱检测时的误差，确保分析的高重现性和准确性，确保了该 方法可应用于临床肿瘤筛查、预后评估、风险评估、病情监测和/或疗效评估。
[0166] 本领域普通技术人员基于本领域常识可根据不同对象群的检测数据绘制相应的 R0C曲线，例如本发明的实施例中根据不同人群的数据绘制相应的R0C曲线。根据本领域公 知技术，每一条R0C曲线都提供了一系列阔值及与之相对应的灵敏度和特异度。因此，使用 运些R0C曲线，本领域技术人员能很容易地查出选取任意阔值（即cut-off值）时该项检 测对疾病的识别能力，即诊断相应癌种的灵敏度、特异度和符合率。
[0167] 筛查结果的计算（阔值的计算）取决于特异度和灵敏度。阔值的计算方法包括但 不限于： 阳168] 方法1 :选定R0C曲线中斜率最大点，取其对应的Gal比为阔值。 阳169] 方法2 :最大化灵敏度和特异度的值，即[灵敏度％ -(1-特异度％ )]m。、对应的Gal比即为最优阔值（最大约登指数，Youdenindex)。
[0170] W阔值为界，高于该值判定为阳性，低于该值判定为阴性。 阳171] 在本发明中优选的阔值范围为0.35~0.6,优选0.5。本领域技术人员可W理解， 由于受试群体和瘤种的不同，阔值的选取及其对应的灵敏度、特异度和符合率等参数会有 所差别，但均包含在本发明限定的阔值范围内。本领域技术人员可W根据实际使用需求，如 对特定瘤种、灵敏度、特异度等的要求，从本发明公开的R0C曲线或阔值范围内选取适当的 优选阔值。可在确定最佳阔值后，将该最佳阔值±1~15%的范围（包括该范围内的任意 数值点或子范围）。 阳17引Gal比指梳的麻用
[0173] 本发明Gal比指标可应用于恶性肿瘤筛查、早期诊断、预后评估、风险评估、病情 监测和/或疗效评估等用途中。运些应用包括但不限于：
[0174] 1)将Gal比指标应用于肿瘤筛查检测：当Gal比达到或高于预先设定的阔值，贝U 判定该受试者患有恶性肿瘤或具有罹患恶性肿瘤的风险。 阳175] 2)将Gal比指标应用于良恶判定：当Gal比达到或高于预先设定的阔值，则判定 该受试者患有恶性肿瘤或具有罹患恶性肿瘤的风险。 阳176] 3)将Gal比指标应用于预后监测：当Gal比达到或高于预先设定的阔值，则提示 对象恶性肿瘤复发或具有复发的高风险；
[0177] 4)将Gal比指标用于高危群体恶性肿瘤发生预期：当Gal比达到或高于预先设定 的阔值，则提示对象发生恶性肿瘤的可能性高于其它对象；
[0178] 5)将Gal比指标用于癌症患者病情监测：当Gal比高于前次测试所得的Gal比达 到或高于预先设定的范围（例如5%~50%或该范围内的任意点或子范围），则表明该癌症 患者的病情有所发展或进一步恶化；
[0179] 6)将Gal比指标用于疗效评估：在治疗前后或治疗过程中的不同时间点测定并计 算Gal比值，当Gal比值高于前次测试所得的Gal比值达到或高于预先设定的范围（例如 5%~50%或该范围内的任意点或子范围），则表明该疗法和/或药物的疗效不佳。 。化0] 方法与产品 阳181] 基于如前所述的技术，本发明中提供了用恶性肿瘤筛查、早期诊断、预后评估、风 险评估、病情监测和/或疗效评估的方法和产品（如试剂盒、设备和/或系统）。 阳182] 本发明的方法包括如下步骤：
[0183] (A'）测定对象血液样本中IgG表面双天线复杂型N糖链的末端半乳糖基化水平， 所述末端半乳糖基化水平包括：IgG表面末端无半乳糖连接的双天线复杂型N-糖链水平 Gal。、末端连有1个半乳糖的双天线复