C= 0.9099 (95%置信区间：0.8924 ~0.9275)(参见图 2G)。 阳364] 恶性肿瘤患者的Gal比均值与对照样本相比差异极其显著（t检验，p<0. 0001)(参 见表3A)。
[0365] 上述分析证实了本发明的血清IgG半乳糖化指标能W高灵敏度和特异度有效地 筛查并区分恶性肿瘤患者和良性对照。 36引 连施俩I8.Gal比与经化指梳联合伸用具有审高的诊断价估 阳367] 如表3B所述，当Gal比与经典指标联合运用后能够提高在特定肿瘤中的检出率。 在216例肝癌患者中，Gal比与AFP联合运用，检出率达到95. 83% (两个指标中有一个阳性 即判定为阳性），高于Gal比巧3. 98% )与AFP巧9. 72% )分别独立检测；在158例胃癌患者 中，Gal比与CEA联合运用，检出率达到91. 14%，高于Gal比（88. 61% )与CEA巧9. 49% ) 分别独立检测。 阳368] 综合上述数据，Gal比可与经典指标联合使用，增加恶性肿瘤检出率。 阳3~]连施俩I9.Gal比麻用于早期诊断
[0370]获自早期恶性肿瘤患者（即表2中肿瘤分期为I)的样本（η= 231)与对照（健 康和良性疾病）（η= 924)所得AUC= 0. 8958 (95%置信区间：0. 8724,0. 9192)，参见图2Η。 阳371]早期恶性肿瘤患者的Gal比均值与对照样本相比差异极其显著（t检验， p<0. 0001)。 阳372] 上述分析证实了本发明的血清IgG半乳糖化指标能W高灵敏度和特异度有效地 筛查并区分早期恶性肿瘤和对照。
[0373]连施例10.Gal比麻用于临测肿漓预后 阳374] 对78例行规范手术方案治疗的胃癌患者随访监测研究，W检验血液中Gal比与患 者病情变化的相关性，检测周期为每3个月一次。
[0375] 根据病理学诊断、临床生化W及影像学资料评价术后肿瘤的复发情况。结果表明， 在术后3年时间内，共有25例复发，其中在明确肿瘤复发诊断前，有23例Gal比阳性（检 出率为92. 0% )。
[0376] W上数据证明了本发明方法在肿瘤的预后检测中具有重要的价值。 377]连施例11.Gal比用于预测廉忡肿漓的发牛
[0378] 对于4217例高危人群的血清样本进行监测，并进行6个月到3年不等的有效跟踪 随访，随访结果发现Gal比阴性组3780人中无肿瘤患者发现，阳性组437人中发现肿瘤病 人47例，两组肿瘤发生率差异显著。
[0379] 据此，Gal比检测可用于预测恶性肿瘤的发生。 阳380] 在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独 引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可W对本发明作各种改动或修改，运些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范 围。
【主权项】
1. 一种用于对象恶性肿瘤筛查、早期诊断、预后评估、风险评估、病情监测和/或疗效 评估的产品，所述产品可为例如试剂盒、设备、可操作系统和/或它们的组合，所述产品包 括： (A) 用于测定血液IgG表面双天线复杂型N糖链的末端半乳糖基化程度的试剂、仪器 和/或系统，其用于测定IgG表面末端无半乳糖连接的双天线复杂型N-糖链丰度Gal。、末 端连有1个半乳糖的双天线复杂型N-糖链丰度Gah和末端连有2个半乳糖的双天线复杂 型N-糖链丰度Gal2; 例如，用于选自下组的一种或多种方法的试剂、仪器和/或系统：基质辅助激光解析 飞行时间质谱法MALDI-MS、快原子轰击质谱FAB-MS、电喷雾质谱ES-MS;液相色谱法；液相 色谱-质谱联用法；糖芯片技术；核磁共振NMR，优选基质辅助激光解析飞行时间质谱法 MALDI-MS； (B) 用于计算Gal。与GalJPGal2的丰度比值Gal比的模块和/或处理器； (C) 可选的，用于根据Gal比判断对象是否罹患恶性肿瘤、对对象进行预后评估和/或 罹患肿瘤的风险评估、病情监测和/或疗效评估的模块和/或处理器； 优选，所述血液选自：血清、血浆和全血，更优选血清。2. 如权利要求1所述的产品，其特征在于，所述产品还包括选自下组的一种或多种： a) 用于采集和/或处理对象血液样品的试剂和/或仪器； b) 用于分离和/或纯化血清和/或血浆的试剂和/或仪器； c) 用于分离和/或纯化血清/血浆IgG的试剂和/或仪器； d) 用于分离、纯化和/或富集血清IgG表面N-糖链的试剂和/或仪器， 例如，选自下组的分离纯化N糖链方法的试剂和/或仪器：多孔石墨化碳PGC固相萃取 法（优选采用乙腈：水：三氟醋酸=80:19. 9:0. 1活化PGC，采用水：三氟醋酸=99. 9:0. 1 平衡PGC，采用乙腈：水：三氟醋酸=25:74. 95:0. 05的混合溶剂洗脱糖链）、多糖纯化柱、 凝集素亲合法（如连续凝集素亲合色谱SLAC)、毛细管电泳、高效液相色谱； e) 用于存储和/或处理对象血清的双天线复杂型N糖链末端去半乳糖与半乳糖糖链丰 度比值作为IgG表面半乳糖化量变指标的数据库、模块和/或处理器； f) 用于提供判断阈值的模块和/或处理器； g) 用于将对象的Gal比与对照比较以判断对象是否罹患恶性肿瘤、对对象进行预后评 估和/或罹患肿瘤的风险评估、病情监测和/或疗效评估的模块和/或处理器； h) 用于提供诊断和/或检测结果和/或报告的模块和/或处理器； j)说明书或使用指南，其中记载了如下一种或多种应用和判断方式： (i) 用于肿瘤筛查检测：当Gal比达到或高于预先设定的阈值，则判定该受试者患有恶 性肿瘤或具有罹患恶性肿瘤的风险； (ii) 用于良恶判定：当Gal比达到或高于预先设定的阈值，则判定该受试者患有恶性 肿瘤或具有罹患恶性肿瘤的风险； (iii) 用于预后监测：当Gal比达到或高于预先设定的阈值，则提示对象恶性肿瘤复发 或具有复发的尚风险； (iv) 用于对象群（例如高危群体）恶性肿瘤发生预期：当Gal比达到或高于预先设定 的阈值，则提示对象发生恶性肿瘤的可能性高于其它对象； (V)用于癌症患者病情监测：当Gal比高于前次测试所得的Gal比达到或高于预先设 定的范围（例如5 %~50 %或该范围内的任意点或子范围），则表明该癌症患者的病情有所 发展或进一步恶化； (vi)用于疗效评估：在治疗前后或治疗过程中的不同时间点测定并计算Gal比值，当Gal比值高于前次测试所得的Gal比值达到或高于预先设定的范围（例如5%~50%或该 范围内的任意点或子范围），则表明该疗法和/或药物的疗效不佳； 优选，（i)~（iv)中的阈值为0. 35~0. 6,更优选0. 5 ; 优选，可基于ROC曲线中斜率最大点或最大化灵敏度和特异度的值来确定最佳阈值， 且优选的阈值范围可为最佳阈值±1~15% (包括该范围内的任意数值点或子范围）的范 围。3. 如权利要求1或2所述的产品，其特征在于，所述Gal。与GalJPGal2的丰度比值的 计算采用选自下组的公式进行： Gal比值=Galo/^Gali+GalJ; Gal比值=GalaAGalfSGaU;或 其倒数、对数等其他变换形式。4. 如权利要求1所述的产品，其特征在于，所述恶性肿瘤选自：肝癌、胃癌、肺癌、卵巢 癌、肠癌、食管癌、胰腺癌、胆管癌、肾癌、乳腺癌、前列腺癌、鼻咽癌、膀胱癌、子宫内膜癌和 宫颈癌。5. 如权利要求1所述的产品，其特征在于，所述产品用于包含如下步骤的检测方法中： (A'）测定对象血液样本中IgG表面双天线复杂型N糖链的末端半乳糖基化水平，所述 末端半乳糖基化水平包括：IgG表面末端无半乳糖连接的双天线复杂型N-糖链水平Gal。、 末端连有1个半乳糖的双天线复杂型N-糖链水平Gah和末端连有2个半乳糖的双天线复 杂型N-糖链水平Gal2; (B'）计算Gal。与GalJPGal2的丰度比值，S卩Gal比； (C'）根据Gal比判断对象是否罹患恶性肿瘤、对对象进行预后评估和/或罹患肿瘤的 风险评估、对病情进行监测和/或对疗效进行评估。6. 如权利要求5所述的产品，其特征在于，所述方法还包括选自下组的一个或多个步 骤： (a'）采集和/或处理对象血液样品； (b'）分离和/或纯化血清和/或血浆； (c'）分离和/或纯化血清/血浆IgG; (d'）分离、纯化和/或富集血清IgG表面N-糖链； (e'）存储和/或处理对象血清的双天线复杂型N糖链末端去半乳糖与半乳糖糖链丰度 比值作为IgG表面半乳糖化量变指标； (f'）提供判断阈值； (g'）将对象的Gal比与对照比较以判断对象是否罹患恶性肿瘤、对对象进行预后评估 和/或罹患肿瘤、病情监测和/或疗效评估； (h'）提供诊断和/或检测结果和/或报告； (j'）检测其它恶性肿瘤指标，并将所述其它恶性肿瘤指标的检测结果与Gal比检测结 果结合。7. 如权利要求1所述的产品，其特征在于，所述产品还包含用于检测其它恶性肿瘤指 标的试剂盒、设备、系统和/或它们的组合，优选所述指标选自：患者的基本情况，如年龄、 性别、家族史；肿瘤临床表现，包括局部表现如肿块及继发症状、疼痛、病理性分泌物、皮肤 黏膜溃疡，全身表现如发热、感染、贫血、消瘦、乏力、恶液质，内诊如直肠指检、妇科检查；专 一性理化检查指标，包括特定的影像检查，如核磁、CT、B超、内窥镜，乳腺钼靶，肿瘤生化指 标，如AFP、CEA、PSA、SF、TSGF、POA、PROGRP、CA125、CA15-3、CA19-9、CA72-4、CA242、CA50、 CYFRA21-1、NSE、SCC、AFU、EBV-VCA等。8. 试剂、仪器、模块和/或处理器在制备用于对象恶性肿瘤筛查、早期诊断、预后评估、 风险评估、病情监测和/或疗效评估的产品中的应用，所述产品可为例如试剂盒、设备、系 统和/或它们的组合，所述试剂、仪器、模块和/或处理器包括： (A) 用于测定血液IgG表面双天线复杂型N糖链的末端半乳糖基化水平的试剂、仪器、 模块和/或处理器，其用于测定IgG表面末端无半乳糖连接的双天线复杂型N-糖链水平 Gal。、末端连有1个半乳糖的双天线复杂型N-糖链水平Gah和末端连有2个半乳糖的双天 线复杂型N-糖链水平Gal2; 例如，用于选自下组的一种或多种方法的试剂、仪器、模块和/或处理器：基质辅助激 光解析飞行时间质谱MALDI法、快原子轰击质谱FAB-MS、电喷雾质谱ES-MS;液相色谱法； 液相色谱-质谱联用法；糖芯片技术；核磁共振NMR，优选基质辅助激光解析飞行时间质谱 法（MALDI-MS); (B) 可选的，用于计算Gal。与GalJPGal2的丰度比值Gal比的模块或处理器； (C) 可选的，用于根据Gal比判断对象是否罹患恶性肿瘤、对对象进行预后评估和/或 罹患肿瘤的风险评估、病情监测和/或疗效评估的模块或处理器。9. 如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述产品如权利要求1-7中任一项所述。10. -种用于药物和/或治疗方法筛选的方法，所述方法包括： (A〃）测定对象给药和/或治疗之前、之后和/或过程中的不同时间点血液样本中IgG表面双天线复杂型N糖链的末端半乳糖基化水平，所述末端半乳糖基化水平包括：IgG表面 末端无半乳糖连接的双天线复杂型N-糖链水平Gal。、末端连有1个半乳糖的双天线复杂型 N-糖链水平Gah和末端连有2个半乳糖的双天线复杂型N-糖链水平Gal2; (B〃）计算Gal。与GalJPGal2的丰度比值，S卩Gal比； (C〃）根据Gal比评估判断所述药物和/或治疗方法的有效性，其中当Gal比值高于前 次测试所得的Gal比值达到或高于预先设定的范围（例如5%~50%或该范围内的任意点 或子范围），则表明该药物和/或治疗方法的疗效不佳。
【专利摘要】本发明提供了用于恶性肿瘤相关筛查及评估的产品、应用及方法，具体涉及一种通过检测血液中免疫球蛋白G表面双天线复杂型N糖链末端半乳糖变化对恶性肿瘤进行筛查、早期诊断、预后评估、风险评估、病情监测和/或疗效评估的产品、应用及方法。
【IPC分类】G01N33/68
【公开号】CN105277718
【申请号】CN201510632081
【发明人】任士芳, 顾建新, 张泽建, 周蕾, 孙琳琳
【申请人】上海知先生物科技有限公司
【公开日】2016年1月27日
【申请日】2015年9月29日