一种治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药品的检测方法，特别是涉及一种治疗妇科炎症药物制剂的检测方 法，属于药品的技术领域。
【背景技术】
[0002] 妇科炎症是女性的常见疾病，主要是指女性生殖器官的炎症，具体包括女性外阴 炎、阴道炎、宫颈炎、盆腔炎。妇科炎症的常见症状主要是外阴及阴道瘙痒，有的局部发生 糜烂，伴灼痛、尿痛、尿频、阴道分泌物增多、红肿等。炎症不及时治疗，除可能导致炎症在 各生理部位相互蔓延和交叉感染外，还会带来许多并发症，甚至导致某些部位的恶性病 变，还会使身体长时间处于炎症的侵害环境中，对免疫功能、新陈代谢以及内分泌系统都 会产生不良影响，对身体健康危害极大；甚至一些妇科炎症不仅危害女性本人，而且还会 波及家人，引起宫内感染、产道感染等环节感染新生儿，造成流产、早产、先天发育畸形、智 力低下等严重后果。治疗妇科炎症的药物制剂由苦参、杠板归、黄柏、连翘、益母草、赤小 豆、艾叶、当归、乌药制备而成，其中抗妇炎胶囊标准收载于国家中成药标准汇编外科妇 科分册，编号为WS-10498(ZD-0498)-2002,2012年10月30日转为国家正式标准，编号为 WS-10498(ZD-0498)-2002-2012Z，具有活血化瘀、清热燥湿的功效，主要用于湿热下注型盆 腔炎、阴道炎、慢性宫颈炎，症见赤白带下、阴痒、出血、痛经等症。
[0003] 现有质量标准中，仅对苦参、黄柏、当归进行薄层鉴别，其中对苦参的鉴别仅以苦 参碱对照品作为对照，鉴别方法不够全面和充分；对黄柏的鉴别项分开成两项，操作有重 复，会造成一定的资源浪费，且以正丁醇作为展开剂其展开时间较长；同时连翘作为处方 中仅次于苦参、杠板归和黄柏的重要组成部分，对其进行鉴别是非常必要的。另外含量测定 方法中，仅对苦参中的苦参碱进行含量测定，未考虑到苦参碱、氧化苦参碱之间的转换，导 致含量测定不够准确，另外，还缺乏对黄柏中盐酸小檗碱的含量测定。另外，本领域技术人 员知道，药材使用是否准确，各地生长的药材药用成分含量不一定相同，因此，对药材的定 性、定量就显得尤为重要。因此现有质量标准对抗妇炎药品的质量控制不够全面和准确，从 而造成隐患。
[0004] 现有技术中，《中国药典》2010年版一部P188公开了苦参的检测方法，对苦参进 行显微鉴别，以苦参碱对照品、槐定碱对照品为对照，以甲苯-丙酮-甲醇（8 :3 :0. 5)为展 开剂进行薄层鉴别，以氧化苦参碱对照品为对照，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（5 :0. 6 : 0. 3) KTC以下放置的下层溶液为展开剂进行薄层鉴别，利用乙腈-无水乙醇-3 %磷酸溶液 (80 :10 :10)作为流动相对苦参中苦参碱和氧化苦参碱进行含量测定；《中国药典》2010年 版一部P285-287公开了黄柏的检测方法，对黄柏进行显微鉴别，以黄柏对照药材、盐酸黄 柏碱对照品为对照，以三氯甲烷-甲醇-水（30 :15 :4)的下层溶液为展开剂进行薄层鉴别， 利用乙腈-0. 1 %磷酸溶液（50 : 50)(每100mL加十二烷基磺酸钠0.1 g)作为流动相对黄 柏中盐酸小檗碱进行含量测定；《中国药典》2010年版一部P159公开了连翘的检测方法，以 连翘对照药材、连翘苷对照品为对照，以三氯甲烷-甲醇（8 :1)为展开剂进行薄层鉴别。
[0005] 祝晨藤等在HPLC法测定黄柏药材中小檗碱与黄柏碱的含量（中药新药与临床药 理，2004, 15(4) :262~264.) -文中，公开了采用RP-HPLC法梯度洗脱（乙腈-0· 3 %磷 酸二乙胺为流动相，梯度洗脱顺序为：15/85^? 35/65 ，测定黄柏药材中小檗 碱与黄柏碱的含量；高峰等在高效液相色谱法测定关黄柏与川黄柏的有效成分的含量分析 (黑龙江医药，2011，24(2) :174~175.) -文中，公开了采用乙腈-0· 1%磷酸溶液（50:50) (每100mL加十二烷基硫酸钠0.1 g)为流动相对黄柏中盐酸小檗碱进行含量测定。
[0006] 姚敦武等在抗妇炎片质量标准研究（湖南中医杂志，2006, 22(4) :73·) -文中，公 开了以苦参碱对照品为对照、氯仿-甲醇-浓氨试液（5:0. 6:0. 3)为展开剂对抗妇炎片中 苦参进行薄层鉴别，以盐酸小檗碱对照品为对照、正丁醇-冰醋酸-水（7:1:2)为展开剂对 抗妇炎片中黄柏进行薄层鉴别，以连翘对照药材为对照、氯仿-甲醇（3:1)为展开剂对抗妇 炎片中连翘进行薄层鉴别，以苦参碱对照品为对照、甲醇-水-三乙胺（48:52:0.05)为流 动相对抗妇炎片中苦参进行含量测定；该文献中对苦参、黄柏的鉴别与抗妇炎胶囊现有质 量标准相同。李蔚等在抗妇炎软胶囊质量标准研究（安徽医药，2011，15 (10) :1220.) -文 中，公开了以连翘苷对照品为对照、三氯甲烷-甲醇-甲酸（9:2:0. 1)为展开剂对抗妇炎 软胶囊中连翘进行薄层鉴别，以盐酸小檗碱对照品为对照、甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲 醇-水(6:3:1. 5:1. 5:0. 3)为展开剂对抗妇炎软胶囊中黄柏进行薄层鉴别，以苦参碱对照 品为对照、甲苯-丙酮-甲醇（9:2:5)为展开剂对抗妇炎软胶囊中苦参进行薄层鉴别，以苦 参碱对照品为对照、乙腈-0. 02mol/l磷酸二氢钠溶液（82:18)为流动相对抗妇炎软胶囊中 苦参进行含量测定。
[0007] 以上文献虽然报道了苦参等药材的单一检测方法以及抗妇炎片、软胶囊质量标准 研究方法，但是按照上述方法进行操作，首先对于单一药材的鉴别或含量测定方法和种类 比较多，针对性不强，会造成重复操作或指标选择复杂等现象，且未考虑复方制剂的相互干 扰因素；另一方面对于现有片剂或软胶囊的研究过程中，部分与抗妇炎胶囊的方法相同，另 外在进行方法学验证时还会出现或分离度不佳，或分析时间较长，还有其他色谱峰干扰等 现象，且制剂质量标准研究中也未体现对黄柏等重要组成药材的含量测定内容，因此现有 对治疗妇科炎症的药物制剂的检测不能满足要求。
【发明内容】
[0008] 本发明所要解决的技术问题在于提供一种治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法， 包括性状、鉴别、检查和含量测定；该检测方法能全面有效地控制治疗妇科炎症药物制剂的 质量，从而确保该药物的临床疗效和用药安全性。
[0009] 为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：
[0010] 治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法，所述的制剂是由以下重量配比的药物制备 而成：苦参200-300g、杠板归200-300g、黄柏100-200g、连翘30-70g、益母草20-40g、赤小 豆20-40g、艾叶20-40g、当归20-40g、乌药20-40g ;该检测方法由性状、鉴别、检查、含量测 定组成，其特征在于：鉴别是对黄柏、苦参进行显微鉴别，以苦参对照药材、苦参碱和氧化苦 参碱对照品作对照、以二氯甲烷：甲醇：浓氨试液=3-7:0. 4-0. 8:0. 2-0. 4为展开剂对苦 参进行薄层鉴别，以阿魏酸作对照、以甲苯：冰醋酸：甲醇=20-40:0. 5-1. 5:2-4为展开剂 对当归进行薄层鉴别，以黄柏对照药材、盐酸小檗碱对照品作对照、以甲苯：乙酸乙酯：甲 醇：异丙醇：水=4-8:2-4:1-3:1-2:0. 2-0. 4为展开剂对黄柏进行薄层鉴别，以连翘对照 药材作对照、以二氯甲烷：甲醇：甲酸=10-30:0. 2-0. 4:0. 03-0. 07为展开剂对连翘进行 薄层鉴别；含量测定是照《中国药典》2010年版一部附录VI D高效液相色谱法，以乙腈：无 水乙醇：3%磷酸溶液=80-84:8-10:8-10为流动相、对苦参中的苦参碱和氧化苦参碱进行 测定，以乙腈：〇. 05mol/L磷酸二氢钾溶液=40-60:40-60为流动相，对黄柏中的盐酸小檗 碱进行测定。
[0011] 前述的治疗妇科炎症的药物制剂的检测方法，其中鉴别由以下组成：
[0012] (1)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物，置显微镜下观察：纤维鲜 黄色，常成束，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；含晶细胞壁木化增厚；黄柏石细胞鲜 黄色，类圆形或纺锤形，直径35~128 μ m，有的呈分枝状，枝端锐尖，壁厚；苦参木栓细胞类 多角形，垂周壁有纹孔呈断续状，导管具缘纹孔；
[0013] (2)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品 2g，加浓氨试液0. 3ml，再加二氯甲烷25ml，加热回流25-40分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残 渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取苦参对照药材lg，同法制成对照药材溶液；再 取苦参碱对照品及氧化苦参碱对照品，分别加乙醇制成每1ml含Img的溶液，作为对照品溶 液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照药 材溶液各2~3 μ 1，吸取苦参碱对照品溶液及氧化苦参碱对照品溶液各6 μ 1，分别点于同 一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷：甲醇：浓氨试液=3-7:0. 4-0. 8:0. 2-0. 4在KTC以下放 置的下层溶液为展开剂，预饱和10-15分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，置日 光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，在与对 照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
[0014] (3)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品 2-5g，加乙醚30ml，加热回流25-40分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作 为供试品溶液；另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含Img的溶液，作为对照品溶液；照 《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于 同一硅胶G薄层板上，以甲苯：冰醋酸：甲醇=20-40:0. 5-1. 5:2-4为展开剂，展开，取出， 晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点；
[0015] (4)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品 〇.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸：甲醇=1 : 100的混合溶液25ml，密塞， 称定重量，500W、40KHz条件下超声处理25-40分钟，放冷，再称定重量，用盐酸：甲醇= 1 : 100的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取盐酸小檗 碱对照品，精密称定，加盐酸：甲醇=1:100的混合溶液制成每1ml含90 μ g的溶液，作为 对照品溶液；取黄柏对照药材0. lg，精密加入盐酸：甲醇=1:100的溶液25ml，超声处理 25-40分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色 谱法试验，吸取供试品溶液与对照品溶液及对照药材溶液各2~3 μ 1，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：甲醇：异丙醇：水=4-8:2-4:1-3:1-2:0. 2-0. 4为展开剂， 试验时展开缸一侧槽中加入展开剂，在另一槽加入与展开剂等体积的浓氨试液，放入点样 后的薄层板预平衡15-20分钟，然后展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视； 供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照药品 色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0016] (5)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品 5g，加甲醇40ml，密塞，超声处理25-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用二 氯甲烷提取2次，每次20ml,合并二氯甲烷液，用氨试液50ml洗涤，弃去氨试液，用水50ml 洗涤，弃去水液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材lg，同法 制成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试 品溶液与对照药材溶液各3~5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷：甲醇：甲 酸=10-30:0. 2-0. 4:0. 03-0. 07为展开剂，预饱和15-20分钟，展开，取出，晾干，喷以醋酐： 硫酸=20:1混合溶液，在105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相 应的位置上，显相同颜色的主斑点。
[0017] 进一步地，所述鉴别方法如下：
[0018] (1)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物，置显微镜下观察：纤维鲜 黄色，常成束，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；含晶细胞壁木化增厚；黄柏石细胞鲜 黄色，类圆形或纺锤形，直径35~128 μ m，有的呈分枝状，枝端锐尖，壁厚；苦参木栓细胞类 多角形，垂周壁有纹孔呈断续状，导管具缘纹孔；
[0019] (2)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品 2g，加浓氨试液0. 3ml，再加二氯甲烷25ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加 乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取苦参对照药材lg，同法制成对照药材溶液；再取苦 参碱对照品及氧化苦参碱对照品，分别加乙醇制成每1ml含Img的溶液，作为对照品溶液； 照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照药材 溶液各2~3 μ 1，吸取苦参碱对照品溶液及氧化苦参碱对照品溶液各6 μ 1，分别点于同一 硅胶G薄层板上，以二氯甲烷：甲醇：浓氨试液=5:0. 6:0. 3在KTC以下放置的下层溶液 为展开剂，预饱和10分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，置日光下检视；供试品 色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，在与对照品色谱相应的位 置上，显相同颜色的斑点；
[0020] (3)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品 2-5g，加乙醚30ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为 供试品溶液；另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含Img的溶液，作为对照品溶液；照《中 国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同 一硅胶G薄层板上，以甲苯：冰醋酸：甲醇=30:1:3为展开剂，展开，取出，晾干，置波长为 365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧 光斑点；
[0021] (4)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品 〇.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸：甲醇=1 : 100的混合溶液25ml，密塞， 称定重量，500W、40KHz条件下超声处理25-40分钟，放冷，再称定重量，用盐酸：甲醇= 1 : 100的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取盐酸小檗 碱对照品，精密称定，加盐酸：甲醇=1:100的混合溶液制成每1ml含90 μ g的溶液，作为 对照品溶液；取黄柏对照药材0. lg，精密加入盐酸：甲醇=1:100的溶液25ml，超声处理 30分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法 试验，吸取供试品溶液与对照品溶液及对照药材溶液各2~3 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以甲苯：乙酸乙酯：甲醇：异丙醇：水=6:3:2:1.5:0. 3为展开剂，试验时展开缸一 侧槽中加入展开剂，在另一槽加入与展开剂等体积的浓氨试液，放入点样后的薄层板预平 衡15分钟，然后展开，取出，晾干，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与 对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照药品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点；
[0022] (5)取本发明药物制剂，固体剂型进行研磨或取内容物、液体制剂蒸干，取样品 5g，加甲醇40ml，密塞，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用二氯甲 烷提取2次，每次20ml，合并二氯甲烷液，用氨试液50ml洗涤，弃去氨试液，用水50ml洗 涤，弃去水液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材lg，同法制 成对照药材溶液；照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述供试品 溶液与对照药材溶液各3~5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷：甲醇：甲酸 =20:0. 3:0. 05为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，喷以醋酐：硫酸=20:1混合 溶液，在105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显 相同颜色的主斑点。
[0023] 前述的治疗妇科炎症的胶囊制剂的检测方法，其中含量测定方法如下：
[0024] (1)苦参：照《中国药典》2010年版一部附录VI D高效液相色谱法测定；
[0025] 色谱条件与系统适用性试验：以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈：无水乙醇：3% 磷酸溶液=80-84:8-10:8-10为流动相；检测波长为220nm ;理论板数