4 :制备食品样品试液
[0103] (1)对于液体样品、粮谷类、及果蔬样品：称取试样4g，于50mL离心管中，加入6mL 水，于高速（15000r/min)均质器上均质3min，以15 000r/min离心5min，收集水相，用水 定容至10mL。对于茶叶类样品：称取试样2g，于50mL离心管中，加入10mL水，于高速（15 000r/min)均质器上均质3min，将离心管以15 000r/min离心5min，收集上层液，用水定容 至10mL。（2)准备透析袋：用剪刀剪至10-20cm小段，用水煮沸10分钟，二次水洗净，保存 至乙醇中；使用前后均用二次水清洗净。（3)准备二乙烯基苯固相萃取小柱（l.Occ柱）：使 用前5mL甲醇、5mL水活化，静置半小时；使用后甲醇清洗保存。（4)取上述步骤⑴的样品 提取液加入步骤（2)中所述透析袋中，并置于按1:1比例在超纯水的50mL玻璃管中，超声 lh后取出，从上述玻璃管中取出5mL残液，用5mL注射器注入步骤（3)中所述二乙烯基苯 固相萃取小柱，弃去二乙烯基苯固相萃取小柱前2mL流出液，用5mL离心管收集后3mL流出 液；加入20mg石墨化碳黑吸附剂（40-60μm，ProElut填料），旋窝震荡2min后于15OOOr/ min离心5min，取2mL上清液至洁净的玻璃管中60°C下氮吹至干，残渣用0. 5mL的水溶液溶 解，过聚四氟乙烯（PTFE)膜。
[0104] 实施例5 :使用高效液相色谱-串联三重四级杆质谱联用仪分析食品样品
[0105] 按照实施例4制备食品样品试液，包括茶叶、柑橘、小麦、苹果、玉米、桃、稻谷、葡 萄、西瓜、香蕉、大豆、甘蔗、大麦茶、棉籽油。每一类食品包括两种试样，一种是不含草甘膦 及其代谢物氨甲基磷酸的空白食品样品，一种是向空白食品样品添加浓度均为〇.〇5mg/kg 草甘膦及其代谢物氨甲基磷酸的加标食品样品。按信噪比（S/N)等于10计算，本方法的定 量下限为0. 05mg/kg能满足限量要求。
[0106] 利用用高效液相色谱-串联三重四级杆质谱联用仪，按照实施例2中所给出的仪 器参数，分别分析所制备的空白食品样品及加标食品样品，获得对应的离子色谱图，见图 4-图31，每一幅图包含两张图，分别命名为a、b，其中a图为样品中草甘膦的定量离子提取 色谱图，b图为样品中氨甲基磷酸的定量离子提取色谱图，例如图4是空白茶叶的定量离子 提取色谱图，则图4a是空白茶叶的草甘膦定量离子提取色谱图，图4b是空白茶叶的氨甲基 磷酸定量离子提取色谱图，后面的图同理。为简便起见，对后面的图统一描述如下：图5是 空白柑橘的定量离子提取色谱图，图6是空白小麦的定量离子提取色谱图，图7是空白苹果 的定量离子提取色谱图，图8是空白玉米的定量离子提取色谱图，图9是空白桃的定量离子 提取色谱图，图10是空白稻谷的定量离子提取色谱图，图11是空白葡萄的定量离子提取色 谱图，图12是空白西瓜的定量离子提取色谱图，图13是空白香蕉的定量离子提取色谱图， 图14是空白大豆的定量离子提取色谱图，图15是空白甘蔗的定量离子提取色谱图，图16 是空白大麦茶的定量离子提取色谱图，图17是空白棉籽油的定量离子提取色谱图，图18是 茶叶基质加标的定量离子提取色谱图，图19是柑橘基质加标的定量离子提取色谱图，图20 是小麦基质加标的定量离子提取色谱图，图21是苹果基质加标的定量离子提取色谱图，图 22是玉米基质加标的定量离子提取色谱图，图23是桃基质加标的定量离子提取色谱图，图 24是稻谷基质加标的定量离子提取色谱图，图25是葡萄基质加标的定量离子提取色谱图， 图26是西瓜基质加标的定量离子提取色谱图，图27是香蕉基质加标的定量离子提取色谱 图，图28是大豆基质加标的定量离子提取色谱图，图29是甘蔗基质加标的定量离子提取色 谱图，图30是大麦茶基质加标的定量离子提取色谱图，图31是棉籽油基质加标的定量离子 提取色谱图。
[0107] 从图4-图31可以看出，空白食品样品中不含有草甘膦及其代谢物氨甲基磷酸的 特征峰，加标食品样品在目标化合物出峰，且出峰位置没有杂质峰干扰测定，表明方法的特 异性可以满足检测茶叶、柑橘、小麦、苹果、玉米、桃、稻谷、葡萄、西瓜、香蕉、大豆、甘蔗、大 麦茶和棉籽油一系列食品的要求。
[0108] 实施例6:测本方法的精密度和回收率
[0109]采用添加法来检测本方法的精密度和回收率：以不含草甘膦和氨甲基磷酸残留的 茶叶、柑橘、小麦、苹果、玉米、桃、稻谷、葡萄、西瓜、香蕉、大豆、甘鹿、大麦茶、棉籽油为空白 样品基质，添加三个浓度水平（高于线性上限的，通过稀释至线性水平内进行检测），每个 浓度水平进行六次重复实验，测得GLY和AMPA的回收率和精密度汇总见表3。这里的回 收率指加标回收率，计算方法为：加标回收率=(加标试样测定值一试样测定值）+加标 量X100%
[0110] 从表3可以看出，样品的平均回收率在71. 9-92. 2 %，相对标准偏差在 2. 29-7. 68%，符合残留检测的要求，本方法的检测结果可信。
[0111] 尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例 性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨 的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
[0112] 表3本方法添加浓度及回收率范围表（η= 6)
[0113]
【主权项】
1. 一种食品中草甘膦及其代谢物氨甲基磷酸残留量的测定方法，其特征在于：包括以 下步骤： (1) 制备标准工作溶液：以水作溶剂，分别配置成草甘膦及其代谢物氨甲基磷酸的标 准工作溶液； (2) 制备食品样品试液： (a) 称取样品试样，质量为m，加水于高速均质器上离心均质，收集水相或者上层液相， 用水定容至体积为v; (b) 取上述步骤（a)中定容的试液，加入透析袋内，置于玻璃管中，加入超纯水超声，取 出透析出的残液，注入二乙烯基苯固相萃取小柱内，弃去二乙烯基苯固相萃取小柱前流出 液，收集后流出液； (c) 向收集的后流出液中加入石墨化碳黑，作为吸附剂去除样品提取溶液中水溶性色 素干扰，旋窝震荡后离心，取上清液，氮气吹扫至干，残渣用水溶液溶解，过聚四氟乙烯膜， 得到食品样品试液，备用； (3) 采用高效液相色谱-串联三重四级杆质谱联用仪，对步骤（1)的标准工作溶液分 别进行液相色谱-串联质谱测定：以标准工作溶液中草甘膦及其代谢物氨甲基磷酸的浓度 X为横坐标，以对应的测得的定量离子峰面积y为纵坐标，绘制标准工作溶液回归曲线y= ax+b，计算出回归曲线的斜率a和截距b; (4) 采用高效液相色谱-串联三重四级杆质谱联用仪，对步骤（2)的食品样品试液进行 液相色谱-串联质谱测定，根据（3)中所获得的线性方程y=ax+b推算出食品样品试液中 草甘膦及其代谢物氨甲基磷酸的浓度c。，进而计算食品样品中草甘膦及其代谢物氨甲基磷 酸的残留量c，c=cQXv/m。2. 根据权利要求1所述的一种食品中草甘膦及其代谢物氨甲基磷酸残留量的测定方 法，其特征在于：所述的高效液相色谱-串联三重四级杆质谱联用仪的色谱柱为NH2P-502D 柱。3. 根据权利要求1所述的一种食品中草甘膦及其代谢物氨甲基磷酸残留量的测定方 法，其特征在于：所述的吸附剂石墨化碳黑添加量为12-32mg，粒径40-60μπι，ProElut填 料。4. 根据权利要求1所述的一种食品中草甘膦及其代谢物氨甲基磷酸残留量的测定方 法，其特征在于：所述的高效液相色谱-串联三重四级杆质谱联用仪的色谱柱流动相pH为 10-11〇5. 根据权利要求1所述的一种食品中草甘膦及其代谢物氨甲基磷酸残留量的测定方 法，其特征在于：所述的高效液相色谱-串联三重四级杆质谱联用仪的流动相含有乙酸铵 水。6. 根据权利要求1所述的一种食品中草甘膦及其代谢物氨甲基磷酸残留量的测定方 法，其特征在于：所述的高效液相色谱-串联三重四级杆质谱联用仪的流动相为乙酸铵水 和乙腈的混合溶液。7. 根据权利要求5或6所述的一种食品中草甘膦及其代谢物氨甲基磷酸残留量的测定 方法，其特征在于：所述的乙酸铵水的浓度为5mmol/L。8. 根据权利要求1至7中任意一项所述的一种食品中草甘膦及其代谢物氨甲基磷酸残 留量的测定方法，其特征在于：所述的食品包括谷物、油料和油脂、糖料、水果和茶叶。
【专利摘要】本发明涉及一种食品中草甘膦及其代谢物氨甲基磷酸残留量的测定方法，包括制备标准工作溶液、制备食品样品试液、绘制标准工作溶液回归曲线和推算食品样品中草甘膦及其代谢物氨甲基磷酸的残留量。本发明的方法可以准确测定出食品中草甘膦及其代谢物氨甲基磷酸残留量，准确可靠，且重现性良好；采用透析袋加二乙烯基苯固相萃取小柱进行净化，不会堵塞，且回收率80％以上，也不需要使用昂贵的内标物来校正回收；采用NH2P-502D柱，以5mmol/L的乙酸铵水和乙腈作为流动相，具有良好的响应和峰形。
【IPC分类】G01N30/02, G01N30/06
【公开号】CN105372353
【申请号】CN201510973309
【发明人】吴敏, 杜凤君, 严丽娟, 余宇成, 林立毅, 周爽, 徐敦明, 黄志强
【申请人】厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心, 湖南省检验检疫科学技术研究院
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2015年12月22日