构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人 士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明 精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Jo-1抗体IgG的试剂盒，所述试剂盒包括： Anti-Jo-1IgG校准品、Anti-Jo-1IgG试剂1 号、Anti-Jo-1IgG试剂2 号、Anti-Jo-1IgG磁分离 试剂、Anti-Jo-1IgG质控品和清洗液，其特征在于： 所述Anti-Jo-1IgG校准品包括6个液体校准瓶，所述液体校准瓶内目标浓度分别为0、 5、20、50、100、200RU/mL的抗Anti-Jo-Ι抗体IgG和牛血清白蛋白的Tris缓冲液； 所述Anti-Jo-lIgG试剂1号为1个含有生物素标记的Jo-Ι抗原和牛血清白蛋白的Tris缓冲液的瓶； 所述Anti-Jo-1IgG试剂2号为含有碱性磷酸酶标记的羊抗人多克隆抗体和牛血清白蛋 白的Tris缓冲液的瓶； 所述Anti-Jo-lIgG磁分离试剂为含有链霉亲和素标记的磁微粒和牛血清白蛋白的Tris缓冲液瓶； 所述Anti-Jo-lIgG质控品包括2质控瓶，所述质控瓶内的浓度的范围分别为：16-24RU/mL和80-120RU/mL。2. -种使用磁微粒化学发光定量检测抗Jo-1抗体IgG的试剂盒的制备方法，其特征在 于，所述的制备方法包括： 步骤1.制备所述Anti-Jo-11gG校准品包括:Anti-Jo-11gG校准品稀释液配制步骤和Anti-Jo-11gG校准品配制步骤： 所述Anti-Jo-11gG校准品稀释液的配制步骤包括： 加800mL纯化水和11.2g的Tris到容器中，搅拌混合均匀，再加8.5g的氯化钠和2mL的Proclin300，搅拌至完全溶解，将pH值调为7.0-7.5，加40g的牛血清白蛋白到容器中，搅拌 至完全溶解，再将pH值调为7.0-7.5，用纯化水定容至1L，使用0.2μπι滤器过滤，将获得的所 述校准品稀释液保存在2_8°C待用； 所述Anti-Jo-1IgG校准品的配制步骤包括： 用上述Anti-Jo-1IgG校准品稀释液将抗Jo-Ι抗体IgG分别配制为0、5、20、50、100、 200RU/mL共6个浓度点； 步骤2.制备所述Anti-Jo-1IgG试剂1号包括:Anti-Jo-1IgG试剂1号稀释液配制步骤和Anti-Jo-1IgG试剂1号配制步骤： 所述Anti-Jo-11gG试剂1号稀释液的配制步骤： 加800mL纯化水、12.1g的Tris和5.8g的NaCl于1L容器中，搅拌至完全溶解，再加入2mL的Proclin300，搅拌至完全溶解，再加入5g的牛血清白蛋白，搅拌至完全溶解，将pH值调为 7.0-7.5,用纯化水定容至1L，使用0.2μπι滤器过滤，将获得的所述试剂1号稀释液保存在2-8 °C待用； 所述Anti-Jo-11gG试剂1号的配制步骤： 用0.2mol/L的pH9.0碳酸盐缓冲液配制0.5mg/mL的生物素溶液，按照Jo-Ι抗原与生物 素溶液质量比为10:1的比例在Jo-Ι抗原溶液中加入到上述〇.5mg/mL的生物素溶液，混合均 匀，室温静置18h，反应生成Jo-Ι抗原-生物素连接物的反应液，将得到的Jo-Ι抗原-生物素 连接物反应液通过G-25凝胶柱进行分离，除去未反应的生物素，得到Jo-Ι抗原-生物素连接 物，再用所述试剂1号稀释液将Jo-Ι抗原-生物素连接物稀释到0.1-0.3yg/mL，得到所述的 试剂1号； 步骤3.制备所述Anti-Jo-1IgG试剂2号包括:Anti-Jo-1IgG试剂2号稀释液配制步骤和Anti-Jo-1IgG试剂2号的配制步骤： 所述Anti-Jo-lIgG试剂2号稀释液的配制步骤： 加800mL纯化水、6.06g的4-羟乙基哌嗪乙磺和8.5g的NaCl到容器中，搅拌至完全溶解， 再加入5g的牛血清白蛋白、0.lg的ZnCl2、0.2mL的Proclin300和0.lg的MgCl2,搅拌至完全 溶解，将pH值调为7.5-8.0，用纯化水定容至1L，使用0.2μπι滤器过滤，将获得的所述试剂2号 稀释液保存在2_8°C待用； 所述Anti-Jo-1IgG试剂2号的配制步骤： 将lmg的羊抗人抗体和2-4yL的1Omg/mL的偶联剂为2-亚胺四氢噻吩溶液，室温静置 20min，加入0.lmol/L的甘氨酸溶液10yL，室温静置5min，用G-25凝胶柱除盐，收集活化后抗 体，将活化后的抗体保存在2_8°C备用，取1.5mg的碱性磷酸酶溶液，加入5mg/mL的4-(N-马 来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯溶液10-20yL，室温静置30min，用G-25凝胶 柱除盐，收集活化后碱性磷酸酶，将活化后的碱性磷酸酶保存在2_8°C备用，再将上述活化 的羊抗人抗体与活化的碱性磷酸酶混合，在2-8°C条件下静置12-24h，用SypperdeUOO凝胶 纯化柱纯化，获得羊抗人抗体-碱性磷酸酶连接物浓溶液，置于2-8°C保存备用，将羊抗人抗 体-碱性磷酸酶连接物浓溶液用所述试剂2号稀释液稀释到0.02-0.lyg/mL，得到所述的试 剂2号； 步骤4.制备所述Anti-Jo-1IgG磁分离试剂包括:Anti-Jo-1IgG磁分离试剂稀释液配制 步骤和Anti-Jo-1IgG磁分离试剂配制步骤： 所述Anti-Jo-1IgG磁分离试剂稀释液配制步骤： 加800mL纯化水、12.lg的Tris和8.5g的NaCl到容器中，搅拌至完全溶解，再加5g的牛血 清白蛋白、50mL的新生牛血清和0.2mL的Proclin300,搅拌至完全溶解，将pH值调为7.9-8.1，用纯化水定容至1L，使用0.2μπι滤器过滤，将获得的所述磁分离试剂稀释液保存在2-8 °C待用； 所述Anti-Jo-1IgG磁分离试剂配制步骤： 取100mg磁微粒，磁分离去上清，取用0.025mol/L的pH值为4.5-6的2-吗啉乙磺酸缓冲 液1OmL重悬，室温下混勾2~3h，加入0.5-1.OmL新配制的浓度为10mg/mL的碳二亚胺和N-轻 基硫代琥珀酰亚胺的吗啉乙磺酸缓冲液，室温振荡混悬30-60min，使磁珠充分活化，磁分 离，去上清，用0. 〇25mol/L的pH值为4.5-6的2-吗啉乙磺酸缓冲液10mL重悬，加入4-8mg的链 霉亲和素，室温混悬16-20h，再进行磁分离，去上清，用百分比浓度0.5%的牛血清白蛋白， 百分比浓度0.5%脱脂奶粉和百分比浓度0.05%吐温-20的2-吗啉乙磺酸缓冲液10mL重悬， 室温条件下混匀2~3h，再磁分离，去上清，用磁微粒缓冲液稀释重悬到0.5mg/mL，在2~8°C 下平衡16~24h，室温条件下混匀2~3h后，使用超声振荡仪将混悬液中聚集成团的磁珠分 散成单颗粒状态，得到所述Anti-Jo-lIgG磁分离试剂。3.根据权利要求2所述一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Jo-Ι抗体IgG的试剂盒的 制备方法，其特征在于，所述制备方法包括清洗液的制备步骤： 加800mL纯化水、12.1g的Tris和8.5g的NaCl于1L容器中，搅拌至完全溶解，再加入5g的 吐温-20和5g的TritonlOO，搅拌，直至完全混匀，将pH值调为7.5-8.0，定容1L，使用0.2μπι滤 器过滤，将获得的所述清洗浓缩液保存在2-8°C待用，使用前将所述清洗液按照每7.5mL加 纯化水至lOOmL比例稀释并混匀。4. 一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Jo-Ι抗体IgG的试剂盒的检测方法，包括以下 步骤： 步骤1.将Anti-Jo-lIgG校准品放到全自动化学发光免疫分析仪测试位置，得到由全自 动化学发光免疫分析仪输出的拟合曲线； 步骤2.将Anti-Jo-lIgG质控品放到上述分析仪测试位置，得到由全自动化学发光免疫 分析仪输出的所述质控品的测试发光值和通过步骤1得到的拟合曲线拟合得到Anti-Jo-1IgG质控品的浓度值； 步骤3.将待测样本放到上述分析仪测试位置，由所述分析仪自动按1: 20将样本稀释， 得到由全自动化学发光免疫分析仪输出的待测样本的浓度值。5. 根据权利要求4所述的一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Jo-Ι抗体IgG的试剂盒 的检测方法，其特征在于:所述步骤1、步骤2和步骤3均包括全自动化学发光免疫分析仪的 全自动检测步骤： 步骤1)加20yL校准品或质控品或1:20稀释后的待测标本至检测管中； 步骤2)加50yL的Anti-Jo-1IgG试剂1号至步骤1)所述检测管中，混匀后，37 ±0.5°C温 育lOmin; 步骤3)加50yL的Anti-Jo-1IgG磁分离试剂至步骤2)所述检测管中，混匀后，37 ±0.5°C温育5min，进行磁分离，去上清； 步骤4)加300yL的清洗液至检测管中，混匀，进行磁分离，去上清； 步骤5)重复步骤4)两遍； 步骤6)加150yL的Anti-Jo-lIgG试剂2号至检测管中，混匀后，37±0.5°C温育lOmin，进 行磁分离，去上清； 步骤7)加300yL的清洗液至检测管中，混匀，进行磁分离，去上清； 步骤8)重复步骤7)两遍； 步骤9)加200yL的化学发光底物至检测管中，混匀，检测发光强度。
【专利摘要】本发明涉及免疫学检测技术领域，具体涉及一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Jo-1抗体IgG的试剂盒及其制备方法和检测方法。本发明提供的一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Jo-1抗体IgG的试剂盒，包括Anti-Jo-1？IgG校准品、Anti-Jo-1？IgG试剂1号、Anti-Jo-1？IgG试剂2号、Anti-Jo-1？IgG磁分离试剂、Anti-Jo-1？IgG质控品和清洗液。本发明还公开了上述试剂盒的制备和检测方法。该检测方法在传统的膜条免疫法和酶联免疫吸附法的基础上，将灵敏度和线性范围再提高3-5个数量级、实现了定量检测，具有敏感度高、特异性强、准确性好、成本低、操作简便和结果判断客观优点，并配合全自动化学发光免疫分析仪实现全自动使用，具有广阔的应用前景。
【IPC分类】G01N33/531, G01N33/553, G01N21/76
【公开号】CN105466913
【申请号】CN201510782564
【发明人】不公告发明人
【申请人】北京中航赛维生物科技有限公司
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2015年11月16日