9时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带;此外，在第二反应窗4和第三反应窗5内，检测样品经过所述第二和第三胶体金结合垫21、23时，则不能与所述金标垫上的金标多克隆抗体结合，当接触到所述第四至第九检测线10、11、12、14、15、16时不发生反应，金标多克隆抗体继续向所述第二对照线13和第三对照线17方向渗移，当接触到所述第二和第三对照线13和17时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带；当第三至第九检测线8、10、11、12、14、15、16没有颜色变化，而第一检测线6和第二检测线7出现淡红色、第一至第三对照线9、13、17出现棕红色条带时，则判定被检样品感染了百合X病毒，田间防治采取杀灭蚜虫并喷施抗病毒药剂；
若待检溶液中含有LVX，在第一反应窗3内，检测样品经过所述第一胶体金结合垫19时，LVX与金标垫上的金标多克隆抗体形成复合物，然后继续向所述第一至第三检测线6、7、8方向渗移，当接触到所述第一检测线6、第二检测线7、第三检测线8时分别发生抗原抗体结合反应而被截留下来，第一检测线6、第二检测线7形成淡红色、而第三检测线8形成棕红色条带;剩余的金标多克隆抗体继续向所述第一对照线9方向渗移，当接触到所述第一对照线9时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带;此外，在第二反应窗4和第三反应窗5内，检测样品经过所述第二和第三胶体金结合垫21、23时，则不能与所述金标垫上的金标多克隆抗体结合，当接触到所述第四至第九检测线10、11、12、14、15、16时不发生反应，金标多克隆抗体继续向所述第二对照线13和第三对照线17方向渗移，当接触到所述对照线13和17时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带；当第四至第九检测线10、11、12、14、15、16没有颜色变化，而第一检测线6和第二检测线7出现淡红色、第三检测线8以及第一至第三对照线9、13、17出现棕红色条带时，则判定被检样品感染了百合X病毒，且病毒含量高，田间防治应增加抗病毒药剂的使用量和使用频次，同时杀灭蚜虫；
若待检溶液中含有PNRSV，在第二反应窗4内，检测样品经过所述第二胶体金结合垫21时，PNRSV与金标垫上的金标多克隆抗体形成复合物，然后继续向所述第四至第六检测线10,11,12方向渗移，当接触到所述第四检测线10时发生抗原抗体结合反应而被全部截留下来，形成可见的淡红色条带;金标垫上剩余的金标多克隆抗体继续向所述第五检测线11、第六检测线12方向渗移，当接触到所述第五检测线11和第六检测线12时不发生反应，金标多克隆抗体继续向所述第二对照线13方向渗移，当接触到所述第二对照线13时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带;此外，在第一反应窗3和第三反应窗5内，检测样品经过所述第一和第三胶体金结合垫19、23时，则不能与所述金标垫上的金标多克隆抗体结合，当接触到所述第一至第三检测线6、7、8以及第七至第九检测线14、15、16时不发生反应，金标多克隆抗体继续向所述第一对照线9和第三对照线17方向渗移，当接触到所述第一和第三对照线9、17时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带；当第一至第三、第五至第九检测线6、7、8、11、12、14、15、16没有颜色变化，而第四检测线10出现淡红色、第一至第三对照线9、13、17出现棕红色条带时，则判定被检样品感染了百合李属坏死环斑病毒，病毒含量低，田间防治以杀灭蚜虫为主；
若待检溶液中含有PNRSV，在第二反应窗4内，检测样品经过所述第二胶体金结合垫21时，PNRSV与金标垫上的金标多克隆抗体形成复合物，然后继续向所述第四至第六检测线10,11,12方向渗移，当接触到所述第四检测线10时发生抗原抗体结合反应而被部分截留下来，形成可见的淡红色条带;剩余的复合物继续往所述第五检测线11、第六检测线12方向渗移，当接触到所述第五检测线11时发生抗原抗体结合反应而被全部截留下来，形成可见的淡红色条带；剩余的金标多克隆抗体继续向所述第六检测线12和第二对照线13方向渗移，当接触到所述第六检测线12时不发生反应，金标多克隆抗体继续向所述第二对照线13方向渗移，当接触到所述第二对照线13时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带;此外，在第一反应窗3和第三反应窗5内，检测样品经过所述第一和第三胶体金结合垫19、23时，则不能与所述金标垫上的金标多克隆抗体结合，当接触到所述第一至第三检测线6、7、8以及第七至第九检测线14、15、16时不发生反应，金标多克隆抗体继续向所述第一对照线9和第三对照线17方向渗移，当接触到所述第一和第三对照线9、17时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带；当第一至第三、第六至第九检测线6、7、8、12、14、15、16没有颜色变化，而第四检测线10和第五检测线11出现淡红色、第一至第三对照线9、
13、17出现棕红色条带时，则判定被检样品感染了百合李属坏死环斑病毒，田间防治采取杀灭蚜虫并喷施抗病毒药剂；
若待检溶液中含有PNRSV，在第二反应窗4内，检测样品经过所述第二胶体金结合垫21时，PNRSV与金标垫上的金标多克隆抗体形成复合物，然后继续向所述第四至第六检测线10,11,12方向渗移，当接触到所述第四检测线10、第五检测线11、第六检测线12时发生抗原抗体结合反应而被截留下来，第四检测线10、第五检测线11形成淡红色、而第六检测线12形成棕红色条带;剩余的金标多克隆抗体继续向所述第二对照线13方向渗移，当接触到所述第二对照线13时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带;此外，在第一反应窗3和第三反应窗5内，检测样品经过所述第一和第三胶体金结合垫19、23时，则不能与所述金标垫上的金标多克隆抗体结合，当接触到所述第一至第三检测线6、7、8以及第七至第九检测线14、15、16时不发生反应，金标多克隆抗体继续向所述第一对照线9和第三对照线17方向渗移，当接触到所述第一和第三对照线9、17时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带；当第一至第三、第七至第九检测线6、7、8、14、15、16没有颜色变化，而第四检测线10和第五检测线11出现淡红色、第六检测线12以及第一至第三对照线9、13、17出现棕红色条带时，则判定被检样品感染了百合李属坏死环斑病毒，且病毒含量高，田间防治应增加抗病毒药剂的使用量和使用频次，同时杀灭蚜虫；
若待检溶液中含有SLRSV，在第三反应窗5内，检测样品经过所述第三胶体金结合垫23时，SLRSV与金标垫上的金标多克隆抗体形成复合物，然后继续向所述第七至第九检测线14、15、16方向渗移，当接触到所述第七检测线14时发生抗原抗体结合反应而被全部截留下来，形成可见的淡红色条带;金标垫上剩余的金标多克隆抗体继续向所述第八检测线15、第九检测线16方向渗移，当接触到所述第八检测线15和第九检测线16时不发生反应，金标多克隆抗体继续向所述第三对照线17方向渗移，当接触到所述第三对照线17时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带;此外，在第一反应窗3和第二反应窗4内，检测样品经过所述第一和第二胶体金结合垫19、21时，则不能与所述金标垫上的金标多克隆抗体结合，当接触到所述第一至第三检测线6、7、8以及第四至第六检测线10、11、12时不发生反应，金标多克隆抗体继续向所述第一对照线9和第二对照线13方向渗移，当接触到所述第一和第三对照线9、13时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带；当第一至第六、第八至第九检测线6、7、8、10、11、12、15、16没有颜色变化，而第七检测线14出现淡红色、第一至第三对照线9、13、17出现棕红色条带时，则判定被检样品感染了百合草莓潜隐环斑病毒，病毒含量低，田间防治以杀灭蚜虫为主；
若待检溶液中含有SLRSV，在第三反应窗5内，检测样品经过所述第三胶体金结合垫23时，SLRSV与金标垫上的金标多克隆抗体形成复合物，然后继续向所述第七至第九检测线14、15、16方向渗移，当接触到所述第七检测线14时发生抗原抗体结合反应而被部分截留下来，形成可见的淡红色条带;剩余的复合物继续往所述第八检测线15、第九检测线16方向渗移，当接触到所述第八检测线15时发生抗原抗体结合反应而被全部截留下来，形成可见的淡红色条带;金标垫上剩余的金标多克隆抗体继续往所述第九检测线16和第三对照线17方向渗移，当接触到所述第九检测线16时不发生反应，金标多克隆抗体继续向所述第三对照线17方向渗移，当接触到所述第三对照线17时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带;此外，在第一反应窗3和第二反应窗4内，检测样品经过所述第一和第二胶体金结合垫19、21时，则不能与所述金标垫上的金标多克隆抗体结合，当接触到所述第一至第三检测线6、7、8以及第四至第六检测线10、11、12时不发生反应，金标多克隆抗体继续向所述第一对照线9和第二对照线13方向渗移，当接触到所述第一和第三对照线9、13时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带；当第一至第六、以及第九检测线6、7、8、10、11、12、16没有颜色变化，而第七检测线14和第八检测线15出现淡红色、第一至第三对照线9、13、17出现棕红色条带时，则判定被检样品感染了百合草莓潜隐环斑病毒，田间防治采取杀灭蚜虫并喷施抗病毒药剂；
若待检溶液中含有SLRSV，在第三反应窗5内，检测样品经过所述第三胶体金结合垫23时，SLRSV与金标垫上的金标多克隆抗体形成复合物，然后继续向所述第七至第九检测线14、15、16方向渗移，当接触到所述第七检测线14、第八检测线15、第九检测线16时发生抗原抗体结合反应而被截留下来，第七检测线14、第八检测线15形成淡红色条带，第九检测线16形成淡红色条带;剩余的金标多克隆抗体继续向所述第三对照线17方向渗移，当接触到所述第三对照线17时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带;此外，在第一反应窗3和第二反应窗4内，检测样品经过所述第一和第二胶体金结合垫19、21时，则不能与所述金标垫上的金标多克隆抗体结合，当接触到所述第一至第三检测线6、7、8以及第四至第六检测线10、11、12时不发生反应，金标多克隆抗体继续向所述第一对照线9和第二对照线13方向渗移，当接触到所述第一和第三对照线9、13时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带；当第一至第六检测线6、7、8、10、11、12没有颜色变化，而第七检测线14和第八检测线15出现淡红色、第九检测线16以及第一至第三对照线9、13、17出现棕红色条带时，则判定被检样品感染了百合草莓潜隐环斑病毒，且病毒含量高，田间防治应增加抗病毒药剂的使用量和使用频次，同时杀灭蚜虫；
若待检溶液中不含LVX、PNRSV和SLRSV，在第一、第二和第三反应窗3、4、5内，检测样品经过所述第一、第二和第三胶体金结合垫19、21、23时，则不能与金标垫上的金标多克隆抗体结合，当接触到所述第一至第九检测线6、7、8、10、11、12、14、15、16时不发生反应，金标多克隆抗体继续向所述第一、第二和第三对照线9、13、17方向渗移，当接触到所述第一、第二和第三对照线9、13、17时与羊抗兔IgG结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带；当第一至第九检测线6、7、8、10、11、12、14、15、16均没有颜色变化，而仅第一至第三对照线9、13、17出现棕红色条带时，则判定被检样品没有感染百合X病毒、百合李属坏死环斑病毒和百合草莓潜隐环斑病毒。
[0016]一种百合X病毒、百合李属坏死环斑病毒和百合草莓潜隐环斑病毒复合半定量检测金标卡的制备方法，按以下步骤进行:(I)兔抗LVX IgG,PNRSV IgG和SLRSV IgG的制备:分别从感染了LVX、PNRSV和SLRSV的百合叶片中提取总RNA进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)，扩增LVX、PNRSV和SLRSV的CP基因片段;通过双酶切分别克隆至pET-28a载体;重组质粒转化入E.coli BL21 (DE3)，37°C震荡培养，IPTG诱导表达，N1-NTA柱纯化获得大小分别为22.0 ,25.0和26.01^^的高纯度1^0(、？爾5￥和51^5￥重组蛋白；分别用0.511^的1^0(、？謝5￥和SLRSVCP重组蛋白作为免疫原免疫日本大耳白兔，获得抗血清;所得抗血清依次通过20%、50%、33%三个饱和度的硫酸铵沉淀粗提后，透析至pH 7.8的磷酸缓冲液，然后使用ProteinG柱进行纯化而分别获得高纯度兔抗LVX IgG,PNRSV IgG和SLRSV IgG; (2)胶体金分别标记兔抗LVX IgG,PNRSV IgG和SLRSV IgG的方法:取半径为30 nm的胶体金10mL和兔抗LVXIgG 1.6mg(lmg/mL)、半径为30 nm的胶体金10mL和兔