一种祁门红茶中含氮化合物的鉴定方法
【专利摘要】本发明提供了一种祁门红茶中含氮化合物的鉴定方法，属于分析检测技术领域，包括一个提取祁门红茶中含氮化合物的步骤；一个利用气相色谱?氮磷检测器?质谱联用技术检测分析上述所得到的祁门红茶中的含氮化合物，并对其进行定性定量分析的步骤。本发明采用静态顶空固相微萃取结合气相色谱?氮磷检测器?质谱联用技术分析祁门红茶茶汤中的含氮化合物，形成了一套祁门红茶中含氮化合物的定性定量分析方法，操作简单、易行，适用性广泛。
【专利说明】
一种祁门红茶中含氮化合物的鉴定方法
技术领域
[0001] 本发明属于分析检测技术领域，尤其涉及一种分析茶类含氮化合物的方法，特别 是一种祁门红茶中含氮化合物的检测方法。
【背景技术】
[0002] 祁门红茶是中国历史名茶，距今已有百余年的生产历史；祁门红茶是著名的红茶 精品，简称祁红，产于安徽省祁门、东至、贵池、石台、黟县，以及江西的浮梁一带。祁红外形 条索紧细匀整，锋苗秀丽，色泽乌润(俗称"宝光"）；香气酷似果香，又带兰花香(号称"祁门 香"），馥郁持久；汤色红艳明亮，滋味甘鲜醇厚，叶底(泡过的茶渣)红亮。祁门红茶，是"红 茶"中的佼佼者，向以"香高、味醇、形美、色艳"四绝驰名于世;似花、似果、似蜜的"祁门香" 以闻名于世，位居世界三大高香名茶之首;又因祁门红茶有一种特殊的芳香;故外国人称祁 门红茶为"祁门香"，"王子香"，"群芳最"，"红茶皇后"。
[0003] 祁门红茶中的含氮化合物与其他物质一样是构成祁门红茶风味的重要因素，决定 祁门红茶的风味和典型性。国内外研究者采用定性定量的办法已经鉴定出许多种决定祁门 红茶风味的物质。近些年对祁门红茶风味物质的研究发现虽然含氮化合物在祁门红茶中含 量甚微，然该类化合物风味阈值低，具有坚果香和焙烤香等怡人风味，并对其他香味物质有 明显的烘托叠加作用，是祁门红茶中一类重要的风味化合物，但目前国内外对祁门红茶中 的含氮化合物的研究仍处于起步阶段，应用常规的气相色谱法(FID检测器)直接进样分析 存在一定困难。本发明旨在采用静态顶空固相微萃取结合气相色谱-氮磷检测器-质谱联用 技术，对市面上祁门红茶茶样中的含氮化合物进行分析研究，建立一套祁门红茶中含氮化 合物的定性定量分析方法，操作简单、易行，适用性广泛。
【发明内容】
[0004] 针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种祁门红茶中含氮化合物的鉴 定方法，所述的这种方法要解决现有技术中测定祁门红茶中的含氮化合物成份和浓度不准 确的技术问题。
[0005] 本发明一种祁门红茶中含氮化合物的检测方法，包括下列步骤：
[0006] 1) 一个提取祁门红茶中含氮化合物的步骤:先将蒸馏水于80°C的恒温水浴锅中平 衡lOmin，加入祁门红茶，所述的祁门红茶与蒸馏水的质量比为1:10,摇勾，浸泡lOmin后筛 网过滤，茶汤冷却后放入4°C冰箱中备用;然后取5g该茶汤，添加lg氯化钠、添加10yL浓度为 4m g//L的2-甲氧基-3-甲基吡嗪置于15mL或20mL顶空瓶中，顶空瓶用硅胶垫皮密封，SPME条 件为:将萃取头插入到顶空瓶中，并使萃取头处于样品之上3~4cm，恒温水浴温度45~50°C 下，萃取50~55min;萃取完成后，迅速将萃取头插入气相色谱-氮磷检测器-质谱联用仪进 样口，于250°C下解吸3~5min;
[0007] 2)-个利用气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技术检测分析步骤1)所得到的祁门 红茶茶汤中的含氮化合物的步骤：
[0008] 气相色谱条件:DB-5毛细管色谱柱，其参数为60m X 0.25mm，0.25μL?;手动不分流进 样，进样口温度250 °C ;程序升温:初始温度40 °C，保持6min，以3 °C/min的速率升至100 °C，不 保持，以5°C/min的速率升至230°C，保持lOmin;
[0009] NPD温度：250 °C ;氢气流速：2 . OmL/min;空气流速：60mL/min;载气He，流速30mL/ min；
[0010] MS条件:El电离源，电子能量70eV，扫描范围30~450amu，离子源温度230°C;传输 线温度280°C ;四极杆温度150°C ;
[0011] 3) -个对检出的含氮化合物进行定性分析的步骤，未知化合物的质谱通过与 wiley7n，NIST 11及标准品对比进行定性；
[0012] 4)-个对检出的含氮化合物进行定量分析的步骤，称取一定量标准品，配制于蒸 馏水中作为单标贮备液，准确吸取一定量的标准贮备液用蒸馏水配制成一系列浓度的混合 标样;其中内标物质为2-甲氧基-3-甲基吡嗪。
[0013] 进一步的，所述的分析检测仪器为气相色谱-氮磷检测器-质谱联用仪。
[0014] 进一步的，所述的定量方法为内标标准曲线法定量。
[0015] 本发明采用了静态顶空固相微萃取结合气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技术，对 祁门红茶中的含氮化合物进行分析研究，建立一套适用于祁门红茶中含氮化合物的有效定 性定量分析方法。本发明操作简单、易行，达到了满足生产快速检测需求的目的，适用性广 泛。
【附图说明】
[0016] 图1为市售祁门红茶所得茶汤中的含氮化合物色谱图。
【具体实施方式】
[0017] 为进一步阐释采用静态顶空固相微萃取结合气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技 术快速检测并定性定量祁门红茶中含氮化合物的方法，下面结合实例作更详尽的说明。
[0018] 实施例1
[0019] 本方法主要采用静态顶空固相微萃取结合气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技术 对祁门红茶中含氮化合物进行快速检测及定性定量，具体步骤如下：
[0020] 1) 一个提取祁门红茶中含氮化合物的步骤:首先准备祁门红茶茶汤，先称量80g80 °C的蒸馏水于250mL的具塞锥形瓶中，于80°C的恒温水浴锅中平衡lOmin，加入8g茶样，每隔 2min摇匀，浸泡lOmin，筛网过滤，茶汤迅速冷却，放入4°C冰箱中备用。然后取5g该茶汤，添 加lg氯化钠、添加l〇yL浓度为4mg/L的2-甲氧基-3-甲基吡嗪置于15mL顶空瓶中，顶空瓶用 硅胶垫皮密封，SPME条件为:将萃取头插入到顶空瓶中，并使萃取头处于样品之上3.2cm，恒 温水浴温度50°C下，萃取55min;萃取完成后，迅速将萃取头插入气相色谱-氮磷检测器-质 谱联用仪进样口，于250°C下解吸5min;
[0021] 2)用气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技术检测分析步骤1)所得到的祁门红茶中 的含氮化合物、并对其含氮化合物进行定性定量分析：
[0022] 气相色谱条件:DB-5毛细管色谱柱，其参数为60m X 0.25mm，0.25μπι;手动不分流进 样，进样口温度250 °C ;程序升温:初始温度40 °C，保持6min，以3 °C/min的速率升至100 °C，不 保持，以5°C/min的速率升至230°C，保持lOmin;
[0023] NPD温度：250 °C ;氢气流速：2 . OmL/min;空气流速：60mL/min;载气He，流速30mL/ min；
[0024] MS条件:El电离源，电子能量70eV，扫描范围30~450amu，离子源温度230°C;传输 线温度280°C ;四极杆温度150°C ;
[0025] 3)检出物质的定性:未知化合物的质谱通过与wiley7n，NIST 11及标准品对比进 行定性；
[0026] 4)定量分析:称取一定量标准品，配制于蒸馏水中作为单标贮备液，准确吸取一定 量的标准贮备液用蒸馏水配制成一系列浓度的混合标样;其中内标物质为2-甲氧基-3-甲 基吡嗪。
[0027] 表1本发明方法祁门红茶中的含氮化合物鉴定结果
[0030]由表1可知，利用气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技术共鉴定出祁门红茶中14种 含氮化合物，其中噻唑类3种、吡嗪类9种、吡咯类2种。该方法能快速定性出多种含氮化合 物，准确测定出祁门红茶中含氮化合物的含量。
【主权项】
1. 一种祁门红茶中含氮化合物的鉴定方法，其特征在于包括下列步骤： 1) 一个提取祁门红茶中含氮化合物的步骤:先将蒸馏水于80°c的恒温水浴锅中平衡 lOmin，加入祁门红茶，所述的祁门红茶与蒸馏水的质量比为1:10,摇匀，浸泡lOmin后筛网 过滤，茶汤冷却后放入4 °C冰箱中备用；然后取5g该茶汤，添加 lg氯化钠、添加10yL浓度为 4mg//L的2-甲氧基-3-甲基吡嗪置于15mL或20mL顶空瓶中，顶空瓶用硅胶垫皮密封，SPME条 件为:将萃取头插入到顶空瓶中，并使萃取头处于样品之上3~4cm，恒温水浴温度45~50°C 下，萃取50~55min;萃取完成后，迅速将萃取头插入气相色谱-氮磷检测器-质谱联用仪进 样口，于250°C下解吸3~5min; 2) -个利用气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技术检测分析步骤1)所得到的祁门红茶 茶汤中的含氮化合物的步骤： 气相色谱条件:DB-5毛细管色谱柱，其参数为60m X 0.25mm，0.25μπι;手动不分流进样， 进样口温度250°C ;程序升温:初始温度40°C，保持6min，以3°C/min的速率升至100°C，不保 持，以5°C/min的速率升至230°C，保持lOmin; NPD温度:250 °C ;氢气流速:2. OmL/min;空气流速:60mL/min;载气He，流速30mL/min; MS条件:EI电离源，电子能量70eV，扫描范围30~450amu，离子源温度230°C ;传输线温 度280 °C;四极杆温度150 °C; 3) -个对检出的含氮化合物进行定性分析的步骤，未知化合物的质谱通过与wiley7n， NIST 11及标准品对比进行定性； 4) 一个对检出的含氮化合物进行定量分析的步骤，称取一定量标准品，配制于蒸馏水 中作为单标贮备液，准确吸取一定量的标准贮备液用蒸馏水配制成一系列浓度的混合标 样;其中内标物质为2-甲氧基-3-甲基吡嗪。2. 根据权利要求1所述的一种祁门红茶中含氮化合物的鉴定方法，其特征在于:所述的 分析检测仪器为气相色谱-氮磷检测器-质谱联用仪。3. 根据权利要求1所述的一种祁门红茶中含氮化合物的鉴定方法，其特征在于:所述的 定量方法为内标标准曲线法定量。
【文档编号】G01N30/06GK106018623SQ201610552952
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年7月14日
【发明人】肖作兵, 王红玲, 牛云蔚, 马宁, 朱建才
【申请人】上海应用技术学院