一种冻顶乌龙茶中含氮化合物的鉴定方法
【专利摘要】本发明提供了一种冻顶乌龙茶中含氮化合物的鉴定方法，属于分析检测技术领域，包括一个提取冻顶乌龙茶中含氮化合物的步骤；一个利用气相色谱?氮磷检测器?质谱联用技术检测分析上述所得到的冻顶乌龙茶中的含氮化合物，并对其进行定性定量分析的步骤。本发明采用顶空固相微萃取结合气相色谱?氮磷检测器?质谱联用技术分析冻顶乌龙茶茶样中的含氮化合物，形成了一套冻顶乌龙茶中含氮化合物的定性定量分析方法，操作简单、易行，适用性广泛。
【专利说明】
一种冻顶乌龙茶中含氮化合物的鉴定方法
技术领域
[0001] 本发明属于分析检测技术领域，尤其涉及一种分析茶类含氮化合物的方法，特别 是一种冻顶乌龙茶中含氮化合物的检测方法。
【背景技术】
[0002] 乌龙茶属于半发酵茶，在我国六大茶类中独具特色，主产于福建、广东和台湾。乌 龙茶的加工工艺是采摘具有一定成熟度新鲜茶树叶，经晒青萎凋后多次摇青，然后高温杀 青、揉捻（或包揉）、干燥而成。其工艺综合了绿茶和红茶的制法，因此品质也介于绿茶和红 茶之间，既有红茶的甜醇味，又有绿茶的清花香，叶底素有绿叶红镶边的美誉，香气馥郁芬 芳，花香明显，滋味醇厚爽口。冻顶乌龙茶，产地为台湾，茶区海拔600-1000公尺，被誉为"茶 中圣品〃。冻顶乌龙茶汤清爽怡人，汤色蜜绿带金黄，茶香清新典雅，香气清雅，喉韵回甘浓 郁且持久。
[0003] 冻顶乌龙茶中的含氮化合物与其他物质一样是构成冻顶乌龙茶的重要因素，决定 冻顶乌龙茶的风味和典型性。国内外研究者采用定性定量的办法已经鉴定出许多种决定成 品冻顶乌龙茶风味的物质。近些年对冻顶乌龙茶风味物质的研究发现虽然含氮化合物在冻 顶乌龙茶中含量甚微，然该类化合物风味阈值低，具有坚果香和焙烤香等怡人风味，并对其 他香味物质有明显的烘托叠加作用，是冻顶乌龙茶中一类重要的风味化合物，但目前国内 外对冻顶乌龙茶中的含氮化合物的研究仍处于起步阶段，应用常规的气相色谱法(FID检测 器)直接进样分析存在一定困难。本发明旨在采用顶空固相微萃取结合气相色谱-氮磷检测 器-质谱联用技术，对市面上冻顶乌龙茶茶样中的含氮化合物进行分析研究，建立一套冻顶 乌龙茶中含氮化合物的定性定量分析方法，操作简单、易行，适用性广泛。
【发明内容】
[0004] 针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种冻顶乌龙茶中含氮化合物的 鉴定方法，所述的这种方法要解决现有技术中测定冻顶乌龙茶中的含氮化合物成份和浓度 不准确的技术问题。
[0005] 本发明一种冻顶乌龙茶中含氮化合物的检测方法，包括下列步骤：
[0006] 1) 一个提取冻顶乌龙茶中含氮化合物的步骤:将去离子水加热至80 °C，称取冻顶 乌龙茶，将茶样倒入准备的去离子水中，所述的冻顶乌龙茶和去离子水的质量比为1:10,摇 匀浸泡10~15min;浸泡完成后，经筛网过滤，再将过滤所得茶汤迅速冷却至室温;取5g冷却 后茶汤，加入lg氯化钠、20yL2-甲氧基-3-甲基吡嗪置于15ml或20mL顶空瓶中，顶空瓶用硅 胶垫皮密封，用于顶空固相微萃取，固相微萃取条件为:将萃取头插入到顶空瓶中，并使萃 取头处于样品之上2cm，恒温水浴温度45~55 °C下，萃取40~50min;萃取完成后，迅速将萃 取头插入气相色谱-氮磷检测器-质谱联用仪进样口，于250°C下解吸4~6min;
[0007] 2)-个利用气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技术检测分析步骤1)所得到的冻顶 乌龙茶中的含氮化合物的步骤：
[0008] 气相色谱条件:HP-5MS毛细管色谱柱，其参数为60m X 0.25mm、0.25WI1;手动不分流 进样，进样口温度250°C ;程序升温:初始温度40°C，保留6min，以3°C/min的速率升至100°C， 以5°C/min的速率升至230°C，保留20min;
[0009] NPD温度：250 °C ;氢气流速：2 . OmL/min;空气流速：60mL/min;载气He，流速30mL/ min；
[0010] MS条件:EI电离源，电子能量70eV，扫描范围30~550amu，离子源温度230°C;传输 线温度280°C ;四极杆温度150°C ;
[0011] 3) -个对检出的含氮化合物进行定性分析的步骤，未知化合物的质谱通过与 wiley7nDatabase，NISTll及标准品对比进行定性；
[0012] 4)-个对检出的含氮化合物进行定量分析的步骤，称取一定量标准品，配制于去 离子水中作为单标贮备液，准确吸取一定量的标准贮备液用去离子水配制成一系列浓度的 混合标样;其中内标物质为2-甲氧基-3-甲基吡嗪。
[0013] 进一步的，所述的分析检测仪器为气相色谱-氮磷检测器-质谱联用仪。
[0014] 进一步的，所述的定量方法为内标标准曲线法定量。
[0015] 本发明采用了顶空固相微萃取结合气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技术，对冻顶 乌龙茶中的含氮化合物进行分析研究，建立一套适用于冻顶乌龙茶中含氮化合物的有效定 性定量分析方法。本发明操作简单、易行，达到了满足生产快速检测需求的目的，适用性广 泛。
【附图说明】
[0016] 图1为市售冻顶乌龙茶中的含氮化合物色谱图。
【具体实施方式】
[0017] 为进一步阐释采用顶空固相微萃取结合气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技术快 速检测并定性定量冻顶乌龙茶中含氮化合物的方法，下面结合实例作更详尽的说明。
[0018] 实施例1
[0019] 本方法主要采用顶空固相微萃取结合气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技术对冻 顶乌龙茶中含氮化合物进行快速检测及定性定量，具体步骤如下：
[0020] 1)提取冻顶乌龙茶中含氮化合物：1)称量80g去离子水于250ml锥形瓶中，将去离 子水加热至80°C备用；2)准确称取8g市售冻顶乌龙茶，将茶样倒入步骤1)准备的去离子水 中，摇匀浸泡。3)浸泡共需10~15min，过程中需每隔2min摇晃锥形瓶一次，目的在于摇匀茶 叶。4)浸泡完成后，经筛网过滤，再将过滤所得茶汤迅速冷却至室温。5)取5g冷却后茶汤，加 入lg氯化钠、20此2_甲氧基-3-甲基吡嗪置于15ml或20mL顶空瓶中，顶空瓶用硅胶垫皮密 封，用于顶空固相微萃取(SPMEhSPME条件为:将萃取头插入到顶空瓶中，并使萃取头处于 样品之上2cm，恒温水浴温度50°C下，萃取45min;萃取完成后，迅速将萃取头插入气相色谱-氮磷检测器-质谱联用仪进样口，于250°C下解吸5min;
[0021] 2)用气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技术检测分析步骤1)所得到的冻顶乌龙茶 中的含氮化合物、并对其含氮化合物进行定性定量分析：
[0022] 气相色谱条件:HP-5MS毛细管色谱柱，其参数为60m X 0.25mm、0.25mi ;手动不分流 进样，进样口温度250°C ;程序升温:初始温度40°C，保留6min，以3°C/min的速率升至100°C， 以5°C/min的速率升至230°C，保留20min;
[0023] NPD温度：250 °C ;氢气流速：2 . OmL/min;空气流速：60mL/min;载气He，流速30mL/ min；
[0024] MS条件:EI电离源，电子能量70eV，扫描范围30~550amu，离子源温度230°C;传输 线温度280°C ;四极杆温度150°C ;
[0025] 3)检出物质的定性:未知化合物的质谱通过与wiley7nDatabase，NISTll及标准品 对比进行定性；
[0026] 4)定量分析:准确吸取一定量标准品，用去离子水配制成一系列浓度的混合标样； 其中内标物质为2-甲氧基-3-甲基吡嗪。
[0027] 表1本发明方法冻顶乌龙茶中的含氮化合物检测结果
[0030]由表1可知，利用气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技术共检测出冻顶乌龙茶中12 种含氮化合物，其中噻唑3种、吡嗪类6种、吡咯类3种。该方法能快速定性出多种含氮化合 物，准确测定出冻顶乌龙茶中含氮化合物的含量。
【主权项】
1. 一种冻顶乌龙茶中含氮化合物的检测方法，其特征在于包括下列步骤： 1) 一个提取冻顶乌龙茶中含氮化合物的步骤:将去离子水加热至80°c，称取冻顶乌龙 茶，将茶样倒入准备的去离子水中，所述的冻顶乌龙茶和去离子水的质量比为1:10,摇匀浸 泡10~15min;浸泡完成后，经筛网过滤，再将过滤所得茶汤迅速冷却至室温;取5g冷却后茶 汤，加入lg氯化钠、20yL2-甲氧基-3-甲基吡嗪置于15ml或20mL顶空瓶中，顶空瓶用硅胶垫 皮密封，用于顶空固相微萃取，固相微萃取条件为:将萃取头插入到顶空瓶中，并使萃取头 处于样品之上2cm，恒温水浴温度45~55°C下，萃取40~50min;萃取完成后，迅速将萃取头 插入气相色谱-氮磷检测器-质谱联用仪进样口，于250°C下解吸4~6min; 2) -个利用气相色谱-氮磷检测器-质谱联用技术检测分析步骤1)所得到的冻顶乌龙 茶中的含氮化合物的步骤： 气相色谱条件:HP-5MS毛细管色谱柱，其参数为60m X 0.25mm、0.25μπι;手动不分流进 样，进样口温度250°C ;程序升温:初始温度40°C，保留6min，以3°C/min的速率升至100°C，以 5°C/min的速率升至230°C，保留20min; NPD温度:250 °C ;氢气流速:2. OmL/min;空气流速:60mL/min;载气He，流速30mL/min; MS条件:EI电离源，电子能量70eV，扫描范围30~550amu，离子源温度230°C ;传输线温 度280 °C;四极杆温度150 °C; 3 ) -个对检出的含氮化合物进行定性分析的步骤，未知化合物的质谱通过与 wiley7nDatabase，NISTll及标准品对比进行定性； 4)一个对检出的含氮化合物进行定量分析的步骤，称取一定量标准品，配制于去离子 水中作为单标贮备液，准确吸取一定量的标准贮备液用去离子水配制成一系列浓度的混合 标样;其中内标物质为2-甲氧基-3-甲基吡嗪。2. 根据权利要求1所述的一种冻顶乌龙茶中含氮化合物的鉴定方法，其特征在于:所述 的分析检测仪器为气相色谱-氮磷检测器-质谱联用仪。3. 根据权利要求1所述的一种冻顶乌龙茶中含氮化合物的检测方法，其特征在于:所述 的定量方法为内标标准曲线法定量。
【文档编号】G01N30/02GK106053666SQ201610552953
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年7月14日
【发明人】肖作兵, 罗婧, 牛云蔚, 朱建才
【申请人】上海应用技术学院