专利名称:一种多糖的提取方法
技术领域：
本发明涉及真菌有效成分提取分离方法，具体涉及一种灰树花多糖的高效提取方法。
背景技术：
灰树花是担子菌纲多孔菌科的一种药食兼用的食用菌，含有多种活性物质。灰树花多糖是灰树花中最主要的一类活性成分。有文献报道它具有抗肿瘤、抗HIV病毒、调节免疫、调节内分泌与营养代谢等药理作用。灰树花多糖是一种由高度分支化的β_1，6支链的 β -1，3葡聚糖，包括D-组分、MD-组分、X-组分、ΜΤ-2等生理活性组分。灰树花多糖是所有实验的真菌多糖中抗肿瘤作用最强的，且口服有效。灰树花多糖抗肿瘤、抗病毒等药理活性均与其激活免疫系统，调节免疫功能相关。Suzuki等通过给小鼠服用灰树花多糖给药后体外培养脾细胞研究发现，培养上清中具有高浓度的IgG和IFN- y。Nanba等研究了灰树花D组分对小鼠机体的免疫激活作用，发现小鼠体内自然杀伤细胞、细胞T毒细胞、迟敏T 细胞均被激活1. 5 2. 2倍，IL-UIL-2和超氧负离子含量均得到不同程度的提高；李小定等研究发现，灰树花均一多糖(PGF-I)经口服给药，能全面增强荷瘤小鼠的非特异性免疫、 细胞免疫及体液免疫功能。
研究发现灰树花多糖具有广泛的药理作用，可以抑制肿瘤、稳定血压、降低血糖、 改善脂肪代谢。灰树花子实体中有多种多糖，不同的多糖具有各自不同的药理作用，目前尚缺乏对其多糖提取的有效方法。
微波具有的高频特性、热特性及生物效应几大特点所致。一方面，高频微波促使样品中偶极分子旋转而导致弱氢键破裂及离子迁移，加速了多糖对样品的渗透，并使多糖很快溶解；另一方面，微波是一种高频波，它使提取体系中偶极分子因高速旋转产生高频率摩擦，从而可在短时间内产生极大的热量，使整个样品同时被加热，从而大大加快了多糖的溶解；第三方面，微波具有生物效应，微波会引起样品细胞膜破裂，加速了多糖从细胞中释放出来。可见，微波辅助提取法与传统水提法相比，提取时间缩短，所得净多糖产率也有一定的提高。
灰树花菌丝体中除多糖外，还含有一定量的蛋白质、胶质和粗纤维等成分，如能采用有关酶类对菌丝体进行预处理，将会有利于糖类物质的溶出和分离，从而提高多糖的提取率。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是使用微波和酶复合技术，使灰树花多糖提取率提高，提供一种高效的灰树花多糖的方法。
本发明实现灰树花多糖提取的技术方案为
1、一种多糖的提取方法，其特征在于该方法是将灰树花子实体粉碎，加入蒸馏水后微波处理，然后加一定的胶原酶和纤维素酶等复合酶，升温灭酶，离心，上清液用乙醇、丙酮等有机溶剂沉淀，得灰树花多糖。
2、灰树花多糖的分离包括下列步骤
A、灰树花多糖的微波辅助提取工艺
以灰树花子实体为原料，粉碎成细粉，加1-50倍蒸馏水，调pH至5. 0-8. 0，按各种设定条件(提取时间为2-lOmin;微波功率200-2000W;液料比1 10_1 50)进行微波提取。微波提取过程为间歇微波处理，每次anin，中间停lmin，补加损失的水分使提取液体积保持相对恒定。处理完后将提取液过滤，按同样条件重复提取1次，合并提取液。
B、灰树花多糖的微波辅助提取工艺
经过微波处理的提取液，调至pH5. 0-8.0，加1-5%的胶原酶和纤维素酶等复合酶，置30°C-80°C保温反应40min-120min后，立即升温至70°C _100°C灭酶，立即升温灭酶， 3000-6000r/min离心，取上清液，乙醇、丙酮等有机溶剂沉淀，得灰树花多糖。多糖含量为 5% -90%，多肽含量为80% -5%。
用本发明分离获得的多糖可用^^叫、三氯乙酸法或几种方法同时应用进行脱蛋白处理，以得到纯化多糖，多糖含量为20-99%。
本发明利用使用微波和酶复合技术提取总多糖，提高灰树花多糖提取率。本发明方法操作简便，多糖分离提取效果显著，为发挥灰树花多糖的药效作用，制备各种适应症的药物提供了可能。
具体实施方式
实施例1灰树花多糖的提取
称取灰树花子实体细粉lOOOg，加8000ml蒸馏水，调pH至7. 0，按各种设定条件(提取时间为IOmin ；微波功率2000W;液料比1 20)进行微波提取。经过微波处理的提取液，调至PH7. 0，加灰树花质量的3%的胶原酶和纤维素酶等复合酶，置40°C保温反应120min后，立即升温至80°C灭酶，并继续于60°C水浴中浸提lh，立即升温至90°C灭酶。 5000rpm离心15分钟，上清液留用。残渣加入8000ml蒸馏水，上述方法重复3次，合并所有上清液。减压浓缩，加入4倍体积95%乙醇，4°C过夜，5000rpm离心15分钟，沉淀减压干燥，碾碎，即得灰树花多糖224. 8g，其中多糖含量为48. 6%。
实施例2灰树花多糖的提取
以灰树花子实体为原料，粉碎成细粉，加50倍蒸馏水，调pH至7. 0，按各种设定条件(提取时间为5min;微波功率1000W ；液料比1 30)进行微波提取。微波提取过程为间歇微波处理，每次anin，中间停lmin，补加损失的水分使提取液体积保持相对恒定。经过微波处理的提取液，调至PH7.0，加灰树花质量的5%的胶原酶和纤维素酶(质量比为 1 2)等复合酶，置40°C保温反应120min后，立即升温至80°C灭酶，并继续于60°C水浴中浸提lh，立即升温灭酶，4000r/min离心，取上清液，乙醇沉淀，得灰树花多糖。多糖含量为 73. 2%%，多肽含量为11. 2%。
实施例3灰树花多糖的提取
以灰树花子实体为原料，粉碎成细粉，加20倍蒸馏水，调pH至6. 0，按各种设定条件(提取时间为7min;微波功率500W;液料比1 50)进行微波提取。经过微波处理的提取液，调至PH7. 5，加灰树花质量的2. 5%的胶原酶和纤维素酶(质量比为2 5)等复合酶，置50°C保温反应120min后，立即升温至70°C灭酶，3000r/min离心，取上清液，丙酮等有机溶剂沉淀，得灰树花多糖。多糖含量为81.2%，多肽含量为14. 1%。
权利要求
1.一种多糖的提取方法，其特征在于该方法是将灰树花子实体粉碎，加入蒸馏水后微波处理，然后加一定的胶原酶和纤维素酶等复合酶，升温灭酶，离心，上清液用乙醇、丙酮等有机溶剂沉淀，得灰树花多糖。
2.如权利要求
1所述的一种多糖的提取方法，其特征在于其中所述的灰树花多糖的分离包括下列步骤A、灰树花多糖的微波辅助提取工艺以灰树花子实体为原料，粉碎成细粉，加1-50倍蒸馏水，调pH至5. 0-8. 0，按各种设定条件(提取时间为2-lOmin;微波功率200-2000W;液料比1 10_1 50)进行微波提取。 处理完后将提取液过滤，按同样条件重复提取1次，合并提取液。B、灰树花多糖的微波辅助提取工艺经过微波处理的提取液，调至PH 5. 0-8. 0，加灰树花质量的1-5%的胶原酶和纤维素酶等复合酶((质量比为1 4)，置30°C-80°C保温反应40min-120min后，立即升温至 700C -100°C灭酶，立即升温灭酶，3000-6000r/min离心，取上清液，乙醇、丙酮等有机溶剂沉淀，得灰树花多糖。
专利摘要
本发明涉及灰树花子实体多糖的提取方法。该方法是将灰树花子实体粉碎，加入蒸馏水后微波处理，然后加一定的胶原酶和纤维素酶等复合酶进行处理，升温灭酶，离心，上清液用乙醇、丙酮等有机溶剂沉淀，得灰树花多糖。本发明使用微波和酶复合技术提取灰树花多糖，提高多糖提取率，为发挥灰树花多糖的药效作用，制备各种适应症的药物提供了可能。
文档编号C12S3/02GKCN102453105SQ201010528169
公开日2012年5月16日 申请日期2010年11月2日
发明者王智佳 申请人:天津济命生生物科技有限公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan