专利名称：团头鲂复合中草药抗应激制剂、制备方法及其使用方法
技术领域：
本发明涉及一种团头鲂复合中草药抗应激制剂、制备方法及其使用方法，属于水产配合饲料技术领域。
背景技术：
团头鱼方{Megalobrama amblycephala ),隶属于硬骨鱼纲，鲤形目，鲤科，鳊亚科，鱼方属，现为我国主要的淡水养殖品种之一，近年来年产量已超过60万吨，并有上升趋势。团头鲂生理特点是身体大、内脏小，集中在南方地区养殖，易受高温气候影响，相对于鲤、鲫鱼等鱼类，团头鲂不耐低氧和运输，因此在养殖生产过程当中经常受到外界不利因素的影响产生应激，病害频繁发生，团头鲂养殖业带来巨大的经济损失。为防治病原菌，抗生素及抗菌药物得到了大量使用，并造成药物残留、耐药性增强、引起动物免疫力下降等一系列不良后果，影响人类食品安全，影响水产养殖业的可持续发展。随着抗生素、抗菌药物的逐渐禁用，一些绿色、安全、高效饲料添加剂的开发与应用应运而生。中草药具有天然、高效、毒副作用少、资源丰富等优点，含有与动物的免疫功能密切相关的生物碱、茶多酚、皂甙、低聚糖、黄酮类、挥发油类等，能促进机体健康，减少抗生素在动物生产中的使用，是我国传统的防病治病药物。五倍子(Galla Chinensis)又名百虫仓、百药煎、掊子,化学成分主要包括单宁酸、没食子酸、五倍子油、树脂、蛋白质、脂肪、淀粉、蜡质、矿物质等。其中主要有效成分单宁酸含量很高，最高可达70%以上，具有抗菌、抗病毒、清除自由基和抗氧化等作用。刺五加(Radix Acanthopanacis Senticosl)是五加科五加属，化学成分主要包括多种醣类、氨基酸、脂肪酸、维生素A、B1、B2及多量的胡萝卜素；另含有芝麻脂素、留醇、香豆精、黄酮、木栓酮、非芳香性不饱和有机酸、及多种微量矿物质等，具有调节机体紊乱，使之趋于正常的功能，提高耐缺氧能力，抗菌消炎等作用。黄柏(Cortex Phellodendri Chinensis)为芸香科植物黄皮树或黄檗的干燥树皮。主要成分小檗碱、黄柏碱、木兰花碱等多种生物碱及内酯、留醇、黏液质等，具有抗真菌、抗细菌、抗氧化、提高免疫机能等功效。蒲公英(Herba Taraxaci)属菊科多年生草本植物。含有蒲公英醇、蒲公英素、胆碱、有机酸、菊糖等多种健康营养成分，同时含有蛋白质、脂肪、碳水化合物、微量元素及维生素等，有丰富的营养价值。具有有利尿、缓泻、退黄疸、利胆、保肝等功效，同时具有抗真菌、抗细菌、抗氧化、提高免疫机能等作用。白头翁(Pulsatilla chinensis (Bunge) Regel)是毛莨科植物，多年生草本,另lj名有奈何草、粉乳草、白头草、老姑草、菊菊苗、老翁花、老冠花、猫爪子花等等，具有清热解毒，凉血止痢，用于热毒血痢，阿米巴痢疾，对肠粘膜有收敛作用，能止泻，止血，对绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、痢疾杆菌有抑制作用。甘草(Radix Glycyrrhizae)是一种补益中草药。含有多种化学成分,主要成分有甘草酸、甘草甙等。研究证明甘草能抗病毒、抗细菌、抗氧化、抗应激，且能调节免疫机能，如增强巨噬细胞吞噬能力，促进辅助性T淋巴细胞的增殖与激活等。最近的一些专利喻运珍等申请了专利“一种鱼用复方中草药制剂及其制备方法”(201010162861.1 );张其中等申请了专利“一种鱼用复方中草药免疫增强剂及其制备方法”(201110201424.0 );张璐等申请了专利“一种淡水养殖鱼类通用复合中草药免疫增强剂”(201110186183. 7 );徐维娜等申请了专利“一种团头鲂免疫增强剂饲料及其生产方法”(20210033844. 7 )等，都是提高鱼类的免疫力复方中草药制剂，但是有关提高鱼体抗应激复合中草药的论文与专利还少见，特别是能提高团头鲂专用的复合中草药制剂还少见。目前已有一些关于五倍子、刺五加、黄柏、蒲公英、白头翁、甘草的在水产养殖的使用，但是有关五倍子、刺五力卩、黄柏、蒲公英、白头翁、甘草配伍使用，还未见报道。因此研制复合中草药抗应激制剂，提高团头鲂抗病能力，抗应激能力，对水产养殖的健康发展和可持续发展具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于从中医的理论出发，以五倍子为君，刺五加、黄柏为臣，蒲公英、
白头翁、甘草等为使，研制中草复合物，从而提供一种团头鲂复合中草药抗应激制剂及制备方法，其能耗低、工艺简单、生产成本低，能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，且可促进鱼体生长。本发明提供一种团头鲂复合中草药抗应激制剂，其组成包括(重量份)五倍子22 28份、刺五加15 19份、黄柏5 20份、蒲公英12 19份、白头翁10 16份和甘草10-15份。制备方法为按上述配方分别称取各组份，分别烘干后粉碎，混匀即得。所述烘干至水分〈12%，烘干温度范围为50-60°C。上述团头鲂复合中草药抗应激制剂在鱼饲料中的添加量为1%-5. 0%。优选地，添加量与使用的周期有关，当使用周期在30d以上，在饲料中添加量为1. 0%-2. 0% ;当使用周期在7-30d以内，在饲料中添加量为2. 0%-3. 0%。当使用周期在7d以内，在饲料中添加量为
3.0%-5. 0%。此复合中草药抗应激制剂可直接清除机体内的自由基，消除自由基对机体组织器官正常功能的负面影响，加快修复被破坏的免疫系统，减缓机体对应激条件的反应，能提高团头鲂的免疫与抗氧化能力、抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，改善饲料适口性，促进团头鲂生长。本发明的团头鲂复合中草药抗应激制剂，从中医的理论出发，以五倍子为君，刺五加、黄柏为臣，蒲公英、白头翁、甘草等为使，研制复合中草药抗应激制剂，能克服某一种产品的不足之处，相互补充，既有抗应激的功效，又具有一定的抗病原菌的功效，促进鱼体生长；本发明原料来源稳定，制备简单，取材广泛，成本低廉。
具体实施例方式
下面结合实施例进一步描述本发明。实施例1
配制I kg复合中草药抗应激制剂，其各原料组成五倍子280g、刺五加150g、黄柏200g、蒲公英120g、白头翁为100g、甘草150g份；将上述各组份进行烘干，烘干至水分〈12% ;烘干后的各组分进行粗粉碎，粉碎机(WKX-160型中草药粉碎机，青州市富尔康制药机械有限公司)内粉碎后为粗物料，并通过40目筛网，粉碎机粉碎速度200转/分；后经超微粉碎机(ZNC-300小型超微粉碎机，北京兴时利和科技发展有限公司)进行第二次粉碎，并通过200目筛网，粉碎机粉碎速度500转/分；再将上述各组分在混合机(V型混合机，上海华夏渔业机械有限公司)内充分混匀，制成200目干粉的复合中草药抗应激制剂，混合机投料转速18转/分。所用五倍子、刺五加、黄柏、蒲公英、白头翁、甘草等中草药均购自江苏中草药贸易有限公司，下同。生长实验团头鲂由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、规格、重量基本一致的团头鲂，个体初均重约30g。随机分组，设有试验组与对照组，每组设3个平行试验，每平行组50尾试验鱼，共6个网箱(规格为250cmX 150cmX 100cm)。团头鲂驯化30d后投喂O、1. 0%两个剂量复合中草药抗应激制剂56d，测定其生长的影响。应激试验饲养试验结束后，选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度(100 g/L)应激，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为20尾左右，放养于同样规格容积为40 L塑料桶中。采用流水系统，水温25± 1°C，流速为2 L/min,并保证充足的氧气，减少人为干扰，保持安静，防止额外应激。每12观察鱼体死亡情况，观察4d，统计死亡率，采集血液、肝脏样品等。攻毒实验饲养试验结束后，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释，使终浓度约为5X106cells/ml。按每100 g鱼重腹腔注射菌液1. O ml，后放养于同样规格容积的水泥池网箱中(规格为IOOcmX IOOcmX 100cm),并保证充足的氧气，每天观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。结果表明与对照组相比，1. 0%复合中草药抗应激制剂增重率显著(P〈0. 05)分别提高了 12. 58% ;病原菌感染鱼体7d，对照组死亡率为90. 0%，1. 0%复合中草药抗应激制剂鱼死亡率为28. 0% ;高密度应激Id试验后，与对照组相比，1. 0%免疫增强剂显著(P〈0. 05)降低血液皮质醇浓度9. 21%，血糖水平5. 54%及丙二醛浓度8. 11%，增加了血液过氧化氢酶15. 34%、超氧化物歧化酶活性11. 238%以及应激蛋白HSP70浓度6. 33%，因此，该复合中草药抗应激制剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，提高鱼体抗应激能力，促进鱼体生长。实施例2
配制I kg复合中草药抗应激制剂,其各原料组成五倍子250g、刺五加170g、黄柏170g、蒲公英150g、白头翁为160g、甘草IOOg份；将上述各组份进行烘干，烘干至水分〈12% ;烘干后的各组分进行粗粉碎，粉碎机(WKX-160型中草药粉碎机，青州市富尔康制药机械有限公司)内粉碎后为粗物料，并通过50目筛网，粉碎机粉碎速度250转/分；后经超微粉碎机(ZNC-300小型超微粉碎机，北京兴时利和科技发展有限公司)进行第二次粉碎，并通过250目筛网，粉碎机粉碎速度550转/分；再将上述各组分在混合机(V型混合机，上海华夏渔业机械有限公司)内充分混匀，制成250目干粉的复合中草药抗应激制剂，混合机投料转速19转/分。生长实验团头鲂由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、规格、重量基本一致的团头鲂，个体初均重约30g。随机分组，设有试验组与对照组，每组设3个平行试验，每平行组50尾试验鱼，共6个网箱(规格为250cmX 150cmX 100cm)。团头鲂驯化30d后投喂0、2. 5%两个剂量复合中草药抗应激制剂25d，测定其生长的影响。应激试验饲养试验结束后，选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度(100 g/L)应激，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为20尾左右，放养于同样规格容积为40 L塑料桶中。采用流水系统，水温25± 1°C，流速为2 L/min,并保证充足的氧气，减少人为干扰，保持安静，防止额外应激。每12h观察鱼体死亡情况，观察4d，统计死亡率，采集血液、肝脏样品等。攻毒实验饲养试验结束后，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释，使终浓度约为5X106cells/ml。按每100 g鱼重腹腔注射菌液1. O ml，后放养于同样规格容积的水泥池网箱中(规格为IOOcmX IOOcmX 100cm),并保证充足的氧气，每天观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。结果表明与对照组相比，2. 5%复合中草药抗应激制剂增重率显著(P〈0. 05)分别提高了 11. 21% ;病原菌感染鱼体7d，对照组死亡率为94. 0%, 2. 5%复合中草药抗应激制剂鱼死亡率为24. 0%;高密度应激Id试验后，与对照组相比，2. 5%复合中草药抗应激制剂显著(P〈0. 05)降低血液皮质醇浓度9. 54%，血糖水平6. 99%及丙二醛浓度12. 857%，增加了血液过氧化氢酶8. 99%、超氧化物歧化酶活性8. 44%以及应激蛋白HSP70浓度12. 45%，因此，该免疫增强剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，提高鱼体抗应激能力，促进鱼体生长。实施例3
配制I kg复合中草药抗应激制剂其各原料组成五倍子220g、刺五加190g、黄柏150g、蒲公英190g、白头翁130g、甘草120g份；将上述各组份进行烘干，烘干至水分〈12% ;烘干后的各组分进行粗粉碎，粉碎机(WKX-160型中草药粉碎机，青州市富尔康制药机械有限公司)内粉碎后为粗物料，并通过60目筛网；粉碎机粉碎速度300转/分；后经超微粉碎机(ZNC-300小型超微粉碎机，北京兴时利和科技发展有限公司)进行第二次粉碎，并通过300目筛网；粉碎机粉碎速度600转/分；再将上述各组分在混合机(V型混合机，上海华夏渔业机械有限公司)内充分混匀，制成300目干粉的复合中草药抗应激制剂，混合机投料转速:20转/分。生长实验团头鲂由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、规格、重量基本一致的团头鲂，个体初均重约30g。随机分组，设有试验组与对照组，每组设3个平行试验，每平行组50尾试验鱼，共6个网箱(规格为250cmX 150cmX 100cm)。团头鲂驯化15d后投喂0、4. 0%复合中草药抗应激制剂7d，测定其生长的影响。应激试验饲养试验结束后，选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度(100 g/L)应激，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为20尾左右，放养于同样规格容积为40 L塑料桶中。采用流水系统，水温25± 1°C，流速为2 L/min,并保证充足的氧气，减少人为干扰，保持安静，防止额外应激。每12h观察鱼体死亡情况，观察2d，统计死亡率，采集血液、肝脏样品等。攻毒实验饲养试验结束后，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌-嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释，使终浓度约为5X106cells/ml。按每100 g鱼重腹腔注射菌液1. O ml，后放养于同样规格容积的水泥池网箱中(规格为IOOcmX IOOcmX 100cm),并保证充足的氧气，每天观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。结果表明与对照组相比，4. 0%复合中草药抗应激制剂增重率显著(P〈0. 05)分别提高了 10. 78% ;病原菌感染鱼体7d，对照组死亡率为89. 0%，4. 0%复合中草药抗应激制剂鱼死亡率为36. 0%;高密度应激Id试验后，与对照组相比，4. 0%复合中草药抗应激制剂显著(P〈0. 05)降低血液皮质醇浓度8. 39%，血糖水平4. 46%及丙二醛浓度9. 64%，增加了血液过氧化氢酶9. 66%、超氧化物歧化酶活性6. 76%以及应激蛋白HSP70浓度5. 76%，因此，该复合中草药抗应激制剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，提高鱼体抗应激能力，促进鱼体生长。
权利要求
1.一种团头鲂复合中草药抗应激制剂，其特征在于其组成包括(重量份):五倍子22 28份、刺五加15 19份、黄柏5 20份、蒲公英12 19份、白头翁10 16份和甘草 10-15 份。
2.如权利要求1所述的团头鲂复合中草药抗应激制剂的制备方法，其特征在于所述制备方法为按权利要求1所述配方分别称取各组份，分别烘干后粉碎，混匀即得。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述烘干的温度为50-60°C，烘干至水分 <12%ο
4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述粉碎的方法为粉碎，过40-60目筛网；二次粉碎，过200-300目筛网。
5.如权利要求1所述的团头鲂复合中草药抗应激制剂的使用方法，其特征在于将所述复合中草药抗应激制剂添加到团头鲂饲料中，添加量为1. 0%-5. 0%。
6.如权利要求5所述的使用方法，其特征在于当使用周期在30d以上，在饲料中添加量为1. 0%-2. 0% ;当使用周期在7-30d以内，在饲料中添加量为2. 0%-3. 0% ;当使用周期在 7d以内，在饲料中添加量为3. 0%-5. 0%。
全文摘要
本发明公布了一种团头鲂复合中草药抗应激制剂，其组成包括(重量份)五倍子22～28份、刺五加15～19份、黄柏5～20份、蒲公英12～19份、白头翁10～16份和甘草10-15份。制备方法为按上述配方分别称取各组份，分别烘干后粉碎，混匀即得。所述复合中草药抗应激制剂在鱼饲料中的添加量为1.0%-5.0%。本发明的复合中草药抗应激制剂可直接清除机体内的自由基，消除自由基对机体组织器官正常功能的负面影响，加快修复被破坏的免疫系统，减缓机体对应激条件的反应，能提高团头鲂的免疫与抗氧化能力、抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，改善饲料适口性，促进团头鲂生长。
文档编号A23K1/16GK102987164SQ20121057361
公开日2013年3月27日 申请日期2012年12月26日 优先权日2012年12月26日
发明者刘波, 谢骏, 戈贤平, 周群兰, 缪凌鸿, 任明春, 高启平 申请人:中国水产科学研究院淡水渔业研究中心