本发明涉及组织培养，具体地，涉及一种生姜的组织培养方法。
背景技术：
生姜是姜科重要的辛辣类蔬菜作物，多年生单子叶草本，生产上多为一年生栽培，现在已广泛栽培于世界各亚热带、热带地区。生姜由于其营养丰富，药用效果好，已成为重要的调味蔬菜和医药、化工及食品工业原料；加上其经济价值高，耐储运，近年来一直受到外商的青睐，出口量呈逐年增加趋势，成为我国主要的特产创汇蔬菜之一。由于生姜不开花或很少开花，在育种上很难利用有性繁殖，而只能靠少数品种长期无性繁殖，从而导致姜植株体内积累多种病毒，产量下降，品质退化，抗逆性下降。生姜种质资源的繁殖和保存也主要依靠种姜在田间种植来进行，这样不仅繁殖系数低、费用高，也容易导致资源材料的丢失。技术实现要素：本发明的目的是提供一种生姜的组织培养方法，该生姜的组织培养方法具有优异的成活率以及繁殖率。为了实现上述目的，本发明提供了一种生姜的组织培养方法，包括：1）将生姜芽尖作为外植体进行热处理脱菌，接着置于抗生素溶液中进行二次灭菌，然后置于初代培养基中进行诱导培养、于增殖培养基中进行增殖培养得到分化幼苗；2）将分化幼苗于生根培养基中进行生根培养以得到组织培养苗；3）将组织培养苗炼苗；其中，步骤1）-2）的培养条件均至少符合以下条件：无菌且透气；初代培养基为含有吲哚乙酸iaa、6-苄基腺嘌呤6-ba和叶酸的ms培养基；增殖培养基为含有玉米素zt、链霉素、2,4-d和西瓜汁的ms培养基；生根培养基含有多效唑、吲哚丁酸iba和土豆泥的1/2ms培养基。在上述技术方案中，本发明以生姜芽尖作为外植体，然后依次经过诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗以得到成熟的生姜苗，在各个培养工序中采用特定的培养基进而使得得到的生姜苗具有优异的成活率和高产率，在此基础上能够大面积的进行培育生姜，从而为生姜的组织培养的推广奠定了坚实的基础。本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。具体实施方式以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。本发明提供了一种生姜的组织培养方法，包括：1）将生姜芽尖作为外植体进行热处理脱菌，接着置于抗生素溶液中进行二次灭菌，然后置于初代培养基中进行诱导培养、于增殖培养基中进行增殖培养得到分化幼苗；2）将分化幼苗于生根培养基中进行生根培养以得到组织培养苗；3）将组织培养苗炼苗；其中，步骤1）-2）的培养条件均至少符合以下条件：无菌且透气；初代培养基为含有吲哚乙酸iaa、6-苄基腺嘌呤6-ba和叶酸的ms培养基；增殖培养基为含有玉米素zt、链霉素、2,4-d和西瓜汁的ms培养基；生根培养基含有多效唑、吲哚丁酸iba和土豆泥的1/2ms培养基。在上述组织培养方法中，各个培养基中的组分浓度可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高生姜的的成活率和繁殖效率，优选地，在初代培养基中，iaa的浓度为0.1-0.3mg/l，6-ba的浓度为0.6-0.9mg/l，叶酸的浓度为0.2-0.5mg/l；在增殖培养基中，zt的浓度为0.05-0.15mg/l，链霉素的浓度为0.1-0.3mg/l，2,4-d的浓度为0.6-0.8mg/l，西瓜汁的浓度为1-3mg/l；在生根培养基中，多效唑的浓度为0.15-0.3mg/l，iba的浓度为0.3-0.6mg/l，土豆泥的浓度为1.5-2g/l。在本发明的各种培养基中，为了更好地为各个组织提供优异的养分以及适宜的培养条件，优选地，初代培养基、增殖培养基以及生根培养基均含有3-6g/l的琼脂和8-12g/l的蔗糖，且ph值为6.0-7.0。在本发明中，热处理脱菌的条件可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高灭菌效果，优选地，热处理脱菌满足以下条件：脱菌温度为42-48℃，脱菌时间为3-6min。在本发明中，二次灭菌的条件以及抗生素溶液中各组分的浓度也可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高灭菌效果，优选地，二次灭菌满足以下条件：灭菌时间为15-25min，灭菌温度为15-35℃；抗生素溶液含有0.8-1.3g/l青霉素和0.2-0.5g/l庆大霉素。在本发明中，外植体的大小可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高生姜的成活率和繁殖效率，优选地，外植体的长度为0.25-0.35cm。在本发明中，诱导培养的条件可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高生姜的成活率和繁殖效率，优选地，诱导培养满足以下条件：先暗培养1-2天，接着转入光暗交替的条件下培养4-6天；其中，光暗交替条件为：光照时间为12-14h/天，光照强度为1400-1600lux，培养温度为25-30℃，相对湿度为50-60%。在本发明中，增殖培养的条件可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高生姜的成活率和繁殖效率，优选地，增殖培养于光暗交替条件下培养8-10天，光暗交替条件为：光照时间为12-14h/天，光照强度为1700-1900lux，培养温度为20-25℃，相对湿度为50-60%。在本发明中，生根培养的条件可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高生姜的成活率和繁殖效率，优选地，生根培养于光暗交替条件下培养10-15天，光暗交替条件为：光照时间为12-14h/天，光照强度为2000-2200lux，培养温度为20-25℃，相对湿度为50-60%。在本发明中，无菌且透气条件的获取可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高生姜的成活率和繁殖效率，优选地，步骤1）-2）中的无菌且透气条件通过以下操作获得：培养环境为带防菌透气膜的组培瓶；其中，透气膜的具体条件也可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高多肉植物的成活率和繁殖效率，更优选地，透气膜至少满足以下条件：孔隙为0.2-0.3um，开孔率80-90﹪。在本发明中，炼苗的条件可以在宽的范围内选择，但是为了进一步提高生姜的成活率和繁殖效率，优选地，炼苗的条件为：光照时间为12-14h/天，黑暗时间为10-12h/天，光照强度为1800-2000lux，温度为21-23℃，相对湿度为75-85%，时间为5-7天。以下将通过实施例对本发明进行详细描述。在以下实施例中，ms培养基以及1/2ms培养基的基本组分参见表1和2；其中，表1中为ms培养基以及1/2ms培养基中不同浓度组分的统计表，表2中为ms培养基以及1/2ms培养基中相同浓度组分的统计表。表1表2实施例11）将长度为0.3cm的生姜芽尖作为外植体进行热处理脱菌（脱菌温度为45℃，脱菌时间为5min），接着置于抗生素溶液（含有0.9g/l青霉素和0.3g/l庆大霉素）中进行二次灭菌（灭菌时间为20min，灭菌温度为20℃），然后置于初代培养基中进行诱导培养（先暗培养1.5天，接着转入光暗交替的条件下培养5天；其中，光暗交替条件为：光照时间为13h/天，光照强度为1500lux，培养温度为28℃，相对湿度为55%）、于增殖培养基中进行增殖培养（于光暗交替条件下培养9天，光暗交替条件为：光照时间为13h/天，光照强度为1800lux，培养温度为22℃，相对湿度为55%）得到分化幼苗；2）将分化幼苗于生根培养基中进行生根培养（于光暗交替条件下培养13天，光暗交替条件为：光照时间为13h/天，光照强度为2100lux，培养温度为23℃，相对湿度为55%）以得到组织培养苗；3）将组织培养苗炼苗得到生姜幼苗（光照时间为13h/天，黑暗时间为11h/天，光照强度为1900lux，温度为22℃，相对湿度为79%，时间为6天）；其中，步骤1）-2）的培养条件均至少符合以下条件：无菌且透气，于带防菌透气膜的组培瓶中进行，透气膜满足以下条件：孔隙为0.25um，开孔率85﹪；初代培养基为含有0.2mg/liaa、0.7mg/l6-ba、0.3mg/l叶酸的ms培养基；增殖培养基为含有0.09mg/lzt、0.2mg/l链霉素、0.7mg/l2,4-d的浓度为、2mg/l西瓜汁的ms培养基；在生根培养基中，0.2mg/l多效唑、0.4mg/liba的浓度、1.8g/l土豆泥的1/2ms培养基；初代培养基、增殖培养基以及生根培养基均含有4g/l的琼脂和10g/l的蔗糖，且ph值为6.5。实施例21）将长度为0.25cm的生姜芽尖作为外植体进行热处理脱菌（脱菌温度为42℃，脱菌时间为6min），接着置于抗生素溶液（含有0.8g/l青霉素和0.2g/l庆大霉素）中进行二次灭菌（灭菌时间为15min，灭菌温度为35℃），然后置于初代培养基中进行诱导培养（先暗培养1天，接着转入光暗交替的条件下培养4天；其中，光暗交替条件为：光照时间为12h/天，光照强度为1400lux，培养温度为25℃，相对湿度为50%）、于增殖培养基中进行增殖培养（于光暗交替条件下培养8天，光暗交替条件为：光照时间为12h/天，光照强度为1700lux，培养温度为20℃，相对湿度为50%）得到分化幼苗；2）将分化幼苗于生根培养基中进行生根培养（于光暗交替条件下培养10天，光暗交替条件为：光照时间为12h/天，光照强度为2000lux，培养温度为20℃，相对湿度为50%）以得到组织培养苗；3）将组织培养苗炼苗得到生姜幼苗（光照时间为12h/天，黑暗时间为10h/天，光照强度为1800lux，温度为21℃，相对湿度为75%，时间为5天）；其中，步骤1）-2）的培养条件均至少符合以下条件：无菌且透气，于带防菌透气膜的组培瓶中进行，透气膜满足以下条件：孔隙为0.25um，开孔率85﹪；初代培养基为含有0.1mg/liaa、0.6mg/l6-ba、0.2mg/l叶酸的ms培养基；增殖培养基为含有0.05mg/lzt、0.1mg/l链霉素、0.6mg/l2,4-d的浓度为、1mg/l西瓜汁的ms培养基；在生根培养基中，0.15mg/l多效唑、0.3mg/liba的浓度、1.5g/l土豆泥的1/2ms培养基；初代培养基、增殖培养基以及生根培养基均含有3g/l的琼脂和8g/l的蔗糖，且ph值为6.0。实施例31）将长度为0.35cm的生姜芽尖作为外植体进行热处理脱菌（脱菌温度为48℃，脱菌时间为3min），接着置于抗生素溶液（含有1.3g/l青霉素和0.5g/l庆大霉素）中进行二次灭菌（灭菌时间为25min，灭菌温度为35℃），然后置于初代培养基中进行诱导培养（先暗培养2天，接着转入光暗交替的条件下培养6天；其中，光暗交替条件为：光照时间为14h/天，光照强度为1600lux，培养温度为30℃，相对湿度为60%）、于增殖培养基中进行增殖培养（于光暗交替条件下培养10天，光暗交替条件为：光照时间为14h/天，光照强度为1900lux，培养温度为25℃，相对湿度为60%）得到分化幼苗；2）将分化幼苗于生根培养基中进行生根培养（于光暗交替条件下培养15天，光暗交替条件为：光照时间为14h/天，光照强度为2200lux，培养温度为25℃，相对湿度为60%）以得到组织培养苗；3）将组织培养苗炼苗得到生姜幼苗（光照时间为14h/天，黑暗时间为12h/天，光照强度为2000lux，温度为23℃，相对湿度为85%，时间为7天）；其中，步骤1）-2）的培养条件均至少符合以下条件：无菌且透气，于带防菌透气膜的组培瓶中进行，透气膜满足以下条件：孔隙为0.25um，开孔率85﹪；初代培养基为含有0.3mg/liaa、0.9mg/l6-ba、0.5mg/l叶酸的ms培养基；增殖培养基为含有0.15mg/lzt、0.3mg/l链霉素、0.8mg/l2,4-d的浓度为、3mg/l西瓜汁的ms培养基；在生根培养基中，0.3mg/l多效唑、0.6mg/liba的浓度、2g/l土豆泥的1/2ms培养基；初代培养基、增殖培养基以及生根培养基均含有6g/l的琼脂和12g/l的蔗糖，且ph值为7.0。应用例1取上述各实施例中100株的炼苗后的幼苗于基质中进行培养直至50%以上的植株生长出5个叶片，然后统计幼苗的成活率（w），同时计算10个2cm的生姜芽尖在一个组织培养周期后能够获取的成活生姜的数量（n），具体结果如表3所示。表3w/%n/棵实施例18955实施例29548实施例39152以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。当前第1页12