一种青鸟寿的组织培养方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物组培培养技术领域，特别是涉及一种青鸟寿的组织培养方法。
【背景技术】
[0002] 青鸟寿（Haworthia retusa)为百合科十二卷属多肉植物，原产非洲南部。由于叶 顶有窗，从上方俯视下去看到的正是由许多三角形合成的一个圆，犹如寿字纹所表现的那 样，从此就称之为"寿"。正寿共有九种，为：西山寿，帝王寿，青鸟寿，玉露寿，白银寿，毛蟹 寿，赤肌寿，磨面寿，芳亭寿。寿的品种繁多，虽都小巧铃拢，但外型都相当精巧美丽，变化丰 富的奇特叶片，生长缓慢，观赏期长，不论是孤赏还是组合盆景都可以保持相对长期的固定 观赏，形似花朵一年四季犹如鲜花绽放，素有"不败之花"的美称。是家庭栽培观赏的理想 种类，园艺爱好者都竞相收藏。由于许多种类繁殖率低，生长缓慢，原产地不在我国，尤其 是出锦的青鸟寿，更是价值连城，观赏价值极高。
[0003] 以往多肉植物的组织培养外植体多以花梗或花茎为主，多肉植物多是多年生植 物，有的次年开花，有的多年后开花，当年开花者较少，有的好几年才开一次花，有的很难见 到开花。外植体取材受到时间季节限制。一些高档观赏性多肉植物，较为稀缺，材料较少， 植物组培受到材料来源限制，成功率较低。很难快速繁殖，造成生产周期延长。目前尚未有 关于青鸟寿组织培养快繁体系研宄的报道。
【发明内容】
[0004] 发明目的：为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种青鸟寿的组织培养 方法，利用青鸟寿叶肉作为外植体材料进行组织培养，在短时间获得大量植物材料，从而使 得包括青鸟寿在内的多肉植物得到快速繁殖与推广。
[0005]技术方案：为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：
[0006] -种青鸟寿的组织培养方法，包括如下步骤：
[0007] 以青鸟寿肉质叶片作为外植体，充分清洗后备用；
[0008] 2)将清洗后的青鸟寿外植体杀菌消毒，然后用手术刀将较大的外植体以45° 斜口切至长约I. 5-2cm，再将切分后的外植体切口向上斜插到启动培养基中，培养温度 25±2°C，光照时间为24h/d，光照度为20001x，培养7d以上；启动培养基配方为MS+琼脂 7g/L+ 鹿糖 30g/L ;
[0009] 3) 7d后青鸟寿外植体叶肉逐渐膨大，此时将外植体转入诱导愈伤培养基培养，20 天后外植体形成黄绿色的疏松的小球状的愈伤组织；诱导愈伤培养基配方为MS+NAA0. 1~ 0? 4mg/L+6-BAl. 0 ~2. 5mg/L+KT 0? 01 ~0? 03mg/L+ 琼脂 7g/L+ 蔗糖 30g/L ;培养条件为： 25+2°C，每天光照8~12h/d，光照强度为2000~40001x，以20~30天为周期更换培养 基；
[0010] 4)将愈伤组织转入分化培养基中培养，35天左愈伤组织逐渐变转成淡绿色，在 淡绿色愈伤上萌动分化出芽点，50天后转入芽增殖培养基中增殖成小芽，丛生芽逐渐形成 丛生苗，并长出小青鸟寿；分化培养基配方为：MS+NAAO. 1~0. 2mg/L+6-BA 0. 1~0. 5mg/ L+KT 0? 01 ~0? 02mg/L+ 琼脂 7g/L+ 蔗糖 30g/L;芽增殖培养基为 MS+NAA0. 05 ~0? lmg/ L+6-BA0. 05~0? 5mg/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L;培养条件为：25+2°C，每天光照8~12h/ d，光照强度为2000~40001x，以20~30天为周期更换培养基；
[0011] 5)壮苗和移栽：将已生根瓶苗或未生根的瓶苗转移到人工气侯室中进行炼苗，控 制相对湿度为85 %~95 %，温度为25°C~30°C，10天后洗净移栽到育苗钵中，进行移栽管 理即可。
[0012] 步骤1)中，利用棉线将选取的青鸟寿外植株叶片剥离成单个叶片，先用洗衣粉清 洗青鸟寿叶片，清洗完后倒去洗涤液，然后将经过洗衣粉清洗的叶片在自来水下冲洗30分 钟后，将叶片放于4°C过夜，次日将叶片置于流水下冲洗2小时。
[0013] 步骤2)中，将清洗后的青鸟寿外植体，放置在超净工作台的烧杯中用浓度为75% 的酒精浸泡30s，浸泡后在用无菌水冲洗2-3次，然后迅速将青鸟寿培养部位倒入浓度为 0. 1 %升采液中浸泡8-10min，将升采消毒后的外植体用无菌水洗绦3-4次，每次3-5min，确 保外植体表面的升汞被洗净为止。
[0014] 步骤2)中，将切分后的外植体切口向上斜插到启动培养基中，每瓶培养基中接1 个外植体，防止污染。
[0015] 有益效果：与现有技术相比，本发明的优点包括：本发明的青鸟寿的组织培养方 法，使用多肉植物叶肉组织作为外植体，克服了多肉植物受到时间季节限制，取材短缺的局 限性，可以短时间获得大量植物材料，从而使得包括青鸟寿在内的多肉植物得到快速繁殖 与推广。本发明可以使名贵青鸟寿品系在较短时间内快速繁殖，采用以上方案后，以青鸟寿 的叶肉为外植体，可以在原取材花茎所需时间大大缩短，只要有一株名贵品种青鸟寿母本， 不论生长状态季节时间，可以在12个月左右形成6万株以上小苗，解决了名贵品种在短期 时间内快速繁殖的问题，从而形成当年提供青鸟寿母本，次年即可规模化将新品种推向市 场。
【附图说明】
[0016] 图1是青鸟寿母本的照片图；
[0017] 图2是外植体切割面愈伤组织诱导结果图；
[0018] 图3是初代培养诱导愈伤培养20d的生长情况结果图；
[0019]图4是初代培养诱导愈伤培养30d的生长情况结果图；
[0020] 图5是继代培养愈伤增殖后分化出芽点结果图；
[0021] 图6是继代愈伤分化成芽结果图；
[0022] 图7是初代培养愈伤分化成小苗结果图。
【具体实施方式】
[0023] 下面结合具体实施例来说明本发明。
[0024] 实施例1
[0025] -种青鸟寿的组织培养方法，包括如下步骤：
[0026]1)取材：使用青鸟寿母本（如图1所示）的肉质叶片作为外植体，利用棉线将选 取的青鸟寿外植株叶片剥离成单个叶片，先用含有60%直链烷基苯磺酸钠洗涤剂清洗青鸟 寿叶片，清洗完后倒去洗涤液，然后将经过洗衣粉清洗的叶片在自来水下冲洗30分钟后， 将叶片放于4°C过夜，次日将叶片置于流水下冲洗2小时。
[0027] 2)材料灭菌：将通过上述清洗的青鸟寿外植体，放置在超净工作台的烧杯中用浓 度为75%的酒精浸泡30s，浸泡后在用无菌水冲洗2-3次，接下来迅速将青鸟寿培养部位倒 入浓度为〇. 1 %升汞液中浸泡8-10min，将升汞消毒后的外植体用无菌水洗涤3-4次，每次 3-5min，确保