场所:约〇. 005kg/ha-约0.5kg/ha的式（I)的化合物，优选0.01-0.2kg/ha，更优 选0.02-0.lkg/ha。
[0180] 在另一个特定实施方式中，作为种子处理，将文中定义的式(I)的化合物以下述施 用率施用:〇 · 〇〇l-250g/kg 种子，优选为 0 · 01-100g/kg，更优选为 0 · 01_50g/kg。
[0181 ]在一个特定的实施方式中，植物选自下组:棉花，藤，谷类(例如小麦，稻，大麦，黑 小麦），玉米，大豆，油菜(oilseed rape)，向日葵，草皮，园艺作物，灌木，果树和果实植物 (例如苹果树，梨树(peer-tree)，柑桔，香蕉，咖啡，草莓植物，覆盆子植物），蔬菜，尤其是谷 类，玉米，油菜，灌木，果树和果实植物，蔬菜和藤。
[0182] 其中T表示氧原子的式（I)的N-环丙基酰胺可依据W0-2007/087906(方法Pl)和TO-2010/130767(方法Pl-步骤10)通过取代的N-环丙基苄基胺与3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-酰氯的缩合反应来制备。
[0183] 合适的N-环丙基苄基胺是已知的，或者可通过已知的方法制备，例如用环丙胺对 取代醛进行还原性氨化(J.Med.Chem. ,2012,55(1 ),169-196)或者用环丙胺对取代苄基烷 基（或芳基）磺酸酯或取代苄基卤化物进行亲核取代(Bioorg.Med.Chem.，2006,14,8506-8518和W0-2009/140769)。
[0184] 可依据W0-2010/130767(方法Pl-步骤9或11)制备3-(二氟甲基）-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-酰氯。
[0185] 其中T表示硫原子的式（I)的N-环丙基硫代酰胺可依据W0-2009/016220 (方法Pl) 和W0-2010/130767(方法P3)通过其中T表示氧原子的式（I)的N-环丙基酰胺的硫化 (thionation)来制备。
[0186] 以下实施例以非限制性的方式对依据本发明的式(I)化合物的制备予以说明。
[0187] N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-N-(2-异丙基苄基）-卜甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺 (化合物Al)的制备
[0188] 步骤A:制备N_( 2-异丙基苄基)环丙胺
[0189] 向55.5g(971mmol)环丙胺在900mL甲醇中的溶液中依次加入20g:3. A分子筛和73g (1.21mol)乙酸。然后滴加72g(486mmol)2-异丙基-苯甲醛，将反应混合物进一步回流加热4 小时。
[0190] 然后将反应混合物冷却至0°C，在10分钟内分批加入45.8g(729mmol)氰基硼氢化 钠，再在回流下在将该反应混合物搅拌3小时。在硅藻土滤饼上过滤经冷却的反应混合物。 用甲醇充分洗涤该滤饼，在真空下浓缩甲醇提取物。然后向残余物中加水，用400mL IN氢氧 化钠水溶液将pH值调节至12。用乙酸乙酯萃取水层，用水(2x 300mL)洗涤，用硫酸镁干燥， 得到81.6g(88%)黄色油状N-(2-异丙基苄基)环丙胺，该产物不经处理直接用于下一步骤。
[0191] 可通过以下步骤制备盐酸盐：在0°C将N_( 2-异丙基苄基）环丙胺溶解在乙醚 (1 · 4mL/g)中，然后添加2M盐酸的乙醚（1 · 05当量)溶液。搅拌2小时后，过滤出N- (2-异丙基 苄基)环丙胺盐酸盐（1:1)，用乙醚洗涤，在40°C真空干燥48小时。Mp(熔点）=149°C
[0192] 步骤B:N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-N_(2-异丙基苄基)-1-甲基-IH-吡唑-4-羧 酰胺的制备
[0193] 在室温下向在IL无水四氢咲喃中的40.8g( 192mmol )N-(2_异丙基苄基)环丙胺中 添加51mL(366mmol)三乙胺。然后，滴加39.48(174臟〇1)3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-1!1-吡 唑-4-酰氯在SOOmL无水四氢呋喃中的溶液，同时保持温度低于34°C。在回流条件下将反应 混合物加热2小时，然后在室温条件下放置过夜。过滤出盐，滤液在真空下浓缩，得到78.7g 棕色油状物。在硅胶上进行柱色谱（750g梯度正庚烷/乙酸乙酯），得到53g(产率71%)的黄 色油状N-环丙-3-(二氟甲基)-5-氟-N-(2-异丙基苄基)-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺，该产 物缓慢结晶。Mp = 76-79°C。
[0194] 按照相同方法，根据化合物Al的制备方法制备化合物A2-A19，A21，A22。
[0195] N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-N_(2-异丙基苄基)-1-甲基-IH-吡唑-4-硫代羧酰 胺(化合物A20)的制备
[0196] 14 · 6g(65mmol)五硫化二磷和 48g( 131mmol )N_ 环丙基 _3_(二氣甲基)_5_ 氣-N_(2-异丙基苄基)-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺在500ml二噁烷中的溶液在100°C加热2小时。然 后，添加50ml水，将反应混合物在100°C再加热1小时。在碱性氧化铝滤筒上过滤冷却的反应 混合物。用二氯甲烷洗涤滤筒，合并的有机萃取物用硫酸镁干燥，在真空下浓缩，得到55.3g 橙色油状物。用几毫升乙醚研制残余物，直到开始结晶。过滤出晶体，在40°C真空干燥15小 时，得到46.Sg(产率88% )N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-N-(2-异丙基苄基)-1-甲基-IH-吡唑-4-硫代羧酰胺。Mp = 64-70°C。
[0197] 表1提供了化合物A1-A20的IogP和NMR数据(1Hh
[0198] 在表1中，依据EEC Directive 79/831 Annex V.A8,通过HPLC(高效液相色谱)使 用以下方法在反相柱(C 18)上测量IogP值：
[0199] 温度：40°C;流动相：0.1 %的甲酸水溶液和乙腈；线性梯度为10 %乙腈到90 %乙 臆。
[0200]使用IogP值已知的非支链烷-2-酮(包含3-16个碳原子)进行校准（IogP值是采用 两个相邻烷酮之间的线性内插法由保留时间确定的）。使用200纳米至400纳米的紫外光谱， 在色谱信号最大值处确定Amax值。
[0203] 以下实施例说明本发明的植物生长调节方法，但不应理解为限制本发明。
[0204] 实施例1:在高啶酰菌胺(boscalid)抗性的独立田中缺乏交叉抗性
[0205] 从田中收集灰葡萄孢(Botrytis cinerea)啶酰菌胺抗性群，并通过测序编码琥?白 酸脱氢酶的亚基B的SDHB基因来表征。四到五个具有SDHB_P225H，F取代的株被保留，用于之 后在微量滴定板中进行敏感度测试。确定测试化合物的IC50,以IC50突变体/IC50WT(B〇47) 的比值计算抗性因子(RF)。本发明的式(I)的化合物的活性与啶酰菌胺(Bo sea I i d )，氟唑菌 酰胺(Fluxapyroxad)，吡噻菌胺(Penthiopyrad)和吡唑萘菌胺（Isopyrazam)比较（表1) 〇RF 低于10的株被认为是敏感的，当RF在10-50之间时被认为是中等抗性的，当RF高于50时被认 为是抗性的。
[0206] 我们得到的结果很好地证明，包含P225H和F取代的株对本发明的式（I)化合物保 持敏感，而对吡唑萘菌胺（I sopyrazam)表现出中等抗性，对其它测试的SDHI抑制剂表现出 抗性。
[0207] 另外，可以看出一种测试化合物(化合物A18)在具有P225取代的株上的活性总是 强于野生型株。这些结果强调了本发明式（I)化合物作为耐受SDHI杀真菌剂的真菌株(特别 是具有SDHB_P225H，F取代的株)的抗性破坏剂的潜力。
[0209]实施例2:啶酰菌胺抗性突变体的线粒体敏感性
[0210]在线粒体靶标水平上研究化合物活性，并与其它SDH抑制剂比较。从田间收集3884 分离物，SDHB基因测序显示P225H取代。
[0211 ]根据Cramer等（1983)Analytical biochemistry，128，384-392提取线粒体，根据 Fritz等（1993) .Agronomie 13，225-230制备菌丝体，不同的是孢子孵育48小时。通过在 595nm DCPIP(2，6_二氯苯酚-靛酚）的下降来测量SDH活性。为了测试SDH抑制剂，线粒体与 测试化合物孵育20分钟，然后开始反应。琥珀酸-泛醌还原酶活性的抑制表达为pI50,表示 使DCPIP降低被抑制50%的浓度（IC50)的-IoglO对数。在突变的线粒体上得到的pI50与在 这些实验中用作参比的 Bo47野生株的计算结果比较。
[0212]我们的结果显示用本发明式（I)的化合物在从3884株(P225H取代）提取的线粒体 上得到的PI50总是高于或等于在参比株(A类)上得到的结果。这证明SDHB_P225H取代不会 破坏式（I)的化合物在Sdh复合物上的活性，而该突变明显影响其它测试SDH抑制剂的活性 (用其它SDH抑制剂常常观察到pI50下降超过一个单位）。为了证实这些数据，在3884株 (P225H取代)上记录本发明的式（I)的化合物的IC50,并与B 〇47野生株比较。如同所预期的， 当其它SDH抑制剂的活性在3884株上被破坏时，式（I)的化合物仍然控制野生型和3884株。
[0213]表2:在线粒体(PI50值)和细胞(IC50)水平的氨基酸取代所赋予的敏感性
[0216] A类:与野生型比较，pI50增加或稳定 [0217] B类:与野生型比较，pI50下降0.6或不到0.6
[0218] C类:与野生型比较，pI50下降超过0.6。
【主权项】
1. 一种治疗性和/或预防性处理植物以抵抗至少一种抗性真菌株的方法，该方法包括 向所述植物、生长为所述植物的种子或所述植物生长的场所施用非植物毒性的有效植物生 长促进量的具有式I的化合物或其农业化学上可接受的盐：其中，T表示氧或硫原子，X选自下组：2-异丙基，2-环丙基，2-叔丁基，5-氯-2-乙基，5-氯_2_异丙基，2-乙基_5_氣，5-氣_2_异丙基，2-环丙基_5_氣，2-环戊基_5_氣，2-氣_6_异丙 基，2-乙基-5-甲基，2-异丙基-5-甲基，2-环丙基-5-甲基，2-叔丁基-5-甲基，5-氯-2-(三氟 甲基），5_甲基_2_(二氣甲基），2_氯_6_(二氣甲基），3_氯-2-氣_6_(二氣甲基），2_乙基,2-三甲基甲硅烷基和2-乙基-4，5-二甲基。2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，式(I)的化合物选自下组： N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-N-(2-异丙基苄基)-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺(化合 物 Al), N-环丙基-N-(2-环丙基苄基)-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺(化合 物 A2)， N-(2-叔丁基苄基)-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺(化合 物 A3)， N-(5-氯-2-乙基苄基)-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺(化 合物A4)， N-(5-氯-2-异丙基苄基)-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺 (化合物A5)， N-环丙基-3-(二氟甲基)-N-(2-乙基-5-氟苄基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺(化 合物A6)， N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-N-(5-氟-2-异丙基苄基)-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺 (化合物A7)， N-环丙基-N-(2-环丙基-5-氟苄基)-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺 (化合物A8)， N-(2-环戊基-5-氟苄基)-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺 (化合物A9)， N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-N-(2-氟-6-异丙基苄基)-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺 (化合物A10)， N-环丙基-3-(二氟甲基)-N-(2-乙基-5-甲基苄基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺 (化合物All), N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-N-(2-异丙基-5-甲基苄基)-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰 胺(化合物A12)， N-环丙基-N-(2-环丙基-5-甲基苄基)-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰 胺(化合物A13)， N-(2-叔丁基-5-甲基苄基)-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰 胺(化合物A14)， N-[5-氯-2-(三氟甲基)苄基）]-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧 酰胺(化合物A15)， N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-N-[5-甲基-2-(三氟甲基）苄基]-IH-吡唑-4-羧酰胺(化合物A16)， N-[2-氯-6-(三氟甲基)苄基）]-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧 酰胺(化合物A17)， N-[3-氯-2-氟-6-(三氟甲基）苄基）]-N-环丙基-3-(二氟甲基）-5-氟-1-甲基-IH-吡 唑-4-羧酰胺(化合物A18)， N-环丙基-3-(二氟甲基)-N-(2-乙基-4,5-二甲基苄基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧 酰胺(化合物A19)， N-环丙基-3-(二氟甲基）-5-氟-N-(2-异丙基苄基）-1-甲基-IH-吡唑-4-硫代羧酰胺 (化合物A20)， N-环丙基-3-(二氟甲基)-N-(2-乙基苄基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺(化合物 A21)，和 N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-N-[2-(三甲基甲硅烷基)苄基]-IH-吡唑-4-羧 酰胺(化合物A22)。3. 如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，真菌株对至少一种SDHI(琥珀酸脱氢酶抑 制剂)杀真菌剂有抗性。4. 如权利要求3所述的方法，其特征在于，SDHI杀真菌剂属于选自以下的化学物质组： 苯基-苯甲酰胺，吡啶基-乙基-苯甲酰胺，呋喃-羧酰胺，氧硫杂芑-羧酰胺，噻唑-羧酰胺，吡 唑-羧酰胺和吡啶-羧酰胺。5. 如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述真菌株对至少一种选自下组的杀真菌剂 有抗性:麦锈灵，联苯吡菌胺，啶酰菌胺，萎锈灵，甲呋酰胺，氟吡菌酰胺，氟酰胺，氟唑菌酰 胺，咲吡菌胺，啦唑萘菌胺，灭锈胺，氧化萎锈灵，戊苯吡菌胺，啦噻菌胺，环丙吡菌胺，甲呋 酰胺，苯威吡氟，异芬安。6. 如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，对SDHI杀真菌剂有抗性的真菌株选自以 下：玉蜀黍黑粉菌，禾生球腔菌，米曲霉，灰葡萄孢，椭圆葡萄孢，链格孢，山扁豆生棒孢，小 双胞腔菌，叉丝单囊壳白粉病菌，核盘菌和匍柄霉。7. 如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，将式（I)的化合物以约O . 005kg/ha-约 0.5kg/ha的式(I)的化合物的施用率施用于所述植物或它们所生长的场所。8. 如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，式（I)的化合物作为种子处理以0.001-250g/kg种子的施用率施用。9. 如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述植物选自下组：棉花，藤，玉蜀黍，大 豆，油菜，向日葵，草皮，园艺作物，灌木，果树、果实植物和蔬菜。10. 式（I)化合物或其农业化学上可接受的盐的用于治疗性和/或预防性处理植物以抵 抗至少一种抗性真菌株的的用途，) 其中，T表示氧或硫原子，X选自下组：2-异丙基，2-环丙基，2-叔丁基，5-氯-2-乙基，5-氯_2_异丙基，2-乙基_5_氣，5-氣_2_异丙基，2-环丙基_5_氣，2-环戊基_5_氣，2-氣_6_异丙 基，2-乙基-5-甲基，2-异丙基-5-甲基，2-环丙基-5-甲基，2-叔丁基-5-甲基，5-氯-2-(三氟 甲基），5_甲基_2_(二氣甲基），2_氯_6_(二氣甲基），3_氯-2-氣_6_(二氣甲基），2_乙基,2-三甲基甲硅烷基和2-乙基-4，5-二甲基。11.如权利要求10所述的用途，其特征在于，式(I)的化合物选自下组： N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-N-(2-异丙基苄基)-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺(化合 物 Al), N-环丙基-N-(2-环丙基苄基)-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺(化合 物 A2)， N-(2-叔丁基苄基)-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺(化合 物 A3)， N-(5-氯-2-乙基苄基)-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺(化 合物A4)， N-(5-氯-2-异丙基苄基)-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺 (化合物A5)， N-环丙基-3-(二氟甲基)-N-(2-乙基-5-氟苄基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺(化 合物A6)， N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-N-(5-氟-2-异丙基苄基)-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺 (化合物A7)， N-环丙基-N-(2-环丙基-5-氟苄基)-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺 (化合物A8)， N-(2-环戊基-5-氟苄基)-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺 (化合物A9)， N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-N-(2-氟-6-异丙基苄基)-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺 (化合物A10)， N-环丙基-3-(二氟甲基)-N-(2-乙基-5-甲基苄基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺 (化合物All), N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-N-(2-异丙基-5-甲基苄基)-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰 胺(化合物A12)， N-环丙基-N-(2-环丙基-5-甲基苄基)-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰 胺(化合物A13)， N-(2-叔丁基-5-甲基苄基)-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰 胺(化合物A14)， N-[5-氯-2-(三氟甲基)苄基）]-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧 酰胺(化合物A15)， N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-N-[5-甲基-2-(三氟甲基）苄基]-IH-吡唑-4-羧酰胺(化合物A16)， N-[2-氯-6-(三氟甲基)苄基）]-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧 酰胺(化合物A17)， N-[3-氯-2-氟-6-(三氟甲基）苄基）]-N-环丙基-3-(二氟甲基）-5-氟-1-甲基-IH-吡 唑-4-羧酰胺(化合物A18)， N-环丙基-3-(二氟甲基)-N-(2-乙基-4,5-二甲基苄基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧 酰胺(化合物A19)， N-环丙基-3-(二氟甲基）-5-氟-N-(2-异丙基苄基）-1-甲基-IH-吡唑-4-硫代羧酰胺 (化合物A20)， N-环丙基-3-(二氟甲基)-N-(2-乙基苄基)-5-氟-1-甲基-IH-吡唑-4-羧酰胺(化合物 A21)，和 N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-N-[2-(三甲基甲硅烷基)苄基]-IH-吡唑-4-羧 酰胺(化合物A22)。12. 如权利要求10或11所述的用途，其特征在于，所述真菌株对至少一种SDHI(琥珀酸 脱氢酶抑制剂)杀真菌剂有抗性。13. 如权利要求10或11所述的用途，其特征在于，SDHI杀真菌剂属于选自以下的化学 组：苯基-苯甲酰胺，吡啶基-乙基-苯甲酰胺，呋喃-羧酰胺，氧硫杂芑-羧酰胺，噻唑-羧酰 胺，吡唑-羧酰胺和吡啶-羧酰胺。14. 如权利要求10或11所述的用途，其特征在于，所述真菌株对至少一种选自下组的杀 真菌剂有抗性:麦锈灵，联苯吡菌胺，啶酰菌胺，萎锈灵，甲呋酰胺，氟吡菌酰胺，氟酰胺，氟 唑菌酰胺，咲吡菌胺，啦唑萘菌胺，灭锈胺，氧化萎锈灵，戊苯吡菌胺，啦噻菌胺，环丙吡菌 胺，甲呋酰胺，苯威吡氟和异芬安。15. 如权利要求10或11所述的用途，其特征在于，对SDHI杀真菌剂有抗性的真菌株选自 以下：玉蜀黍黑粉菌，禾生球腔菌，米曲霉，灰葡萄孢，椭圆葡萄孢，链格孢，山扁豆生棒孢， 小双胞腔菌，叉丝单囊壳白粉病菌，核盘菌和匍柄霉。16. 如权利要求10或11所述的用途，其特征在于，将式（I)的化合物以约0.005kg/ha-约 0.5kg/ha的式(I)的化合物的施用率施用于所述植物或它们所生长的场所。17. 如权利要求10或11所述的用途，其特征在于，式（I)的化合物作为种子处理以 0 · 001-250g/kg种子的施用率施用。18. 如权利要求10或11所述的用途，其特征在于，所述植物选自下组:棉花，藤，玉蜀黍， 大豆，油菜，向日葵，草皮，园艺作物，灌木，果树、果实植物和蔬菜。
【专利摘要】本发明涉及使用N-环丙基-N-[取代苄基]-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺或硫代羧酰胺衍生物和/或其盐提高作物中的生长，包括预防性和/或治疗性控制抗性真菌株，特别是控制对SDHI杀真菌剂有抗性的真菌株。本发明还涉及相关方法。
【IPC分类】A01N43/56, A01P3/00
【公开号】CN105451556
【申请号】CN201380054661
【发明人】P·克里斯涛, M-C·格罗让-库尔诺瓦耶, A·拉帕特, A·梅赫, V·托奎, F·维拉尔巴
【申请人】拜尔农科股份公司
【公开日】2016年3月30日
【申请日】2013年10月17日
【公告号】CA2888562A1, EP2908641A1, US20150264927, WO2014060520A1