专利名称：治疗M2b型急性髓性白血病的靶点的制作方法
技术领域：
本发明涉及急性髓性白血病治疗领域，特别是一种治疗M2b型急性髓性白血病的靶点。
背景技术：
急性髓性白血病(AML)是一种恶性的造血系统疾病，发病率为1～3/10万人口，近年有逐步增高的趋势。AML治疗困难病死率高，其总的完全缓解率仅为50％～70％，5年生存率为25％～30％。
根据细胞形态学、免疫学、细胞遗传学与分子生物学特点，AML可分为8种类型(M0～M7)，M2b型急性髓性白血病(AML M2b)是M2型急性髓性白血病(AML M2)的一种亚型，发病率占所有AML的10.4％左右。目前AML M2b的治疗仍以化疗为主。化疗药的作用靶点包括DNA(直接破坏DNA)、二氢叶酸还原酶、胸苷酸合成酶、DNA多聚酶、核苷酸还原酶、微管、核糖体等。化疗虽可获得较高的缓解率，但其毒副作用大且易复发并可由于耐药性的产生而导致治疗失败。
因此，揭示引起AML M2b发病的分子异常并将其作为治疗靶点、开发特异针对这种靶点的药物，可提高AML M2b的疗效并减轻治疗伴随的毒副作用，对AML M2b的临床治疗有重要意义。迄今尚未见以C-KIT突变和/或表达增高为AML M2b治疗靶点的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的有实际应用价值的AML M2b治疗靶点，以克服上述现有治疗方法的缺陷，为AML M2b病人提供一种新的治疗途径，以进一步提高疗效、改善病人预后。
为实现上述目的，本发明提供一种治疗AML M2b的靶点，该靶点为癌基因C-KIT突变和/或表达增高。
本发明既进一步阐明了AML M2b的发病机制，又为AML M2b的治疗提供新的治疗靶点。这一新靶点的发现对开发AML M2b基于致病基因蛋白产物的靶向疗法具有重要意义，对改善AML M2b病人预后具有潜在的临床应用价值。
具体实施例方式
发明人对53例AML M2b、5例AML M2a、20例AML M3、12例AML M4、4例AML M5、1例AML M6、5例急性淋巴细胞性白血病(ALL)、6例慢性粒细胞性白血病、4例非霍奇金淋巴瘤病人筛查了III型受体酪氨酸激酶家族成员C-KIT的完整编码序列，并在基因组DNA水平上加以验证。发现在53例AML M2b病人中，25例在两个C-KIT等位基因中有一个等位基因突变，而在其他类型的白血病/淋巴瘤病人中未发现C-KIT突变。
在25例发生C-KIT突变的AML M2b病人中，我们发现了包括7种点突变、1种缺失型突变、3种ITD型突变在内的11种类型的突变形式。3种点突变、3种ITD型突变为首次发现。突变情况见表1。
发明人发现，C-KIT的突变分布于C-KIT蛋白的胞外区、胞内近膜区、激酶1区和激酶2区(TK1、TK2)及激酶间区。迄今我们共发现11种类型的突变，包括7种点突变、一种缺失型突变和3种内串连重复(internal tandem duplication，ITD)型突变，其中3种点突变、3种ITD突变为首次发现。
表1 AML M2b病人中C-KIT突变类型突变类型 C-KIT蛋白结构上 突变的后果 备注发生突变的氨基酸部位点突变N822K 第822位天门冬 赖氨酸酰胺点突变D816Y 第816位天门冬 酪氨酸氨酸点突变D816V 第816位天门冬 缬氨酸氨酸点突变D816H 第816位天门冬 组胺酸氨酸点突变V825I 第825位缬氨酸 异亮氨酸 我们首次发现点突变L773S 第773位亮氨酸 丝氨酸 我们首次发现点突变I748T 第773位异亮氨 苏氨酸 我们首次发现酸ITD 第773位谷胺酰 插入17个氨基酸 我们首次发现(Q575+17(EFCELP 胺 (EFCELPYDHKWEFPRYNR)DHKWEFPRNR))ITD 第571位异亮氨 插入14个氨基酸 我们首次发现(I571+14(ESVDPT 酸 (ESVDPTQLPYDHKW)QLPYDHKW))ITD 第502～506位氨 AYFNF重复 我们首次发现(502(AYFNF)506 基酸repeat)D419缺失 第419位天门冬 缺失氨酸注大写英文字母为相应氨基酸缩写。
功能上这些突变可分为2型(1).调控型(regula tory type)C-KIT突变，即发生在C-KIT蛋白胞外区、胞内近膜区的突变，3种ITD及D419缺失均属此型；(2).激酶盒袋型(enzymatic pocket type)突变，主要指发生在激酶1区与激酶2区的突变，包括N822K、D816Y、D816V、D816H、V825I等。
发明人发现，AML M2b病人C-KIT mRNA的表达水平较其他类型白血病病人高。在没有C-KIT突变的病人中，其C-KIT mRNA水平亦较高。将这些数据进行以10为底的对数换算后进行统计学分析，发现AML M2b病人C-KIT表达较其他类型白血病为高，差异具有显著性(P＜0.001)；而在AML M2b，C-KIT突变型与野生型病人间C-KIT mRNA的表达没有差异(P＝0.16)(见表2)。
表2白血病病人C-KIT拷贝数白血病类型 病例拷贝数，中位数 Log(拷贝数)(均数数 (范围) ±标准误)AML M2b伴C-KIT 15 166.13(6.33-11 2.36±0.22*突变635.10)AML M2b不伴C-KIT 13 106.98 1.89±0.24*突变(4.52-1548.01)AML M2a 3 3.7(0.62-11.26)0.48±0.37AML M3 12 4.75 0.20±0.41(0.01-40.26)AML M4 5 3.26 0.85±0.46(0.4-151.29)CML 7 0.39 -0.70±0.51(0.01-27.78)其中*表示P＜0.001发明人比较了伴有与不伴有C-KIT突变的AML M2b病人外周血白细胞计数及其临床预后，发现伴有C-KIT突变者白细胞计数较高而预后较差，差异均具有统计学意义。
发明人分离了AML M2b病人的骨髓单个核细胞，用酪氨酸激酶活性测定试剂盒测定其蛋白酪氨酸激酶(PTK)活性，发现具有突变型C-KIT的病人其酪氨酸激酶活性比无突变者酪氨酸激酶活性明显增高，而无突变者其PTK活性亦较其他类型白血病为高。
用突变型C-KIT转染鼠32D细胞株，可使其发生转化并去除其对细胞因子IL-3的依赖性。
以上结果说明，癌基因C-KIT异常(发生突变和/或表达增高)与AML M2b的发生密切相关，自然可成为AML M2b新的治疗靶点。根据这种治疗靶点开发若干抗白血病药物。这些治疗靶点开发的抗白血病药物与其他药物联合应用。
权利要求
1.一种治疗M2b型急性髓性白血病的靶点，其特征在于该靶点为癌基因C-KIT突变和/或表达增高。
2.如权利要求1所述的，根据这种治疗靶点开发的抗白血病药物。
3.如权利要求2所述的，根据这种治疗靶点开发的抗白血病药物与其他药物联合应用。
全文摘要
一种治疗M2b型急性髓性白血病的靶点，该靶点为癌基因C－KIT突变和/或表达增高。本发明为AML M2b病人的治疗提供新的药物靶点，可根据该靶点开发新的治疗药物，开发的新药物既可单独用于AML M2b的治疗，也可与化疗药物联合应用并减少化疗药的用量，既提高其疗效又减轻其毒副作用，对AML M2b的临床治疗有重要意义。
文档编号C12Q1/68GK1626676SQ20041005373
公开日2005年6月15日 申请日期2004年8月13日 优先权日2004年8月13日
发明者陈赛娟, 王月英, 周光飚, 陈竺 申请人:上海第二医科大学附属瑞金医院