专利名称：一种收集贴壁细胞的方法
技术领域：
本发明涉及一种实验室培养细胞的方法，特别是涉及一种将贴壁细胞从培养板上或培养瓶中分离出来的方法。
背景技术：
细胞在培养过程中按照其生长方式分为贴壁生长和悬浮生长两种，其中大部分种类的细胞是贴壁生长的细胞。贴壁细胞在培养过程中，必须先将贴壁细胞从培养板上或培养瓶中分离出来，才能进行传代和收集，目前一般采用胰蛋白酶法和EDTA法分离。胰蛋白酶法分离效果较好，所以被广泛采用，但此方法容易造成细胞损伤、操作技术要求也高，特别是要准确掌握消化时间，消化时间长造成细胞损伤甚至细胞死亡，消化时间短则细胞分离效果不好，消化时间的长与短有时只有数秒钟，因此较难掌握。EDTA法分离效果不佳，需要时间较长。
发明内容
本发明的目的是提供一种收集贴壁细胞的方法，它能克服现有技术的上述缺点。
一种收集贴壁细胞的方法，其特征是将装有贴壁细胞和细胞培养液的细胞培养瓶或细胞培养板放置在2-8℃冰箱中20分钟至过夜，取出后立刻用吸管轻轻吹打，将细胞全部从培养瓶内或培养板上分离出来。
本发明的方法容易操作，操作时间容易掌握，分离效果好，在操作过程中不容易损伤细胞。可以广泛用于医疗卫生、生物科技、农牧渔业等领域和科研中的细胞培养，如为临床应用而进行的贴壁干细胞的大规模扩增和培养、树突状细胞培养和贴壁细胞株培养，使这些细胞大规模扩增后的临床应用成为可能。
具体实施例方式
实施例1将装有贴壁细胞珠A549和细胞培养液的细胞培养瓶置于8℃冰箱中过夜，取出后立刻用吸管轻轻吹打，可以将细胞全部从培养瓶中分离下来。
实施例2将装有贴壁细胞人骨髓间充质干细胞和细胞培养液的细胞培养瓶置于4℃冰箱中2小时，取出后立刻用吸管轻轻吹打，将细胞全部从培养瓶中分离下来。
实施例3将装有贴壁细胞树突状细胞和细胞培养液的细胞培养板置于2℃冰箱中20分钟，取出后立刻用吸管轻轻吹打，将细胞全部从培养板上分离下来。
本发明利用降低温度，使细胞代谢速度下降，贴壁细胞可自然地从贴壁状态转变为悬浮状态，使贴壁细胞自然从培养板或培养瓶底分离下来，再根据不同的需要或将细胞移植到新的培养瓶中继续培养，或收集起来备用。
用本发明的方法与目前常用的胰蛋白酶法和EDTA法对贴壁细胞株A549、NCI-H446、多例人骨髓间充质干细胞、树突状细胞进行比较，结果发现(见表)本发明无论在分离效果、细胞损伤程度和操作难度方面都优于现有的胰蛋白酶法和EDTA法。
表本发明和现有技术对贴壁细胞分离效果的比较
权利要求
1.一种收集贴壁细胞的方法，其特征是将装有贴壁细胞和细胞培养液的细胞培养瓶或细胞培养板放置在2-8℃冰箱中20分钟至过夜，取出后立刻用吸管轻轻吹打，将细胞几乎全部从培养瓶内或培养瓶板上分离出来。
2.权利要求1所述的贴壁细胞在树突状细胞制备中的应用。
3.权利要求1所述的贴壁细胞在干细胞扩增和培养后制备中的应用。
全文摘要
一种收集贴壁细胞的方法，其特征是将装有贴壁细胞和细胞培养液的细胞培养瓶或细胞培养板放置在2－8℃冰箱中20分钟至过夜，取出后立刻用吸管轻轻吹打，将细胞全部从培养瓶内或培养瓶板上分离出来。本发明的方法容易操作，操作时间容易掌握，分离效果好，并且不损伤细胞。可以广泛用于医疗卫生、生物科技、农牧渔业等领域和科研中的细胞培养，如贴壁生长的干细胞大规模扩增后的临床应用、树突状细胞培养后的临床治疗和部分细胞株培养，从而使大规模推广体细胞临床应用成为可能。
文档编号C12N5/08GK1974763SQ20061007079
公开日2007年6月6日 申请日期2006年12月13日 优先权日2006年12月13日
发明者高岱清, 魏仁敏, 宋修歧, 李文涛, 黄卫青, 张蓉, 王文 申请人:青岛市中心医院