专利名称：一种新型生物微胶囊的分装方法
技术领域：
本发明涉及一种拨i胶囊分装方法，特别涉及一种新型生物微胶囊的分装方法。
背景技术：
微胶囊的制备技术起源于20世纪50年代，在70年代中期得到迅猛发展，出现了许多微胶囊化产品和工艺，微胶囊化的方法已经在医药、农业和化工等方面得到了广泛的应用。
鉴于微胶囊化带来的巨大优越性，目前越来越多的科学工作者正把微胶囊技术应用于更为广泛的领域中,来改善物质传递体系的运行，而且未来还可能有其他用途。用于制备微胶囊的方法很多，目前文献报道的大约有200多种，这些方法在细节方面各有不同。
对于微胶囊工艺的分类主要有三种方法 一、根据涂层方法进行分类；二、根据悬浮介质的性质进行分类；三、根据微胶囊壳材料的原料类别进行分类。
根据涂层法进行分类的常见工艺有七种相分离法、界面聚合法、喷雾干燥和冻结法、离心挤压法、气体中悬浮包裹法、静电沉积法、盘涂法。
以熔点较高的硬化油为壁材的挤压法微胶囊化是生物微胶囊化常用的一种方法。此方法一般将菌粉作为芯材悬浮于室温下不流动的疏水物质(如氢化油脂)中，并以油脂及一定比例的明胶和果胶作为双层壁材。该产品水溶性低，同时由于很多细菌的耐热温度低，制备过程中与熔点较高的油脂接触时死亡率高，而且细菌在油脂中分散极不均匀，因此导致产品质量不稳定。
以海藻酸钠作为壁材，采取固定化法制备微胶囊化细菌应用较多，但由于细胞是分散于凝胶中，打断了凝胶网络的均匀结构，小分子物质容易通过壁材，因此不能很好的阻隔胃液，产品的耐酸性较差；而如果再将油脂喷涂于颗粒表面，虽然制得的产品耐酸性有很大提高，但同样由于油脂温度过高，导致细菌死亡率高。
在相分离凝聚法中，以邻苯二甲酸醋酸纤维素为壁材，将冷冻干燥菌粉和淀粉混合后研磨成微球作为芯材，制得的微胶囊产品通常在医药、农业和化学工业中应用，但不能添加于食品中；而用海藻酸钠作为壁材，采用相分离法制得的产品，与固定化法结构相同，唯一的区别在于颗粒较小，其耐酸性更差。
喷雾冷却法由于要用到硬化油，因此存在细菌分散不均匀及制备过程中死亡率高的问题，硬化油固化需要充分的冷却时间和温度，对设备要求高,而且容易产生粘壁。
双重乳状液法，由于细菌液外有一层固化的油脂膜，在菌体与外水相之间形成屏障，因此产品在低pH条件下稳定性高。但此法操作复杂，而且在形成双重乳状液的过程中外水相与内水相极易混溶，产品得率低。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种将微胶囊技术应用到微生物细菌复合配方的分装上，微胶囊封装工艺使细菌处于"休眠"状态，当产品与水混合后，其保护层被溶解，可确保最高剂量的第一代细菌立即投入工作，保质期长的新型生物微胶囊的分装方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的一种新型生物微胶囊的分装方法，该方法步骤如下-
(1) 菌种经筛选的细菌在培养基中生长，通过检测后，第一代的接种体被转移到经无菌处理的生物发酵器中进行至少十二小时的生长；
细菌各组份的重量百分比乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)又称乳酸链球菌(Str印tococcus lactis): 20 25%，植物乳杆菌(Lactobacillus plantar iim): 10 20%，枯草芽孢杆菌(Bacillussubt i 1 is ) : 30 45% ， 啤酒酵母或酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae): 18 35%，屎链球菌(Streptococcus faeci u m)又称屎肠球菌(Enterococcus faecium): 5 15%;
(2) 培养发酵质量检测确认纯度后，接种体被转移到密封无
菌的不锈钢发酵器中，无菌的糖及氧气供应给细菌并控制适当的PH，pH值在5.5 9.5之间，整个周期内，会定期抽样检查无杂菌状况和生长指标；
6(3) 温和超离心24小时以内，就可以收获经温和超离心作用而浓縮的细菌；
(4) 芯材将细菌与分散保护剂乳清和糖蜜的干燥组份混匀，
细菌的重量百分比为80 90%，乳清的重量百分比为5 20%，糖蜜的重量百分比为1 5%;混匀后加入水分并控制水分含量在10%左右，形成芯材，将芯材加入到多孔旋转圆筒内筒中；
(5) 壁材将3-葡聚糖与蔗糖的干燥组份混匀，3-葡聚糖的重量百分比为40 75%，蔗糖的重量百分比为25 60%，混匀后加入水分并控制水分含量在50%左右，形成壁材糊状溶液，加入到多孔旋转圆筒外筒中；
(6) 微胶囊制成采用多孔离心法，应用多孔旋转圆筒装置，经高速离心，生成50 100um微胶囊。当内部圆筒旋转时，由于离心力作用向水平方向飞出的内芯物，在通过外筒壁的孔洞时，被沿着外筒壁流下的外膜液体(壁材)所包覆，然后在外筒外面的硬化装置中硬化，生成外膜，形成微胶囊；
(7) 固化随后产品在流体冷冻系统里被快速冷冻；
(8) 干燥大型冷冻室，温度在-4.5 (TC条件下，进行2 4天的冷冻干燥，两次冷冻干燥过程消除了 95%的水分，确保了菌种的高存活率。
本发明采用以上技术方案后，可以获得以下有益效果
1、创造性。本发明的稳定性明显好于采用其他微胶囊技术所制 的产品，由于采用亲水性玻璃态基质e -葡聚糖与蔗糖的混合物为壁材，空气扩散进入的速率非常慢，因而能阻隔水分及氧气对芯材的作 用。
2、 保质期长。本发明延长了产品的保质期至少可达2年。
3、 成本低。本发明使细菌处于"休眠"状态，当产品与水混合 后，其保护层被溶解，可确保最高剂量的第一代细菌立即投入工作。 尽管此工艺比喷雾干燥工艺要昂贵一些，但其良好的阻氧性弥补了这 点不足，使其应用成本还低于喷雾干燥法。
4、 效力好。生物产品通常采用液体和粉末两种形态，由于生物 产品多数是活性有机体，因此大多数生产厂家在液体和干燥的微生物 产品中加入食物源，这些食物源一般是谷类食物，当微生物(细菌) 在这种非实验室条件下(具体的pH值，温度，食物源)摄食和繁殖 的时候，产品的效力快速减弱，当这些产品被客户购买使用的时候， 产品的效力已无法得到保障。虽然一些厂家在产品中使用抑制剂来阻 止细菌的摄食和繁殖，但这类液体和粉末产品的保质期仍非常短。一 般仅为3-6个月，而本发明则至少可达2年。
5、 有效菌含量高。本发明生产的产品有效菌含量可达30-50亿/克。
6、 产品稳定。本发明中的e -葡聚糖与蔗糖的混合物形成的壁材， 与细菌的生物相容性极高，利于细菌活性的维持，优于其它壁材。
7、 效率高。现有技术的相分离法形成的凝胶颗粒小，相对表面 积较大，处于表层的菌体量也较多，因而泄漏的菌体也多，产率较小， 本发明的多孔离心法基本上无菌体泄漏，因此微胶囊化产率和效率都比较高。
8、 使用安全。本发明每批产品都经过无沙门氏菌检测。所用材 料对人畜、动植物无害，具环境生态安全性。使用安全。
9、 性能参数优于现有技术。
微胶囊化产率 70% (相分离凝聚法)98% (本发明) 微胶囊化效率 80% (相分离凝聚法)99% (本发明)。
具体实施例方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明 实施例1
所述分装方法步骤如下-(1)经筛选的细菌在培养基中生长，通过检测后，第一代的接 种体被转移到经无菌处理的250升生物发酵器中进行至少十二小时的 生长；
细菌各组份的重量百分比乳酸乳球菌(Lactococcus lactis) 又称乳酸链球菌(Str印tococcus lactis) : 20 25%，植物乳杆菌 (Lactobacillus plantar u m) : 10 20%，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtil is) : 30 45%，啤酒酵母或酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) : 18 35%，屎链球菌(Streptococcus faecium)又 称屎肠球菌(Enterococcus faecitim) : 5~15%;
(2)质量检测确认纯度后，接种体被转移到密封无菌的5000升不 锈钢发酵器中，无菌的糖及氧气供应给细菌并控制适当的PH， pH值平均范围在5.5 9.5之间，整个周期内，会定期抽样检査无杂菌状况 和生长指标；
(3) 24小时以内，就可以收获经温和超离心作用而浓縮的细菌。
(4) 芯材将细菌与分散保护剂乳清和糖蜜的干燥组份混匀， 细菌的重量百分比为80 90%，乳清的重量百分比为5 20%，糖蜜的 重量百分比为1 5%;混匀后加入水分并控制水分含量在10%左右， 形成芯材；将芯材加入到多孔旋转圆筒内筒中；
(5) 壁材将e-葡聚糖与蔗糖的干燥组份混匀，葡聚糖的 重量百分比为40 75%，蔗糖的重量百分比为25 60%;混匀后加入 水分并控制水分含量在50%左右，形成壁材糊状溶液，加入到多孔旋 转圆筒外筒中；
(6) 微胶囊制成采用多孔离心法，应用多孔旋转圆筒装置， 经高速离心，生成50 100um微胶囊。当内部圆筒旋转时，由于离 心力作用向水平方向飞出的内芯物，在通过外筒壁的孔洞时，被沿着 外筒壁流下的外膜液体(壁材)所包覆，然后在外筒外面的硬化装置 中硬化，生成外膜，形成微胶囊；
(7) 随后产品在流体冷冻系统里被快速冷冻，在大型冷冻室， 温度为-4.5 (TC条件下，进行2 4天的冷冻干燥，两次冷冻干燥过 程消除了 95%的水分，确保了菌种的高存活率；
(8) 每批产品都经过无沙门氏菌检测。
所述菌种乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)又称乳酸链球菌 (Streptococcus lactis)、 植物季L杆菌(Lactobacillus plantarum)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、啤酒酵母或酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae)、屎链球菌(Streptococcus faecium) 又称屎肠球菌(Enterococcusfaecium)，均采购自"广东省微生物 研究所"，其它单位和个人均可通过向此单位购买而随时获得上述菌 种。
上述菌种在自然界是广泛存在的，非基因工程改造产物，已被我 国农业部列入《允许使用的饲料添加剂品种目录》，说明以上菌种无 毒，对人畜、动植物无害，具环境生态安全性。
本发明中的多孔离心法为现有技术。 本发明中的机械装置-多孔旋转圆筒可采用现有技术。
本发明的其他工艺可采用现有技术，其分装芯物不限于本实施例 所述，亦可分装其他微生物，分装方便，保质期限长。
实施例2
所述分装方法步骤如下 (1)经筛选的细菌在培养基中生长，通过检测后，第一代的接 种体被转移到经无菌处理的250升生物发酵器中进行十二小时的生 长；
细菌各组份的重量百分比乳酸乳球菌(Lactococcus lactis) 又称乳酸链球菌(Str印tococcus lactis): 20%,植物乳杆菌 (Lactobacillus plantar iim): 15%， 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis): 35%,啤酒酵母或酉良酒酵母(Saccharomyces cerevisiae):20% ， 屎链球菌 (Streptococcus faeci um) 又称屎肠球菌 (Enterococcus faeci um): 10%;
(2) 质量检测确认纯度后，接种体被转移到密封无菌的5000升 不锈钢发酵器中。无菌的糖及氧气供应给细菌并控制适当的pH。 PH 值为9.5，整个周期内，会定期抽样检査无杂菌状况和生长指标；
(3) 24小时，就可以收获经温和超离心作用而浓縮的细菌；
(4) 芯材将细菌与分散保护剂乳清和糖蜜的干燥组份混匀， 细菌的重量百分比为80%,乳清的重量百分比为15%,糖蜜的重量百 分比为5%;混匀后加入水分并控制水分含量在10%左右，形成芯材； 将芯材加入到多孔旋转圆筒内筒中；
(5) 壁材将e-葡聚糖与蔗糖的干燥组份混匀，e-葡聚糖的
重量百分比为75%,蔗糖的重量百分比为25%;混匀后加入水分并控 制水分含量在50.5%，形成壁材糊状溶液，加入到多孔旋转圆筒外 筒中；
(6) 微胶囊制成采用多孔离心法，应用多孔旋转圆筒装置， 经高速离心，生成50pm微胶囊。当内部圆筒旋转时，由于离心力作 用向水平方向飞出的内芯物，在通过外筒壁的孔洞时，被沿着外筒壁 流下的外膜液体(壁材)所包覆，然后在外筒外面的硬化装置中硬化， 生成外膜，形成微胶囊；
(7) 随后产品在流体冷冻系统里被快速冷冻，并在大型冷冻室， -0.5-C条件下，进行3天的冷冻干燥，两次冷冻干燥过程消除了 95% 的水分，确保了菌种的高存活率(8)每批产品都经过无沙门氏菌检测。 其他与实施例l相同。
实施例3
所述分装方法步骤如下-
(1) 经筛选的细菌在培养基中生长，通过检测后，第一代的接 种体被转移到经无菌处理的250升生物发酵器中进行十六小时的生 长；
细菌各组份的重量百分比乳酸乳球菌(Lactococcus lactis) 又称乳酸链球菌(Str印tococcus lactis): 25%，植物乳杆菌
(Lactobacillus plantar pm): 20%， 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis): 30%,啤酒酵母或酉良酒酵母(Saccharomyces cerevisiae): 18% , 屎链球菌(Str印tococcus faeci um) 又称屎肠球菌
(Enterococcus faeci践)7%;
(2) 质量检测确认纯度后，接种体被转移到密封无菌的5000升 不锈钢发酵器中。无菌的糖及氧气供应给细菌并控制适当的pH， pH 值7.5，整个周期内，会定期抽样检査无杂菌状况和生长指标；
(3) 18小时，就可以收获经温和超离心作用而浓縮的细菌；
(4) 芯材将细菌与分散保护剂乳清和糖蜜的干燥组份混匀， 细菌的重量百分比为90%，乳清的重量百分比为5%，糖蜜的重量百分
比为5%;混匀后加入水分并控制水分含量在10%左右，形成芯材；将
芯材加入到多孔旋转圆筒内筒中；(5) 壁材将P-葡聚糖与蔗糖的干燥组份混匀，葡聚糖的重 量百分比为40%，蔗糖的重量百分比为60%;混匀后加入水分并控制 水分含量在49. 3%，形成壁材糊状溶液，加入到多孔旋转圆筒外筒中；
(6) 微胶囊制成采用多孔离心法，应用多孔旋转圆筒装置，经
高速离心，生成60nm微胶囊。当内部圆筒旋转时，由于离心力作用 向水平方向飞出的内芯物，在通过外筒壁的孔洞时，被沿着外筒壁流 下的外膜液体(壁材)所包覆，然后在外筒外面的硬化装置中硬化， 生成外膜，形成微胶囊；
(7) 随后产品在流体冷冻系统里被快速冷冻，并在大型冷冻室， -2.5°〇条件下，进行2天的冷冻干燥，两次冷冻干燥过程消除了 95% 的水分，确保了菌种的高存活率；
(8) 每批产品都经过无沙门氏菌检测。 其他与实施例l相同。
实施例4
所述分装方法步骤如下 (1)经筛选的细菌在培养基中生长，通过检测后，第一代的接 种体被转移到经无菌处理的250升生物发酵器中进行十八小时的生 长。细菌各组份的重量百分比乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)又 称乳酸链球菌(Streptococcus lactis): 20%,植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum): 10%，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis): 43%，啤 酒酵母或酸酒酵母(Saccharomyces cerevisiae): 22%，屎链球菌(Streptococcus faeci Pm) 又禾尔屎肠球菌 (Enterococcus faecilim): 5%;
(2) 质量检测确认纯度后，接种体被转移到密封无菌的5000升 不锈钢发酵器中，无菌的糖及氧气供应给细菌并控制适当的pH， pH 值5.5，整个周期内，会定期抽样检查无杂菌状况和生长指标；
(3) 20小时，就可以收获经温和超离心作用而浓縮的细菌；
(4) 芯材将细菌与分散保护剂乳清和糖蜜的干燥组份混匀， 细菌的重量百分比为85%,乳清的重量百分比为10%，糖蜜的重量百 分比为5%;混匀后加入水分并控制水分含量在10%左右，形成芯材； 将芯材加入到多孔旋转圆筒内筒中；
(5) 壁材将P-葡聚糖与蔗糖的干燥组份混匀，葡聚糖的 重量百分比为50%，蔗糖的重量百分比为50%;混匀后加入水分并控 制水分含量在50.9%，形成壁材糊状溶液，加入到多孔旋转圆筒外筒 中；
(6) 微胶囊制成采用多孔离心法，应用多孔旋转圆筒装置， 经高速离心，生成100um微胶囊。当内部圆筒旋转时，由于离心力 作用向水平方向飞出的内芯物，在通过外筒壁的孔洞时，被沿着外筒 壁流下的外膜液体(壁材)所包覆，然后在外筒外面的硬化装置中硬 化，生成外膜，形成微胶囊；
(7) 随后产品在流体冷冻系统里被快速冷冻，并在大型冷冻室， -4"C条件下，进行3天的冷冻干燥，两次冷冻干燥过程消除了 95%的 水分，确保了菌种的高存活率；(8)每批产品都经过无沙门氏菌检测。 其他与实施例l相同。
实施例5
所述分装方法步骤如下
(1) 经筛选的细菌在培养基中生长，通过检测后，第一代的接 种体被转移到经无菌处理的250升生物发酵器中进行二十小时的生 长；
细菌各组份的重量百分比乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)又 称乳酸链球菌(Streptococcus lactis): 22%,植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum): 18%，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis): 30%，啤 酒酵母或酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae): 22%,屎链球菌 (Streptococcus faeciym ) 又禾尔屎肠球菌 (Enterococcus faecipm): 8%;
(2) 质量检测确认纯度后，接种体被转移到密封无菌的5000升 不锈钢发酵器中，无菌的糖及氧气供应给细菌并控制适当的pH， pH 值6.55，整个周期内，会定期抽样检查无杂菌状况和生长指标；
(3) 6小时后，就可以收获经温和超离心作用而浓縮的细菌；
(4) 芯材将细菌与分散保护剂乳清和糖蜜的干燥组份混匀，
细菌的重量百分比为90%,乳清的重量百分比为8%，糖蜜的重量百分
比为2%;混匀后加入水分并控制水分含量在10%左右，形成芯材；将 芯材加入到多孔旋转圆筒内筒中；(5) 壁材将P-葡聚糖与蔗糖的干燥组份混匀，3-葡聚糖的重 量百分比为60%，蔗糖的重量百分比为40%;混匀后加入水分并控制 水分含量在49.8%，形成壁材糊状溶液，加入到多孔旋转圆筒外筒中；
(6) 微胶囊制成采用多孔离心法，应用多孔旋转圆筒装置，经
高速离心，生成80um微胶囊。当内部圆筒旋转时，由于离心力作用 向水平方向飞出的内芯物，在通过外筒壁的孔洞时，被沿着外筒壁流 下的外膜液体(壁材)所包覆，然后在外筒外面的硬化装置中硬化， 生成外膜，形成微胶囊；
(7) 随后产品在流体冷冻系统里被快速冷冻，并在大型冷冻室， -1.5'C条件下，进行3天的冷冻干燥，两次冷冻干燥过程消除了 95% 的水分，确保了菌种的高存活率；
(8) 每批产品都经过无沙门氏菌检测。 其他与实施例l相同。
实施例6
所述分装方法步骤如下 (1)经筛选的细菌在培养基中生长，通过检测后，第一代的接 种体被转移到经无菌处理的250升生物发酵器中进行二十三小时的 生长；
细菌各组份的重量百分比乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)又 称乳酸链球菌(Streptococcus lactis): 21°/。，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum): 12%，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis): 32%，啤
17酒酵母或酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae): 25%，屎链球菌 (Streptococcus faecium ) 又禾尔屎肠球菌 (Enterococcus faecium): 10%;
(2) 质量检测确认纯度后，接种体被转移到密封无菌的5000升 不锈钢发酵器中，无菌的糖及氧气供应给细菌并控制适当的pH， pH 值7.4，整个周期内，会定期抽样检査无杂菌状况和生长指标；
(3) 13小时后，就可以收获经温和超离心作用而浓缩的细菌；
(4) 芯材将细菌与分散保护剂乳清和糖蜜的干燥组份混匀，
细菌的重量百分比为83%，乳清的重量百分比为13%，糖蜜的重量百
分比为4%;混匀后加入水分并控制水分含量在10%左右，形成芯材； 将芯材加入到多孔旋转圆筒内筒中；
(5) 壁材将e-葡聚糖与蔗糖的干燥组份混匀，3-葡聚糖的
重量百分比为55%，蔗糖的重量百分比为45%;混匀后加入水分并控 制水分含量在50.6%，形成壁材糊状溶液，加入到多孔旋转圆筒外筒 中；
(6) 微胶囊制成采用多孔离心法，应用多孔旋转圆筒装置，
经高速离心，生成90ym微胶囊。当内部圆筒旋转时，由于离心力作 用向水平方向飞出的内芯物，在通过外筒壁的孔洞时，被沿着外筒壁 流下的外膜液体(壁材)所包覆，然后在外筒外面的硬化装置中硬化， 生成外膜，形成微胶囊；
(7) 随后产品在流体冷冻系统里被快速冷冻，并在大型冷冻室， -3.5r条件下，进行4天的冷冻干燥，两次冷冻干燥过程消除了 95%的水分，确保了菌种的高存活率；
(8)每批产品都经过无沙门氏菌检测。 其他与实施例l相同。
实施例7
所述分装方法步骤如下-(1)经筛选的细菌在培养基中生长，通过检测后，第一代的接 种体被转移到经无菌处理的250升生物发酵器中进行十五小时的生 长；
细菌各组份的重量百分比乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)又 称乳酸链球菌(Streptococcus lactis): 20%,植物乳杆菌(Lactobacillus plantarpm): 20%，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis): 30%，啤 酒酵母或酉良、酒酵母(Saccharomyces cerevisiae): 18%，尿链球菌 (Streptococcus faecium ) 又禾尔屎肠球菌 (Enterococcus faecilim): 12%;
(2)质量检测确认纯度后，接种体被转移到密封无菌的5000升不 锈钢发酵器中，无菌的糖及氧气供应给细菌并控制适当的PH， pH值 8.5，整个周期内，会定期抽样检査无杂菌状况和生长指标；
(3) 16小时后，就可以收获经温和超离心作用而浓縮的细菌；
(4) 芯材将细菌与分散保护剂乳清和糖蜜的干燥组份混匀， 细菌的重量百分比为88%，乳清的重量百分比为8%，糖蜜的重量百分
比为4%;混匀后加入水分并控制水分含量在10%左右，形成芯材；将芯材加入到多孔旋转圆筒内筒中；
(5) 壁材将e-葡聚糖与蔗糖的干燥组份混匀，葡聚糖的重 量百分比为70%，蔗糖的重量百分比为30%;混匀后加入水分并控制 水分含量在49. 8%，形成壁材糊状溶液，加入到多孔旋转圆筒外筒中；
(6) 微胶囊制成采用多孔离心法，应用多孔旋转圆筒装置，经 高速离心，生成85um微胶囊。当内部圆筒旋转时，由于离心力作用 向水平方向飞出的内芯物，在通过外筒壁的孔洞时，被沿着外筒壁流 下的外膜液体(壁材)所包覆，然后在外筒外面的硬化装置中硬化， 生成外膜，形成微胶囊；
(7) 随后产品在流体冷冻系统里被快速冷冻，并在大型冷冻室， -2.6。C条件下，进行4天的冷冻干燥，两次冷冻干燥过程消除了95% 的水分，确保了菌种的高存活率；
(8) 每批产品都经过无沙门氏菌检测。 其他与实施例l相同。
实施例8
所述分装方法步骤如下 (1)经筛选的细菌在培养基中生长，通过检测后，第一代的接 种体被转移到经无菌处理的250升生物发酵器中进行十九小时的生 长；
细菌各组份的重量百分比乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)又 称乳酸链球菌(Streptococcus lactis): 23%，植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum): 17%，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis): 35%,啤 酒酵母或酉良、酒酵母(Saccharomyces cerevisiae): 20%，尿链球菌 (Streptococcus faeci um) 又禾尔屎肠球菌 (Enterococcus faeciym): 5%;
(2) 质量检测确认纯度后，接种体被转移到密封无菌的5000升 不锈钢发酵器中，无菌的糖及氧气供应给细菌并控制适当的pH， pH 值7，整个周期内，会定期抽样检查无杂菌状况和生长指标；
(3) 4小时后，就可以收获经温和超离心作用而浓縮的细菌；
(4) 芯材将细菌与分散保护剂乳清和糖蜜的干燥组份混匀，
细菌的重量百分比为82%，乳清的重量百分比为16%，糖蜜的重量百
分比为2%;混匀后加入水分并控制水分含量在10%左右，形成芯材； 将芯材加入到多孔旋转圆筒内筒中；
(5) 壁材将P-葡聚糖与蔗糖的干燥组份混匀，e-葡聚糖的重 量百分比为66%，蔗糖的重量百分比为34%;混匀后加入水分并控制 水分含量在50%，形成壁材糊状溶液，加入到多孔旋转圆筒外筒中；
(6) 微胶囊制成采用多孔离心法，应用多孔旋转圆筒装置，经
高速离心，生成55um微胶囊。当内部圆筒旋转时，由于离心力作用 向水平方向飞出的内芯物，在通过外筒壁的孔洞时，被沿着外筒壁流 下的外膜液体(壁材)所包覆，然后在外筒外面的硬化装置中硬化， 生成外膜，形成微胶囊；
(7) 随后产品在流体冷冻系统里被快速冷冻，并在大型冷冻室， -3.5'C条件下，进行3天的冷冻干燥，两次冷冻干燥过程消除了95%的水分，确保了菌种的高存活率；
(8)每批产品都经过无沙门氏菌检测。 其他与实施例l相同。
实施例9
所述分装方法步骤如下-(1)经筛选的细菌在培养基中生长，通过检测后，第一代的接 种体被转移到经无菌处理的250升生物发酵器中进行十九小时的生 长；
细菌各组份的重量百分比乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)又 称乳酸链球菌(Str印tococcuslactis): 25%，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum): 10%，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis): 40%,啤 酒酵母或酉良、酒酵母(Saccharomyces cerevisiae): 20%，尿链球菌 (Streptococcus faeci um) 又称屎肠球菌 (Enterococcus faecium): 5%;
(2)质量检测确认纯度后，接种体被转移到密封无菌的5000升不 锈钢发酵器中，无菌的糖及氧气供应给细菌并控制适当的PH， pH值 5.8，整个周期内，会定期抽样检査无杂菌状况和生长指标；
(3) 8小时后，就可以收获经温和超离心作用而浓縮的细菌；
(4) 芯材将细菌与分散保护剂乳清和糖蜜的干燥组份混匀， 细菌的重量百分比为90%,乳清的重量百分比为5%，糖蜜的重量百分
比为5%;混匀后加入水分并控制水分含量在10%左右，形成芯材；将芯材加入到多孔旋转圆筒内筒中；
(5) 壁材将6-葡聚糖与蔗糖的干燥组份混匀，0-葡聚糖的重 量百分比为75%，蔗糖的重量百分比为25%;混匀后加入水分并控制 水分含量在50. 6%，形成壁材糊状溶液，加入到多孔旋转圆筒外筒中；
(6) 微胶囊制成采用多孔离心法，应用多孔旋转圆筒装置，经
高速离心，生成75iim微胶囊。当内部圆筒旋转时，由于离心力作用 向水平方向飞出的内芯物，在通过外筒壁的孔洞时，被沿着外筒壁流 下的外膜液体(壁材)所包覆，然后在外筒外面的硬化装置中硬化， 生成外膜，形成微胶囊；
(7) 随后产品在流体冷冻系统里被快速冷冻，并在大型冷冻室， -0.6'C条件下，进行4天的冷冻干燥，两次冷冻干燥过程消除了 95% 的水分，确保了菌种的高存活率；
(8) 每批产品都经过无沙门氏菌检测。 其他与实施例l相同。
实施例10
所述分装方法步骤如下 (1)经筛选的细菌在培养基中生长，通过检测后，第一代的接 种体被转移到经无菌处理的250升生物发酵器中进行二十六小时的 生长；
细菌各组份的重量百分比乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)又 称乳酸链球菌(Streptococcus lactis): 22%，植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum): 10%，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis): 33%，啤 酒酵母或酉良、酒酵母(Saccharomyces cerevisiae): 30%，尿链球菌 (Streptococcus faecium ) 又禾尔屎肠球菌 (Enterococcus faecium): 5%;
(2) 质量检测确认纯度后，接种体被转移到密封无菌的5000升 不锈钢发酵器中，无菌的糖及氧气供应给细菌并控制适当的pH， pH 值8.5，整个周期内，会定期抽样检査无杂菌状况和生长指标；
(3) 3小时，就可以收获经温和超离心作用而浓縮的细菌；
(4) 芯材将细菌与分散保护剂乳清和糖蜜的干燥组份混匀， 细菌的重量百分比为85%，乳清的重量百分比为10%，糖蜜的重量百 分比为5%;混匀后加入水分并控制水分含量在10%左右，形成芯材； 将芯材加入到多孔旋转圆筒内筒中；
(5) 壁材将P-葡聚糖与蔗糖的干燥组份混匀，p-葡聚糖的重 量百分比为50%，蔗糖的重量百分比为50%;混匀后加入水分并控制 水分含量在49. 8%，形成壁材糊状溶液，加入到多孔旋转圆筒外筒中；
(6) 微胶囊制成采用多孔离心法，应用多孔旋转圆筒装置，经
高速离心，生成95um微胶囊。当内部圆筒旋转时，由于离心力作用 向水平方向飞出的内芯物，在通过外筒壁的孔洞时，被沿着外筒壁流 下的外膜液体(壁材)所包覆，然后在外筒外面的硬化装置中硬化， 生成外膜，形成微胶囊；
(7) 随后产品在流体冷冻系统里被快速冷冻，并在大型冷冻室， -1.8匸条件下，进行2天的冷冻干燥，两次冷冻干燥过程消除了 95%的水分，确保了菌种的高存活率；
(8)每批产品都经过无沙门氏菌检测。 其他与实施例l相同。
本发明的最佳实施例己经阐明，本领域普通技术人员根据本发明 所做的进一步拓展均落入本发明范围。
权利要求
1、一种新型生物微胶囊的分装方法，其特征在于(1)菌种经筛选的细菌在培养基中生长，通过检测后，第一代的接种体被转移到经无菌处理的生物发酵器中进行至少十二小时的生长；细菌各组份的重量百分比乳酸乳球菌20～25％，植物乳杆菌10～20％，枯草芽孢杆菌30～45％，啤酒酵母或酿酒酵母18～35％，屎链球菌5～15％；(2)培养发酵质量检测确认纯度后，接种体被转移到密封无菌的不锈钢发酵器中，无菌的糖及氧气供应给细菌并控制适当的pH，pH值在5.5～9.5之间，整个周期内，会定期抽样检查无杂菌状况和生长指标；(3)温和超离心24小时以内，就可以收获经温和超离心作用而浓缩的细菌；(4)芯材将细菌与分散保护剂乳清和糖蜜的干燥组份混匀，细菌的重量百分比为80～90％，乳清的重量百分比为5～20％，糖蜜的重量百分比为1～5％；混匀后加入水分并控制水分含量在10％左右，形成芯材；将芯材加入到多孔旋转圆筒内筒中；(5)壁材将β-葡聚糖与蔗糖的干燥组份混匀，β-葡聚糖的重量百分比为40～75％，蔗糖的重量百分比为25～60％；混匀后加入水分并控制水分含量在50％左右，形成壁材糊状溶液，加入到多孔旋转圆筒外筒中；(6)微胶囊制成采用多孔离心法，应用多孔旋转圆筒装置，经高速离心，生产出50～100μm微胶囊。当内部圆筒旋转时，由于离心力作用向水平方向飞出的内芯物，在通过外筒壁的孔洞时，被沿着外筒壁流下的外膜液体(壁材)所包覆，然后在外筒外面的硬化装置中硬化，生成外膜，形成微胶囊；(7)固化随后产品在流体冷冻系统里被快速冷冻；(8)干燥在大型冷冻室，温度在-4.5～0℃条件下，进行2～4天的冷冻干燥，两次冷冻干燥过程消除了95％的水分，确保了菌种的高存活率。
全文摘要
一种新型生物微胶囊的分装方法，步骤菌种筛选细菌乳酸乳球菌20～25％，植物乳杆菌10～20％，枯草芽孢杆菌30～45％，啤酒酵母或酿酒酵母18～35％，屎链球菌5～15％；至少十二小时生长；检测，24小时内，获浓缩细菌；芯材将细菌与分散保护剂乳清和糖蜜干燥组份混匀，细菌重量百分比80～90％，乳清重量百分比5～20％，糖蜜重量百分比1～5％；水分控制在10％左右，加至多孔旋转圆筒内筒中；壁材将β-葡聚糖与蔗糖干燥组份混匀，β-葡聚糖重量百分比40～75％，蔗糖重量百分比25～60％，水分控制在50％左右，加至多孔旋转圆筒外筒中；高速离心，生成微胶囊；固化，干燥。
文档编号C12N1/16GK101676386SQ20081021198
公开日2010年3月24日 申请日期2008年9月16日 优先权日2008年9月16日
发明者范德朋 申请人:佛山市楚一科技有限公司