专利名称：前列腺癌相关融合基因Fish检测方法和相关检测探针及试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及疾病相关基因检测技术领域，更具体地，涉及前列腺癌相关融合基因检测技术领域，特别是指一种前列腺癌相关融合基因Fish检测方法和相关检测探针及试剂盒。
背景技术：
Ilr歹(prostatic carcinoma, prostatic cancer, Pea) ^^ ^ ' '] 的恶性肿瘤。在北美地区，前列腺癌的发病率仅次于皮肤癌，每6个美国男性中就有1人会患前列腺癌。前列腺癌的死亡率仅次于肺癌，每36个美国男性中就有1人会死于前列腺癌。 在2010年，已报道了 217，730例前列腺癌病例，32，050例死亡病例。前列腺癌发病率随年龄增高，在50岁人群中，发病率约为2. 14%，在70岁人群中，发病率上升到8. 02%。我国近年来由于人口老龄化，发病率也开始增加。目前前列腺癌的诊断主要依靠三种手段PSA筛查，直肠指检及经直肠B超引导下前列腺穿刺活检。PSA筛查目前应用最广泛，但特异性较低。PSA> lOng/mL时，漏诊率在 50%以上；PSA为4 lOng/mL，结合穿刺活检仅能发现20% 40%的前列腺癌患者；PSA < 4ng/mL仍有20% 30%患者漏诊。PSA筛查不能有效区分早期前列腺癌和良性前列腺增生，尤其当PSA为2 lOng/mL时，更加无法判断。经直肠超声引导下前列腺穿刺活检， 是诊断前列腺癌的主要方法。而早期前列腺癌表现主要为组织结构的改变，细胞病理学改变不典型，其诊断易受病理检查者主观经验的影响。2005年发现在大多数前列腺癌组织中，TMPRSS2与ETS相关基因(ERG，ETVl及 ETV4)之间可以发生融合，表明非随机的基因重排可以发生在上皮来源的癌症中，被认为是人类恶性肿瘤中最多见的基因变异形式。目前，检测融合基因主要有RT-PCR和FISH两种方法。RT-PCR对样本和技术要求较高，部分甲醛固定、石蜡包埋标本因RNA降解影响结果的可靠性，不能直接显示标本组织形态学的关系。研究表明，在前列腺癌患者直肠指检后尿标本中，采取RT-PCR检测 TMPRSS2-ERG融合基因，虽然特异性可达93%，但敏感性仅为32% 42%。FISH为分子生物学(探针)与细胞遗传学(染色体)相结合，检测染色体异常的新技术，开辟了间期细胞遗传学研究的新领域。FISH作为一种快速、准确、直观的分子遗传学技术广泛应用于膀胱癌、乳腺癌、血液系统疾病诊断及预后判断中，但对于应用FISH技术进行前列腺癌相关融合基因的检测，国内外尚不多见。
发明内容
本发明的主要目的就是针对以上存在的问题与不足，提供一种前列腺癌相关融合基因Fish检测方法和相关检测探针及试剂盒，该检测方法设计巧妙，操作简单，特异性和敏感性均能大幅提高，可以快速、准确、直观检测出前列腺癌相关融合基因，检测结果准确CN 102533945 A
可靠，从而可作为医师诊断前列腺癌的参考依据，适于大规模推广应用。为了实现上述目的，在本发明的第一方面，提供了一种前列腺癌相关融合基因 Fish检测方法，其特点是，对前列腺癌组织石蜡切片进行常规预处理，然后采用双色融合探针进行原位杂交，根据检测到的荧光信号判断是否存在所述前列腺癌相关融合基因。较佳地，所述双色融合探针是TMPRSS2/ERG双色融合探针、TMPRSS2/ETV1双色融合探针或TMPRSS2/ETV4双色融合探针，其中TMPRSS2为SEQ ID NO 1所示的核苷酸序列， ERG为SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列，ETVl为SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列，ETV4为 SEQ ID NO :4所示的核苷酸序列。更佳地，所述TMPRSS2采用Cy3标记，所述ERG、所述ETVl和所述ETV4均采用Cy2 标记。在本发明的第二方面，提供了一种用于上述的前列腺癌相关融合基因Fish检测方法的双色融合探针，其特点是，所述双色融合探针是TMPRSS2/ERG双色融合探针、 TMPRSS2/ETV1双色融合探针或TMPRSS2/ETV4双色融合探针，其中TMPRSS2为SEQ ID NO 1 所示的核苷酸序列，ERG为SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列，ETVl为SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列，ETV4为SEQ ID NO 4所示的核苷酸序列。较佳地，所述TMPRSS2采用Cy3标记，所述ERG、所述ETVl和所述ETV4均采用Cy2 标记。在本发明的第三方面，提供了一种前列腺癌相关融合基因Fish检测试剂盒，其特点是，包括双色融合探针容器，所述双色融合探针容器内具有TMPRSS2/ERG双色融合探针、 TMPRSS2/ETV1双色融合探针或TMPRSS2/ETV4双色融合探针，其中TMPRSS2为SEQ ID NO 1 所示的核苷酸序列，ERG为SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列，ETVl为SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列，ETV4为SEQ ID NO 4所示的核苷酸序列。较佳地，所述I1PRSS2采用Cy3标记，所述ERG、所述ETVl和所述ETV4均采用Cy2标记。本发明的有益效果在于本发明的前列腺癌相关融合基因Fish检测方法通过对前列腺癌组织石蜡切片进行常规预处理，然后采用双色融合探针进行原位杂交，根据检测到的荧光信号判断是否存在所述前列腺癌相关融合基因，设计巧妙，操作简单，特异性和敏感性均能大幅提高，可以快速、准确、直观检测出前列腺癌相关融合基因，检测结果准确可靠，从而可作为医师诊断前列腺癌的参考依据，适于大规模推广应用。
具体实施例方式为更好的理解本发明的内容，下面结合具体实施例作进一步说明。下列具体实施例采用的试剂、仪器、耗材和步骤具体如下1 试剂1.1DNA 探针TMPRSS2/ERG, TMPRSS2/ETV1, TMPRSS2/ETV4 双色融合探针。TMRPSS2 (Homo sapiens transmembrane protease, serine 2)用 Cy3 标记，产生红色信号。ERG(Homo sapiens v_ets erythroblastosis virus E26 oncogene homolog(avian) (ERG), transcript variant 2),ETVl (Homo sapiens ets variant 1 (ETVl)),ETV4(Homo sapiens ets variant gene 4 (EIAenhancer binding protein, ElAF) (ETV4))用 Cy2 标记，产生绿色信号。在_20°C下避光保存。溶解在含有硫酸葡聚糖，去离子甲酰胺和SSC的缓冲液中。
权利要求
1.一种前列腺癌相关融合基因FiSh检测方法，其特征在于，对前列腺癌组织石蜡切片进行常规预处理，然后采用双色融合探针进行原位杂交，根据检测到的荧光信号判断是否存在所述前列腺癌相关融合基因。
2.根据权利要求1所述的前列腺癌相关融合基因Fish检测方法，其特征在于，所述双色融合探针是TMPRSS2/ERG双色融合探针、TMPRSS2/ETV1双色融合探针或TMPRSS2/ETV4双色融合探针，其中TMPRSS2为SEQ ID NO :1所示的核苷酸序列，ERG为SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列，ETVl为SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列，ETV4为SEQ ID NO 4所示的核苷酸序列。
3.根据权利要求2所述的前列腺癌相关融合基因Fish检测方法，其特征在于，所述 TMPRSS2采用Cy3标记，所述ERG、所述ETVl和所述ETV4均采用Cy2标记。
4.一种用于根据权利要求1所述的前列腺癌相关融合基因Fish检测方法的双色融合探针，其特征在于，所述双色融合探针是TMPRSS2/ERG双色融合探针、TMPRSS2/ETV1双色融合探针或TMPRSS2/ETV4双色融合探针，其中TMPRSS2为SEQ ID NO 1所示的核苷酸序列， ERG为SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列，ETVl为SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列，ETV4为 SEQ ID NO :4所示的核苷酸序列。
5.根据权利要求4所述的双色融合探针，其特征在于，所述TMPRSS2采用Cy3标记，所述ERG、所述ETVl和所述ETV4均采用Cy2标记。
6.一种前列腺癌相关融合基因Fish检测试剂盒，其特征在于，包括双色融合探针容器，所述双色融合探针容器内具有TMPRSS2/ERG双色融合探针、TMPRSS2/ETV1双色融合探针或TMPRSS2/ETV4双色融合探针，其中TMPRSS2为SEQ ID NO 1所示的核苷酸序列，ERG 为SEQ ID NO 2所示的核苷酸序列，ETVl为SEQ ID NO 3所示的核苷酸序列，ETV4为SEQ ID NO :4所示的核苷酸序列。
7.根据权利要求6所述的双色融合探针，其特征在于，所述TMPRSS2采用Cy3标记，所述ERG、所述ETVl和所述ETV4均采用Cy2标记。
全文摘要
本发明涉及一种前列腺癌相关融合基因Fish检测方法，对前列腺癌组织石蜡切片进行常规预处理，然后采用双色融合探针进行原位杂交，根据检测到的荧光信号判断是否存在前列腺癌相关融合基因。较佳地，双色融合探针是TMPRSS2/ERG双色融合探针、TMPRSS2/ETV1双色融合探针或TMPRSS2/ETV4双色融合探针，其中TMPRSS2、ERG、ETV1和ETV4分别为为SEQ ID NO1-4所示的核苷酸序列。还涉及相关的双色融合探针及试剂盒。本发明的前列腺癌相关融合基因Fish检测方法设计巧妙，操作简单，特异性和敏感性均能大幅提高，可以快速、准确、直观检测出前列腺癌相关融合基因，检测结果准确可靠，从而可作为医师诊断前列腺癌的参考依据，适于大规模推广应用。
文档编号C12Q1/68GK102533945SQ20101058605
公开日2012年7月4日 申请日期2010年12月13日 优先权日2010年12月13日
发明者白小萍, 谭睿, 赵翊均 申请人:江苏百帝生物科技有限公司