一种水产副产品源Ⅰ型胶原抗氧化肽的制备工艺的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种水产副产品源Ⅰ型胶原抗氧化肽的制备工艺，它包括如下步骤：（1）酸碱脱脂脱灰技术及低温粉碎技术预处理水产副产品；（2）低温酶提取技术提取Ⅰ型胶原蛋白，提取产率高于15％；（3）低温离心技术去除固体杂质；（4）低温盐析技术协同低温离心技术分离纯化Ⅰ型胶原蛋白；（5）耐酸型卷式纳滤膜分离技术脱盐；（6）酶催化技术制备Ⅰ型胶原抗氧化肽溶液；（7）喷雾干燥技术干燥Ⅰ型胶原抗氧化肽溶液，得到蛋白质含量超过95％的Ⅰ型胶原抗氧化肽粉成品。所制得水产副产品源Ⅰ型胶原抗氧化肽提取产率高、抗氧化活性高、蛋白质含量高、生物安全性高、生产成本低，充分利用水产品副产品，变废为宝，适合大规模工业化生产。
【专利说明】一种水产副产品源I型胶原抗氧化肽的制备工艺
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种水产副产品源I型胶原抗氧化肽的制备工艺，属于生物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]自由基严重威胁着人类的健康，现代研究表明:白内障、心血管疾病、动脉硬化、糖尿病、老年痴呆症及衰老等老龄病均被公认与自由基应激损伤密切相关。人工合成抗氧化剂的疗效得到医学界的普遍认可，但其毒副作用使其使用受到限制，高安全性的水产副产品源胶原抗氧化肽为研究的热点，可广泛应用于食品、保健品和化妆品等领域，具有巨大的市场前景。
[0003]水产副产品源胶原抗氧化肽上世纪90年代在国外得到广泛的研究，进入21世纪以后，国内关于水产副产品源胶原抗氧化肽的研究也取得丰硕的成果，部分产品获得国家保健品批号。水产副产品除含有I型胶原蛋白外还含有π、ν、χι不同类型的胶原蛋白，单一型胶原规模化制备技术成为制约单一型胶原活性肽产业化研发的瓶颈问题，目前未见有涉及利用水产副产品生产I型胶原抗氧化肽的相关专利，现有的市面上的胶原抗氧化肽产品都为多种类型胶原肽混合物产品，未见I型胶原抗氧化肽的产品上市。为了提高胶原抗氧化肽产品的附加值，急需开发一种水产副产品源I型胶原抗氧化肽的制备工艺。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是针对目前水产副产品源胶原抗氧化肽存在的生产成本高、提取产率低、产品蛋白质含量低、生物活性低、安全性低、附加值低等问题，提供一种工艺简单安全、成本低、产品蛋白质含量高、生物活性高，且仅含有单一型胶原蛋白肽(I型)的水产副产品源I型胶原抗氧化肽的制备工艺，以充分利用水产副产品，变废为宝，开发高附加值的I型胶原抗氧化肽。
[0005]为解决上述技术问题，本发明的技术解决方案是:
一种水产副产品源I型胶原抗氧化肽的制备工艺，包括如下步骤:
1、一种水产副产品源I型胶原抗氧化肽的制备工艺，其特征在于:它包括如下步骤:
(1)水产副产品的预处理
将水产副产品投入反应釜中，加入质量百分比浓度为1-5%的碱溶液搅拌除杂，搅拌后用水洗净；加入体积百分比浓度为0.5-5%的酸溶液搅拌除杂，脱脂脱灰去除水产副产物的脂肪和无机盐杂质；除杂后的水产副产物投入粉碎机中粉碎；
(2)I型胶原蛋白的提取
将粉碎后的水产副产品置于反应釜中，加入水和相当于水产副产品投料重量0.01 -
0.1%的胃蛋白酶进行酶法提取，反应温度为1-4 °C，反应pH值控制在1-3，反应时间为8-12h，得到I型胶原蛋白粗提物，提取产率高于15% ；
(3)I型胶原蛋白的固液分离利用离心机分离技术分离I型胶原蛋白粗提物，除掉固体杂质；
(4)I型胶原蛋白的盐析
步骤(3)所得清液加入等体积的质量百分比浓度为2-20%的无机盐溶液盐析；利用离心机分离技术分离盐析溶液，得到I型胶原蛋白沉淀物；
(5)I型胶原蛋白的脱盐
配置0.5M的醋酸溶液溶解I型胶原蛋白沉淀物，利用膜分离技术去除I型胶原蛋白溶液的无机盐，得到高纯I型胶原蛋白溶液；
(6)I型胶原抗氧化肽的制备
将步骤(5)所述的高纯I型胶原蛋白溶液置于反应釜中，添加相当于水产副产品投料重量0.1 — 1%的蛋白酶，进行酶解反应，反应温度为50-55°C，酶解反应pH值控制在7_8，反应2-6小时，酶解反应结束，升温到85°C灭酶，得到I型胶原抗氧化肽溶液；
(7)I型胶原抗氧化肽的干燥
利用喷雾干燥技术干燥I型胶原抗氧化肽溶液，得到蛋白质含量超过95%的I型胶原抗氧化肽粉成品。
[0006]所述的步骤(I)预处理使用的碱为碳酸氢钠或氢氧化钠，所使用的酸为硫酸或盐酸或醋酸。
[0007]所述的步骤(I)粉碎温度为1-4°C。
[0008]所述的步骤(2)及步骤(6)控制反应pH值所用的碱为碳酸氢钠或氢氧化钠,所用的酸为硫酸或盐酸或醋酸。
[0009]所述的步骤(3)和步骤(4)中所用的离心机为转速为1000 — 4500rpm/min,离心
温度为1-4 °C。
[0010]所述的步骤(4)中利用无机盐盐析分离纯化，所使用的无机盐为硫酸铵或氯化钠，盐析温度为1_4°C。
[0011]所述的步骤(5)中膜分离技术所使用的膜设备为耐酸型卷式纳滤膜设备，所使用的膜截留平均相对分子质量为IkD - lOOkD。
[0012]所述的步骤(5)中膜分离技术除盐，往胶原蛋白溶液加入0.1M醋酸溶液，并控制胶原蛋白溶液温度为1-4 °C。
[0013]所述的步骤(6)中所用的蛋白酶为木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、鱼鳞鱼皮胶原蛋白水解专用酶、海产品水解专用蛋白酶和风味蛋白酶中的任意两种或者三种组合。
[0014]所述的步骤(7)中喷雾干燥的出风温度为65_85°C、进风温度为140_180°C。
[0015]采用上述方案后，本发明与已有技术相比具有以下优点:
1、本发明利用低温粉碎预处理技术和低温酶提取技术制备I型胶原蛋白，提取产率高于15%，解决I型胶原蛋白传统提取工艺存在得率低的瓶颈问题，利于产业化放大生产。
[0016]2、本发明综合利用低温离心分离技术、低温盐析分离技术和耐酸型卷式膜分离技术分离纯化I型胶原蛋白，改变传统的分离工艺存在的分离效率低、设备使用寿命短，生产成本过高等问题，简化工艺，缩短时间，节约成本，分离效率高，利于规模化放大生产。
[0017]3、本发明利用酶工程技术制备I型胶原抗氧化肽肽，条件温和，质量可控，得到蛋白质含量超过95%的水产副产品源I型胶原抗氧化肽。[0018]总之，本发明采用上述工艺后，所制得水产副产品源I型胶原抗氧化肽成本低、抗氧化活性高、蛋白质含量高，并充分利用了水产副产品，变废为宝，适合大规模工业化生产。
【专利附图】
【附图说明】
[0019]图1是本发明的工艺流程图。
【具体实施方式】
[0020]下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步描述。
[0021]本发明所揭示的是一种水产副产品源I型胶原抗氧化肽的制备工，如图1所示，本发明包括如下步骤:水产副产品——酸碱脱脂脱灰技术去除脂肪和无机盐——低温粉碎技术粉碎——低温酶提取技术提取I型胶原蛋白一低温离心技术去除固体杂质一低温盐析技术协同低温离心技术分离纯化I型胶原蛋白一耐酸型卷式纳滤膜分离技术脱盐——酶催化技术制备I型胶原抗氧化肽溶液决速干燥I型胶原抗氧化肽。
[0022]以下通过具体实施例说明。
[0023]实施例一:
1、取鱼鳞50kg投入反应釜中，加入质量百分比浓度为1%的氢氧化钠溶液，搅拌2小时，用水洗净；再加入体积百分比浓度为4%的硫酸溶液，搅拌2小时，用水洗净，脱脂脱灰除掉鱼鳞杂质。将脱脂脱灰后鱼鳞投入粉碎机中，加入氮气调节温度，并控制粉碎过程温度为 1-4。。。
[0024]2、将粉碎后的鱼鳞置于反应釜中，加入250kg的水，加入0.005kg的胃蛋白酶，调节pH值并控制反应体系pH为 I,调整pH值所用的碱为碳酸氢钠或氢氧化钠，所使用的酸为硫酸或盐酸或醋酸，反应温度为1°C，反应12小时，结束反应，得到I型胶原蛋白，提取产率为 16%。
[0025]3、利用转速为1000rpm/min的离心机分离上述的I型胶原蛋白溶液，离心温度控制在1-4°C，除掉颗粒状杂质。
[0026]4、在1-4°C条件下，将所得清液加入等体积的质量百分比浓度为2%硫酸铵或氯化钠溶液。利用转速为1000rpm/min的离心机分离该溶液，离心分离温度控制在1_4°C，得到I型胶原蛋白沉淀物。
[0027]5、配置0.5M的醋酸溶液溶解I型胶原蛋白沉淀物，得到I型胶原蛋白溶液。利用截留相对分子质量为5kD的耐酸型卷式纳滤膜设备分离纯化该胶原蛋白溶液，膜分离纯化过程中，往胶原蛋白溶液加入0.1M醋酸溶液，控制胶原蛋白温度为1_4°C，去除无机盐，得到高纯I型胶原蛋白溶液。
[0028]6、将高纯I型胶原蛋白溶液装入反应釜中，加入0.025kg木瓜蛋白酶和0.025kg菠萝蛋白酶，调节pH值并控制反应体系pH为7,调整pH值所用的碱为碳酸氢钠或氢氧化钠，所使用的酸为硫酸或盐酸或醋酸，反应温度为55°C，反应3小时，反应结束后升温到85°C保温灭酶，得到I型胶原抗氧化肽溶液。
[0029]7、利用喷雾干燥机干燥I型胶原抗氧化肽溶液，出风温度为85°C、进风温度为180°C，喷雾干燥结束，得到I型胶原抗氧化肽粉成品。粉成品的蛋白质含量为97%，清除超氧阴离子自由基的活性为73%。[0030] 实施例二:
1、取鱼鳞IOOkg投入反应釜中，加入质量百分比浓度为3%的碳酸氢钠溶液，搅拌4小时，用水洗净；再加入体积百分比浓度为5%的醋酸溶液，搅拌6小时，用水洗净，脱脂脱灰除掉鱼鳞杂质。将脱脂脱灰后鱼鳞投入粉碎机中，加入氮气调节温度，并控制粉碎过程温度为 1-4。。。
[0031]2、将粉碎后的鱼鳞置于反应釜中，加入500kg的水，加入0.1kg的胃蛋白酶，调节pH值并控制反应体系pH为3,调整pH值所用的碱为碳酸氢钠或氢氧化钠，所使用的酸为硫酸或盐酸或醋酸，反应温度为4°C，反应10小时，结束反应，得到I型胶原蛋白，提取产率为18%。
[0032]3、利用转速为3000rpm/min的离心机分离上述的I型胶原蛋白溶液，离心温度控制在1-4°C，除掉颗粒状杂质。
[0033]4、在1-4°C条件下，将所得清液加入等体积的质量百分比浓度为10%硫酸铵或氯化钠溶液。利用转速为3000rpm/min的离心机分离该溶液，离心分离温度控制在1_4°C，得到I型胶原蛋白沉淀物。
[0034]5、配置0.5M的醋酸溶液溶解I型胶原蛋白沉淀物，得到I型胶原蛋白溶液。利用截留相对分子质量为IOOkD的耐酸型卷式纳滤膜设备分离纯化该蛋白质溶液，膜分离纯化过程中，往胶原蛋白溶液加入0.1M醋酸溶液，控制胶原蛋白温度为1_4°C，去除无机盐，得到高纯I型胶原蛋白溶液。
[0035]6、将高纯I型胶原蛋白溶液装入反应釜中，加入0.225kg中性蛋白酶和0.225kg鱼鳞鱼皮胶原蛋白水解专用酶和0.05kg风味蛋白酶，调节pH值并控制反应体系pH为7，调整pH值所用的碱为碳酸氢钠或氢氧化钠,所使用的酸为硫酸或盐酸或醋酸,反应温度为50°C，反应4小时，反应结束后升温到85°C保温灭酶，得到I型胶原抗氧化肽溶液。
[0036]7、利用喷雾干燥机干燥I型胶原抗氧化肽溶液，出风温度为80°C、进风温度为160°C，喷雾干燥结束，得到I型胶原抗氧化肽粉成品。粉成品的蛋白质含量为96%，清除超氧阴离子自由基的活性为85%。
[0037]实施例三:
1、取鱼鳞IOkg投入反应釜中，加入质量百分比浓度为3%的碳酸氢钠溶液，搅拌4小时，用水洗净；再加入体积百分比浓度为I %的盐酸溶液，搅拌4小时，用水洗净，脱脂脱灰除掉鱼鳞杂质。将脱脂脱灰后鱼鳞投入粉碎机中，加入氮气调节温度，并控制粉碎过程温度为 1-4。。。
[0038]2、将粉碎后的鱼鳞置于反应釜中，加入50kg的水，加入0.0lkg的胃蛋白酶，调节pH值并控制反应体系pH为3,调整pH值所用的碱为碳酸氢钠或氢氧化钠，所使用的酸为硫酸或盐酸或醋酸，反应温度为3°C，反应8小时，结束反应，得到I型胶原蛋白，提取产率为17%。
[0039]3、利用转速为4000rpm/min的离心机分离上述的I型胶原蛋白溶液，离心温度控制在1-4°C，除掉颗粒状杂质。
[0040]4、在1_4°C条件下，将所得清液加入等体积的质量百分比浓度为20%硫酸铵或氯化钠溶液。利用转速为4000rpm/min的离心机分离该溶液，离心分离温度控制在1_4°C，得到I型胶原蛋白沉淀物。[0041]5、配置0.5M的醋酸溶液溶解I型胶原蛋白沉淀物，得到I型胶原蛋白溶液。利用截留相对分子质量为50kD的耐酸型卷式纳滤膜设备分离纯化该蛋白质溶液，膜分离纯化过程中，往胶原蛋白溶液加入0.1M醋酸溶液，控制胶原蛋白温度为1_4°C，去除无机盐，得到高纯I型胶原蛋白溶液。
[0042]6、将高纯I型胶原蛋白溶液装入反应釜中，加入0.045kg木瓜蛋白酶和0.045kg海产品水解专用蛋白酶和0.0Ikg风味蛋白酶，调节pH值并控制反应体系pH为7.5，调整pH值所用的碱为碳酸氢钠或氢氧化钠，所使用的酸为硫酸或盐酸或醋酸，反应温度为55°C,反应2小时，反应结束后升温到85°C保温灭酶，得到I型胶原抗氧化肽溶液。
[0043]7、利用喷雾干燥机干燥I型胶原抗氧化肽溶液，出风温度为65°C、进风温度为140°C，喷雾干燥结束，得到I型胶原抗氧化肽粉成品。粉成品的蛋白质含量为97%，清除超氧阴离子自由基的活性为81%。
[0044]实施例四:
1、取鱼鳞80kg投入反应釜中，加入质量百分比浓度为1%的氢氧化钠溶液，搅拌3小时，用水洗净；再加入体积百分比浓度为3%的盐酸溶液，搅拌4小时，用水洗净，脱脂脱灰除掉鱼鳞杂质。将脱脂脱灰后鱼鳞投入粉碎机中，加入氮气调节温度，并控制粉碎过程温度为 1-4。。。
[0045]2、将粉碎后的鱼鳞置于反应釜中，加入400kg的水，加入0.04kg的胃蛋白酶，调节pH值并控制反应体系pH为2,调整pH值所用的碱为碳酸氢钠或氢氧化钠，所使用的酸为硫酸或盐酸或醋酸，反应温度为2V，反应10小时，结束反应，得到I型胶原蛋白，提取产率为16%。
[0046]3、利用转速为4500rpm/min的离心机分离上述的I型胶原蛋白溶液，离心温度控制在1-4°C，除掉颗粒状杂质。
[0047]4、在1-4°C条件下，将所得清液加入等体积的质量百分比浓度为6%硫酸铵或氯化钠溶液。利用转速为4500rpm/min的离心机分离该溶液，离心分离温度控制在1_4°C，得到I型胶原蛋白沉淀物。
[0048]5、配置0.5M的醋酸溶液溶解I型胶原蛋白沉淀物，得到I型胶原蛋白溶液。利用截留相对分子质量为IkD的耐酸型卷式纳滤膜设备分离纯化该蛋白质溶液，膜分离纯化过程中，往胶原蛋白溶液加入0.1M醋酸溶液，控制胶原蛋白温度为1-4°C，去除无机盐，得到高纯I型胶原蛋白溶液。
[0049]6、将高纯I型胶原蛋白溶液装入反应釜中，加入0.24kg中性蛋白酶和0.24kg木瓜蛋白酶和0.24kg菠萝蛋白酶，调节pH值并控制反应体系pH为7，调整pH值所用的碱为碳酸氢钠或氢氧化钠，所使用的酸为硫酸或盐酸或醋酸，反应温度为55°C,反应6小时,反应结束后升温到85°C保温灭酶，得到I型胶原抗氧化肽溶液。
[0050]7、利用喷雾干燥机干燥I型胶原抗氧化肽溶液，出风温度为70°C、进风温度为140°C，喷雾干燥结束，得到I型胶原抗氧化肽粉成品。粉成品的蛋白质含量为96%，清除超氧阴离子自由基的活性为75%。
[0051]实施例五:
1、取鱼皮50kg投入反应釜中，加入质量百分比浓度为5%的碳酸氢钠溶液，搅拌4小时，用水洗净；再加入体积百分比浓度为I %的硫酸溶液，搅拌4小时，用水洗净，脱脂脱灰除掉鱼皮杂质。将脱脂脱灰后鱼皮投入粉碎机中，加入氮气调节温度，并控制粉碎过程温度为 1-4℃
[0052]2、将粉碎后的鱼皮置于反应釜中，加入250kg的水，加入0.005kg的胃蛋白酶，调节pH值并控制反应体系pH为3,调整pH值所用的碱为碳酸氢钠或氢氧化钠,所使用的酸为硫酸或盐酸或醋酸，反应温度为2V，反应12小时，结束反应，得到I型胶原蛋白，提取产率为 18%。
[0053]3、利用转速为3000rpm/min的离心机分离上述的I型胶原蛋白溶液，离心温度控制在1-4°C，除掉颗粒状杂质。
[0054]4、在1-4°C条件下，将所得清液加入等体积的质量百分比浓度为6%硫酸铵或氯化钠溶液。利用转速为3000rpm/min的离心机分离该溶液，离心分离温度控制在1_4°C，得到I型胶原蛋白沉淀物。
[0055]5、配置0.5M的醋酸溶液溶解I型胶原蛋白沉淀物，得到I型胶原蛋白溶液。利用截留相对分子质量为8kD的耐酸型卷式纳滤膜设备分离纯化该蛋白质溶液，膜分离纯化过程中，往胶原蛋白溶液加入0.1M醋酸溶液，控制胶原蛋白温度为1-4°C，去除无机盐，得到高纯I型胶原蛋白溶液。
[0056]6、将高纯I型胶原蛋白溶液装入反应釜中，加入0.225kg菠萝蛋白酶和0.225kg海产品水解专用蛋白酶和0.05kg风味蛋白酶，调节pH值并控制反应体系pH为7.5，调整pH值所用的碱为碳酸氢钠或氢氧化钠，所使用的酸为硫酸或盐酸或醋酸，反应温度为50°C,反应2小时，反应结束后升温到85°C保温灭酶，得到I型胶原抗氧化肽溶液。
[0057]7、利用喷雾干燥机干燥I型胶原抗氧化肽溶液，出风温度为80°C、进风温度为160°C，喷雾干燥结束，得到I型胶原抗氧化肽粉成品。粉成品的蛋白质含量为98%，清除超氧阴离子自由基的活性为82%。
[0058]实施例六:
1、取鱼皮IOOkg投入反应釜中，加入质量百分比浓度为3%的氢氧化钠溶液，搅拌4小时，用水洗净；再加入体积百分比浓度为0.5%的硫酸溶液，搅拌3小时，用水洗净，脱脂脱灰除掉鱼皮杂质。将脱脂脱灰后鱼皮投入粉碎机中，加入氮气调节温度，并控制粉碎过程温度为1-4 °C。
[0059]2、将粉碎后的鱼皮置于反应釜中，加入500kg的水，加入0.08kg的胃蛋白酶，调节pH值并控制反应体系pH为3,调整pH值所用的碱为碳酸氢钠或氢氧化钠，所使用的酸为硫酸或盐酸或醋酸，反应温度为3°C，反应8小时，结束反应，得到I型胶原蛋白，提取产率为17%。
[0060]3、利用转速为2000rpm/min的离心机分离上述的I型胶原蛋白溶液，离心温度控制在1-4°C，除掉颗粒状杂质。
[0061]4、在1-4°C条件下，将所得清液加入等体积的质量百分比浓度为10%硫酸铵或氯化钠溶液。利用转速为2000rpm/min的离心机分离该溶液，离心分离温度控制在1_4°C，得到I型胶原蛋白沉淀物。
[0062]5、配置0.5M的醋酸溶液溶解I型胶原蛋白沉淀物，得到I型胶原蛋白溶液。利用截留相对分子质量为IOkD的耐酸型卷式纳滤膜设备分离纯化该蛋白质溶液，膜分离纯化过程中，往胶原蛋白溶液加入0.1M醋酸溶液，控制胶原蛋白温度为1_4°C，去除无机盐，得到高纯I型胶原蛋白溶液。
[0063]6、将高纯I型胶原蛋白溶液装入反应釜中，加入0.45kg菠萝蛋白酶和0.45kg胰蛋白酶和0.1kg风味蛋白酶，调节pH值并控制反应体系pH为8，调整pH值所用的碱为碳酸氢钠或氢氧化钠，所使用的酸为硫酸或盐酸或醋酸，反应温度为50°C,反应3小时,反应结束后升温到85°C保温灭酶，得到I型胶原抗氧化肽溶液。
[0064]7、利用喷雾干燥机干燥I型胶原抗氧化肽溶液，出风温度为75°C、进风温度为170°C，喷雾干燥结束，得到I型胶原抗氧化肽粉成品。粉成品的蛋白质含量为97%，清除超氧阴离子自由基的活性为71%。
[0065]实施例七:
1、取鱼皮IOkg投入反应釜中，加入质量百分比浓度为5%的氢氧化钠溶液，搅拌6小时，用水洗净；再加入体积百分比浓度为0.8%的盐酸溶液，搅拌3小时，用水洗净，脱脂脱灰除掉鱼皮杂质。将脱脂脱灰后鱼皮投入粉碎机中，加入氮气调节温度，并控制粉碎过程温度为1-4 °C。
[0066]2、将粉碎后的鱼皮置于反应釜中，加入50kg的水，加入0.0lkg的胃蛋白酶，调节pH值并控制反应体系pH为2,调整pH值所用的碱为碳酸氢钠或氢氧化钠，所使用的酸为硫酸或盐酸或醋酸，反应温度为2V，反应10小时，结束反应，得到I型胶原蛋白，提取产率为17%。
[0067]3、利用转速为4500rpm/min的离心机分离上述的I型胶原蛋白溶液，离心温度控制在1-4°C，除掉颗粒状杂质。
[0068]4、在1-4°C条件下，将所得清液加入等体积的质量百分比浓度为10%硫酸铵或氯化钠溶液。利用转速为4500rpm/min的离心机分离该溶液，离心分离温度控制在1_4°C，得到I型胶原蛋白沉淀物。
[0069]5、配置0.5M的醋酸溶液溶解I型胶原蛋白沉淀物，得到I型胶原蛋白溶液。利用截留相对分子质量为SOkD的耐酸型卷式纳滤膜设备分离纯化该蛋白质溶液，膜分离纯化过程中，往胶原蛋白溶液加入0.1M醋酸溶液，控制胶原蛋白温度为1_4°C，去除无机盐，得到高纯I型胶原蛋白溶液。
[0070]6、将高纯I型胶原蛋白溶液装入反应釜中，加入0.03kg木瓜蛋白酶和0.03kg鱼鳞鱼皮胶原蛋白水解专用酶和0.0lkg风味蛋白酶，调节pH值并控制反应体系pH为7，调整pH值所用的碱为碳酸氢钠或氢氧化钠，所使用的酸为硫酸或盐酸或醋酸，反应温度为55°C，反应3小时，反应结束后升温到85°C保温灭酶，得到I型胶原抗氧化肽溶液。
[0071]7、利用喷雾干燥机干燥I型胶原抗氧化肽溶液，出风温度为75°C、进风温度为140°C，喷雾干燥结束，得到I型胶原抗氧化肽粉成品。粉成品的蛋白质含量为98%，清除超氧阴离子自由基的活性为86%。
[0072]实施例八:
1、取鱼皮80kg投入反应釜中，加入质量百分比浓度为4%的氢氧化钠溶液，搅拌8小时，用水洗净；再加入体积百分比浓度为I %的盐酸溶液，搅拌2小时，用水洗净，脱脂脱灰除掉鱼皮杂质。将脱脂脱灰后鱼皮投入粉碎机中，加入氮气调节温度，并控制粉碎过程温度为 1-4。。。
[0073]2、将粉碎后的鱼皮置于反应釜中，加入400kg的水，加入0.04kg的胃蛋白酶，调节pH值并控制反应体系pH为2,调整pH值所用的碱为碳酸氢钠或氢氧化钠，所使用的酸为硫酸或盐酸或醋酸，反应温度为3V，反应12小时，结束反应，得到I型胶原蛋白，提取产率为18%。
[0074]3、利用转速为4000rpm/min的离心机分离上述的I型胶原蛋白溶液，离心温度控制在1-4°C，除掉颗粒状杂质。
[0075]4、在1-4°C条件下，将所得清液加入等体积的质量百分比浓度为16%硫酸铵或氯化钠溶液。利用转速为4000rpm/min的离心机分离该溶液，离心分离温度控制在1_4°C，得到I型胶原蛋白沉淀物。
[0076]5、配置0.5M的醋酸溶液溶解I型胶原蛋白沉淀物，得到I型胶原蛋白溶液。利用截留相对分子质量为IOOkD的耐酸型卷式纳滤膜设备分离纯化该蛋白质溶液，膜分离纯化过程中，往胶原蛋白溶液加入0.1M醋酸溶液，控制胶原蛋白温度为1_4°C，去除无机盐，得到高纯I型胶原蛋白溶液。
[0077]6、将高纯I型胶原蛋白溶液装入反应釜中，加入0.32kg胰蛋白酶和0.32kg糜蛋白酶，调节pH值并控制反应体系pH为8,调整pH值所用的碱为碳酸氢钠或氢氧化钠,所使用的酸为硫酸或盐酸或醋酸，反应温度为50°C，反应5小时，反应结束后升温到85°C保温灭酶，得到I型胶原抗氧化肽溶液。
[0078]7、利用喷雾干燥机干燥I型胶原抗氧化肽溶液，出风温度为70°C、进风温度为140°C，喷雾干燥结束，得到I型胶原抗氧化肽粉成品。粉成品的蛋白质含量为96%，清除超氧阴离子自由基的活性 为65%。
【权利要求】
1.一种水产副产品源I型胶原抗氧化肽的制备工艺，其特征在于:它包括如下步骤: (1)水产副产品的预处理 用酸碱预处理鱼皮，除去脂肪、无机盐和其它杂质；除杂后的水产副产物投入粉碎机中粉碎； (2)I型胶原蛋白的提取 将粉碎后的水产副产品置于反应釜中，加入水和相当于水产副产品投料重量0.0l -0.1%的胃蛋白酶进行酶法提取，反应温度为1-4°C，反应pH值控制在1-3，反应时间为8-12h，得到I型胶原蛋白粗提物，提取产率高于15% ； (3)I型胶原蛋白的固液分离 利用离心机分离技术分离I型胶原蛋白粗提物，除掉固体杂质； (4)I型胶原蛋白的盐析 步骤(3)所得清液加入等体积的质量百分比浓度为2-20%的无机盐溶液盐析；利用离心机分离技术分离盐析溶液，得到I型胶原蛋白沉淀物； (5)I型胶原蛋白的脱盐 配置0.5M的醋酸溶液溶解I型胶原蛋白沉淀物，利用膜分离技术去除I型胶原蛋白溶液的无机盐，得到高纯I型胶原蛋白溶液； (6)I型胶原抗氧化.肽的制备 将步骤(5)所述的高纯I型胶原蛋白溶液置于反应釜中，添加相当于水产副产品投料重量0.1 - 1%的蛋白酶，进行酶解反应，反应温度为50-55°C，酶解反应pH值控制在7_8，反应2-6小时，酶解反应结束，升温到85°C灭酶，得到I型胶原抗氧化肽溶液； (7)I型胶原抗氧化肽的干燥 利用喷雾干燥技术干燥I型胶原抗氧化肽溶液，得到蛋白质含量超过95%的I型胶原抗氧化肽粉成品。
2.根据权利要求1所述的一种水产副产品源I型胶原抗氧化肽的制备工艺，其特征在于:所述步骤(I)中酸碱除杂的具体过程为:将水产副产品投入反应釜中，加入质量百分比浓度为1-5%的碱溶液搅拌除杂，搅拌后用水洗净；加入体积百分比浓度为0.5-5%的酸溶液搅拌除杂，脱脂脱灰去除水产副产物的脂肪和无机盐杂质。
3.根据权利要求1或2所述的一种水产副产品源I型胶原抗氧化肽的制备工艺，其特征在于:所述的步骤(I)预处理使用的碱为碳酸氢钠或氢氧化钠，所使用的酸为硫酸或盐酸或醋酸。
4.根据权利要求1或2所述的一种水产副产品源I型胶原抗氧化肽的制备工艺，其特征在于:所述的步骤(I)粉碎温度为1_4°C。
5.根据权利要求1或2所述的一种水产副产品源I型胶原抗氧化肽的制备工艺，其特征在于:所述的步骤(2)及步骤(6)控制反应pH值所用的碱为碳酸氢钠或氢氧化钠，所用的酸为硫酸或盐酸或醋酸。
6.根据权利要求1或2所述的一种水产副产品源I型胶原抗氧化肽的制备工艺，其特征在于:所述的步骤(3)和步骤(4)中所用的离心机为转速为1000 — 4500rpm/min,离心温度为1-4 °C。
7.根据权利要求1或2所述的一种水产副产品源I型胶原抗氧化肽的制备工艺，其特征在于:所述的步骤(4)中利用无机盐盐析分离纯化，所使用的无机盐为硫酸铵或氯化钠，盐析温度为1_4°C。
8.根据权利要求1或2所述的一种水产副产品源I型胶原抗氧化肽的制备工艺，其特征在于:所述的步骤(5)中膜分离技术所使用的膜设备为耐酸型卷式纳滤膜设备，所使用的膜截留平均相对分子质量为IkD - lOOkD。
9.根据权利要求1或2所述的一种水产副产品源I型胶原抗氧化肽的制备工艺，其特征在于:所述的步骤(5)中膜分离技术除盐过程中，往胶原蛋白溶液加入0.1M醋酸溶液，并控制胶原蛋白溶液温度为1-4 °C。
10.根据权利要求1或2所述的一种水产副产品源I型胶原抗氧化肽的制备工艺，其特征在于:所述的步骤(6)中所用的蛋白酶为木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、鱼鳞鱼皮胶原蛋白水解专用酶、海产品水解专用蛋白酶和风味蛋白酶中的任意两种或者三种组合。
11.根据权利要求1或2所述的一种水产副产品源I型胶原抗氧化肽的制备工艺，其特征在于:所述的步骤(7)中喷雾干燥的出风温度为65-85°C、进风温度为140-180°C。
【文档编号】C12P21/06GK103468772SQ201310386159
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年8月30日 优先权日:2013年8月30日
【发明者】陈俊德, 易瑞灶, 洪碧红, 洪专, 李龙, 许诺华, 高然, 郑美华, 余琳 申请人:国家海洋局第三海洋研究所