一种高密度培养枯草芽孢杆菌的方法
【专利摘要】本发明涉及一种高密度培养枯草芽孢杆菌的方法，包括步骤：(1)以枯草芽孢杆菌为发酵菌种进行三级种子活化，其中，活化培养基的组份包括：蛋白胨10g/L、牛肉粉3g/L、氯化钠5g/L、葡萄糖1g/L；(2)将活化后的菌种接种到发酵培养基中培养，发酵培养基的组份包括：葡萄糖 10g/L、豆饼粉 15g/L、MnSO4 0.3g/L、NaCl 5g/L、K2HPO4 0.3g/L、碳酸钙5g/L；在30℃，搅拌转速200r/min条件下发酵48h后得高密度培养的枯草芽孢杆菌。本发明通过对培养基配方及发酵条件的改进，枯草芽孢杆菌的活菌数达到8.9×109cfu/mL以上，为提高枯草芽孢杆菌的工业化发酵提供了必要条件，可大大提高生产率。
【专利说明】一种高密度培养枯草芽孢杆菌的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于菌类培养【技术领域】，尤其是一种高密度培养枯草芽孢杆菌的方法。
【背景技术】
[0002]枯草芽孢杆菌在水体中繁殖的过程中能够产生胞外酶，它能够将水体和底泥中的残余饵料、排泄废物和动植物残体等有机物分解，这些有机物首先分解为小分子，如高级脂肪酸和多肽等，然后分解为更小的分子有机物，如单糖、氨基酸、低级脂肪酸和环烃等，最终分解为二氧化碳、硝酸盐、硫酸盐等，最终降低了水中的B0D、C0D，使水中的氮、氨、硫化物和亚硝酸氮的浓度降低，具有清除底泥和减轻水体富营养化的作用，此外芽孢杆菌分泌的多种抗生素和酶类都能抑制其它病原菌的生长。
[0003]枯草芽孢杆菌作为水产养殖用添加剂，一些研究证明其能够促进养殖品种加速生长，降低饲料系数，维持肠道微生态平衡，增强动物机体免疫力，提高抗病能力和减少污染坐寸ο
[0004]目前国内对枯草芽孢杆菌的研究主要集中在筛菌、抑菌效果以及枯草芽孢杆菌的产酶特性等，而对于高密度培养枯草芽孢杆菌的发酵技术则报道较少。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是针对现有技术的不足，而提出一种高密度培养枯草芽孢杆菌的方法。
[0006]本发明解决其技术问题是采取以下技术方案实现的:
[0007]一种高密度培养枯草芽孢杆菌的方法，包括步骤如下:
[0008](I)以枯草芽孢杆菌为发酵菌种进行三级种子活化，
[0009]其中，活化培养基的组份包括:蛋白胨10g/L、牛肉粉3g/L、氯化钠5g/L、葡萄糖lg/L ；
[0010]三级种子活化培养条件均为:摇床培养、PH值7.5、温度为30°C、时间24h ；
[0011](2)将活化后的菌种接种到发酵培养基中培养，
[0012]其中，发酵培养基的组份包括:葡萄糖10g/L、豆饼粉15g/L、MnS040.3g/L、NaC15g/L、K2HPO40.3g/L、碳酸钙 5g/L ；
[0013]发酵条件为:pH自然、培养温度30°C、搅拌转速200r/min、培养时间48h后，得高密度培养的枯草芽孢杆菌。
[0014]而且，所述步骤(I)中三级种子活化培养的接种量均为8% v/v。
[0015]而且，所述步骤(2)中发酵培养的接种量为8% v/v。
[0016]而且，所述步骤(2)中发酵培养时，每发酵1L体积的通氧量大于0.5m3/h。
[0017]本发明的优点和积极效果是:
[0018]1、本发明通过对培养基配方及发酵条件的改进，为提高枯草芽孢杆菌的菌体量、提闻广品有效率提供了基础条件。
[0019]2、使用本发明方法后，枯草芽孢杆菌的活菌数显著提高，达到8.9X109cfu/mL以上，比优化前的1.8X109cfu/mL活菌数提高了 4.9倍，显著的提高了产量。
【具体实施方式】
[0020]以下对本发明实施做进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。
[0021]一种高密度培养枯草芽孢杆菌的方法，包括步骤如下:
[0022](I)以枯草芽孢杆菌为发酵菌种进行三级种子活化，
[0023]其中，活化培养基的组份包括:蛋白胨10g/L、牛肉粉3g/L、氯化钠5g/L、葡萄糖lg/L ；
[0024]三级种子活化培养条件均为:摇床培养、PH值7.5、温度为30°C、时间24h、接种量8% (v/v)。
[0025](2)对活化后的菌种接种到发酵培养基中培养，
[0026]其中，发酵培养基的组份包括:葡萄糖10g/L、豆饼粉15g/L、MnS040.3g/L、NaC15g/L、K2HPO40.3g/L、碳酸钙 5g/L ；
[0027]发酵条件为:pH自然、培养温度30°C、搅拌转速200r/min、接种量为8% (v/v)，培养时间48h，得高密度培养的枯草芽孢杆菌。
[0028]实例1:
[0029](I)种子培养:
[0030]种子活化采用的培养基组成如下:蛋白胨10g/L、牛肉粉3g/L、氯化钠5g/L、葡萄糖 lg/L。
[0031]活化培养的条件为:摇床培养；PH值7.5 ;温度为30°C ;时间24h，接种量8% (v/V)。
[0032](2)发酵培养:
[0033]将活化好的枯草芽孢杆菌接种到发酵培养基中培养，发酵体积为30L。
[0034]所述发酵培养基由以下原料组成:葡萄糖10g/L、豆饼粉15g/L、MnSO40.3g/L、NaC15g/L、K2HPO40.3g/L、碳酸钙 5g/L。
[0035]发酵培养的条件为:pH自然；培养温度30°C ;转速200r/min ;通氧量2m3/h ;装液量30L ;接种量8% (v/v);培养时间48h。
[0036]培养结束时其活菌数为8.9 X 109cfu/mL。
[0037]实例2
[0038]以枯草芽孢杆菌为发酵菌种，经三级种子活化后接种到发酵培养基中培养。
[0039](I)活化培养:蛋白胨10g/L、牛肉粉3g/L、氯化钠5g/L、葡萄糖lg/L ;活化培养的条件为:摇床培养；PH值7.5 ;温度为30°C ;时间24h。
[0040](2)发酵培养:
[0041]将活化好的枯草芽孢杆菌接种到发酵培养基中培养，发酵体积为300L。
[0042]所述发酵培养基由以下原料组成:葡萄糖10g/L、豆饼粉15g/L、MnSO40.3g/L、NaC15g/L、K2HPO40.3g/L、碳酸钙 5g/L。
[0043]发酵培养的条件为:pH自然；培养温度30°C ;转速200r/min ;通氧量15m3/h ;装液量30L ;接种量8% (v/v);培养时间48h。
[0044]培养结束时其活菌数为8.2 X 109cfu/mL。
[0045]上述两个实例中芽孢杆菌活菌数测定方法为:发酵结束后取ImL发酵液加入到9mL无菌生理盐水中，依次做10倍系列稀释，选取3个适当的稀释倍数，吸取0.1mL稀释液注入到平板计数培养基中，用涂布棒将稀释液混匀铺平，每个稀释度接三个平板，倒置，于37°C恒温培养箱中培养24h，选取菌落数在30?300之间的培养皿计菌落数。
【权利要求】
1.一种高密度培养枯草芽孢杆菌的方法，其特征在于包括步骤如下: (1)以枯草芽孢杆菌为发酵菌种进行三级种子活化， 其中，活化培养基的组份包括:蛋白胨10g/L、牛肉粉3g/L、氯化钠5g/L、葡萄糖lg/L ； 三级种子活化培养条件均为:摇床培养、PH值7.5、温度为30°C、时间24h ； (2)将活化后的菌种接种到发酵培养基中培养， 其中，发酵培养基的组份包括:葡萄糖10g/L、豆饼粉15g/L、MnSO40.3g/L、NaC15g/L、K2HPO40.3g/L、碳酸钙 5g/L ； 发酵条件为:PH自然、培养温度30°C、搅拌转速200r/min、培养时间48h，得高密度培养的枯草芽孢杆菌。
2.根据权利要求1所述的高密度培养枯草芽孢杆菌的方法，其特征在于:所述步骤(I)中三级种子活化培养的接种量均为8% v/v0
3.根据权利要求1所述的高密度培养枯草芽孢杆菌的方法，其特征在于:所述步骤(2)中发酵培养的接种量为8% v/v0
4.根据权利要求1所述的高密度培养枯草芽孢杆菌的方法，其特征在于:所述步骤(2)中发酵培养时，每发酵1L体积的通氧量大于0.5m3/h。
【文档编号】C12R1/125GK104293721SQ201410567431
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年10月23日 优先权日:2014年10月23日
【发明者】张云泽, 辛乃宏, 李炳乾, 刘颖芬 申请人:中盐工程技术研究院有限公司