本发明涉及食品脱色技术领域，具体地说是涉及苜蓿叶蛋白抗氧化肽的脱色方法。
背景技术：
苜蓿（lucerne；alfalfa）为禾本科牧草，因其具有产量高、抗旱耐盐碱、适应性广、品质优、营养丰富等特点，被誉为“牧草之王” ，在我国乃至世界范围内大面积种植。众所周知，中国是苜蓿种植大国。在我国，由于缺乏深加工技术，近一半苜蓿作为优良的能量饲料饲喂家畜，资源利用率和附加值低。苜蓿营养价值丰富，其叶子富含蛋白质和各种维生素，合理开发利用苜蓿叶中的蛋白质和其它营养成分成为引导我国苜蓿产业健康发展的关键因素。虽然苜蓿叶蛋白质含量高，其含有18种人体必需氨基酸，是一种较为理想的优质纯天然全价蛋白质，但由于大多提取后的叶蛋白溶解度低，很难以功能性成分在乳品、饮料、糖果等食品体系中加以利用。而且植物蛋白具有一定的抗原性，其消化率和生物效价远不及牛奶、鸡蛋等动物蛋白。所有这些都大大限制了叶蛋白利用领域和应用效果。近年来，很多学者对肽的消化吸收机制进行了研究，认为肽较蛋白质和游离氨基酸更易被肠道吸收，通过生物代谢实验证实了肽的吸收率比游离氨基酸大，且比氨基酸更易更快通过小肠粘膜而被肌体吸收利用。大量的实验证实了长期食用一些肽的食品有助于延缓衰老、增强免疫力，同时食用方便，适合于大众人群。近年来，研究人员成功的利用动植物蛋白制得了降压肽、抗氧化肽、免疫调节肽等。目前，抗氧化肽类作为一种安全、高效的天然抗氧化剂用于清除体内过多自由基的研究正在兴起。许多关于酶法水解植物蛋白制备抗氧化肽并应用于饮料等食品领域的方法已公开在专利文献中，例如公开的CN 102318864 A、CN102379435 A、CN102349579 A等。
从目前研究结果看，将苜蓿叶蛋白酶解后产物具有较好的溶解性、消化吸收性及抗氧化活性，可以作为抗氧化活性肽来源应用到食品和医药行业。但是苜蓿叶蛋白酶解液为深绿色，如果作为食品添加剂直接应用到食品中不易被消费者接受，因此需要对酶解液进行脱色处理。目前常用的脱色方法有有机溶剂脱色法、离子交换树脂脱色法等，但这些方法常会导致成本高、二次污染、蛋白损失率高等问题。
本发明采用粉末活性炭、活性白土和碱性高岭土三种吸附剂按一定比例复配对苜蓿叶蛋白抗氧化肽进行脱色处理，降低成本，避免有机溶剂导致的二次污染，同时降低了蛋白、多肽的损失率，因此解决了苜蓿叶蛋白抗氧化肽颜色很深的问题，对功能性食品的开发具有重要的理论意义和应用价值。
技术实现要素：
为解决苜蓿叶蛋白抗氧化肽酶解液色泽过深的技术问题，本发明提供一种苜蓿叶蛋白抗氧化肽的脱色方法，即利用粉末活性炭、活性白土和碱性高岭土混合物为脱色剂，在保证较高脱色率、较低多肽损失率的同时，还有效保留了抗氧化活性，并可广泛应用于苜蓿叶蛋白多肽及其他活性肽生产过程中。
实现上述目的的技术方案为：
一种苜蓿叶蛋白抗氧化肽的脱色方法，将采用碱性蛋白酶制备好的苜蓿叶蛋白抗氧化肽溶液调 pH 2~4 , 加入粉末活性炭、活性白土和碱性高岭土重量比1：0.6~1.0：0.4~0.8混合物为脱色剂，复合脱色剂添加量为苜蓿叶蛋白抗氧化肽溶液的1.0~3.0 %（m/V）,在50 ~ 70 ℃下水浴振荡脱色60 ~ 80 min后，在 4000~5000 r/min 的离心作用下持续处理20~ 30 min，所得上清液为脱色后的苜蓿叶蛋白抗氧化肽。
本发明中脱色剂的优选配比为粉末活性炭、活性白土和碱性高岭土重量比1：0.8：0.6，在此配比下脱色，复合脱色剂的活性高，脱色率高，多肽损失率较低，同时抗氧化活性保留率高。
本发明中复合脱色剂添加量为苜蓿叶蛋白抗氧化肽溶液的1.5~2.5%（m/V），调节苜蓿叶蛋白抗氧化肽溶液 pH 2.5~3.5时，得到的脱色处理后的苜蓿叶蛋白抗氧化肽的脱色效果好，脱色率可达80 %以上，多肽损失率较低，抗氧化活性也达到了优值，原始苜蓿叶蛋白抗氧化肽液对DPPH·清除率为90 %以上，脱色后对DPPH·清除率为80 %以上，还原力保持率为80 %以上。
本发明苜蓿叶蛋白抗氧化肽的制备方法为苜蓿叶蛋白水溶液中加入碱性蛋白酶作为水解酶，碱性蛋白酶的加入量为苜蓿叶蛋白质量的2.0~4.0%，控制在pH值为7.5-8.5的环境下酶解3 ~ 5h，灭酶后离心，收集上清液即可得到苜蓿叶蛋白抗氧化肽液。苜蓿叶蛋白溶液中苜蓿叶蛋白与水的质量体积比为4.0~5.0%。
本发明的苜蓿叶蛋白抗氧化肽的脱色方法也可应用到采用其他方法制备得到的抗氧化肽液的脱色过程中。
本发明采用粉末活性炭、活性白土和碱性高岭土混合物为复合脱色剂。粉状活性炭吸附可分为物理吸附和化学吸附两种。无臭无味，具有表面积大、吸附力强、纯度高、滤速快、质量稳定，具有絮凝效应和助滤效应等特点。广泛适用于食品、医药、味精化工等产品的脱色、除杂精制，也可以用于水的净化处理。粉末活性炭在脱色方面不能取代活性白土。活性白土又称为酸性白土，是以膨润土为原料处理加工成的活性较高的吸附剂，它不仅具有较强的吸附活性，而且具有以下几个明显特性：固体酸性质；阳离子交换剂性质；酸催化剂性质；助滤剂性质。因而，酸性白土对色素，尤其是叶绿素及其他胶性杂质吸附力很强，对碱性原子团吸附力更强。碱性高岭土吸附剂的最佳粒径为10UM以内, pH值控制在7.5～8.5间，偏碱性,锰离子的去除率超过90%，达到GB8978-1996工业废水排放的一级标准。其吸附原理主要是吸附作用和沉淀作用。高岭土能有效吸附,是基于高岭土中的高岭石层面上带的永久负电荷和在碱性条件下端面表现出的负电荷性质,易与蛋白酶解液中的阳离子发生交换吸附作用,可针对蛋白酶解液选择性的吸附反应体系中的部分有色物质，而对蛋白质影响、破坏较小，将使水的色度降低。将粉末活性炭、活性白土和碱性高岭土混合使用，使苜蓿叶蛋白抗氧化肽的多肽损失率较低，有效保留了抗氧化活性，且脱色效果良好。
本发明与现有技术比较具有以下优点：
1）本发明的脱色方法简单、操作易行，处理过程温和，安全性高，经济实用。
2）本发明采用粉末活性炭、活性白土和碱性高岭土混合物为复合脱色剂，较其它脱色方法如有机溶剂萃取法、氧化脱色法等，成本低，处理方法方便，无残留物存在，无毒性，且能高效、快速地吸附蛋白质酶解液中的色素。在物理吸附和化学吸附双重作用下，苜蓿叶蛋白抗氧化肽的脱色率为80 %以上，多肽损失率10 %以下，DPPH·清除率为80 %以上，还原力保留率为80 %以上，可广泛用于苜蓿叶蛋白多肽及其他活性肽生产的保健食品行业。
具体实施方式
下面通过具体实施例进一步说明本发明。需要说明的是，本发明的实施例仅仅是用于本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明的制备和脱色方法的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
实施例1
一、苜蓿叶蛋白抗氧化肽液的制备
将40g 苜蓿叶蛋白粉溶入1L 水中形成苜蓿叶蛋白水溶液，加入碱性蛋白酶作为水解酶，碱性蛋白酶的加入量为苜蓿叶蛋白质量的2.0 %，控制在pH值为8.0的环境下酶解4 h，用NaOH溶液维持pH值恒定，灭酶后离心，收集上清液即可得到苜蓿叶蛋白抗氧化肽液。经测定：DPPH·清除率为90.82 %，其中酶解液蛋白质含量为10 mg/mL。
二、苜蓿叶蛋白抗氧化肽液的脱色
将制备得到的苜蓿叶蛋白抗氧化肽液的pH值调到3.0，脱色剂中粉末活性炭、活性白土和碱性高岭土重量比1：0.8：0.6，该复合脱色剂添加量为苜蓿叶蛋白抗氧化肽溶液的2.0 %（m/V），在60 ℃下水浴振荡脱色60 min后，在 5000 r/min 的离心作用下持续处理20 min，所得上清液为脱色后的苜蓿叶蛋白抗氧化肽。经测定最终脱色率为85.32 %，多肽损失率为5.77 %，脱色后苜蓿叶蛋白抗氧化肽对DPPH·清除率为84.30 %，还原力保持率为85.31 %。
实施例2
一、苜蓿叶蛋白抗氧化肽液的制备同实施例1
二、苜蓿叶蛋白抗氧化肽液的脱色
将制备得到的苜蓿叶蛋白抗氧化肽液的pH值调到2.5，脱色剂中粉末活性炭、活性白土和碱性高岭土重量比1：0.9：0.7，该复合脱色剂添加量为苜蓿叶蛋白抗氧化肽溶液的1.5 %（m/V），在50 ℃下水浴振荡脱色60 min后，在 5000 r/min 的离心作用下持续处理20 min，所得上清液为脱色后的苜蓿叶蛋白抗氧化肽。经测定最终脱色率为82.40 %，多肽损失率为5.11 %，脱色后苜蓿叶蛋白抗氧化肽对DPPH·清除率为84.62 %，还原力保持率为83.50 %。
实施例3
一、苜蓿叶蛋白抗氧化肽液的制备同实施例1
二、苜蓿叶蛋白抗氧化肽液的脱色
将制备得到的苜蓿叶蛋白抗氧化肽液的pH值调到3.5，脱色剂中粉末活性炭、活性白土和碱性高岭土重量比1：1：0.8，该复合脱色剂添加量为苜蓿叶蛋白抗氧化肽溶液的2.5 %（m/V），在60 ℃下水浴振荡脱色80 min后，在 5000 r/min 的离心作用下持续处理20 min，所得上清液为脱色后的苜蓿叶蛋白抗氧化肽。经测定最终脱色率为86.20 %，多肽损失率为7.82 %，脱色后苜蓿叶蛋白抗氧化肽对DPPH·清除率为83.12 %，还原力保持率为85.34 %。
实施例4
一、苜蓿叶蛋白抗氧化肽液的制备
将50g 苜蓿叶蛋白粉溶入1L 水中形成苜蓿叶蛋白水溶液，加入碱性蛋白酶作为水解酶，碱性蛋白酶的加入量为苜蓿叶蛋白质量的3.0 %，控制在pH值为8.5的环境下酶解4 h，用NaOH溶液维持pH值恒定，灭酶后离心，收集上清液即可得到苜蓿叶蛋白抗氧化肽液。经测定：DPPH·清除率为92.13 %，其中酶解液蛋白质含量为10 mg/mL。
二、苜蓿叶蛋白抗氧化肽液的脱色
将制备得到的苜蓿叶蛋白抗氧化肽液的pH值调到3.0，脱色剂中粉末活性炭、活性白土和碱性高岭土重量比1：0.8：0.6，该复合脱色剂添加量为苜蓿叶蛋白抗氧化肽溶液的2.5 %（m/V），在60 ℃下水浴振荡脱色60 min后，在 5000 r/min 的离心作用下持续处理20 min，所得上清液为脱色后的苜蓿叶蛋白抗氧化肽。经测定最终脱色率为84.57 %，多肽损失率为3.45 %，脱色后苜蓿叶蛋白抗氧化肽对DPPH·清除率为84.96%，还原力保持率为84.12 %。