专利名称：乙肝病毒基因扩增检测前的样本处理方法
技术领域：
本发明涉及生物化学、酶学、突变或遗传过程，是在变异或遗传工程中涉及基因工程的DNA或其分离、制备或纯化，其宿主的应用;进一步说，是涉及由二个或二个以上细胞融合、DNA片段、编码性微生物蛋白质，如内毒素的基因，具体地说，是涉及编码病毒蛋白质的基因，如肝炎病毒。
据统计，全世界约有2亿以上人携带HBV(乙肝病毒)，而我国受HBV感染的人至少有1亿以上。大量证据表明HBV持续感染和肝癌发生有相关关系，据报道，HBV感染人群中发生肝癌的相对危险性为非感染人群的200倍以上，肝癌患者中血清HBV标志流行率也较高，用放免法检测HBeAg，在对照人群中低于6%，而肝癌患者的血清中HBeAg阳性率达45%至80%，如果包括将抗HBe也作为HBV感染的标志，则对照人群与肝癌人群在HBV标志方面的这种差异更大，因此，HBV的准确迅速检测就显得十分重要，但是传统检测法存在敏感性比较差、费时、假阴性多等问题，而PCR高度敏感，因而可检出潜在的低水平HBV感染。
已有的PCR直接检测HBVDNA，通常比较复杂、使用不便、且需花费较多时间。关键在于PCR检测前的血清样本处理存在一些缺陷。
本发明的目的是提供一种简单、快速、不加任何试剂的乙肝病毒基因扩增检测(HBVDNAPCR)前的样本处理方法。
本发明的技术解决方案是一种乙肝病毒基因扩增检测前的样本处理方法首先将血清样本在90℃-99℃下加热5-25分钟，再经离心后，吸取上清液作为血清中靶DNA。
本发明中的加热温度以94℃-95℃为佳，当然，也可采用其他合适的温度值。
本发明中的加热时间以10-15分钟为佳。
当然，也可采用其他合适的时间值。
本发明中离心时的离心速度1万转，离心时间2-5分钟，当然，也可采用其他合适的离心速度和离心时间。
本发明的优点是快速、稳定可靠，重复性好。而且在处理血清时(PCR之前)无需加入任何试剂，除了简化操作、节约试剂、节省时间外，还使PCR操作人员不必接触有损健康的苯酚/氯仿等有机溶剂，可在没有防护设施的普通实验室内开展PCR操作，可避免经典法经常遇到的操作误差。更有利于普及推广应用。
下表即为本发明方法与其他方法的比较
以下结合实施例对本发明作进一步说明例1取50μl血清样品于94℃下加热15分钟，再12000rpm离心2分钟，吸取5μl上清液作为血清中靶DNA。
例2取50μl血清样品于97℃下加热5分钟，再9800rpm离心3分钟，吸取5μl上清液作为血清中靶DNA。
例3取50μl血清样品于95℃下加热10分钟，再10000rpm离心5分钟，吸取5μl上清液作为血清中靶DNA。
本发明中所取血清样品的量、加热温度、加热时间、离心速度、离心时间、及吸取上清液的量均可作合适的变化。以符合要求为准。
权利要求
1.一种乙肝病毒基因扩增检测前的样本处理方法，其特征在于首先将血清样本在90℃-99℃下加热5-25分钟，再经离心后，吸取上清液作为血清中靶DNA。
2.根据权利要求1所述的乙肝病毒基因扩增检测前的样本处理方法，其特征在于加热温度以94℃-95℃为佳。
3.根据权利要求1或2所述的乙肝病毒基因扩增检测前的样本处理方法，其特征在于加热时间以10-15分钟为佳。
4.根据权利要求1或2所述的乙肝病毒基因扩增检测前的样本处理方法，其特征在于离心速度1万转，离心时间2-5分钟。
全文摘要
本发明公开了一种乙肝病毒基因扩增检测前的样本处理方法。其特点首先将血清样本在90℃—99℃下加热5—25分钟，再经离心后吸取上清液作为血清中靶DNA。优点血清用量少，无需加入任何试剂，简化操作，节省时间，有利于普及推广。
文档编号C12N15/10GK1072453SQ9210784
公开日1993年5月26日 申请日期1992年12月6日 优先权日1992年12月6日
发明者余竹元, 周铭, 汤钊猷, 刘建宁, 杜菁, 陈建华 申请人:上海医科大学附属中山医院, 南勇宏达生物技术有限公司