专利名称：一种蜗牛酶的制备方法
技术领域：
本发明是一种从动物废弃脏器中提取回收蜗牛酶制剂的方法。
自从蜗牛人工饲养供人们作为美味佳肴后，蜗牛的内脏等下脚料一直未有被利用，长期以来蜗牛的下脚料丢弃不用，既浪费了资源，又污染了环境。虽然也有用蜗牛下脚料烘干作饲料用，但是利用率太低，远未发挥其应有的作用，十分可惜。如何发挥富有营养价值的蜗牛其下脚料的营养价值，使其物尽其用，事半功倍，是人们一直寻求的目标。
本发明的目的是发明一种工艺简单、利用率高的提取蜗牛酶的方法，本发明生产蜗牛酶的方法如下(1)蜗牛取来饿养2∽5天，尽可能排泄掉体内食物，洗尽蜗牛体表污泥和排泄物；(2)用简易装置研散或敲散外壳，分离外壳，取出可食用的蜗牛肉；(3)收集下脚料中胃、嗉囊和肝脏部分，放入预冷至2∽8℃的玻璃杯中；(4)用高速匀浆器或绞肉机绞碎胃等内脏；(5)用醋酸盐、磷酸盐、tris等缓冲液在2∽8℃冰箱中搅拌2～3小时提取蜗牛酶；(6)在上述温度范围内的离心机中以8000-12000转/分，离心20～30分钟，上清液放于4℃冰箱保存。为了充分提取蜗牛酶，沉淀部分再以一倍内脏浆液体积的缓冲液，同上方法重复一次。
(7)合并两次离心液，用0.45u过滤器过滤除菌。沉淀部分可做饲料使用；(8)除菌液在-30℃冰箱冰冻两天，然后转入-30℃的冷冻干燥器中制成冻干品；(9)冻干品适当磨散，按需要分装，在-18℃冰箱保存。
本发明的制备方法中，酶的提取液是缓冲液，但是以NaH2PO4H2O和NaHPO42H2O为好，提取效果好，后处理方便，更易操作。
上述缓冲液的用量以内脏浆液体积的1∽4倍为好，缓冲液少了提取效果不高，多了造成浪费，且使后道工艺费时费力，增加了制备成本。
缓冲液NaH2PO4H2O和NaHPO42H2O的浓度分别是20.0-26.0g/L和2.00-3.00g/L，其余是水。
本发明用离心机的离心速度是8000-12000转/分，离心后能有效分离酶液和杂质。
本发明方法简便，易工业化生产，所用试剂和设备均为常规物品，对建立工业化生产容易为企业接受。本发明方法制得的蜗牛酶经测试，结果表明其活性与标准蜗牛酶基本相同，且其中的淀粉酶，纤维素酶和果胶酶都保留着相当高的活性，以一公斤蜗牛8元计算，则一公斤蜗牛留下的下脚料制成的蜗牛酶可得60元左右。因此本方法是提取蜗牛酶后，再进行饲料加工，不仅清洁了环境，还大大提高了蜗牛下脚料的有效利用率，取得良好的社会效益和经济效益。
本发明蜗牛酶的测定方法如下采用酵母菌细胞的显微镜计数方法测定蜗牛酶活性相对值。
取酵母菌培养液1.5毫升，离心收集菌体，以一定量的标准蜗牛酶作破壁处理，其中一半在再生培养基(A)上生长，另一半在非再生培养基(B)上生长，酵母菌菌落之差为破壁数。以相同量自制蜗牛酶在相同条件下测定，同样计算破壁数。对两者的破壁数作比较，以标准蜗牛酶的破壁数为标准，计算自制蜗牛酶的相对活性。每个实验重复三次。如有一次实验结果是标准蜗牛酶的破壁数为(83,97,89)/皿，平均89.7，自己提取的蜗牛酶破壁数为(92,86,94)/皿，平均90.7。结果表明，自制的蜗牛酶其活性与标准蜗牛酶基本相同。
实施例(以实验室生产蜗牛酶为例)(1)蜗牛取来后饿养2天，尽可能排泄掉体内食物，洗尽蜗牛体表污泥和排泄物。
(2)敲散外壳，并分离外壳，取出可食用的蜗牛肉。
(3)收集下脚料中的胃、嗉囊部分，放入预冷的玻璃杯中。
(4)用高速匀浆器匀浆胃等内脏。
(5)用两倍内脏匀液体积的缓冲液，在4℃冰箱中搅拌3小时提取蜗牛酶。
(6)在4℃离心机中以10000转/分，离心25分钟，上清液放于4℃冰箱保存。沉淀部分再以1倍内脏匀浆液体积的缓冲液，同上方法再重复一次。
(7)合并两次离心液，用0.45u过滤器过滤除菌。沉淀部分可做饲料使用。
(8)除菌液在-30℃冰冻两天，然后转入-30℃的冷冻干燥器中制成冻干品。
(9)冻干品适当磨散，按需要分装，在-18℃冰箱保存。
权利要求
1．一种蜗牛酶的制备方法，其特征在于(1)蜗牛酶提取前，蜗牛饿养2∽5天；(2)取出可食用的蜗牛肉后下脚料置2∽8℃低温下粉碎待用；(3)用缓冲液在上述温度范围下搅拌；(4)在上述温度下离心；(5)过滤除菌，冷冻干燥。
2．根据权利要求1所述的蜗牛酶的制备方法，其特征在于其缓冲液是NaH2PO4H2O、Na2HPO42H2O。
3．根据权利要求1所述的蜗牛酶的制备方法，其特征在于缓冲液的用量是内脏浆液体积的1∽4倍。
4．根据权利要求1所述的蜗牛酶的制备方法，其特征在于缓冲液NaH2PO4H2O和Na2HPO42H2O的浓度分别是20.0-26.0g/L和2.00-3.00g/L，其余是水。
5．根据权利要求1所述的蜗牛酶的制备方法，其特征在于离心机的离心速度是8000∽12000转/分。
全文摘要
本发明是一种从原料蜗牛中生产蜗牛肉后产生的下脚料中回收生产蜗牛酶的方法。目前的蜗牛下脚料丢弃不用,既浪费了资源,又污染了环境;即使直接烘干作饲料用,利用率也很低。本发明将蜗牛下脚料经处理后,用缓冲液提取蜗牛酶后,经除菌、干燥,制成冻干品,再进行饲料加工等,极大地提高了蜗牛下脚料的利用率,获得了十分良好的社会效益和经济效益。
文档编号C12N9/00GK1216778SQ9812194
公开日1999年5月19日 申请日期1998年10月10日 优先权日1998年10月10日
发明者梁雪宝, 张培德 申请人:复旦大学, 上海东地实业发展有限公司