一种提取水飞蓟分离蛋白的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种提取食品蛋白方法，特别是涉及一种提取水飞蓟分离蛋白的方法。
【背景技术】
[0002]水飞蓟，Silybum marianum (L.) Gaertn,别名水飞雉、奶蓟，为菊科一至二年生草本植物。水飞蓟很早就作为保肝的草药在民间流传。1947年，水飞蓟被收载于《美国处方齐U》中。水飞蓟果实中有较大药用价值的是水飞蓟素、水飞蓟油和水飞蓟蛋白。其中，水飞蓟素主要存在壳中，籽仁中主要含有蛋白质、油脂和糖类。经脱去油脂后的水飞蓟柏可用于提取水飞蓟素。提取水溶性水飞蓟素后的渣饼富含淀粉、蛋白质。有研究表明，水飞蓟蛋白是一种优质植物蛋白，不仅蛋白质含量高且氨基酸种类齐全，具有较高的营养价值，其效价介于大豆蛋白和小麦蛋白之间。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，本发明利用蛋白质在碱条件下溶解度较高，而在等电点条件下溶解度很低的特性，通过调节分散体系PH值将蛋白质与淀粉和纤维素分离出来。通过实验对比，筛选出最适的提取溶剂和最优的提取条件。
[0004]本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，所述方法包括以下过程:
(1)将脱脂处理后的水飞蓟籽仁粉碎；过80目筛制得水飞蓟籽仁脱脂粉，装入实验袋，封好口，冷冻备用；
(2)以步骤(I)中制备的水飞蓟籽仁脱脂粉为原料，在一定的温度下用提取溶剂浸提。
[0005](3)浸提结束后，离心收集上清液；
(4)在收集的上清液中滴加HC1，以使上清液中蛋白质沉淀；
(5)离心，倾去上清液，收集沉淀；
(6)将收集到的蛋白质沉淀真空冷冻干燥12-18h，即得水飞蓟分离蛋白。
[0006]所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，所述步骤(I)中所述的脱脂处理为用乙醚脱脂处理三次。
[0007]所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，所述步骤(2)中的提取溶剂为0.05mol/L的Tris-HCl溶液(pH=8)，其料液比为1: 16，浸提温度为40_50°C。浸提过程中不断搅拌，用lmol/L NaOH溶液调体系pH至11，浸提时间为60_80min。
[0008]所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，步骤(3)中所述的离心条件为低温冷冻4000r/min,离心 30min。
[0009]所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，步骤(4)中所述的HCl为lmol/L，调节反应体系的pH至5.5。
[0010]所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，步骤(5)中所述的离心条件为低温冷冻4000r/min,离心 30min。
[0011]所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，提取过程中浸泡原料用水、缓冲液的配置用水均为去离子水。
[0012]本发明的优点与效果是:
本发明通过单因素实验和响应面优化，筛选合适的提取剂和最优提取条件。该套提取技术操作简单、用时短，能较其他方法有效地提高蛋白质的提取率。
[0013]采用本发明的方法提取水飞蓟中的分离蛋白，工艺过程简单、合理、对环境无污染(酸碱中和)、蛋白质提取率高、操作时间短、具有很高的实用价值，可为与水飞蓟蛋白质相关的研究提供闻质量的样品。
【具体实施方式】
[0014]下面结合实施例对本发明进行详细说明。
[0015]实施例1不同提取液对SMP提取效果的影响结果
取5份2g过80目筛的水飞蓟籽仁脱脂粉，按1:16的料液比分别溶解于去离子水、
1.0mol/LNaCl 溶液、70% 乙醇溶液、0.1moI/LPBS 溶液(pH=8)、0.05mol/LTris-HCl 溶液(pH=8) ;5(TC水浴加热50min,然后4000r/min离心30min,取上清液；用凯氏定氮法测定上清液中的蛋白质含量。结果表明:pH=8的Tris-HCl溶液提取水飞蓟分离蛋白(SMPI)的得率最高，达41.52%，优于其他。
[0016]实施例2
取2g过80目筛的水飞蓟籽仁脱脂粉，按1:16的料液比加入到0.5mol/L的Tris-HCl溶液中，调节PH为8 ;在50°C条件下水浴加热50min ;然后4000r/min离心30min。收集上清液，滴加HCl,使上清液中蛋白质沉淀。4000r/min离心30min,倾去上清液,将收集到的蛋白质沉淀真空冷冻干燥12-18h，即得水飞蓟分离蛋白。
[0017]实施例3
除以下区别外，其他同实施例2。
[0018]取2g过80目筛的水飞蓟籽仁脱脂粉，分别按液料比为1:14加入到0.5!1101/1的Tris-HCl溶液中，调节pH=9。在45°C条件下水浴加热50min ;然后4000r/min离心30min。收集上清液，滴加HCl，使上清液中蛋白质沉淀。4000r/min离心30min，倾去上清液，将收集到的蛋白质沉淀真空冷冻干燥12_18h，即得水飞蓟分离蛋白。
[0019]本研究在对比水飞蓟蛋白质提取方法的基础上，筛选出最佳的提取方法为碱提酸沉法，结合单因素试验，并通过响应面分析，得到了提取水飞蓟籽仁中蛋白质的最佳工艺条件为:pH=8，液料比1:16，温度50°C，最佳提取液为Tris-HCl溶液。
【主权项】
1.一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下过程: (1)将脱脂处理后的水飞蓟籽仁粉碎；过80目筛制得水飞蓟籽仁脱脂粉，装入实验袋，封好口，冷冻备用； (2)以步骤(I)中制备的水飞蓟籽仁脱脂粉为原料，在一定的温度下用提取溶剂浸提； (3)浸提结束后，离心收集上清液； (4)在收集的上清液中滴加HC1，以使上清液中蛋白质沉淀； (5)离心，倾去上清液，收集沉淀； (6)将收集到的蛋白质沉淀真空冷冻干燥12-18h，即得水飞蓟分离蛋白。
2.根据权利要求1述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，其特征在于，所述步骤(I)中所述的脱脂处理为用乙醚脱脂处理三次。
3.根据权利要求1所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的提取溶剂为0.05mol/L的Tris-HCl溶液(pH=8)，其料液比为1:16，浸提温度为40-50 0C ； 浸提过程中不断搅拌，用lmol/L NaOH溶液调体系pH至11，浸提时间为60_80min。
4.根据权利要求1所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，其特征在于:步骤(3)中所述的离心条件为低温冷冻4000r/min，离心30min。
5.根据权利要求1所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，其特征在于:步骤(4)中所述的HCl为lmol/L，调节反应体系的pH至5.5。
6.根据权利要求1所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，其特征在于:步骤(5)中所述的离心条件为低温冷冻4000r/min，离心30min。
7.根据权利要求1所述的一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，其特征在于:提取过程中浸泡原料用水、缓冲液的配置用水均为去离子水。
【专利摘要】一种提取水飞蓟分离蛋白的方法，涉及一种提取食品蛋白方法，包括以下过程：（1）将脱脂处理后的水飞蓟籽仁粉碎；过80目筛制得水飞蓟籽仁脱脂粉，装入实验袋，封好口，冷冻备用；（2）以步骤（1）中制备的水飞蓟籽仁脱脂粉为原料，在一定的温度下用提取溶剂浸提。（3）浸提结束后，离心收集上清液；（4）在收集的上清液中滴加HCl，以使上清液中蛋白质沉淀；（5）离心，倾去上清液，收集沉淀；（6）将收集到的蛋白质沉淀真空冷冻干燥12-18h，即得水飞蓟分离蛋白。采用本发明的方法提取水飞蓟中的分离蛋白，工艺过程简单、合理、对环境无污染（酸碱中和）、蛋白质提取率高、操作时间短、具有很高的实用价值，可为与水飞蓟蛋白质相关的研究提供高质量的样品。
【IPC分类】A23J1-14
【公开号】CN104621339
【申请号】CN201510032681
【发明人】岳静, 侯雅文, 李博望, 邱雪松
【申请人】沈阳化工大学
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年1月23日