理中心。
[0013] 实施例1 本发明所述的富含赖氨酸、精氨酸和苏氨酸三种必需氨基酸的功能蛋白饲料生产方法 包括下述步骤： 第一步，液体发酵 将牛肉膏蛋白胨上的三种谷氨酸棒杆菌(编号为CICC 20906、CICC 20191和CICC 20903)用200ml无菌生理盐水制成悬浮菌液，按1: 1:1比例混合后，接种到液体发酵培养 基中培养（装液量60%)，培养基组成：葡萄糖120g/L、（NH4) 2SO4 30g/L、玉米浆20g/L、KH2P04 I. 5g/L、MgSO4 · 7Η200· 5 g/L、生物素 8X KT5 g/L、CaCO3 30 g/L ;ρΗ7· 0,0· 12 MPa 下灭菌 20 min;培养条件：罐压0.1 Mpa，搅拌转速230 r/min，通风量1:0. 25,培养温度30°C，发 酵时间48 h ;将YH)培养基上的粘性丝孢酵母(编号为CICC 32858)用200ml无菌生理盐 水制成悬浮菌液，当谷氨酸棒杆菌发酵液的产酸率达到5. 0%以上时，接入粘性丝孢酵母悬 浮菌液，继续培养发酵IOh ; 将斜面上的植物乳杆菌(编号为CICC20022)在盛有MRS培养基的500mL茄形扁瓶中接 种，将植物乳杆菌一级固体种子用200mL无菌生理盐水制成悬浮菌液，到发酵罐中培养(装 液量60%)，培养基组成：葡萄糖或糖蜜20-50g/L、玉米浆35 g/L，七水合硫酸镁0. 35 g/L， 四水合硫酸锰0.015 g/L，七水合硫酸铁0.015 g/L，乙酸钠21 g/L，Tween-80 lmL/L;培养 条件：罐压0.1 Mpa静置培养，培养温度30 °C，发酵时间22 h。
[0014] 第二步，制备发酵醪液 将第一步制得的发酵液按谷氨酸棒杆菌和粘性丝孢酵母混菌发酵液20份与植物乳杆 菌发酵液10份混合均匀，用Ca (OH) 2调节pH值至7. 0,得到发酵醪液备用； 第三步，固态发酵 按重量比将100份去皮豆柏与5份糖蜜混合，得到固态发酵原料；将第二步配制的发酵 醪液按固态发酵原料重量的60%的比例与固态发酵原料混合均匀，在发酵塔上进行有氧固 态发酵，发酵条件：起始温度25°C，过程控制温度45°C，发酵时间为60h ; 第四步，烘干包装 发酵结束，将发酵物料传送到干燥器上，使用热风，在65 °C条件下烘干到含水量 < 12%，粉碎后计量包装，得到富含三种必需氨基酸高蛋白饲料原料。
[0015] 按照国家标准（GB/T 19541和GB/T 18296)进行测定，本发明方法制得的发酵豆 柏与普通豆柏、常规发酵豆柏的营养指标进行对比，结果如下：
【主权项】
1. 一种富含三种必需氨基酸的功能蛋白饲料生产方法，其特征在于：包括下述步骤： 第一步，液体发酵 将编号为CICC20906、CICC20191、CICC20903、CICC20887 和CICC20192 五种 谷氨酸棒杆菌中的任意三种按1:1:1比例混合后先进行种子培养和液体发酵；将编号为 CICC32858的粘性丝孢酵母进行种子培养，然后接入到谷氨酸棒杆菌发酵液中混菌发酵，得 到混菌发酵液备用； 将编号为CICC20022或CICC20038的植物乳杆菌单独发酵，发酵液备用； 将编号为CICC23413或CICC20443的纳豆芽孢杆菌单独发酵，发酵液备用； 第二步，制备发酵醪液 将第一步制得的发酵液按谷氨酸棒杆菌和粘性丝孢酵母混菌发酵液1〇~60份，植物乳 杆菌发酵液0~30份或/和纳豆芽孢杆菌发酵液0~30份混合，用Ca(OH) 2调节pH值至中性， 得到发酵醪液备用； 第三步，固态发酵 按重量比将100~150份豆柏、棉柏、菜籽柏和花生柏中的一种或两种以上物料与 5~10份糖蜜混合，得到固态发酵原料；将第二步得到的发酵醪液按固态发酵原料重量的 50~100%的比例与发酵原料混合，进行有氧固态发酵，发酵条件为：起始温度20~30°C，过程 控制温度30°C~45°C，发酵时间为48~72h; 第四步，烘干包装 发酵结束，将发酵物料在60~70°C条件下烘干到含水量< 12%，粉碎后计量包装，即可 得到富含三种必需氨基酸的高蛋白饲料。
2. 根据权利要求1所述的富含三种必需氨基酸的功能蛋白饲料生产方法，其特征在 于：所述第一步中谷氨酸棒杆菌与粘性丝孢酵母混菌发酵液的制备方法为： 将使用牛肉膏蛋白胨培养基活化后的任意三种谷氨酸棒杆菌种用无菌生理盐水制成 悬浮菌液，接种到液体发酵种子培养基中培养，培养基组成：葡萄糖100~120g/L、（NH4)2SO 4 20~30g/L、玉米浆 10~20g/L、KH2P04 1~1. 5g/L、MgS04.7H20 0? 3~0. 5 g/L、生物素 5~8X KT5 g/L、CaCO3 10~30 g/L ;pH7. 0,0? 12 MPa 下灭菌 20 min ;培养条件：罐压 0? 03~0.1 Mpa，搅 拌转速170~230 r/min，通风量1:0. 25~0. 5,培养温度30~32°C，发酵时间24~48h ;将粘性 丝孢酵母用无菌生理盐水制成悬浮菌液，当谷氨酸棒杆菌发酵液的产酸率达到5. 0%以上 时，接入粘性丝孢酵母悬浮菌液，继续培养发酵IOh即可。
3. 根据权利要求1所述的富含三种必需氨基酸的功能蛋白饲料生产方法，其特征在 于：所述第一步中植物乳杆菌发酵液的制备方法为： 使用固体MRS培养植物乳杆菌，将植物乳杆菌一级固体种子用无菌生理盐水制成悬浮 菌液，接种到液体发酵培养基中，培养基组成：葡萄糖或糖蜜20-50g/L、玉米浆20~35g/L， 七水合硫酸镁〇. 25~0. 35g/L，四水合硫酸锰0. 01~0. 015g/L，七水合硫酸铁0. 01~0. 015 g/L，乙酸钠16~21g/L，Tween-80ImL/L;培养条件：罐压0. 03~0.IMpa静置培养，培养温 度30~32°C，发酵时间18~22h。
4. 根据权利要求1所述的富含三种必需氨基酸的功能蛋白饲料生产方法，其特征在 于：所述第一步中纳豆芽孢杆菌发酵液的制备方法为： 将使用牛肉膏蛋白胨培养基活化后的纳豆芽孢杆菌种用无菌生理盐水制成悬浮菌
【专利摘要】本发明公开了一种富含三种必需氨基酸的功能蛋白饲料生产方法，采用谷氨酸棒杆菌、粘性丝孢酵母、植物乳杆菌和纳豆芽孢杆菌进行液体发酵，将富含代谢产物和活菌体的发酵醪液混合配制成发酵醪液；再将其按照一定比例与豆粕、棉粕、菜籽粕和花生粕中的一种或两种以上的混合物混合，进行固态发酵，最后对产品干燥、包装，终产品中粗蛋白含量高于50%，且富含三种必需氨酸。本发明将发酵醪液直接与固态物料混合发酵，降低了生料固态发酵过程中染杂菌的几率；能耗低，无废弃物排放；通过发酵，降低了植物粕类原料中抗营养因子含量，提高了原料中必需氨基酸和蛋白质含量，提升了农副产品的经济附加值，可减少外源必需氨基酸的添加量，降低了饲料成本。
【IPC分类】A23K1-14, C12R1-645, C12N1-16, C12N1-20, C12R1-25, C12R1-07, A23K1-16, C12R1-15
【公开号】CN104839444
【申请号】CN201510280174
【发明人】李伟, 宋安东, 曹胜炎, 杨森, 王风芹, 李琰
【申请人】河南双成生物科技有限公司, 河南农业大学
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年5月28日