用天然防腐剂-抗菌肽。
[0022] 实施例2: 一种天然防腐剂抗菌肽的制备方法： 将80μL畐lJ干酷乳杆菌FX_6菌液加至lmLMRS液体培养基，于摇床35°C，150;r/min 培养10~18h。取ImL活化菌液，用MRS培养基以1:14的比例稀释，0D_=0. 2。将4L牛奶 置于发酵瓶中，按15% (m/v)的比例接种活化后的FX-6-1菌，按照3% (m/v)的比例添加葡 萄糖，按照3% (m/v)的比例酵母粉。将发酵罐内各种物质彻底摇匀溶解，放置在30° C 发酵75小时。发酵完毕后取出，将发酵液置于4000 r/min下离心20 min，取上清液。将上 清液用0.2 nm孔径的滤纸过膜，取滤液备用。收集多次滤液于-40°C真空冷冻干燥成粉末 状后-20°C低温保存，即得一种肉制品用天然防腐剂-抗菌肽。
[0023] 实施例3: 一种天然防腐剂抗菌肽的制备方法： 将120 μ L副干酪乳杆菌FX-6菌液加至I mL MRS液体培养基，于摇床40° C，150r/ min培养10~18h。取ImL活化菌液，用MRS培养基以1:14的比例稀释，OD6qq=O. 2。将4L 牛奶置于发酵瓶中，按5% (m/v)的比例接种活化后的FX-6-1菌，按照4% (m/v)的比例添加 葡萄糖，按照1% (m/v)的比例酵母粉。将发酵罐内各种物质彻底摇匀溶解，放置在35° C 发酵72小时。发酵完毕后取出，将发酵液置于4000 r/min下离心20 min，取上清液。将上 清液用0.2 nm孔径的滤纸过膜，取滤液备用。收集多次滤液于-40°C真空冷冻干燥成粉末 状后-20°C低温保存，即得一种肉制品用天然防腐剂-抗菌肽。
[0024] 实施例1为优选方案。上述实施例中，所述的副干酪乳杆菌坚韧亚种FX-6-1菌株 已经保藏于于2014年02月23日保藏于位于武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心， 保藏编号为CCTCC M 2014043。
[0025] 实施例4: 一种天然防腐剂抗菌肽的使用方法： 取上述制备好的肉制品用天然防腐剂，将切好的鲜肉浸泡入抗菌肽加水稀释后的防腐 液中，抗菌肽与水的质量比为1 :1〇〇,先浸泡5min捞出，然后沥水5min。其中冷鲜肉可以在 自然状态下切块获得。
[0026] 实施例5: 本发明提供的天然防腐剂抗菌肽抗菌谱分析： 采用牛津杯琼脂扩散法对天然防腐剂抗菌肽进行抗菌谱分析，具体方法是： 2. 1指示菌活化 在超净工作台中挑取4°C保存的试管斜面指示菌单菌于5 mL LB肉汤培养基，放置于恒 温摇床，37°C下150 r/min过夜培养。将过夜活化的指示菌液稀释至菌浓度为IXlO8 CFU/ mL，备用。
[0027] 2. 2检测平板制备 将灭菌处理的LB琼脂冷却至50~60 ° C，无菌条件下用5 mL移液器向水平放置的培 养皿（9 cm)中转移20 mL培养基。琼脂平板凝固后，吸取0.2 mL指示菌液至平板，用无菌 涂布器涂布均勾，随后放置已灭菌的牛津杯（内径6±0.1 mm，外径7.8 ± 0.1 mm，高10 ± 0.1 mm)于培养皿平板上。为防止牛津杯放置不稳固，可适当按压。
[0028] 2. 3抑菌活性测定 用移液枪准确吸取0.2 mL天然防腐剂抗菌肽溶液（I g/mL)至牛津杯，在37°C下恒温 静置培养18 h，游标卡尺测抑菌圈直径。通过扫描仪从培养皿背面扫描拍照。天然防腐剂 抗菌肽抗菌谱的结果见表1。
[0029] 表1天然防腐剂抗菌肽抗菌谱（X土SD，n=3)
【主权项】
1. 一种肉制品用天然防腐剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 将对数期的副干酪乳杆菌坚韧亚种FX-6-1按照体积比1~4:10接种MRS液体培 养基中，摇床培养，活化菌株，所述副干酪乳杆菌坚韧亚种FX-6-1已在中国典型培养物保 藏中心保藏，保藏编号为CCTCC M 2014043,保藏日期为2014年02月23日； (2) 取活化菌液，用MRS培养基以体积比为1:14的比例稀释，OD6tltl=O. 2 ; (3) 将牛奶置于发酵罐中，接种活化后的FX-6-1菌，添加葡萄糖和酵母粉，将发酵罐内 各种物质彻底摇匀溶解，放置在30~35°C下发酵70~75小时； (4) 发酵完成后，将发酵液离心分离，去上清液，过滤； (5) 将滤液真空冷冻干燥成粉末状后冷冻保存，即得一种肉制品用天然防腐剂-抗菌 肽。
2. 根据权利要求1所示的肉制品用天然防腐剂的制备方法，其特征在于，步骤（1)中， 所述FX-6-1在MRS液体培养基的接种量为8~12%，培养温度为35~40°C，培养时间10~ 18h〇
3. 根据权利要求1所述的肉制品用天然防腐剂的制备方法，其特征在于，步骤（3)中， 所述接种活化后的FX-6-1菌和牛奶的质量体积配比为5~15 :100,所述葡萄糖与牛奶的 质量体积比为3~4 :100,所述酵母粉与牛奶的质量体积比为1~3 :100。
4. 根据权利要求1或3所述的肉制品用天然防腐剂的制备方法，其特征在于，步步骤 (3)中，接种活化后的FX-6-1菌和牛奶的质量体积配比为9 :100,所述葡萄糖与牛奶的质量 体积比为3. 44 :100,所述酵母粉与牛奶的质量体积比为2 :100。
5. 根据权利要求1所述的肉制品用天然防腐剂的制备方法，其特征在于，步骤（3)中， 发酵温度32°C，发酵时间72小时。
6. 根据权利要求1所述的肉制品用天然防腐剂的制备方法，特征在于，步骤（4)中，所 述离心分离转速4000 r/min，时间20 min。
7. 根据权利要求1所述的肉制品用天然防腐剂的制备方法，其特征在于，冷冻干燥温 度为-40°C，冷冻保存温度为_20°C。
8. -种如权利要求1-7任意一下所述的方法制备的肉制品用天然防腐剂产品。
9. 一种如权利要求8所述的肉制品用天然防腐剂的使用方法，其特征在于，包括：取上 述制备好的肉制品用天然防腐剂，将切好的鲜肉浸泡入抗菌肽加水稀释后的防腐液中，抗 菌肽与水的质量比为0. 1~1.5 :100,先浸泡3~IOmin后捞出，然后沥水3~lOmin。
【专利摘要】本发明提供一种肉制品用天然防腐剂的制备方法，包括：（1）将对数期的副干酪乳杆菌坚韧亚种FX-6-1接种MRS液体培养基中，摇床培养，活化菌株。（2）将活化菌液用MRS培养基以体积比为1:14的比例稀释；（3）牛奶接种活化后的FX-6-1菌，添加葡萄糖和酵母粉，将发酵罐内各种物质彻底摇匀溶解，放置在30～35℃下发酵70～75小时；（4）发酵完成后，将发酵液离心分离，去上清液，过滤；（5）将滤液真空冷冻干燥成粉末状后冷冻保存。本发明还提供一种上述方法制备的肉制品用天然防腐剂产品及其使用方法。本发明能延长冷鲜肉的货架期，不仅能保证冷鲜肉的营养及口感，而且安全卫生，天然无毒。CCTCC NO:M 201404320140223
【IPC分类】A23B4-22
【公开号】CN104855492
【申请号】CN201510151463
【发明人】苗建银, 陈飞龙, 曹庸
【申请人】曹庸
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2015年4月2日