一种蛹虫草-纳豆芽孢杆菌复合发酵功能食品原料的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属加工副产物高值化利用和生物技术领域，具体涉及一种蛹虫草-纳豆芽 孢杆菌复合发酵功能食品原料的制作方法，。
【背景技术】
[0002] 蛹虫草（Cordyceps militaris)又名北虫草、蛹草等，是一种名贵的药食兼用真 菌，含有虫草素、虫草多糖、虫草酸等多种生物活性物质，具有抗癌抗肿瘤、抗菌消炎、提高 免疫力等作用。目前市场上常见的蛹虫草多为通过人工培育技术，利用谷物为主要营养基 质发酵而成，该技术已经比较成熟，部分食用菌生产企业已经开始规模化应用。利用甘薯 渣、豆渣、玉米为基质进行蛹虫草发酵，可将加工副产物转化为具有保健功能的高附加值原 料或产品，大大降低了生产成本，缓解对粮食需求。
[0003] 纳豆芽孢杆菌通常为（0. 7-0. 8)umX (2. 0-3. 0)um，革兰氏阳性。生长在葡萄糖琼 脂的细胞原生质染色均匀。芽孢椭圆形或柱状，中生或偏中生，即使孢囊膨大，也不显著，有 鞭毛，能运动。生长温度最高为45-55Γ，最低为5-20°C，孢子耐热性强。纳豆芽孢杆菌是 具有耐酸、耐热特性的有益菌，在胃酸下四小时存活率为100%，同时具有强力的病原菌抑 制能力，是各种益菌当中对环境耐受力最好，可以直达小肠的菌种之一，口服后可改变人体 肠道菌丛生态，帮助消化道机能正常化，以使排便顺畅，维持体内生理环保。可以产酸，调节 肠道菌群，增强动物细胞免疫放应，并能生成多种蛋白酶（特别是碱性蛋白酶）、糖化酶、月旨 肪酶、淀粉酶，降解植物性饲料中某些复杂的碳水化合物，从而提高饲料的转化率。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是针对上述现状，旨在提供一种含有虫草素、虫草酸，虫草多糖，同 时还含有纳豆酵素激酶和维生素 K的蛹虫草-纳豆芽孢杆菌复合发酵功能食品原料的制作 方法。
[0005] 本发明目的的实现方式为，一种蛹虫草-纳豆芽孢杆菌复合发酵功能食品原料的 制作方法，具体步骤如下：
[0006] 1)制备蛹虫草菌发酵物：
[0007] (1)制备转化蛹虫草培养液，将100g 土豆，10g黄豆粉，加入到800mL蒸馏水中，煮 沸15min，纱布过滤，所得液体冷却至室温后，向其中加入10g白砂糖，lg磷酸二氢钾、0. 5g 硫酸镁，lg乳酸钙，定容至l〇〇〇mL，得转化蛹虫草培养液；
[0008] (2)在罐头瓶中放入甘薯渣或豆渣，或甘薯渣和豆渣的混合物100g、玉米25g，再 加入步骤1)、（1)的培养液50-90mL，混匀后，瓶口用可透气的耐高温聚丙烯膜封好，115°C 灭菌30min，取出后放入无菌操作台冷却至室温备用；
[0009] 所述甘薯渣和豆渣的质量比为1一 3:3- 1 ;
[0010] (3)用喷雾连续接种枪接种6-15mL蛹虫草菌液至步骤1)、（2)的罐头瓶中，接完种 的罐头瓶移入可调控温湿度及光照的培养室的培养架上，于温度18-25Γ，湿度50% -70% 的条件下避光培养，待白色菌丝长满培养基后，调节温湿度及光照至所需，2-5天后白色菌 丝转黄，收获蛹虫草发酵物；
[0011] 2)蛹虫草菌发酵物处理
[0012] 将步骤1)、（3)罐头瓶中蛹虫草发酵物置于70°C热处理30min，冷却至室温后继续 培养12h，再次置于70°C热处理30min，使其中的菌种及孢子失活；
[0013] 3)纳豆芽孢杆菌菌种培养
[0014] 制备纳豆芽孢杆菌Bacillus natto,菌种保藏号LICC60229的菌种活化培养基， 培养基组成：氯化钠5. 0g，牛肉膏10. 0g，蛋白胨10. 0g，蒸馏水1000.0 mL，pH值7. 2,使用 前 115Γ -121Γ灭菌 15min-20min ;3(TC，200rpm 震荡 24h ;
[0015] 4)接入纳豆芽孢杆菌进行二次发酵
[0016] (1)制备二次发酵基础培养基，二次基础发酵培养基组成：豆渣50g，麸皮50g，磷 酸氢二钾2. 5g、磷酸二氢钾0. 5g、氯化钙0. 2g、硫酸镁0. 5g，蒸馏水1000.0 mL，pH值7. 2 ; 将二次发酵基础培养基115°C _121°C灭菌15min-20min，取出后放入无菌操作台冷却至室 温备用；
[0017] (2)取步骤4)、（1)灭菌、冷却后的二次发酵基础培养基50mL于罐头瓶中，然后接 种5-15mL纳豆芽孢杆菌菌液，在30°C培养2天；
[0018] 5)二次发酵物处理
[0019] 将步骤4)、（2)纳豆芽孢杆菌二次发酵物进行低温真空干燥，干燥后造粒得蛹虫 草-纳豆芽孢杆菌复合发酵功能食品原料；
[0020] 所述低温真空干燥温度40°C，压力0· 3MPa。
[0021] 本发明先用蛹虫草菌液发酵基质，再用纳豆芽孢杆菌进行二次发酵，最后得到的 产品中，不仅含有虫草素、虫草酸，虫草多糖，同时还含有纳豆酵素激酶和维生素 K、膳食纤 维等，有治疗三高（高血糖、高血压、高血脂）和溶解血栓的作用。
[0022] 本发明改变普通蛹虫草人工发酵方式，缓解对粮食的需求，大大降低虫草生产成 本。
【具体实施方式】
[0023] 本发明的具体步骤是：
[0024] 1)制备蛹虫草菌发酵物：
[0025] (1)制备转化蛹虫草培养液，将100g 土豆，10g黄豆粉，加入到800mL蒸馏水中，煮 沸15min，纱布过滤，所得液体冷却至室温后，向其中加入10g白砂糖，lg磷酸二氢钾、0. 5g 硫酸镁，lg乳酸钙，定容至l〇〇〇mL，得甘薯渣、豆渣等转化蛹虫草所用的培养液；
[0026] (2)在每个直径8cm，高10cm的罐头瓶中放入甘薯渣或豆渣，或甘薯渣和豆渣的混 合物100g、玉米25g，再加入步骤1)、（1)的培养液50-90mL，混匀后，瓶口用可透气的耐高 温聚丙烯膜封好，115°C灭菌30min，取出后放入无菌操作台冷却至室温备用；
[0027] 所述甘薯渣和豆渣的质量比为1一 3:3- 1 ;
[0028] (3)用喷雾连续接种枪接种6_15mL蛹虫草菌液至步骤1)、（2)的罐头瓶中，接完种 的罐头瓶移入可调控温湿度及光照的培养室的培养架上，于温度18-25Γ，湿度50% -70% 的条件下避光培养，待白色菌丝长满培养基后，适当调节温湿度及光照，2-5天后白色菌丝 转黄，收获蛹虫草发酵物；
[0029] 2)蛹虫草菌发酵物处理
[0030] 将步骤1)、（3)罐头瓶中蛹虫草发酵物置于70°C热处理30min，冷却至室温后继续 培养12h，再次置于70°C热处理30min，使其中的菌种及孢子失活；
[0031] 3)纳豆芽孢杆菌菌种培养
[0032] 制备纳豆芽孢杆菌Bacillus natto,菌种保藏号LICC60229的菌种活化培养基， 培养基组成：氯化钠5. 0g，牛肉膏10. 0g，蛋白胨10. 0g，蒸馏水1000.0 mL，pH值7. 2,使用 前 115Γ -121Γ灭菌 15min-20min ;3(TC，200rpm 震荡 24h ;
[0033] 4)接入纳豆芽孢杆菌进行二次发酵
[0034] (1)制备二次发酵基础培养基，二次基础发酵培养基组成：豆渣50g，麸皮50g，磷 酸氢二钾2. 5g、磷酸二氢钾0. 5g、氯化钙0. 2g、硫酸镁0. 5g，蒸馏水1000.0 mL，pH值7. 2 ; 将二次发酵基础培养基115°C _121°C灭菌15min-20min，取出后放入无菌操作台冷却至室 温备用；
[0035] (2)取步骤4)、（1)灭菌、冷却后的二次发酵基础培养基50mL于罐头瓶中，然后接 种5-15mL纳豆芽孢杆菌菌液，在30°C培养2天；
[0036] 5)二次发酵物处理
[0037] 将步骤4)、（2)纳豆芽孢杆菌二次发酵物进行低温真空干燥，干燥后造粒得蛹虫 草-纳豆芽孢杆菌复合发酵功能食品原料；
[0038] 所述低温真空干燥温度40°C，压力0· 3MPa。
[0039] 下面用具体实施例详述本发明：
[0040] 例 1、
[0041] 1)制备蛹虫草菌发酵物：
[0042] (1)制备转化蛹虫草培养液，将100g 土豆，10g黄豆粉，加入到800mL蒸馏水中，煮 沸15min，纱布过滤，所得液体冷却至室温后，向其中加入10g白砂糖，lg磷酸二氢钾、0. 5g 硫酸镁，lg乳酸钙，定容至l〇〇〇mL，得甘薯渣、豆渣等转化蛹虫草所用的培养液；
[0043] (2)在每个直径8cm，高10cm的罐头瓶中放入甘薯渣100g、玉米25g，再加入步 骤1)、（1)的培养液50-60mL，混匀后，瓶口用可透气的耐高温聚丙烯膜封好，115°C灭菌 30min，取出后放入无菌操作台冷却至室温备用；
[0044] (3)用喷雾连续接种枪接种6-9mL蛹虫草菌液至步骤1)、（2)的罐头瓶中，接完种 的罐头瓶移入可调控温湿度及光照的培养室的培养架上，于温度18-25Γ，湿度50% -70% 的条件下避光培养，待白色菌丝长满培养基后，适当调节温湿度及光照，2-5天后白色菌丝 转黄，收获蛹虫草发酵物；
[0045] 2)蛹虫草菌发酵物处理
[0046] 将步骤1)、（3)罐头瓶中蛹虫草发酵物置于70°C热处理30min，冷却至室温后继续 培养12h，再次置于70°C热处理30min，使其中的菌种及孢子失活；
[0047] 3)纳豆芽孢杆菌菌种培养
[0048] 制备纳豆芽孢杆菌Bacillus natto,菌种保藏号LICC60229的菌种活化培养基， 培养基组成：氯化钠5. 0g，牛肉膏10. 0g，蛋白胨10. 0g，蒸馏水1000.0 mL，pH值7. 2,使用 前 115Γ -121Γ灭菌 15min-20min ;3(TC，200rpm 震荡 24h ;
[0049] 4)接入纳豆芽孢杆菌进行二次发酵
[0050] (1)制备二次发酵基础培养基，二次基础发酵培养基组成：豆渣50g，麸皮50g，磷 酸氢二钾2. 5g、磷酸二氢钾0. 5g、氯化钙0. 2g、硫酸镁0. 5g，蒸馏水1000.0 mL，pH值7. 2 ; 将二次发酵基础培养基115°C _121°C灭菌15min-20min，取出后放入无菌操作台冷却至室 温备用；
[0051] (2)取步骤4)、（1)灭菌、冷却后的二次发酵基础培养基50mL于罐头瓶中，然后