发明人意外发现，使用磷脂酶处理乳卵磷脂得到改善的乳液，即使在含有水解蛋 白质的组合物中也是如此。虽无意于受理论束缚，但据信磷脂酶处理使得乳卵磷脂转化为 例如游离脂肪酸和/或溶血卵磷脂等的化合物，从而起到稳定乳液的作用。
[0052] 令人意外的是，浓度非常低的已转化乳卵磷脂和使用的磷脂酶导致了乳液品质和 稳定性得到显著改善。
[0053] 因此，在一个方面，本发明涉及制备含有水解蛋白质的蛋白质组合物的方法，所述 方法包括以下步骤：
[0054] a)提供配料混合物，所述配料混合物包含至少一种蛋白质和乳卵磷脂；
[0055] b)添加至少一种磷脂酶并且进行乳卵磷脂的转化；以及
[0056] c)进行所述蛋白质的水解。
[0057] 在另一方面，本发明涉及能够根据该方法获得或根据该方法获得的蛋白质组合 物。
[0058] 蛋白质水解
[0059] 蛋白质水解可在乳卵磷脂转化之前进行、与乳卵磷脂转化同时进行或者在乳卵磷 脂转化之后进行。在一个实施方案中，蛋白质水解可在选自以下阶段的至少一个阶段进行： 加入至少一种磷脂酶之前、加入至少一种磷脂酶的同时，或者加入至少一种磷脂酶之后。在 一些实施方案中，进行不止一个蛋白质水解步骤。在本发明的方法的一个优选实施方案中， 磷脂酶步骤与蛋白质水解步骤同时进行。
[0060] 优选地，蛋白质水解通过酶法来进行。可施加任何蛋白水解酶或酶混合物，例如来 源于动物、植物或微生物的蛋白酶。在一个特别优选的实施方案中，使用胰蛋白酶、胰蛋白 酶样内肽酶或含胰蛋白酶的级分来水解蛋白质。胰蛋白酶、胰蛋白酶样内肽酶或含胰蛋白 酶的制剂可来源于植物、动物胰腺或来自微生物发酵。使用的微生物可（例如）是基因改 造的微生物。胰蛋白酶制剂通常包含不同比例的酶混合物，例如胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、 弹性蛋白、羧肽酶、淀粉酶、脂肪酶和磷脂酶。使用基因改造的微生物的蛋白水解制剂的应 用例子在W02012/042013中有所描述。
[0061] 胰蛋白酶或胰蛋白酶样内肽酶可与一种或多种其他蛋白酶结合提供。
[0062] 因此，蛋白水解制剂可包含例如由任何微生物制得的胰蛋白酶样内肽酶和/或胰 凝乳蛋白酶样内肽酶。
[0063] 在一个实施方案中，胰蛋白酶样内肽酶来自微生物，所述微生物选自镰刀菌 (Fusar ium)，优选地尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum)，和/或选自库茨涅尔氏菌属 (Kutzneria)，优选地白色库茨涅尔氏菌（Kutzneria albida);胰凝乳蛋白酶样内肽酶来 自拟诺卡氏菌（Nocardiopsis)，优选地 Nocardiopsis Sp. EMBL CDS CAI94179,或来自 绿僵菌（Metarhizium)，优选地金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae)，和/或来自 Brachysporiella，优选地 Brachysporiella gayana。
[0064] 在另外的实施方案中，根据本发明所述的方法中的蛋白质水解使用胰蛋白酶样内 肽酶和胰凝乳蛋白酶样内肽酶的混合物来进行，其中所述胰蛋白酶样内肽酶来自尖孢镰刀 菌或白色库茨涅尔氏菌，所述胰凝乳蛋白酶样内肽酶来自Nocardiopsis Sp.或金龟子绿僵 菌。
[0065] 乳卵磷脂的转化与蛋白质水解同时进行使流程合理化。
[0066] 制备含有水解蛋白质的蛋白质组合物的方法的其他实施方案包括如下方法：其中 蛋白质水解在添加至少一种磷脂酶之前进行，和/或其中蛋白质水解在添加至少一种磷脂 酶之后进行。
[0067] 蛋白质水解产物在要用于制备（例如）低变应原性的营养产品例如低变应原性的 婴儿配方产品的蛋白质组合物中是有用的。另外，由于水解蛋白质更易于消化和吸收，因此 期望在设计用于支持具有吸收障碍的个体健康的营养产品中包含蛋白质水解产物，所述吸 收障碍是由于与如胰腺或其他蛋白酶产生腺体之功能不足相关的肠道病症导致的。又例 如，面临代谢应激和代谢损伤问题的患者对营养物质和能量增加有显著需求。
[0068] 然而，本发明还涉及方法、组合物和营养产品，其中所有或大部分蛋白质是完整蛋 白质。据设想，所述磷脂酶处理和乳卵磷脂转化将支持和/或改善这些最终营养产品的乳 液稳定性。因此，在该实施方案中，所述方法包括提供含乳卵磷脂的配料和提供至少一种磷 脂酶的步骤。这样形成的组合物可用于制备具有改善的乳液稳定性的营养产品。
[0069] 蛋白质可来自任何来源或来源的组合。例子包括植物蛋白，例如大豆、豌豆、稻中 的一种或多种，和/或动物蛋白，例如来自乳品，如乳清和/或奶。在一个优选的实施方案 中，所述蛋白质为例如选自酪蛋白和乳清蛋白（例如乳球蛋白和α-乳清蛋白）的一 种或多种乳蛋白。在一个特别优选的实施方案中，所述蛋白质以乳清的形式提供，所述乳清 可以是例如乳清蛋白浓缩物（WPC)或乳清蛋白级分（WPF)。WPC可定义为通常使用膜过滤 法制备的乳清蛋白富集产品，而乳清蛋白级分更多地涉及色谱分离富集产品或沉淀富集蛋 白质。乳清还可以液态乳清或干燥形式提供。
[0070] 本发明的一个实施方案涉及一种方法，所述方法包括以下步骤：将乳卵磷脂添加 到含有蛋白质水解产物的营养组合物中或添加到蛋白质水解产物中；添加至少一种磷脂 酶，使得乳卵磷脂被转化，并且例如脂肪酸和溶血卵磷脂从乳卵磷脂中释放出来，从而有助 于最终营养产品的乳液稳定性。
[0071] 卵磷脂
[0072] 卵磷脂是一个用于统指磷脂的术语。可存在于卵磷脂中的磷脂的例子包括磷脂酰 肌醇（PI)、磷脂酰-L-丝氨酸（PS)、磷脂酰乙醇胺（PE)、磷脂酰胆碱（PC)和鞘磷脂（SP)。 术语卵磷脂和磷脂在本文中可互换使用。
[0073] 卵磷脂存在于植物和动物中，并且卵磷脂的组成各不相同。在下表1中，对来自大 豆、鸡蛋黄和牛乳的卵磷脂进行了比较。很明显，卵磷脂中存在哪些磷脂，以及这些磷脂的 相对存在量都有区别。
[0074] 与其他卵磷脂相比，乳卵磷脂在组成方面有所不同，因为其包含大量浓度类似的 PE、PC、PS和SP。相比之下，蛋卵磷脂主要包含PC，而来自大豆的卵磷脂缺乏SP并且包含 浓度较高的PI和PA。
[0075] 因此，乳卵磷脂的结构组成与蛋卵磷脂和大豆卵磷脂的结构组成不同。由于这个 原因，来自不同来源的卵磷脂有不同的应用。
[0076] 继而，磷脂酶作用于乳卵磷脂和作用于来自例如大豆或蛋的卵磷脂而生成的游离 脂肪酸和溶血卵磷脂不同。
[0077] 因此，不同来源的卵磷脂或其级分可提供不同功能。最佳浓度范围根据卵磷脂类 型和应用的不同而不同。
[0078] 令人意外地，与添加了相对较多量的（如）大豆卵磷脂相比，少量磷脂酶处理的内 源乳卵磷脂实现了更好的乳液稳定性。
[0079] 轰1
[0081] PI =磷脂酰肌醇；PA =磷脂酸；；PS =磷脂酰-L-丝氨酸PE =磷脂酰乙醇胺；PC =磷脂酰胆碱；LPE =溶血磷脂酰乙醇胺；LPC =溶血磷脂酰胆碱；SP =鞘磷脂。其他=神 经酰胺（GluCer、LacCer)
[0082] 表1中的百分比是基于在最终液体配方产品中测得的水平。液体配方产品中应用 的大豆卵磷脂的浓度可最多至0. 5w/w%。这表示每100g配方中含约210mg磷脂。每100g 基于WPC的配方通常仅含有约34mg磷脂。
[0083] 在本发明的一个实施方案中，每100g配料混合物中存在的乳卵磷脂的量可在5mg 至500mg的范围内，例如每100g中含10至100mg，优选地每100g配料混合物中含20至 IOOmg乳卵磷脂。一般来讲，蛋白质水解的程度越高，所需乳卵磷脂的量越高。
[0084] ^ 2
[0086] LPC =溶血磷脂酰胆碱；LPE =溶血磷脂酰乙醇胺。
[0087] 表2描述未添加大豆卵磷脂或添加大豆卵磷脂的情况下，根据本发明所述的营养 产品中获得的均化程度。令人意外的是，据发现，大豆卵磷脂的添加未能改善乳液品质。
[0088] 因此，本发明的一个实施方案涉及根据本发明的不含大豆卵磷脂的营养产品。在 本发明另外的实施方案中，唯一存在的乳化剂是转化的乳卵磷脂。
[0089] 在本申请的情况下，术语"转化的乳卵磷脂"是指磷脂酶作用于乳卵磷脂的产物， 包括游离脂肪酸、溶血磷脂、甘油二酯、磷脂酰化合物、磷酸甘油酯和剩余部分（例如胆 碱）。
[0090] 在该方法的一个优选实施方案中，在根据本发明的方法中提供的乳卵磷脂是内源 乳卵磷脂。术语内源乳卵磷脂意指该乳卵磷脂天然存在于配料混合物的配料中，例如乳清 蛋白浓缩物和/或例如奶、乳清、黄油、奶酪、奶油和酪乳等乳制品或它们的组合中。
[0091] 使用内源乳卵磷脂不再需要添加外源乳卵磷脂或者来自其他来源的真正外源卵 磷脂（例如大豆乳卵磷脂等）。这再一次避免了将潜在过敏原引入蛋白质水解产物和最终 的营养产品中。此外，该实施方案可使用与之前所用相同的基本生产线来实施，仅需少量改 变。
[0092] 乳清蛋白浓缩物是可提供内源乳卵磷脂的一种配料。
[0093] 这种WPC的一个例子是来自丹麦阿拉食品公司（Aria Foods (DK))的 Liacprodail# DI-87。类似产品还可得自例如Armor (法国）、Davisco (美国）、DMV (荷 兰）、Glanbia(爱尔兰）、Kerry (爱尔兰）、Hilmar (美国）、Fonterra(新西兰）。通常卵磷 脂浓度范围为每100g约0. 3g至2g，蛋白质浓度范围为25%至90%。
[0094] 有利地是，乳清蛋白浓缩物中天然存在的乳卵磷脂可保持稳定（valorized)，无须 添加非乳物质。
[0095] 因此，一个实施方案涉及根据本发明的方法，其中乳卵磷脂包含在乳清蛋白浓缩 物中，就是说，提供例如蛋白质等配料（例如提供乳清（如以WPC的形式提供）还提供乳卵 磷脂。
[0096] 磷脂酶
[0097] 本发明的发明人意外发现，向含有乳卵磷脂的组合物中添加磷脂酶将导致乳卵磷 脂的转化以及游离脂肪酸和/或溶血磷脂等转化产物的释放，并且这会改善包含它们的最 终营养产品的乳液品质。
[0098] 至少一种磷脂酶作用于乳卵磷脂会生成游离脂肪酸和/或溶血卵磷脂。根据本 发明所述的磷脂酶可为选自磷脂酶A2(PLA2)、磷脂酶Al (PLAl)、磷脂酶B(PLB)、磷脂酶 C(PLC)和/或磷脂酶D(PLD)的一种或多种。
[0099] 磷脂酶PLAl和PLA2会从磷脂中释放一个脂肪酸分子，PLAl在甘油的SNl位置处， 而PLA2在SN2位置处。磷脂酶B同时表现出PL