治疗剂的制作方法

专利名称：治疗剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及含有来源于植物的生长因子产生增强物质的生长因子产生增强用组合物，含有该组合物的必需增强生长因子产生的疾病的治疗剂或预防剂，生长因子产生增强用的食品、饮料或饲料。另外，本发明还涉及对于增强健康优良的功能性食品、饮料或饲料。
背景技术：
作为属于伞形科的植物例如当归具有的药理作用，已知高血压预防效果、抗菌作用、抗溃疡作用、抑制胃酸分泌作用、抗癌作用、癌预防效果等。
作为属于菊科的植物例如红花具有的药理作用，已知抗炎活性、抗浮肿效果、抗菌活性等。
作为属于百合科的植物例如洋葱具有的药理作用，已知降胆固醇作用、抗菌作用、抗真菌作用、降血糖作用、抗哮喘作用、抗炎症作用、醛糖还原酶抑制作用等。
作为属于银杏科的植物例如银杏具有的药理作用，已知脑的血液循环促进作用、消痣效果、血小板凝集抑制作用、血清胆固醇降低作用等。
作为属于禾本科的植物例如竹具有的药理作用，已知抗菌作用、抗真菌作用、降血压作用、抗氧化活性等。另外，已知米糠具有降胆固醇作用。
作为属于蔷薇科的植物例如蔷薇具有的药理作用，已知抗炎症作用、抗过敏作用、癌细胞增殖抑制作用、抗菌作用等。另外，已知洋李具有降胆固醇作用、预防糖尿病作用。
作为属于桑科的植物例如蛇麻花具有的药理活性，已知抗菌作用、抗肿瘤作用、镇静作用等。
作为属于姜科的植物例如莪术(紫郁金)具有的药理活性，已知抗菌作用、胆汁分泌作用、抗溃疡活性、抗肿瘤活性等。
作为属于豆科的植物例如大豆具有的药理作用，已知降胆固醇作用、抗氧化作用等。
作为属于椴科的植物例如mulukhiya具有的药理作用，已知降血压作用、免疫激活作用等。
作为属于十字花科的植物例如花茎甘蓝具有的药理作用，已知抗癌作用。
但是，尚不知道这些植物成分的生长因子产生增强作用，特别是肝细胞增殖因子(HGF)产生增强作用、神经生长因子(NGF)产生增强作用。
另外，接受了部分肝切除的肝脏迅速再生，恢复到原来的大小。该肝再生因子的本体常年以来一直不明确，但是在严重肝炎患者的血浆中发现了肝细胞增殖因子(Hepatocyte growth factorHGF)，并由其患者血液分离、纯化了该肝细胞增殖因子(Gohda，E.et al.J.Clin.Invest.，88414-419，1988)。而且，也克隆了人HGF的cDNA，明确了HGF的1维结构(Miyakawa，K.et al.，Biochem.Biophys.Res.Commun.，163 967-973，1989)。另外，已经明确使细胞的运动性亢进的scatter factor(SF)以及肿瘤细胞障碍因子tumor cytotoxic factor(TCF)与HGF是同一物质(Weidner，K.M.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88 7001-7005，1991，Shima，N.et al.Biochem.Biophys.Res.Commun.，180 1151-1158，1991)。
HGF不仅促进肝细胞的增殖，而且促进胆管上皮细胞、肾小管上皮细胞、胃粘膜细胞等多种上皮细胞的增殖。并且诱导在上皮细胞的运动性亢进或者血管新生、上皮细胞的管腔形成中可见的形态形成，HGF是显示非常多样的生理活性的多功能活性物质。即，在各种脏器中，修复其脏器的障碍时促进上皮细胞的增殖，诱导运动性的亢进或血管新生等的形态形成等。
HGF显示肝细胞增殖作用、蛋白质合成促进作用、胆汁淤滞改善作用以及预防药物引起肾障碍的作用等。HGF的mRNA也在脑、肾脏、肺等中合成。HGF是促进胆管上皮细胞、肾小管上皮细胞、胃粘膜细胞等多种上皮细胞增殖的中胚叶性细胞生长因子，是具有修复障碍时促进上皮细胞增殖，或诱导运动性亢进、血管新生等形态形成等非常多样的生理活性的多功能活性物质。而且，HGF也具有保护神经细胞、促进增殖、修复障碍的作用等。因此，期待通过诱导HGF的产生，能够治疗或预防肝炎、重症肝炎、剧症肝炎、肝硬化、肝内胆汁淤滞等肝障碍、药物等引起的肾障碍、胃肠障碍、血管障碍、慢性肾炎、肺炎、创伤、糖尿病、癌症等。
由于HGF显示上述各种作用，因此期待HGF自身作为肝炎、重症肝炎、剧症肝炎、肝硬化、肝内胆汁淤滞等肝障碍、药物等引起的肾障碍、胃肠障碍、血管障碍、慢性肾炎、肺炎、创伤、糖尿病、癌症等的治疗药，但是HGF本身作为治疗药并没有得以实际应用。而且，在基因治疗中也尝试了导入HGF的基因的方法，但是由于在不必要的时间、场所发挥作用而产生的副作用，距离实际应用尚很遥远。因而，认为如果不从外部给予HGF，能够任意地增强，则对于治疗和预防必需增强HGF产生的疾病有效，但是至今尚未实际应用。
神经细胞对于维持人的智能、记忆、感情、行动等精神活动承担着主要的作用。认为在作为这些精神活动基础的神经细胞的分化、生存、功能表达中，对各种神经细胞特异的神经营养因子是必需的。神经营养因子中最初明确了其存在和功能的是神经生长因子(NerveGrowth Factor，以下简称为NGF)，现在发现了来源于脑的神经营养因子(Brain-derived-neurotrophic Factor)、神经营养蛋白(Neurotrophin)-3、神经营养蛋白-4/5等。
由于NGF是前脑基底部的大细胞型胆碱能神经细胞的神经营养因子，因而与阿耳茨海默型痴呆症之间的关连受到了瞩目〔Pharmasia，Vol.22，No.2，147～151(1986)、老年精神医学，Vol.3，No.6，751～758(1986)〕。阿耳茨海默型痴呆症是指伴有发育障碍、病灶症状、下肢强直痉挛、癫痫样发作等临床症状，可见老年斑、阿耳茨海默原纤维变化等病理学表象的疾病，是老年性痴呆的一种疾病类型。在近年来的高龄化社会中可见增加的趋势，得到了社会的极大关心，但是尚未找到这种症状的改善方法、治疗方法。
确认在阿耳茨海默型痴呆患者的脑中，以迈内特基底核为中心的前脑基底部显著变性，胆碱乙酰基转移酶(CAT)活性显著降低〔Annu.Rev.Neurosci.，Vol.3，77(1980)〕。1985年使用大鼠脑的研究表明NGF是脑的这一部位的神经营养因子〔EMBOJ.，Vol.4，1389(1985)〕，NGF与该疾病的关连受到了注目。另外，亨廷顿氏舞蹈病患者的脑的纹状体中，GABA能神经细胞的脱落以及胆碱能神经细胞的脱落显著，表明NGF也作用于纹状体的内在性胆碱能神经细胞〔Science，Vol.234，1341(1986)〕，指出该疾病可能与NGF有关。有报道指出用能够成为各种神经疾病模型的大鼠等动物研究了NGF的效果，大鼠神经细胞显著变性以前如果在脑内给予NGF，则可以抑制变性，防止CAT活性降低〔J.Neurosci.，Vol.6，2155(1986)、Brain Res.，Vol.293，305(1985)、Science，Vol.235，214(1986)、Proc.Natl.Acad.Sci.USA，Vol.83，9231(1986)〕。已经证明在末梢的交感神经支配组织和脑中生物合成NGF，该NGF的生物合成中末梢组织或脑组织的间质细胞即成纤维细胞或星形神经胶质细胞分别发挥重要作用〔J.Biol.Chem.，Vol.259，1259(1984)、Biochem.Biophys.Res.Commun.，Vol.136，57(1986)〕。另外，已经明确该成纤维细胞或星形神经胶质细胞产生的NGF的抗原性、分子量、等电点、生物活性与以前进行了充分研究的颚下腺NGF相同，而且通过在成纤维细胞(L-M细胞)以及星形神经胶质细胞的培养液中加入各种神经传导物质的实验，发现儿茶酚胺类(去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺)显示出NGF产生增强作用〔J.Biol.Chem.，Vol.201，6039(1986)〕。
期待NGF在NGF作为神经营养因子发挥作用的部位发生变性的神经疾病中能够用作抑制变性的治疗药。另外，如脑血管障碍、脑肿瘤、脑栓塞(脑尖)、头部外伤变性疾病、麻醉药物中毒等脑神经细胞一旦发生变性，则一生也不能恢复，结果不仅智力低下、记忆缺陷，还会引起感情障碍、行动异常等各种障碍，但是神经纤维具有可塑性，如果受到损伤，则由其附近的健康正常纤维发芽，形成新的突触代替受伤的突触，因此这时可以期待能够使用NGF作为促进神经机能修复再生的治疗剂。
但是，将NGF应用于各种神经疾病的治疗时，NGF必须到达需要NGF的神经细胞非常近的地方，中枢神经疾病的场合也必须将NGF送到脑细胞的患处，而通过血管系统不能将NGF送入脑内。这是由于脑内的血管内皮细胞相互紧密结合(称为血脑屏障)，水、气体、脂溶性物质以外的物质由血液向脑组织移动受到限制，高分子物质——蛋白质(也包括NGF)完全不能通过血脑屏障。即使拥有现在的技术，采用外科手法将该NGF直接给予脑内危险也过大。
另一方面，也进行了不直接给予NGF，而是增强NGF产生的物质的开发。但是，其中多数是具有很强毒性或出现毒性的浓度与有效浓度非常接近的物质，或者是产生神经兴奋作用等对神经系统有非常严重的副作用的物质等，存在多种问题，至今尚未达到实用化。
因而，虽然认为通过增强生长因子能够治疗或预防与该生长因子有关的各种疾病，但是目前尚不知道不显示毒性或副作用，能够根据需要适当增强生长因子产生的物质、方法等。
发明公开本发明的目的在于提供一种含有来源于植物，例如属于伞形科、菊科、百合科、银杏科、禾本科、蔷薇科、桑科、豆科、椴科、十字花科或姜科的植物的果实、种子、种皮、花、叶、茎、根和/或根茎的生长因子产生增强物质作为有效成分的生长因子产生增强用组合物，以及利用生长因子产生增强物质的生理作用的药物、食品、饮料或饲料。
概括来说，本发明的第1项发明涉及一种生长因子产生增强用组合物，其特征在于，含有来源于植物的生长因子产生增强物质作为有效成分。在本发明的笫1项发明中，作为植物，优选从属于伞形科、菊科、百合科、银杏科、禾本科、蔷薇科、桑科、豆科、椴科、十字花科和姜科的植物中选择的1种以上的植物。另外，作为来源于植物的生长因子产生增强物质，优选从绿原酸(chlorogenic acid)、二咖啡酰奎尼酸(dicaffeoyl-quinic acid)、咖啡酰奎尼酸(caffeoyl-quinic acid)、异东方蓼黄素(isoorientin)、safflomin A、愈创内酯(guaianolide)、黄香独活内酯(xanthoangelol)、3’-O-β-D-吡喃葡糖酰凯林内酯(3’-O-β-D-glucopyranoyl khellactone)、7-O-β-D-吡喃葡萄糖基氧-8-异戊烯基香豆素(7-O-β-D-glucopyranosyloxy-8-prenylcoumarin)、咖啡酸甲酯(caffeic acidmethyl ester)、咖啡酸乙酯(caffeic acid ethyl ester)、8-羧基-3-羟基-5-甲氧基-2-二甲基色满(8-carboxyl-3-hydroxy-5-methoxyl-2-dimethylchroman)、7-β-D-吡喃葡萄糖基氧-6-异戊烯基香豆素(7-β-D-glucopyranosyloxy-6-prenylcoumarin)、4’-O-当归酰基-3’-O-〔6-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)-β-D-吡喃葡萄糖基〕-凯林内酯(4’-O-angeloyl-3’-O-[6-O-(β-D-glucopyranosyl)-β-D-glucopyranosyl]-khellactone)、异黄腐酚(isoxanthohumol)、黄腐酚B(xanthohumol B)、黄腐酚D(xanthohumolD)以及黄腐酚(xanthohumol)中选择的1种以上的化合物。而且，作为该组合物也包括含有来源于植物的提取物或者由该植物提取物得到的级分的组合物。另外，特别优选该组合物能够高浓度和/或高纯度地含有来源于植物的生长因子产生增强物质。另外，作为生长因子优选肝细胞增殖因子或神经生长因子。
本发明的第2项发明涉及一种必需增强生长因子产生的疾病的治疗剂或预防剂，其特征在于，含有本发明第1项发明的组合物。
本发明的第3项发明涉及一种生长因子产生增强用的食品、饮料或饲料，其特征在于，含有本发明第1项发明的生长因子增强用组合物。
本发明的第4项发明涉及一种食品、饮料或饲料，其特征在于，高浓度和/或高纯度地含有来源于植物的生长因子产生增强物质。
作为来源于植物的生长因子产生增强物质，优选从绿原酸、二咖啡酰奎尼酸、咖啡酰奎尼酸、异东方蓼黄素、safflomin A、愈创内酯、黄香独活内酯、3’-O-β-D-吡喃葡糖酰凯林内酯、7-O-β-D-吡喃葡萄糖基氧-8-异戊烯基香豆素、咖啡酸甲酯、咖啡酸乙酯、8-羧基-3-羟基-5-甲氧基-2-二甲基色满、7-β-D-吡喃葡萄糖基氧-6-异戊烯基香豆素、4’-O-当归酰基-3’-O-〔6-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)-β-D-吡喃葡萄糖基〕-凯林内酯、异黄腐酚、黄腐酚B、黄腐酚D以及黄腐酚中选择的1种以上的化合物。
本发明的第5项发明涉及一种食品、饮料或饲料，其特征在于，高浓度和/或高纯度地含有本发明第1项发明的组合物。
作为来源于植物的生长因子产生增强用组合物，优选含有从绿原酸、二咖啡酰奎尼酸、咖啡酰奎尼酸、异东方蓼黄素、safflomin A、愈创内酯、黄香独活内酯、3’-O-β-D-吡喃葡糖酰凯林内酯、7-O-β-D-吡喃葡萄糖基氧-8-异戊烯基香豆素、咖啡酸甲酯、咖啡酸乙酯、8-羧基-3-羟基-5-甲氧基-2-二甲基色满、7-β-D-吡喃葡萄糖基氧-6-异戊烯基香豆素、4’-O-当归酰基-3’-O-〔6-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)-β-D-吡喃葡萄糖基〕-凯林内酯、异黄腐酚、黄腐酚B、黄腐酚D以及黄腐酚中选择的1种以上化合物的组合物。
本发明的第6项发明涉及一种神经生长因子产生增强用的食品、饮料或饲料，其中含有黄腐酚0.00007重量％以上。
本发明的第7项发明涉及一种生长因子产生增强用的食品、饮料或饲料，其中含有包含生长因子产生增强物质的食品、饮料、饲料或者其处理物。作为其方式，优选包括啤酒类的生长因子产生增强用的食品、饮料或饲料，啤酒类包括啤酒、发泡酒、非酒精啤酒饮料、其浓缩物、其稀释物、含有蛇麻花提取物的饮料。
本发明的第8项发明涉及一种含有蛇麻花提取物的生长因子产生增强用的食品、饮料或饲料。蛇麻花提取物优选在食品、饮料或饲料中含有0.0001重量％以上。
本发明的第9～11项发明涉及一种生长因子产生增强用组合物、必需增强生长因子产生的疾病的治疗剂或预防剂、或者生长因子产生增强用的食品、饮料或饲料，其特征在于，分别含有愈创内酯作为有效成分。


图1是表示化合物(1)的1H-NMR波谱的图(上)以及表示绿原酸标准品的1H-NMR波谱的图(下)。
图2是表示来源于当归的提取级分1～3中含有的绿原酸浓度与各级分的HGF产生增强活性的相关性的图。
图3是表示绿原酸标准品浓度与HGF产生增强活性的相关性的图。
图4是表示化合物(2)的1H-NMR波谱的图。
图5是表示国产菊花氯仿提取级分A-a-2的MS谱的图。
图6是表示国产菊花氯仿提取级分A-a-2的1H-NMR波谱的图。
图7是表示国产菊花氯仿提取级分A-b-1的MS谱的图。
图8是表示国产菊花氯仿提取级分A-b-1的IR光谱的图。
图9是表示国产菊花氯仿提取级分A-b-1的1H-NMR波谱的图。
图10是表示国产菊花氯仿提取级分A-b-1的13C-NMR波谱的图。
图11是表示当归提取级分中含有7.82分钟的峰的级分的质谱图。
图12是表示当归提取级分中含有7.82分钟的峰的级分的IR光谱图。
图13是表示当归提取级分中含有7.82分钟的峰的级分的1H-NMR波谱图。
图14是表示当归提取级分中含有7.82分钟的峰的级分的13C-NMR波谱图。
图15是表示当归提取级分中含有11.09分钟的峰的级分的质谱图。
图16是表示当归提取级分中含有11.09分钟的峰的级分的IR光谱图。
图17是表示当归提取级分中含有11.09分钟的峰的级分的1H-NMR波谱图。
图18是表示当归提取级分中含有11.09分钟的峰的级分的13C-NMR波谱图。
图19是表示来源于当归根部的级分10的FAB-MS谱的图。
图20是表示来源于当归根部的级分10的1H-NMR波谱的图。
图21是表示来源于当归根部的级分13-2的FAB-MS谱的图。
图22是表示来源于当归根部的级分13-2的1H-NMR波谱的图。
图23是表示来源于当归根部的级分13-2的13C-NMR波谱的图。
图24是表示来源于当归根部的级分18-3的FAB-MS谱的图。
图25是表示来源于当归根部的级分18-3的1H-NMR波谱的图。
图26是表示来源于当归根部的级分18-4的FAB-MS谱的图。
图27是表示来源于当归根部的级分18-4的1H-NMR波谱的图。
图28是表示来源于当归根部的级分18-4的13C-NMR波谱的图。
图29是表示来源于当归根部的级分19、20-5的FAB-MS谱的图。
图30是表示来源于当归根部的级分19、20-5的1H-NMR波谱的图。
图31是表示来源于当归根部的级分19、20-5的13C-NMR波谱的图。
图32是表示来源于当归根部的级分19、20-6的FAB-MS谱的图。
图33是表示来源于当归根部的级分19、20-6的1H-NMR波谱的图。
图34是表示来源于当归根部的级分19、20-6的13C-NMR波谱的图。
图35是表示来源于当归根部的级分28的FAB-MS谱的图。
图36是表示来源于当归根部的级分28的1H-NMR波谱的图。
图37是表示来源于黄腐酚级分的级分A-5的FAB-MS谱的图。
图38是表示来源于黄腐酚级分的级分A-5的1H-NMR波谱的图。
图39是表示来源于蛇麻花的黄腐酚级分的1H-NMR波谱的图。
发明的实施方式本发明提供一种生长因子产生增强用组合物，其特征在于，含有来源于植物的生长因子产生增强物质作为有效成分。植物中存在显示生长因子产生增强作用的物质是本发明首次发现的。另外，在本说明书中作为有效成分例举的任何一种物质均可以单独或者2种以上混合后在本发明中使用。
作为本发明涉及的来源于植物的生长因子产生增强物质，只要能够通过下述该物质的制备方法得到即可，并没有特别的限定。其中，优选来源于从属于伞形科、菊科、百合科、银杏科、禾本科、蔷薇科、桑科、豆科、椴科、十字花科和姜科的植物中选择的1种以上植物的具有生长因子产生增强作用的物质。
作为属于伞形科的植物，例如当归、独活、胡萝卜、水芹、鸭儿芹、旱芹等。作为属于菊科的植物，例如菊、蒲公英、向日葵、蓟、春菊、食用菊花、牛蒡、蜂斗叶、艾蒿等，艾蒿优选使用KWANGHWA MUGWORT(サザバルョモギ)。作为属于百合科的植物，例如洋葱、葱、蒜、郁金香、百合等。作为属于银杏科的植物，例如银杏。作为属于禾本科的植物，例如孟宗竹、苦竹、淡竹、箣竹、小竹、稻、小麦、苇子、羊胡子草、稷等，也可以使用谷物或其处理物，例如米糠、麦糠等。作为属于蔷薇科的植物，例如山樱、染井吉野樱、梅、桃、洋李、苦扁桃、苹果、蔷薇、木莓、枇杷、多花蔷薇、景天等。作为属于桑科的植物，例如桑、无花果、蛇麻花、葡蟠、畏芝、面包树、橡胶树等。作为属于姜科的植物，例如姜、郁金、姜、鸢尾等，作为郁金，特别优选莪术(紫郁金)。作为属于椴科的植物，例如mulukhiya(モロヘィャ)。作为属于豆科的植物，例如大豆、小豆、菜豆、绿豆等。作为属于十字花科的植物，例如圆白菜、花茎甘蓝、菜花、白菜、油菜花等。
另外，本发明使用的植物没有特别的限定，可以使用果实、种子、种皮、花、叶、茎、根和/或根茎、其处理物，例如米糠、麦糠、大豆胚芽、大豆种皮、大豆粗粉(soya meal)等，或者直接将植物体剥去表皮后仅使用表皮、或除去表皮以外的部分，或者直接使用植物体本身。
另外，本发明中，作为来源于植物的生长因子产生增强物质，只要是具有增强生长因子的活性的来源于植物的物质即可，并没有特别的限定，从表现出本发明所需效果的观点出发，优选从绿原酸、二咖啡酰奎尼酸、咖啡酰奎尼酸、异东方蓼黄素、safflomin A、愈创内酯、黄香独活内酯、3’-O-β-D-吡喃葡糖酰凯林内酯、7-O-β-D-吡喃葡萄糖基氧-8-异戊烯基香豆素、咖啡酸甲酯、咖啡酸乙酯、8-羧基-3-羟基-5-甲氧基-2-二甲基色满、7-β-D-吡喃葡萄糖基氧-6-异戊烯基香豆素、4’-O-当归酰基-3’-O-〔6-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)-β-D-吡喃葡萄糖基〕-凯林内酯、异黄腐酚、黄腐酚B、黄腐酚D以及黄腐酚中选择的1种以上的化合物。另外，作为本发明中使用的有效成分的物质的生长因子产生增强作用的表达，可以通过例如本发明公开的方法(例如实施例4-(1)和实施例13记载的方法)进行评价。该物质只要是来源于植物的显示生长因子产生增强作用的物质即可，并没有限定，当然也可以包含上述例举的作为有效成分优选的化合物以外的物质。本发明中作为咖啡酰奎尼酸，优选例如5-咖啡酸奎尼酸(5-caffeoyl-quinic acid)、4-咖啡酰奎尼酸(4-caffeoyl-quinic acid)。另外，本发明中作为愈创内酯，优选例如2-氧代-8-当归酰氧基-愈创木-3(4)，11(13)-二烯-1 2，6-交酯(2-Oxo-8-angeloyloxy-guaia-3(4)，11(13)-dien-12，6-olide)或3，4-环氧-8-当归酰氧基-愈创木-1(10)，11(13)-二烯-12，6-交酯(3，4-Epoxy-8-angeloyloxy-guaia-1(10)，11(13)-dien-12，6-olide)。另外，本发明中，来源于植物是指由植物原料获得。
另外，本发明的生长因子产生增强用组合物作为其一种方式，例如含有生长因子产生增强物质的组合物、含有来源于植物的提取物或由该植物提取物得到的级分的组合物。该组合物也可以是上述提取物或级分本身。由植物提取纯化可以按照下述公知的方法进行。例如在适当的时期采集作为原料的植物的果实、种子、种皮、花、叶、茎、根和/或根茎等后，直接或进行常规空气干燥等干燥工序后，根据需要粉碎，作为提取原料。另外，也可以在各种条件下进行原料的熟化，使用熟化后的原料。另外，也可以使用植物的处理物，例如米糠、麦糠、大豆胚芽、大豆种皮、大豆粗粉等。原料为植物的榨汁液或树液的场合，也可以直接作为提取原料使用。另外，本发明中所谓来源于植物的提取物是指经过使用提取溶剂进行提取操作的工序由植物得到的物质。
由植物体制备生长因子产生增强物质可以按照公知的提取方法如下所述进行。例如将原料粉碎或切碎后，使用溶剂采用分批式或连续式进行。作为提取溶剂，可以例举水，氯仿、乙醇、甲醇、异丙醇等醇类，丙酮、甲乙酮等酮类，乙酸甲酯、乙酸乙酯等亲水性或亲油性的溶剂，根据需要可以单独使用或者适当制成混合液使用。通常，优选使用水、含有乙醇的水、或乙醇进行。提取溶剂的量可以适当确定，通常相对于原料优选使用1～100倍量的提取溶剂。提取温度也可以根据目的适当确定，水提取的场合通常优选4～130℃，更优选25～100℃。另外，溶剂中含有乙醇的场合，优选4～60℃的范围。提取时间也可以考虑提取效率进行确定，通常最好是设定原料、提取溶剂、提取温度，优选达到数分钟～数天，更优选5分钟～3小时的范围。提取操作可以通过搅拌和或静置进行，另外也可以根据需要反复进行数次。通过以上操作，生长因子产生增强物质作为含有该物质的提取物得到。提取物根据需要进行过滤、离心分离、浓缩、超滤、分子筛等处理，可以制备所需生长因子产生增强物质被浓缩后的提取物。提取物或浓缩提取物的生长因子产生增强活性可以通过下述实施例4-(1)或实施例13记载的方法简便测定。
另外，本发明中所谓由植物提取物得到的级分是指按照公知的方法将来源于植物的提取物分级得到的级分，或者反复进行数次分级操作得到的含有单一物质的级分，只要具有生长因子产生增强作用，就包括在本发明中。作为上述分级方法，可以例举提取、分别沉淀、柱色谱、薄层色谱等。以生长因子产生增强活性作为指标，进一步纯化得到的级分，也可以分离生长因子产生增强物质。
另外，按照公知的方法使植物成为茶叶状，使用该物质得到的提取物或由该植物提取物得到的级分如果也具有生长因子产生增强作用，则可以作为本发明的提取物或由该植物提取物得到的级分使用。另外，也可以含有2种以上这些提取物或由该植物提取物得到的级分进行使用。另外，本发明中也可以含有2种以上采用不同提取方法由同一植物得到的提取物或由该植物提取物得到的级分进行使用。
另外，作为来源于植物的提取物和由该植物提取物得到的级分以外的生长因子产生增强用组合物的制备方法，例如可以通过将植物干燥、粉碎得到粉状的该组合物。
另外，本发明中的来源于植物的生长因子产生增强用组合物特别优选与植物体本身相比以高浓度和/或高纯度含有生长因子产生增强物质的组合物。其中高浓度是指与作为原料的植物体每单位重量的生长因子产生增强物质重量相比，组合物的每单位重量的生长因子产生增强物质重量较多。另外，高纯度是指与作为原料的植物相比，该组合物的生长因子产生增强物质的含有率较高。
另外，本发明还提供高浓度和/或高纯度地含有生长因子产生增强物质的食品、饮料或饲料，这是指与以往的食品、饮料或饲料相比，本发明的食品、饮料或饲料中高浓度和/或高纯度地含有生长因子产生增强物质。
另外，含有该组合物作为有效成分的生长因子产生增强剂也包括在本发明中。
本发明中，作为来源于植物的生长因子产生增强用组合物的形状，只要含有来源于植物的生长因子产生增强物质即可，并没有特别的限定，可以是粉状、固体状、液状中的任意一种形状。另外，也可以按照公知方法将该组合物造粒制成粒状的固态物质，作为本发明的生长因子产生增强用组合物使用。作为造粒方法没有特别的限定，例如转动造粒、搅拌造粒、流动床造粒、气流造粒、挤出造粒、压缩成型造粒、粉碎造粒、喷射造粒或喷雾造粒等。也可以将粉状的该组合物溶解于液体，例如水或醇等中，制成液状，作为本发明的生长因子产生增强用组合物使用。
本发明的有效成分如下所述确认没有特别的毒性。另外，不必担心产生副作用。因而，可以安全且适当地增强生长因子的产生。因此，含有该有效成分的本发明的治疗剂、预防剂、食品、饮料或饲料对于治疗或预防必需增强生长因子产生的疾病有效。
本发明中，所谓生长因子只要具有促进细胞生长的活性即可，并没有特别的限定，例如肝细胞增殖因子(HGF)、神经生长因子(NGF)、神经营养因子、上皮生长因子、来源于乳的生长因子、成纤维细胞生长因子、来源于脑的成纤维细胞生长因子、酸性成纤维细胞生长因子、来源于血小板的生长因子、血小板碱性蛋白、结缔组织活化肽、胰岛素样增殖因子、集落形成刺激因子、红细胞生成素、血小板生成素、T细胞生长因子、白介素类(例如白介素2、3、4、5、7、9、11、15)、B细胞生长因子、来源于软骨的因子、来源于软骨的生长因子、来源于骨的生长因子、骨骼生长因子、内皮细胞生长因子、来源于内皮细胞的生长因子、来源于眼的生长因子、来源于精巢的生长因子、来源于塞尔托利氏细胞的生长因子、乳腺刺激因子、来源于脊髓的生长因子、来源于巨噬细胞的生长因子、再循环间叶生长因子、性状转化增殖因子-α、性状转化增殖因子-β、肝素结合性EGF样增殖因子、双调蛋白、SDGF、β-动物纤维素(betacellulin)、表皮整联配体蛋白(epiregulin)、神经调节蛋白1，2，3、血管内皮增殖因子、神经营养蛋白、BDNF、NT-3、NT-4、NT-5、NT-6、NT-7、来源于神经胶质细胞株的神经营养因子、干细胞因子、midkine、pleiotrophin、Ephrin、血管形成素(Angiopoietin)、活化素、肿瘤坏死因子、干扰素类等。按照本发明，可以特别好地增强神经生长因子(NGF)或肝细胞增殖因子(HGF)的产生。
HGF是肝细胞的再生因子，而且也是使细胞运动亢进的因子以及肿瘤细胞障碍因子。HGF不仅促进肝细胞的增殖，而且促进胆管上皮细胞、肾小管上皮细胞、胃粘膜细胞等多种上皮细胞的增殖。另外，HGF显示诱导在上皮细胞的运动性亢进或者血管新生、上皮细胞的管腔形成中可见的形态形成等非常多样的生理活性。因此，通过增强HGF的产生，能够治疗或预防例如肝炎、重症肝炎、剧症肝炎、肝硬化、肝内胆汁淤滞等肝障碍、药物等引起的肾障碍、胃肠障碍、血管障碍、慢性肾炎、肺炎、创伤、糖尿病、癌等。
另一方面，NGF是维持神经细胞的生存和功能，或随着NGF的浓度梯度使神经细胞伸长的内因性生长因子，通过增强NGF的产生，可以治疗或预防阿耳茨海默病等老年痴呆症、末梢神经障碍、脑血管障碍、脑肿瘤、脑栓塞(脑尖)、头部外伤变性疾病、麻醉药物中毒等引起的需要修复或再生神经功能的疾病。另外，对于治疗或预防肌肉萎缩性侧索硬化症、药物障碍性末梢神经障碍、糖尿病性末梢神经障碍、帕金森氏病、感觉神经障碍、色素性视网膜症、黄斑变性等也有用。
作为本发明中必需增强生长因子产生的疾病，只要是通过给予本发明的治疗剂、预防剂等能够治疗或预防的疾病即可，并没有特别的限定，例如肝炎、重症肝炎、剧症肝炎、肝硬化、肝内胆汁淤滞等肝障碍、药物等引起的肾障碍、胃肠障碍、血管障碍、慢性肾炎、肺炎、创伤、糖尿病、癌、痴呆症、神经障碍、末梢神经病、脑缺血、糖尿病性神经病等。
本发明中使用的以含有来源于植物的生长因子产生增强用组合物为特征的必需增强生长因子产生的疾病的治疗剂或预防剂可以使用来源于植物的生长因子产生增强用组合物适当制备。
本发明的治疗剂或预防剂可以将本发明中使用的来源于植物的生长因子产生增强用组合物与公知的药用载体组合进行制剂。另外，也可以通过将生长因子产生增强物质与公知的药用载体组合使之制剂化而进行制备。
该制剂的制备通常可以将本发明中使用的来源于植物的生长因子产生增强用组合物与药学上允许的液状或固体状载体配合，根据需要加入溶剂、分散剂、乳化剂、缓冲剂、稳定剂、赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等，制成片剂、颗粒剂、散剂、粉末剂、胶囊剂等固体制剂、常规溶剂、悬浊剂、乳剂等液体制剂。另外，也可以制成使用前添加适当载体能够形成液状的干燥品以及其它外用剂。
药用载体可以根据治疗剂或预防剂的给药方式和剂型进行选择。口服制剂的场合，可以利用例如淀粉、乳糖、白糖、甘露醇、羧甲基纤维素、玉米淀粉、无机盐等。另外，配制口服剂时，也可以进一步配合粘结剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂、助流剂、矫味剂、着色剂、香料等。
另一方面，非口服剂的场合，可以按照常规方法使本发明的有效成分即来源于植物的生长因子产生增强用组合物溶解或悬浊于作为稀释剂的注射用蒸馏水、生理盐水、葡萄糖水溶液、注射用植物油、芝麻油、花生油、大豆油、玉米油、丙二醇、聚乙二醇等中，根据需要加入杀菌剂、稳定剂、等渗剂、止痛剂等进行配制。
本发明的治疗剂或预防剂可以根据制剂形态采用适当的给药途径给药。给药方法也没有特别的限定，可以内用、外用和注射。注射剂可以在如静脉内、肌肉内、皮下、皮内等给药，外用剂也包括栓剂等。
本发明的治疗剂或预防剂的给药量并不是一定的，可以根据其制剂形态、给药方法、使用目的以及适用其的患者的年龄、体重、症状适当设定，一般作为制剂中含有的本发明使用的来源于植物的生长因子产生增强用组合物的量，优选成人每天0.001～2000mg/kg体重，更优选0.01～200mg/kg体重。另外，作为该制剂中含有的来源于植物的生长因子产生增强物质的量，优选成人每天0.0001～2000mg/kg体重，更优选0.001～200mg/kg体重，进一步优选0.01～20mg/kg体重。
当然给药量根据种种条件变化，因此有时采用低于上述给药量的量就足够，或者有时必须超过上述范围。本发明的药物除了直接口服给药之外，也可以添加到任意的饮食品中使之日常摄取。另外，也可以使用本发明使用的来源于植物的生长因子产生增强用组合物作为生长因子产生增强用的饮食品的原料。
另外，作为本发明的另一种方式，还提供生长因子产生增强剂，其中含有本发明的作为有效成分的生长因子产生增强物质。作为该增强剂，可以是上述有效成分本身，另外也可以是含有上述有效成分的组合物。生长因子产生增强剂例如可以将上述有效成分以及能够用于与该有效成分相同用途的其它成分等配合，按照上述治疗剂或预防剂的制备方法制成通常使用的试剂形态。所述增强剂中上述有效成分的含量考虑该增强剂的给药方法、使用目的等，只要是能够得到本发明所需效果的量即可，没有特别的限定。另外，该增强剂的用量也是只要能够得到本发明所需的效果即可，没有特别的限定。特别是给予生物体使用时，优选以能够在上述治疗剂或预防剂中有效成分的给药量范围内给予有效成分的量进行使用。生长因子产生增强剂对于必需增强生长因子产生，特别是增强HGF或NGF产生的疾病中该生长因子的增强有用。另外，该增强剂对于生长因子的功能研究、有关生长因子的疾病用药物的筛选也有用。
而且，作为本发明的另一种方式，还提供将本发明的上述有效成分给予动物的生长因子产生增强方法。所述方法可以通过对预测必需增强生长因子产生或者必需增强生长因子产生的动物，给予上述有效成分进行，优选作为上述生长因子产生增强剂给予，通过这种给药可以增强生长因子的产生。有效成分的给药方法、给药量等可以与上述生长因子产生增强剂的场合同样。另外，在生长因子产生增强方法中，也可以使用本发明的治疗剂或预防剂、下述的食品、饮料或饲料。另外，作为“动物”，可以例举哺乳动物的人、狗、猫、牛、猪、马等，其中优选用于人。所述生长因子产生增强方法对于例如治疗或预防必需增强生长因子产生的疾病时增强该生长因子产生是有用的。另外，该增强方法对于生长因子的功能研究、有关生长因子的疾病用药物的筛选也是有用的。
其次，本发明使用的来源于植物的生长因子产生增强用组合物或者含有来源于植物的生长因子产生增强物质的食品、饮料或饲料由于其生长因子产生增强作用，对于对本发明使用的来源于植物的生长因子产生增强用组合物等显示敏感性的需要增强生长因子产生的疾病的症状改善、预防或者如下所述改善生物体的身体状况非常有用。
另外，本发明的方式中，“含有”这一用语包括含有、添加、稀释的含义，“含有”是指食品、饮料或饲料中含有本发明使用的有效成分这种方式，“添加”是指在食品、饮料或饲料的原料中添加本发明使用的有效成分这种方式，“稀释”是指在本发明使用的有效成分中添加食品、饮料或饲料的原料这种方式。
本发明的食品或饮料的制备方法没有特别的限定。可以按照配合、烹调、加工等一般食品、饮料所采用的制备方法进行，只要可以按照所述食品、饮料的制备方法进行制备，且制得的食品或饮料中含有具有生长因子产生增强作用的来源于植物的生长因子产生增强用组合物或来源于植物的生长因子产生增强物质即可。另外，在食品或饮料中混合植物，进行加热、放置等，根据需要除去植物的提取残渣得到的生长因子产生增强用食品或饮料也包括在本发明中。另外，含有包含生长因子产生增强物质的食品、饮料或其处理物的具有生长因子产生增强作用的食品或饮料也是本发明的食品或饮料。另外，作为处理物，例如具有生长因子产生增强作用的饮料的浓缩和稀释等。
作为其方式，优选包括啤酒类的生长因子产生增强用的食品、饮料或饲料，啤酒类包括啤酒、发泡酒、非酒精啤酒饮料、其浓缩物、其稀释物、含有蛇麻花提取物的饮料。
本发明的食品或饮料没有特别的限定，例如谷类加工品(小麦粉加工品、淀粉加工品、预混合加工品、面类、通心粉类、面包类、馅类、荞麦面类、麸子、米粉、粉条、包装饼等)，油脂加工品(增塑性油脂、油炸用油、色拉油、蛋黄酱类、调味汁等)，大豆加工品(豆腐类、豆酱、纳豆等)，肉类加工品(火腿、熏猪肉、压缩火腿、香肠等)，水产品(冷冻碎鱼肉、鱼糕、鱼卷、鱼肉山芋蒸饼、油炸鱼丸子、汆鱼丸子、饭卷、鱼肉火腿、香肠、干狐鲣、鱼子加工品、水产品罐头、煮的鱼贝等)，乳制品(原料乳、乳酪、酸乳、奶油、干酪、炼乳、乳粉、冰淇淋等)，蔬菜·果实加工品(馅类、果酱类、腌菜类、果类饮料、蔬菜饮料、混合饮料等)，糖果类(巧克力、饼干类、甜点类、蛋糕、年糕、米糕类、威士忌酒心巧克力等)，酒精饮料(日本酒、中国酒、葡萄酒、威士忌酒、日本蒸馏酒、伏特加酒、白兰地、杜松子酒、朗姆酒、啤酒、清凉醇饮料、果酒、利口酒等)，嗜好饮料(绿茶、红茶、乌龙茶、咖啡、清凉饮料、乳酸饮料等)，调料(酱油、辣酱油、醋、料酒等)，罐装、瓶装、袋装食品(牛肉盖饭、小锅什锦饭、红小豆饭、咖哩饭、其它各种烹调好的食品)，半干燥或浓缩食品(肝酱、其它涂抹果酱的食品、荞麦·面条的汁、浓缩的汤类)，干燥食品(速食面类、速食咖哩饭、速溶咖啡、果汁粉、汤粉、速食酱类、烹调好的食品、烹调好的饮料、烹调好的汤等)，冷冻食品(素烧、蒸鸡蛋羹、烤鳗鱼串、汉堡包、烧麦、饺子、各种面条、鸡尾酒等)，固态食品、液态食品(汤等)，香料类等农产·林产加工品、畜牧加工品、水产加工品等。
本发明的食品或饮料中来源于植物的具有生长因子产生增强作用的有效成分的含量没有特别的限定，可以从其功能和活性表达的观点出发适当选择，例如食品中优选0.000001重量％以上，更优选0.00001～100重量％，进一步优选0.0003～90重量％，例如饮料中优选0.000001重量％以上，更优选0.00001～100重量％，进一步优选0.0003～90重量％。另外，本发明的食品或饮料优选其中含有的有效成分例如成人每天最好摄取达到0.0001～100mg/kg体重，更优选0.001～10mg/kg体重，进一步优选0.01～1mg/kg体重。
另外，按照本发明还提供高浓度和/或高纯度地含有上述生长因子产生增强用组合物而成的食品或饮料。另外，“高浓度和/或高纯度地含有上述生长因子产生增强用组合物”是指本发明方式的食品或饮料中含有生长因子产生增强用组合物达到高浓度和/或高纯度含有来源于生长因子产生增强用组合物的生长因子产生增强物质的程度，或者从表现出生长因子产生增强作用的观点来看，达到与高浓度和/或高纯度含有生长因子产生增强物质相匹敌的程度。
在该食品或饮料的制备中，作为生长因子产生增强用组合物，可以使用例如含有生长因子产生增强物质的植物提取物，例如从伞形科植物提取物、菊科植物提取物、百合科植物提取物、银杏科植物提取物、禾本科植物提取物、蔷薇科植物提取物、桑科植物提取物、豆科植物提取物、椴科植物提取物、十字花科植物提取物以及姜科植物提取物中选择的提取物，也可以使用作为有效成分优选含有从绿原酸、二咖啡酰奎尼酸、咖啡酰奎尼酸、异东方蓼黄素、safflomin A、愈创内酯、黄香独活内酯、3’-O-β-D-吡喃葡糖酰凯林内酯、7-O-β-D-吡喃葡萄糖基氧-8-异戊烯基香豆素、咖啡酸甲酯、咖啡酸乙酯、8-羧基-3-羟基-5-甲氧基-2-二甲基色满、7-β-D-吡喃葡萄糖基氧-6-异戊烯基香豆素、4’-O-当归酰基-3’-O-〔6-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)-β-D-吡喃葡萄糖基〕-凯林内酯、异黄腐酚、黄腐酚B、黄腐酚D以及黄腐酚中选择的1种以上化合物的组合物，例如来源于植物的提取物。
本发明提供高浓度和/或高纯度地含有来源于植物的生长因子产生增强物质的健康增强用食品或饮料，通过日常摄取该食品或饮料，能够增强生物体内的生长因子产生，维持或增强健康。
也就是说，在本发明的方式中，提供一种食品或饮料，其特征在于，高浓度和/或高纯度地含有来源于植物的生长因子产生增强物质。
本发明的方式中，作为来源于植物的生长因子产生增强物质，优选从绿原酸、二咖啡酰奎尼酸、咖啡酰奎尼酸、异东方蓼黄素、safflomin A、愈创内酯、黄香独活内酯、3’-O-β-D-吡喃葡糖酰凯林内酯、7-O-β-D-吡喃葡萄糖基氧-8-异戊烯基香豆素、咖啡酸甲酯、咖啡酸乙酯、8-羧基-3-羟基-5-甲氧基-2-二甲基色满、7-β-D-吡喃葡萄糖基氧-6-异戊烯基香豆素、4’-O-当归酰基-3’-O-〔6-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)-β-D-吡喃葡萄糖基〕-凯林内酯、异黄腐酚、黄腐酚B、黄腐酚D以及黄腐酚中选择的1种以上的化合物，提供高浓度和/或高纯度地含有该化合物的食品或饮料。
例如，在本发明中，作为含有HGF产生增强物质的组合物使用竹提取物时，优选按照干燥重量换算在食品或饮料中含有0.00001重量％以上。竹提取物可以通过例如在温水中保持竹的叶进行制备。另外，测定提取物中异东方蓼黄素的含量，也可以在食品或饮料中含有其有效量。作为异东方蓼黄素的含量，在食品或饮料中优选含有0.01重量％以上。
在本发明中，作为含有HGF产生增强物质的组合物使用洋葱提取物时，优选按照干燥重量换算在食品或饮料中含有洋葱薄皮的热水提取物，例如将5g洋葱薄皮在100ml水中100℃下加热处理15分钟得到的提取物1重量％以上。
在本发明中，作为含有HGF产生增强物质的组合物使用银杏提取物时，优选按照干燥重量换算在食品或饮料中含有银杏茶叶的热水提取物，例如将3g银杏茶叶在200ml水中100℃下加热处理15分钟得到的提取物5重量％以上。
在本发明中，作为含有HGF产生增强物质的组合物使用银杏提取物时，优选按照干燥重量换算在食品或饮料中含有银杏茶叶的热水提取物，例如将3g银杏茶叶在200ml水中100℃下加热处理15分钟得到的提取物5重量％以上。
在本发明中，作为含有HGF产生增强物质的组合物使用艾蒿提取物时，优选按照提取干燥物换算在食品或饮料中含有0.0001重量％以上。例如可以将艾蒿10g在150ml水中60℃下处理1小时制备提取物。另外，使用艾蒿提取物中的3，5-二咖啡酰奎尼酸作为HGF产生增强物质时，优选食品或饮料中含有3，5-二咖啡酰奎尼酸0.0005重量％以上。
另外，使用艾蒿提取物中的绿原酸作为HGF产生增强物质时，优选在食品或饮料中含有绿原酸0.001重量％以上。
在本发明中，使用来源于当归的绿原酸作为HGF产生增强物质时，优选在食品或饮料中含有0.001重量％以上。
在本发明中，作为含有HGF产生增强物质的组合物使用菊花提取物时，优选按照干燥重量换算在食品或饮料中含有菊花的热水提取物，例如将10g菊花在100ml水中60℃下加热处理2小时得到的提取物1重量％以上。
在本发明中，作为含有HGF产生增强物质的组合物使用紫郁金提取物时，优选按照干燥重量换算在食品或饮料中含有紫郁金的温水提取物，例如将20g紫郁金在100ml水中60℃下加热处理2小时得到的提取物0.001重量％以上。
在本发明中，作为含有HGF产生增强物质的组合物使用洋李提取物时，优选按照干燥重量换算在食品或饮料中含有洋李的乙醇提取物，例如用100ml乙醇提取处理60g洋李得到的提取物0.1重量％以上。另外，使用提取物中的5-咖啡酰奎尼酸或4-咖啡酰奎尼酸作为HGF产生增强物质时，优选在食品或饮料中含有5-咖啡酰奎尼酸或4-咖啡酰奎尼酸0.01重量％以上。
在本发明中，作为含有HGF产生增强物质的组合物使用花茎甘蓝提取物时，优选按照干燥重量换算在食品或饮料中含有花茎甘蓝的50％乙醇提取物，例如用100ml的50％乙醇提取处理100g花茎甘蓝得到的提取物0.2重量％以上。
在本发明中，作为含有HGF产生增强物质的组合物使用春菊提取物时，优选按照干燥重量换算在食品或饮料中含有春菊的温水提取物，例如将10g春菊粉碎物用乙醇洗净，用100ml水在60℃下提取处理1小时得到的提取物0.1重量％以上。
另外，也优选在食品或饮料中含有春菊的乙醇提取物，例如用80％乙醇1升将春菊50g匀化得到的提取物0.1重量％以上。另外，含有提取物中的3，5-二咖啡酰奎尼酸时，在食品或饮料中优选为0.0005重量％以上。
在本发明中，使用啤酒类，例如啤酒、发泡酒、非酒精啤酒饮料作为含有HGF产生增强物质的组合物时，优选按照干燥重量换算在食品或饮料中含有2重量％以上。
在本发明中，作为含有HGF产生增强物质的组合物使用大豆提取物时，可以使用来源于大豆的物质的温水提取物，例如分别用乙醇将大豆胚芽、大豆种皮或大豆粗粉洗净后，用水在60℃下处理2小时得到的提取物，而且可以使用将该提取物进一步分级成乙醇可溶级分和乙醇不溶级分得到的物质。
例如用乙醇洗净大豆胚芽粉碎物10g，用水200ml在60℃下处理2小时，向得到的提取液中加入2.5倍量的乙醇，可以分成乙醇可溶级分和乙醇不溶级分。在食品或饮料中按照干燥重量换算优选含有该乙醇可溶级分0.02重量％以上，优选含有乙醇不溶级分0.01重量％以上。
例如用乙醇洗净大豆种皮粉碎物10g，用水70ml在60℃下处理2小时，向得到的提取物中加入2.5倍量的乙醇，可以分成乙醇可溶级分和乙醇不溶级分。在食品或饮料中按照干燥重量换算优选含有该乙醇可溶级分0.01重量％以上，优选含有乙醇不溶级分0.003重量％以上。
例如用乙醇洗净大豆粗粉粉碎物10g，用水100ml在60℃下处理2小时，向得到的提取液中加入2.5倍量的乙醇，可以分成乙醇可溶级分和乙醇不溶级分。在食品或饮料中按照干燥重量换算优选含有该乙醇可溶级分0.01重量％以上，优选含有乙醇不溶级分0.005重量％以上。
在本发明中，作为含有HGF产生增强物质的组合物使用mulukhiya提取物时，可以使用向mulukhiya叶的温水提取物中，例如用乙醇洗净10g的mulukhiya粉末后，用80ml的水在60℃下提取处理2小时得到的提取物中加入2.5倍量的乙醇，分成乙醇可溶级分和乙醇不溶级分而得到的物质。在食品或饮料中按照干燥重量换算优选含有该乙醇可溶级分0.0002重量％以上，优选含有乙醇不溶级分0.0004重量％以上。
在本发明中，作为含有HGF产生增强物质的组合物使用米糠提取物时，可以使用向米糠的温水提取物中，例如用乙醇洗净10g的米糠后，用100ml的水在60℃下提取处理2小时得到的提取物中加入2.5倍量的乙醇，分成乙醇可溶级分和乙醇不溶级分而得到的物质。在食品或饮料中按照干燥重量换算优选含有该乙醇可溶级分0.1重量％以上。
在本发明中，作为含有NGF产生增强物质的组合物使用红花色素时，在食品或饮料中优选含有0.1重量％以上。
在本发明中，使用来源于红花的safflomin A作为NGF产生增强物质时，在食品或饮料中优选含有0.3重量％以上。
在本发明中，作为含有NGF产生增强物质的组合物使用菊花提取物时，优选按照干燥重量换算在食品或饮料中含有菊花的温水提取物，例如将10g菊花在100ml水中60℃下加热处理2小时得到的提取物2重量％以上。另外，在本发明中使用来源于菊花的愈创内酯作为NGF产生增强物质时，优选在食品或饮料中含有0.002重量％以上。
在本发明中，作为含有NGF产生增强物质的组合物使用当归提取物时，优选按照干燥重量换算在食品或饮料中含有菊花的温水提取物，例如将10g当归叶茎部在200ml水中60℃下加热处理2小时得到的提取物0.04重量％以上。在本发明中，作为含有NGF产生增强物质的组合物使用当归根部提取物时，优选按照干燥重量换算在食品或饮料中含有例如将10g当归根部在200ml水中60℃下加热处理2小时得到的提取物0.06重量％以上。
在本发明中，使用来源于当归的黄香独活内酯作为NGF产生增强物质时，优选在食品或饮料中含有0.001重量％以上。
在本发明中，使用来源于当归的3’-O-β-D-吡喃葡糖酰凯林内酯作为NGF产生增强物质时，优选在食品或饮料中含有0.005重量％以上。
在本发明中，使用来源于当归的7-O-β-D-吡喃葡萄糖基氧-8-异戊烯基香豆素作为NGF产生增强物质时，优选在食品或饮料中含有0.003重量％以上。
在本发明中，使用来源于当归的咖啡酸甲酯作为NGF产生增强物质时，优选在食品或饮料中含有0.002重量％以上。
在本发明中，使用来源于当归的8-羧基-3-羟基-5-甲氧基-2-二甲基色满作为NGF产生增强物质时，优选在食品或饮料中含有0.0003重量％以上。
在本发明中，使用来源于当归的7-β-D-吡喃葡萄糖基氧-6-异戊烯基香豆素作为NGF产生增强物质时，优选在食品或饮料中含有0.03重量％以上。
在本发明中，使用来源于当归的4’-O-当归酰基-3’-O-〔6-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)-β-D-吡喃葡萄糖基〕-凯林内酯作为NGF产生增强物质时，优选在食品或饮料中含有0.04重量％以上。
在本发明中，使用来源于当归的咖啡酸乙酯作为NGF产生增强物质时，优选在食品或饮料中含有0.04重量％以上。
在本发明中，使用洋葱薄皮提取物作为NGF产生增强物质时，优选按照干燥重量换算在食品或饮料中含有洋葱薄皮的乙醇提取物，例如用乙醇500ml提取洋葱薄皮25g得到的提取物0.01重量％以上。
在本发明中，作为含有NGF产生增强物质的组合物使用银杏茶叶提取物时，优选按照干燥重量换算在食品或饮料中含有银杏茶叶的热水提取物，例如将银杏茶叶3g在水200ml中100℃下提取1小时得到的提取物0.07重量％以上。
在本发明中，使用蔷薇花提取物作为NGF产生增强物质时，优选按照干燥重量换算在食品或饮料中含有蔷薇花的温水提取物，例如将蔷薇花2g在水40ml中60℃下提取1小时得到的提取物0.008重量％以上。
在本发明中，使用来源于蛇麻花的黄腐酚作为NGF产生增强物质时，优选在食品或饮料中含有0.0003重量％以上。
在本发明中，作为含有NGF产生增强物质的组合物使用蛇麻花提取物时，优选按照干燥重量换算在食品或饮料中含有0.0001重量％以上，更优选含有0.001重量％以上。
在本发明中，使用黄腐酚B、黄腐酚D作为NGF产生增强物质时，优选在食品或饮料中分别含有0.002重量％以上。
在本发明中，使用异黄腐酚作为NGF产生增强物质时，优选在食品或饮料中分别含有0.008重量％以上。
在本发明中，作为含有NGF产生增强物质的组合物使用啤酒类，例如啤酒、发泡酒、非酒精啤酒饮料时，优选按照干燥重量换算在食品或饮料中含有2重量％以上。
在本发明中，作为含有NGF产生增强物质的组合物使用蛇麻花提取物时，优选在食品或饮料中含有蛇麻花提取物，使之优选达到含有黄腐酚0.000004重量％以上，优选含有异黄腐酚0.00013重量％以上。
另外，在本发明中，作为含有NGF产生增强物质的组合物使用蛇麻花提取物时，优选按照干燥重量换算在食品或饮料中含有蛇麻花的乙醇提取物，例如用1升乙醇提取蛇麻花干燥粉碎物50g得到的提取物0.0001重量％以上，更优选0.001重量％以上。
在本发明中，作为含有NGF产生增强物质的组合物使用紫郁金提取物时，优选按照干燥重量换算在食品或饮料中含有紫郁金的温水提取物，例如将紫郁金5g用水25ml在60℃下提取2小时得到的提取物0.06重量％以上。
在本发明中，作为含有NGF产生增强物质的组合物使用大豆提取物时，可以使用来源于大豆的物质的温水提取物，例如分别用乙醇洗净大豆胚芽、大豆种皮或大豆粗粉后，用水在60℃下处理2小时得到的提取物，而且可以使用将该提取物进一步分级成乙醇可溶级分和乙醇不溶级分得到的物质。
例如用乙醇将大豆胚芽粉碎物10g洗净，用水200ml在60℃下处理2小时，向得到的提取物中加入2.5倍量的乙醇，可以分成乙醇可溶级分和乙醇不溶级分。在食品或饮料中按照干燥重量换算优选含有该乙醇可溶级分0.5重量％以上，优选含有乙醇不溶级分0.3重量％以上。
例如用乙醇将大豆种皮粉碎物10g洗净，用水70ml在60℃下处理2小时，向得到的提取物中加入2.5倍量的乙醇，可以分成乙醇可溶级分和乙醇不溶级分。在食品或饮料中按照干燥重量换算优选含有该乙醇可溶级分0.3重量％以上，优选含有乙醇不溶级分0.06重量％以上。
例如用乙醇将大豆粗粉粉碎物10g洗净，用水100ml在60℃下处理2小时，向得到的提取物中加入2.5倍量的乙醇，可以分成乙醇可溶级分和乙醇不溶级分。在食品或饮料中按照干燥重量换算优选含有该乙醇可溶级分0.3重量％以上，优选含有乙醇不溶级分0.006重量％以上。
在本发明中，作为含有NGF产生增强物质的组合物使用mulukhiya提取物时，可以使用向mulukhiya叶的温水提取物中，例如用乙醇将10g的mulukhiya粉末洗净后，用80ml的水在60℃下提取处理2小时得到的提取物中加入2.5倍量的乙醇，分成乙醇可溶级分和乙醇不溶级分而得到的物质。在食品或饮料中按照干燥重量换算优选含有该乙醇可溶级分0.05重量％以上，优选含有乙醇不溶级分0.0005重量％以上。
在本发明中，作为含有NGF产生增强物质的组合物使用米糠提取物时，可以使用向米糠的温水提取物中，例如用乙醇将10g的米糠洗净后，用100ml的水在60℃下提取处理2小时得到的提取物中加入2.5倍量的乙醇，分成乙醇可溶级分和乙醇不溶级分而得到的物质。在食品或饮料中按照干燥重量换算优选含有该乙醇可溶级分0.05重量％以上，优选含有乙醇不溶级分0.05重量％以上。
例如，本发明的HGF产生增强用的食品或饮料可以按照如下所述的公知方法进行制备。
(1)向乌龙茶叶加入提取溶剂进行提取，通过将提取物与乙醇及其它成分混合制备含酒精饮料。例如可以配制添加该提取物形成该提取物的100倍稀释液得到的含酒精饮料。
(2)向竹叶粉末加入提取溶剂(例如水)进行提取，制备提取物的冷冻干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如通过添加该干燥物达到0.1μg/ml，可以制备含有异东方蓼黄素100μg/ml的含酒精饮料。
(3)向洋葱薄皮加入提取溶剂(例如水)进行提取，使用提取物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该提取物形成该提取物的100倍稀释液得到的含酒精饮料。
(4)向银杏茶叶加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如100℃下提取15分钟)，制备提取物的冷冻干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该干燥物形成该干燥物的100倍稀释液得到的含酒精饮料。
(5)向艾蒿干燥品加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取1小时)，使用提取物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加由该提取物得到的3，5-二咖啡酰奎尼酸达到5μg/ml得到的含酒精饮料。另外，也可以配制添加由该提取物得到的绿原酸达到40μg/ml得到的含酒精饮料。
(6)向当归(叶茎部)干燥品加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取1小时)，使用提取物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加由该提取物得到的绿原酸达到10μg/ml得到的含酒精饮料。
(7)向菊花干燥物加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取2小时)，使用提取物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该提取物形成该提取物的100倍稀释液得到的含酒精饮料。
(8)向紫郁金干燥品加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取2小时)，制备提取物的冷冻干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该干燥物达到10μg/ml得到的含酒精饮料。
(9)向洋李加入提取溶剂(例如乙醇)进行匀化，通过过滤制备滤液，使用得到的提取物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该提取物形成该提取物的1000倍稀释液得到的含酒精饮料。另外，也可以配制添加由该提取物得到的5-咖啡酰奎尼酸和4-咖啡酰奎尼酸分别达到100μg/ml得到的含酒精饮料。
(10)向花茎甘蓝加入提取溶剂(例如50％乙醇水溶液)进行匀化，通过过滤制备滤液，浓缩该滤液。使用得到的浓缩物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该浓缩物形成该浓缩液的1000倍稀释液得到的含酒精饮料。
(11)将春菊的冷冻干燥物粉碎，用有机溶剂(例如乙醇)洗涤后，加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取1小时)，使用提取物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该提取物形成该提取物的1000倍稀释液得到的含酒精饮料。
(12)向春菊加入提取溶剂(例如80％乙醇)进行匀化，通过过滤制备滤液，浓缩该滤液。使用得到的浓缩物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该提取物形成该提取物的1000倍稀释液得到的含酒精饮料。另外，也可以制备添加由该提取物得到的3，5-二咖啡酰奎尼酸达到10μg/ml得到的含酒精饮料。
(13)将啤酒浓缩，使用该浓缩物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该浓缩物形成该浓缩物的100倍稀释液得到的含酒精饮料。
(14)将非酒精啤酒饮料浓缩，使用该浓缩物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该浓缩物形成该浓缩物的100倍稀释液得到的含酒精饮料。
(15)用有机溶剂(例如乙醇)将大豆胚芽粉碎物洗净后，加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取2小时)，得到提取物。将提取物过滤，得到滤液后，向滤液中加入有机溶剂(例如2.5倍量的乙醇)，分成有机溶剂可溶级分和有机溶剂不溶级分，分别制备各种级分的干燥物。使用该干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加乙醇可溶级分的干燥物达到200μg/ml得到的含酒精饮料。另外，也可以配制添加乙醇不溶级分的干燥物达到130μg/ml得到的含酒精饮料。
(16)用有机溶剂(例如乙醇)将大豆种皮粉碎物洗净后，加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取2小时)，得到提取物。将提取物过滤，得到滤液后，向滤液中加入有机溶剂(例如2.5倍量的乙醇)，分成有机溶剂可溶级分和有机溶剂不溶级分，分别制备各种级分的干燥物。使用该干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加乙醇可溶级分的干燥物达到130μg/ml得到的含酒精饮料。另外，也可以配制添加乙醇不溶级分的干燥物达到30μg/ml得到的含酒精饮料。
(17)用有机溶剂(例如乙醇)将大豆粗粉粉碎物洗净后，加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取2小时)，得到提取物。将提取物过滤，得到滤液后，向滤液中加入有机溶剂(例如2.5倍量的乙醇)，分成有机溶剂可溶级分和有机溶剂不溶级分，分别制备各种级分的干燥物。使用该干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加乙醇可溶级分的干燥物达到100μg/ml得到的含酒精饮料。另外，也可以配制添加乙醇不溶级分的干燥物达到60μg/ml得到的含酒精饮料。
(18)用有机溶剂(例如乙醇)将mulukhiya叶粉末洗净后，加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取2小时)，得到提取物。将提取物过滤，得到滤液后，向滤液中加入有机溶剂(例如2.5倍量的乙醇)，分成有机溶剂可溶级分和有机溶剂不溶级分，分别制备各种级分的干燥物。使用该干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加乙醇可溶级分的干燥物达到2μg/ml得到的含酒精饮料。另外，也可以配制添加乙醇不溶级分的干燥物达到4μg/ml得到的含酒精饮料。
(19)用有机溶剂(例如乙醇)将米糠洗净后，加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取2小时)，得到提取物。将提取物过滤，得到滤液后，向滤液中加入有机溶剂(例如2.5倍量的乙醇)，得到有机溶剂可溶级分，制备其干燥物。使用该干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加乙醇可溶级分的干燥物达到1mg/ml得到的含酒精饮料。
(20)按照常规方法对上述(1)～(19)记载的含酒精饮料进行碳酸饱和，可以制备发泡型饮料。另外，对于每种饮料，可以制备含有有效成分为上述记载的饮料的20倍量的非酒精型饮料。高浓度和/或高纯度地含有生长因子产生增强物质的这些饮料可以显示较高的HGF产生增强作用，因而优选。
另外，例如本发明的NGF产生增强用的食品或饮料可以按照如下所述的公知方法进行制备。
(1)按照常规方法，将葡萄果汁与乙醇及其它成分混合，制备含酒精饮料。例如可以配制添加该葡萄果汁形成该果汁的6倍稀释液得到的含酒精饮料。
(2)使用红花黄色色素，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以制备添加该色素达到1.25mg/ml得到的富含safflomin A的含酒精饮料。
另外，向红花干燥物加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取2小时)，制备提取物的冷冻干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该干燥物使该干燥物中含有的safflomin A的量达到3mg/ml而得到的含酒精饮料。
(3)向菊花干燥物加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取2小时)，制备提取物的冷冻干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该干燥物达到20mg/ml得到的含酒精饮料。另外，也可以配制添加该干燥物使该干燥物中含有的愈创内酯的量达到20μg/ml而得到的含酒精饮料。
(4)向当归干燥物(叶茎部)加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取2小时)，制备提取物的冷冻干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该干燥物达到400μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，向当归干燥物(根部)加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取2小时)，制备提取物的冷冻干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该干燥物达到600μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，可以配制添加该干燥物使该干燥物中含有的黄香独活内酯的量达到10μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，可以配制添加该干燥物使该干燥物中含有的3’-O-β-D-吡喃葡糖酰凯林内酯的量达到50μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，可以配制添加该干燥物使该干燥物中含有的7-O-β-D-吡喃葡萄糖基氧-8-异戊烯基香豆素的量达到30μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，可以配制添加该干燥物使该干燥物中含有的咖啡酸甲酯的量达到20μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，可以配制添加该干燥物使该干燥物中含有的8-羧基-3-羟基-5-甲氧基-2-二甲基色满的量达到3μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，可以配制添加该干燥物使该干燥物中含有的7-β-D-吡喃葡萄糖基氧-6-异戊烯基香豆素的量达到300μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，可以配制添加该干燥物使该干燥物中含有的4’-O-当归酰基-3’-O-〔6-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)-β-D-吡喃葡萄糖基〕-凯林内酯的量达到400μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，可以配制添加该干燥物使该干燥物中含有的咖啡酸乙酯的量达到30μg/ml得到的含酒精饮料。
(5)向洋葱薄皮加入提取溶剂(例如95体积％乙醇)进行提取，制备提取物的冷冻干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该干燥物达到100μg/ml得到的含酒精饮料。
(6)向银杏茶叶加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如100℃下提取1小时)，制备提取物的冷冻干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该干燥物达到700μg/ml得到的含酒精饮料。
(7)向蔷薇花加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取1小时)，制备提取物的冷冻干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该干燥物达到80μg/ml得到的含酒精饮料。
(8)按照常规方法，使用蛇麻花提取物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该蛇麻花提取物使该蛇麻花提取物中含有的黄腐酚的量达到3μg/ml得到的含酒精饮料。
(9)按照常规方法，使用蛇麻花提取物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该蛇麻花提取物使干燥重量达到20μg/ml得到的含酒精饮料。
(10)按照常规方法，使用蛇麻花提取物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该蛇麻花提取物使该蛇麻花提取物中含有的黄腐酚B和黄腐酚D的总量达到20μg/ml得到的含酒精饮料。
(11)按照常规方法，使用蛇麻花提取物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该蛇麻花提取物使该蛇麻花提取物中含有的异黄腐酚的量达到80μg/ml得到的含酒精饮料。
(12)将啤酒浓缩，使用该浓缩物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该浓缩物形成该浓缩物的10倍稀释液得到的含酒精饮料。
(13)将非酒精啤酒饮料浓缩，使用该浓缩物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该浓缩物形成该浓缩物的10倍稀释液得到的含酒精饮料。
(14)按照常规方法，使用蛇麻花提取物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该蛇麻花提取物使该蛇麻花提取物中含有的黄腐酚的量达到0.04μg/ml，并使异黄腐酚的量达到1.3μg/ml而得到的含酒精饮料。
另外，也可以配制添加该蛇麻花提取物使蛇麻花提取物中含有的黄腐酚的量达到0.9μg/ml，并使异黄腐酚的量达到4μg/ml而得到的含酒精饮料。
(15)将蛇麻花干燥物粉碎，加入提取溶剂(例如乙醇)进行提取(例如60℃下提取1小时)，将得到的提取物浓缩，使用该浓缩物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该浓缩物使干燥重量达到20μg/ml得到的含酒精饮料。
(16)向紫郁金粉碎物加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取2小时)，制备提取物的冷冻干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加该干燥物达到600μg/ml得到的含酒精饮料。
(17)用有机溶剂(例如乙醇)将大豆胚芽粉碎物洗净后，加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取2小时)，得到提取物。将提取物过滤，得到滤液后，向滤液中加入有机溶剂(例如2.5倍量的乙醇)，分成有机溶剂可溶级分和有机溶剂不溶级分，分别制备各种级分的干燥物。使用该干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加乙醇可溶级分的干燥物达到5mg/ml得到的含酒精饮料。另外，也可以配制添加乙醇不溶级分的干燥物达到3mg/ml得到的含酒精饮料。
(18)用有机溶剂(例如乙醇)将大豆种皮粉碎物洗净后，加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取2小时)，得到提取物。将提取物过滤，得到滤液后，向滤液中加入有机溶剂(例如2.5倍量的乙醇)，分成有机溶剂可溶级分和有机溶剂不溶级分，分别制备各种级分的干燥物。使用该干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加乙醇可溶级分的干燥物达到3mg/ml得到的含酒精饮料。另外，也可以配制添加乙醇不溶级分的干燥物达到600μg/ml得到的含酒精饮料。
(19)用有机溶剂(例如乙醇)将大豆粗粉粉碎物洗净后，加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取2小时)，得到提取物。将提取物过滤，得到滤液后，向滤液中加入有机溶剂(例如2.5倍量的乙醇)，分成有机溶剂可溶级分和有机溶剂不溶级分，分别制备各种级分的干燥物。使用该干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加乙醇可溶级分的干燥物达到3mg/ml得到的含酒精饮料。另外，也可以配制添加乙醇不溶级分的干燥物达到60μg/ml得到的含酒精饮料。
(20)用有机溶剂(例如乙醇)将mulukhiya叶粉末洗净后，加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取2小时)，得到提取物。将提取物过滤，得到滤液后，向滤液中加入有机溶剂(例如2.5倍量的乙醇)，分成有机溶剂可溶级分和有机溶剂不溶级分，分别制备各种级分的干燥物。使用该干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加乙醇可溶级分的干燥物达到500μg/ml得到的含酒精饮料。另外，也可以配制添加乙醇不溶级分的干燥物达到5μg/ml得到的含酒精饮料。
(21)用有机溶剂(例如乙醇)将米糠洗净后，加入提取溶剂(例如水)进行提取(例如60℃下提取2小时)，得到提取物。将提取物过滤，得到滤液后，向滤液中加入有机溶剂(例如2.5倍量的乙醇)，分成有机溶剂可溶级分和有机溶剂不溶级分，分别制备各种级分的干燥物。使用该干燥物，与上述(1)同样制备含酒精饮料。例如可以配制添加乙醇可溶级分的干燥物达到500μg/ml得到的含酒精饮料。另外，也可以配制添加乙醇不溶级分的干燥物达到500μg/ml得到的含酒精饮料。
(22)按照常规方法对上述(1)～(21)记载的含酒精饮料进行碳酸饱和，可以制备发泡型饮料。另外，对于每种饮料，可以制备含有有效成分为上述饮料的20倍量的非酒精型饮料。高浓度和/或高纯度地含有生长因子产生增强物质的这些饮料可以显示较高的NGF产生增强作用，因而优选。
如上所述，按照本发明可以提供以来源于植物的HGF产生增强物质、NGF产生增强物质作为有效成分的HGF产生增强用食品或饮料、NGF产生增强用食品或饮料。
例如，按照本发明，可以提供含有包含NGF产生增强物质有效量的食品或饮料、蛇麻花提取物，且在食品或饮料中黄腐酚的含量优选为0.00004重量％以上和/或异黄腐酚的含量优选为0.00013重量％以上的NGF产生增强用食品或饮料，该食品或饮料对于需要产生NGF的疾病，例如帕金森氏病、老年性痴呆，如阿耳茨海默症、脑血管性痴呆等的症状改善或疾病的预防非常有用。
另外，按照本发明还提供富含来源于植物的具有生长因子产生增强作用的有效成分的含酒精饮料。本说明书中，含酒精饮料是指含有乙醇的饮料。含酒精饮料中的乙醇含量例如是0.1～50体积％。另外，也提供使用本发明中的含酒精饮料得到的食品，例如威士忌酒心巧克力。
作为含酒精饮料，优选例如高浓度和/或高纯度地含有来源于植物的具有生长因子产生增强作用的有效成分的含酒精饮料，例如添加了来源于植物的具有生长因子产生增强作用的有效成分的日本酒、合成清酒、中国酒、烧酒、葡萄酒、威士忌酒、日本蒸馏酒、伏特加酒、白兰地、杜松子酒、朗姆酒、啤酒、发泡酒、清凉醇饮料、酸味饮料、鸡尾酒、果酒、利口酒等。
上述含酒精饮料的乙醇浓度通常优选0.1～12体积％，更优选0.5～8体积％，更优选1～6体积％。使用的酒精没有特别的限定，例如可以分别单独使用或同时使用酿造用酒精、烈酒类(朗姆酒、伏特加酒、杜松子酒等)、威士忌酒、白兰地或日本蒸馏酒等。
另外，该含酒精饮料可以通过将来源于植物的具有生长因子产生增强作用的有效成分与乙醇、根据需要的其他成分混合而制备。另外，通过将所需的植物浸渍于乙醇浓度在上述所需范围内的含酒精饮料中，由该植物提取具有生长因子产生增强作用的有效成分，也可以制备本发明的含酒精饮料。
本发明的含酒精饮料是生长因子产生增强用饮料。制备本发明的该饮料可以采用以前用于制备的原材料和方法。例如作为原材料，可以使用甜味剂、着色剂、酸味剂、调味品、乳化剂、维生素强化剂、食物纤维等功能性食品材料，香辛料、香料、增粘剂、矿物等食品材料或食品添加剂等能够饮食的物质。
本发明的含酒精饮料的pH可以在通常的食品所采用的范围内选择，通常可以在pH2～7的范围内选择。本发明的清凉醇饮料有无碳酸饱和是任意的。进行碳酸饱和时，产品的气体体积优选为1以上，更优选1.3～3的范围。另外，本发明的含酒精饮料可以任意添加果汁、蔬菜汁、果肉、蔬菜片。
另外，按照本发明还可以提供食品或饮料中含有黄腐酚0.0003重量％以上的生长因子产生增强用食品或饮料。
虽然以前的含蛇麻花提取物(extractive)的饮料即啤酒、非酒精型啤酒中含有本发明使用的黄腐酚，但A社制啤酒中的黄腐酚含量为0.73μg/100ml，B社制啤酒中的黄腐酚含量为2.1μg/100ml，C社制啤酒中的黄腐酚含量为0.70μg/100ml，任何一种啤酒均不能相当于本发明的含有黄腐酚0.00007重量％以上的饮料。
作为本发明的食品或饮料中含有黄腐酚0.00007重量％以上的食品或饮料的制备方法，并没有限定，例如可以在啤酒中添加含有黄腐酚的蛇麻花提取物，也可以使用非酒精型啤酒作为原料，还可以使用含有黄腐酚的蛇麻花提取物作为清凉醇饮料、嗜好饮料等的制造原料。使用蛇麻花本身代替蛇麻花提取物当然也在本发明的范围内。另外，也可以使用蛇麻花提取物自身作为本发明的生长因子产生增强用组合物。
本发明的食品或饮料中的黄腐酚含量可以根据生理学效果和功能结果进行确定，在食品或饮料中优选含有0.00007重量％以上，通常0.0001～0.001重量％的范围较为合适。
另外，本发明还提供含有包含生长因子产生增强物质的食品、饮料和其处理物作为有效成分的生长因子产生增强用食品或饮料。作为包含生长因子产生增强物质的食品或饮料，例如啤酒类。作为啤酒类，例如啤酒、发泡酒、非酒精啤酒饮料、其浓缩物、其稀释物、含有蛇麻花提取物的饮料，例如能够将啤酒、发泡酒作为生长因子产生增强用的饮料，也可以作为食品或饮料的原料。另外，也能够以啤酒类的处理物，例如浓缩物或稀释物作为食品或饮料的原料。
本发明还涉及含有蛇麻花提取物的生长因子产生增强用食品或饮料。作为蛇麻花提取物可以使用市售的蛇麻花提取物，通常在食品或饮料中优选含有0.0001重量％以上，更优选含有0.002～0.02重量％。均可以按照本发明公开的方法(例如实施例4-(1)和实施例13)测定蛇麻花提取物中的生长因子产生增强活性，从功能和生理活性的观点出发，确定蛇麻花提取物的含量，制备本发明的食品或饮料。
按照本发明还提供含有蛇麻花提取物，且在食品或饮料中优选含有黄腐酚0.00000006重量％以上，优选含有异黄腐酚0.000005重量％以上的生长因子产生增强用食品或饮料。
另外，本发明还提供含有蛇麻花提取物，且在食品或饮料中优选含有黄腐酚0.0000032重量％以上，优选含有异黄腐酚0.00013重量％以上的浓厚型生长因子产生增强用食品或饮料。
而且，本发明还提供含有蛇麻花提取物，且在食品或饮料中优选含有黄腐酚0.00007重量％以上，优选含有异黄腐酚0.0004重量％以上的食品或饮料，该食品或饮料具有高活性的生长因子产生增强作用。
作为本发明的食品或饮料，含有具有生长因子产生增强作用的来源于植物的生长因子产生增强用组合物，只要含有表达其生理功能所必要的量即可，其形状并没有特别的限定，也包括例如片状、颗粒状、胶囊状等形状的能够口服摄取的形状物。
另外，本发明还提供一种具有生长因子产生增强作用的生物用饲料，其中含有作为有效成分的生长因子产生增强物质。作为该饲料，提供与上述食品或饮料同样，含有上述生长因子产生增强用组合物的生长因子产生增强用饲料；以高浓度和/或高纯度含有上述生长因子产生增强物质为特征的饲料；高浓度和/或高纯度含有上述生长因子产生增强用组合物而成的饲料；饲料中含有黄腐酚0.00007重量％以上的神经生长因子产生增强用饲料；含有包含上述生长因子产生增强物质而成的饲料或其处理物的生长因子产生增强用饲料(优选含有啤酒类的方式)；以及含有蛇麻花提取物的生长因子产生增强用饲料。作为使用的生长因子产生增强物质，与上述食品或饮料同样，优选从绿原酸、二咖啡酰奎尼酸、咖啡酰奎尼酸、异东方蓼黄素、safflominA、愈创内酯、黄香独活内酯、3’-O-β-D-吡喃葡糖酰凯林内酯、7-O-β-D-吡喃葡萄糖基氧-8-异戊烯基香豆素、咖啡酸甲酯、咖啡酸乙酯、8-羧基-3-羟基-5-甲氧基-2-二甲基色满、7-β-D-吡喃葡萄糖基氧-6-异戊烯基香豆素、4’-O-当归酰基-3’-O-〔6-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)-β-D-吡喃葡萄糖基〕-凯林内酯、异黄腐酚、黄腐酚B、黄腐酚D以及黄腐酚中选择的1种以上的化合物。
而且，作为另一种方式，还提供一种生物的饲养方法，其特征在于，将上述有效成分给予生物。另外，作为本发明的另一种方式，提供一种生物饲养用剂，其特征在于，含有上述有效成分。
在这些发明中，生物是指例如养殖动物、宠物等，作为养殖动物，例如家畜、试验动物、家禽、鱼类、甲壳类或贝类。作为饲料，例如身体状况的维持和/或改善用饲料。作为生物饲养用剂，例如浸渍用剂、饲料添加剂、饮料用添加剂。
按照这些发明，在适用其的以上例举的生物中，基于本发明使用的上述有效成分的生长因子产生增强作用，可以期待出现与本发明的上述治疗剂或预防剂同样的效果。也就是说，按照这些发明，可以期待出现该生物的需要生长因子产生增强作用的疾病的治疗或预防效果。
本发明中使用的上述有效成分通常是每1kg对象生物的体重，每天优选给予0.01～2000mg。给药可以通过例如将该有效成分添加、混合到供给对象生物的人工配合饲料的原料中，或与人工配合饲料的粉末原料混合后，再添加、混合到其它原料中进行。另外，上述有效成分在饲料中的含量没有特别的限定，可以根据目的适当设定，优选0.001～15重量％的比例。
作为人工配合饲料例如以鱼粉、酪蛋白、乌贼粉等动物性原料，大豆粕、小麦粉、淀粉等植物性原料，饲料用酵母等微生物原料，鳕鱼肝油、乌贼肝油等动物性油脂，大豆油、菜籽油等植物性油脂，维生素类、矿物类、氨基酸、抗氧化剂等为原料的人工配合饲料。另外，还例如鱼肉绞碎物等鱼类用饲料。
本发明饲料的制备方法没有特别的限定，另外配合只要按照一般饲料进行即可，只要制得的饲料中含有具有生长因子产生增强作用的本发明的上述有效成分即可。
另外，也可以通过将具有生长因子产生增强作用的本发明的上述有效成分直接添加到池塘、水槽、贮水池或饲养区域的水、海水等中，浸渍对象生物给药。这种浸渍方法在对象生物的饲料摄取量低下时特别有效。水或海水中具有生长因子产生增强作用的本发明有效成分的浓度没有特别的限定，可以根据目的使用，优选0.00001～1重量％的比例。
另外，也可以将含有具有生长因子产生增强作用的本发明的上述有效成分的饮料作为饲养用饮料使对象生物摄取。该饮料中具有生长因子产生增强作用的本发明使用的有效成分的浓度没有特别的限定，可以根据目的使用，优选0.0001～1重量％的比例。含有具有生长因子产生增强作用的本发明上述有效成分的生物饲养用剂，例如浸渍用剂、饲料添加剂、饮料用添加剂可以按照其本身公知的配合和制备方法制备。该生物饲养用剂中有效成分的含量只要能够得到本发明所需的效果即可，并没有特别的限定。
本发明可以适用的生物没有限定，作为养殖动物，例如马、牛、猪、羊、山羊、骆驼、驼羊等家畜，小鼠、大鼠、土拨鼠、兔等实验动物，鸡、鸭、火鸡、鸵鸟等家禽，真鲷、石鲷、比目鱼、鲽鱼、鱼师鱼、黄尾笛鲷、黄条鱼师、金枪鱼、大甲参、香鱼、鲑类、河豚、鳗鲡、泥鳅、鲇鱼等鱼类，对虾、黑虎虾、对虾(タィショゥェビ)、青蟹等甲壳类等，鲍、蝾螺、扇贝、牡蛎等贝类，作为宠物，例如狗、猫等，可以广泛适用于陆上、水中动物。
通过使之摄取含有具有生长因子产生增强作用的本发明使用的上述有效成分的饲料，或者将对象生物浸渍在含有具有生长因子产生增强作用的本发明使用的上述有效成分的液体中，能够良好地维持或改善家畜、实验动物、家禽、鱼类、甲壳类、贝类、宠物等的身体状况。
如上所述，按照本发明可以提供具有生长因子产生增强作用的各种药品、食品、饮料、饲料等，其中从表现出本发明所需效果的观点出发，特别优选含有愈创内酯作为生长因子产生增强物质而成的生长因子产生增强用组合物、治疗剂或预防剂、以及食品、饮料或饲料。
而且，作为本发明的另一种方式，提供本发明的上述有效成分在制备必需增强生长因子产生的疾病的治疗剂或预防剂、生长因子产生增强剂或者生长因子产生增强用食品、饮料或饲料中的用途。作为所述用途的方式，可以例举上述有效成分在本发明的上述治疗剂或预防剂、生长因子产生增强剂或者生长因子产生增强用食品、饮料或饲料的制备中的用途的方式。例如，作为上述有效成分在必须增强生长因子产生的疾病的治疗剂或预防剂或者生长因子产生增强剂的制备中的用途，可以例举在上述片剂、颗粒剂、散剂、粉末剂、胶囊剂等固体制剂、常规溶液剂、悬浊剂、乳剂等液体制剂，或使用前添加适当载体能够形成液状的干燥品的制备中的用途。
另外，本发明中用作有效成分的生长因子产生增强物质即使对大鼠以1g/kg体重单次口服给药，也确认没有死亡例。
以下结合实施例更具体地说明本发明，但是本发明并不受这些实施例的任何限定。另外，只要没有特别的说明，实施例中的％表示重量％。另外，有时将级分称为级分。实施例1(1)将竹叶冷冻干燥后粉碎，将得到的竹叶粉末6.7g悬浊于100ml的氯仿中，过滤，回收不溶级分，该操作反复进行3次。之后，悬浊于100ml的乙醇中，进行过滤，回收不溶级分，该操作反复进行3次。由通过该操作得到的不溶级分完全除去乙醇，悬浊于100ml的蒸馏水中。将该悬浊液在60℃下保温1小时后，过滤。在滤液中添加2.5倍量的乙醇，在-20℃下冷却后，低温下离心分离得到沉淀。将该沉淀溶解于蒸馏水，冷冻干燥，得到粉末状的含有糖的竹叶提取物。
(2)将实施例1-(1)制得的竹叶提取物的10mg/ml水溶液300μl加入至Microcon 3000Cut(Amicon社制)，以10000rpm离心90分钟，制得通过滤器除去的级分(下层级分)。而且，残留在上层的级分再次溶解于300μl蒸馏水中，制得上层级分。实施例2将洋葱的茶色薄皮5g悬浊于蒸馏水100ml中，100℃下保温15分钟后，去除洋葱薄皮，得到5％洋葱薄皮提取物。实施例3将银杏茶叶(100％GINKGO、BILOBA TEA商品名GINGOTON、GingotonInc.，Gardena OA 90248USA)3g悬浊于蒸馏水200ml中，在100℃下保温15分钟后，过滤，去除银杏茶叶，得到上清液。将该上清液冷冻干燥后，溶解于8ml的蒸馏水中，得到银杏茶叶提取物。实施例4(1)测定实施例1-(1)制得的竹叶提取物(试样①)、实施例1-(2)制得的下层级分(试样②)上层级分(试样③)的HGF产生增强活性。将悬浊于含有10％胎牛血清的DME培养基中的MRC-5细胞(CCL 171大日本制药社制，code.02-021)500μl加入48孔细胞培养板中，使之达到1×105cells/ml，在37℃、5％CO2存在下培养24小时后，更换为含有1％胎牛血清的DME培养基。之后添加试样，再培养24小时后，回收培养基，使用Quantikine Human HepatocyteGrowth Factor(HGF)ELISA Kit(フナコシ社制，Code.RS-0641-00)，测定培养基中的HGF的量。HGF的产生量以阴性对照作为100％进行表示。添加试样①使最终浓度达到0.001、0.01、0.1、1μg/ml，添加试样②、③使最终浓度达到1、10、100μg/ml。作为阴性对照添加与试样等量的蒸馏水。HGF的产生量以阴性对照作为100％进行表示。试样①的结果如表1所示，试样②、③的结果如表2所示。实验全部进行2次，取其平均值。如表1、2所示，这些试样增强了HGF的产生。特别是试样①和③添加组较强地增加了HGF的产生量。由此表明竹叶提取物具有增强HGF产生的活性。而且，由于上层级分具有增强HGF产生的活性，确认分子量高于3000的高分子物质具有诱导HGF产生的活性。表1试样①的浓度(μg/ml) HGF产生量(％)0 1000.001 1230.011180.1 1821 570(其中，对照的HGF产生量为8.79ng/ml。)表2试样浓度试样②的HGF产生量 试样③的HGF产生量(μg/ml) (％) (％)0 100 1001 106 41710 109 584100216 476(其中，对照的HGF产生量为9.99ng/ml。)(2)将粉碎的竹叶约5g与50％丙酮70ml一起搅拌15分钟以上，对得到的提取液进行抽滤，再用等量的溶剂提取残渣。按照与实施例4-(1)同样的方法考察该粗提取液的HGF产生增强活性，结果如表3所示确认有活性。减压浓缩粗提取液，将浓缩液用水稀释至20倍，将其中一部分供于10mL的Amberlite XAD-2(Organo社制)上，依次用30％、40％、50％、60％甲醇水溶液以及甲醇各30ml洗脱。测定各级分的HGF产生诱导活性后，确认40％甲醇、30％甲醇洗脱级分具有活性。将30％、40％甲醇洗脱级分浓缩、干燥固化，供于硅胶柱色谱，以氯仿∶甲醇∶乙酸＝3∶1∶2.5％作为展开剂，分别收集每10mL。
采用1H-NMR、FAB-MS进行分析，结果由级分第19～35支得到了高浓度含有异东方蓼黄素(isoorientin)的级分，确认该级分如表4所示具有HGF产生增强活性。
1H-NMRisoorientinσ7.57(1H，dd，J 8，2Hz)，7.55(1H，d，J 2Hz)，7.02(1H，d，J 8Hz)，6.81(1H，s)，6.63(1H，d，J 8Hz)，4.74(1H，d，J 10Hz)，4.19(1H，t，J 4.5Hz)FAB-MASS449(M+H)表3竹叶粗提取液(％) HGF产生量(％)0 1000.1 1951 463(其中，对照的HGF产生量为9.09ng/ml。)表4含有异东方蓼黄素的级分 HGF产生量(％)(mg/ml)0 1000.1 1311 318(其中，对照的HGF产生量为9.62ng/ml。)
(3)用混合机将市售的干燥洋李约300g与甲醇500ml一起磨碎，通过抽滤得到滤液。将该滤液1ml浓缩干燥固化，考察溶解于1ml DMSO中的洋李粗提取液的HGF产生增强活性，结果确认如表5所示具有活性。
将得到的粗提取液浓缩，除去提取溶剂，用水稀释至1升，供于200ml的Amberlite XAD-2(Organo社制)，用500ml H2O洗涤后，用甲醇洗脱吸附级分。将得到的洗脱级分浓缩后，溶解于少量的水中，然后供于Cosmosil 140C18-OPN(nakalaitesque社制)，按照水和25％的乙腈水溶液合计800ml的梯度洗脱，每1级分收集约10ml。通过1H-NMR分析得到的级分，结果由第26支～第32支的级分和第41支～第48支的级分分别得到高浓度地含有5-咖啡酰奎尼酸(5-caffeoyl-quinic acid)、4-咖啡酰奎尼酸(4-caffeoyl-quinicacid)的级分，确认分别如表6所示具有HGF产生增强活性。
1H-NMR5-caffeoyl-quinic acidσ7.63(1H，d，J 15.5Hz)，7.19(1H，s)，7.12(1H，d，J 8Hz)，6.93(1H，d，J 8Hz)，5.40(1H，m)，4.18(1H，m)，3.77(1H，dd，J 9.5，4.5Hz)，2.2-1.6(5H，m)4-caffeoyl-quinic acidσ7.49(1H，d，J 15.5Hz)，7.04(1H，d，J 4Hz)，6.99(1H，dd，J 8，4Hz)，6.73(1H，d，J 8Hz)，6.27(1H，d，16Hz)，4.65(1H，dd J 8，3Hz)，4.08(1H，m)，2.2～1.6(5H，m)表5洋李粗提取液(％)HGF产生量(％)0 1000.01 1110.1 2141 306(其中，对照的HGF产生量为8.02ng/ml。)表6试样 浓度(mg/ml)HGF产生量(％)5-咖啡酰奎尼酸 0 1000.01 1110.1321富含4-咖啡酰奎尼酸的级 0 100分0.01 1030.1142(其中，对照的HGF产生量为9.98ng/ml。)(4)将市售的花茎甘蓝约300g与50％乙醇水溶液350ml一起匀化，通过过滤得到滤液。将残渣用50％乙醇水溶液350ml再次匀化，合并得到的滤液，减压浓缩至150ml。与实施例4-(1)同样考察该浓缩液的HGF产生增强活性，结果如表7所示确认具有HGF产生增强活性。表7花茎甘蓝粗提取液(％) HGF产生量(％)11000.01 1050.1 1731258(其中，对照的HGF产生量为6.80ng/ml。)实施例5采用与实施例4-(1)同样的方法，研究实施例2制得的洋葱薄皮提取物(试样①)、实施例3制得的银杏茶叶提取物(试样②)的HGF产生增强活性。将各试样分别用蒸馏水稀释1、10、100倍，在培养基中添加各种稀释液5μl。作为阴性对照，添加与试样等量的蒸馏水。HGF的产生量以阴性对照作为100％进行表示。其结果如表8所示。实验全部进行2次，取其平均值。如表8所示，试样①、试样②增强了HGF的产生。由此表明洋葱薄皮提取物、银杏茶叶提取物具有HGF产生增强活性。表8试样浓度试样①HGF产生量试样②HGF产生量(％)(％)0 100 100100倍稀释 122 21410倍稀释 266 3581倍稀释 248 199(其中，对照的HGF产生量为10.01ng/ml。)实施例6(1)作为菊科植物艾蒿，使用收获KWANGHWA MUGWORT后熟化3年得到的物质，用水洗涤该熟化物后，用蒸气加热方式的提取机，在100～105℃下进行7小时的热水提取，制得艾蒿提取物。再将该提取物煎熬24小时制成粘稠状，接着用制片机制成片剂。
(2)将实施例6-(1)制得的片剂(泉湖食品社制)粉碎，将得到的粉末15.563g悬浊于100ml的氯仿中，过滤，回收不溶级分，该操作反复进行2次。之后，悬浊于100ml的乙醇中，过滤，回收不溶级分，该操作反复进行2次。由通过该操作得到的不溶级分完全除去乙醇，悬浊于100ml蒸馏水中。将该悬浊液在60℃下保温1小时后，过滤。向滤液中添加2.5倍量的乙醇，-20℃下冷却后，低温下离心分离，得到沉淀。将该沉淀溶解于蒸馏水，冷冻干燥，得到粉末状的含有糖的级分。
(3)按照与实施例4-(1)同样的方法，研究实施例6-(2)制得的KWANGHWA MUGWORT提取物的HGF产生增强活性。添加KWANGHWAMUGWORT提取物，使最终浓度达到1、10、100μg/ml。作为阴性对照，添加与试样等量的蒸馏水。HGF产生量以阴性对照作为100％进行表示。其结果如表9所示。实验全部进行2次，取其平均值。如表9所示，KWANGHWA MUGWORT提取物增强了HGF的产生。表9KWANGHWA MUGWORT提取物浓度 HGF产生量(％)(μg/ml)0 1001 11410 196100 771(其中，阴性对照的HGF产生量为5.27ng/ml。)实施例7(1)将当归干燥品(阪本汉方堂社制)480g用乙酸乙酯1升提取2次，用乙醇1升提取2次，向残渣中加入水2升，在60℃下提取1小时。将提取滤液浓缩至250ml后，添加乙醇50ml，除去不溶物质后，将得到的上清液减压浓缩。将浓缩物的约一半量供于XAD-2(ォルガノ社制)300ml，用水600ml洗涤后，依次分步用30％甲醇600ml(级分1)、60％甲醇500ml(级分2)、100％甲醇600ml(级分3)洗脱吸附级分。将这些洗脱液干燥固化后，分别溶解于50ml的水中，按照与实施例4-(1)同样的方法测定各级分的HGF产生增强活性。其中，添加各种级分使最终浓度达到0.01、0.1、1％。其结果如表10所示。实验进行2次，取其平均值。如表10所示，各种级分均显示HGF产生增强活性。表10试样 最终浓度(％) HGF产生量(％)级分1 0.01 1110.1 1501364级分2 0.01 1620.1 2231388级分3 0.01 1070.1 1451274(其中，对照的HGF产生量为10.88ng/ml。)(2)接着，将级分3在硅胶板(Merck社制)上展开，以丁醇∶乙醇∶乙酸∶水＝10∶10∶1∶1作为展开剂，进行分级，采用与实施例4-(1)同样的方法测定各点的HGF产生增强活性。结果，Rf值0.3附近的在UV254nm显示吸收的化合物(以下表示为化合物(1))存在HGF产生增强活性。用1H-NMR对该化合物(1)进行解析后，如图1所示，与绿原酸标准品(Sigma社制)一致，确认化合物(1)是绿原酸。另外，采用与实施例4-(1)同样的方法，研究绿原酸标准品的HGF产生增强活性，确认如表11所示确实具有HGF产生增强活性。表11绿原酸浓度(μM)HGF产生量(％)0 1001 10510122100 302500 4791000 624(其中，对照的HGF产生量为8.10ng/ml。)
(3)接着，以绿原酸标准品作为标准，用HPLC(TSKgel ODS-80Ts(Tosoh社制)，A液水(含有0.1％TFA)，B液50％乙腈(含有0.1％TFA)，0分-B 25％，20分-B 75％)分析级分1～3中含有的绿原酸量，其结果如表12所示。表12绿原酸浓度(mM)级分1 7.5级分2 35.7级分3 5.3另外，根据表10、12的结果，级分1～3中含有的绿原酸浓度与各级分的HGF产生增强活性的相关性如图2所示，根据图11的结果，绿原酸标准品浓度与HGF产生增强活性的相关性如图3所示。这些相关性几乎一致。由此确认各级分的HGF产生增强活性主要依赖于绿原酸。另外，图2、图3中，横轴表示绿原酸浓度的对数，纵轴表示HGF浓度。实施例8将艾蒿干燥品(阪本汉方堂社制)40g用50％丙酮500ml提取3次后，减压浓缩至约15ml。向浓缩液中添加10％枸橼酸水溶液35ml，用乙酸乙酯100mL提取3次后，用硫酸镁干燥有机层，减压浓缩。将浓缩物供于硅胶柱色谱，以氯仿∶甲醇∶乙酸＝2∶1∶1作为展开溶剂，分别收集每8ml。收集得到的级分7～13，减压浓缩后，在硅胶板上展开，以氯仿∶甲醇∶乙酸＝1∶1∶0.05作为展开溶剂，回收Rf值0.5附近的在UV254nm显示吸收的物质(以下称为化合物(2))225mg。通过1H-核磁共振(NMR)波谱(JNM-A500日本电子社制)解析该物质的结构。
1H-NMRσ7.46(1H，d，J 15.5Hz)，7.45(1H，d，J 15.5Hz)，7.02(1H，m)，7.00(1H，m)，6.93(2H，m)，6.72(1H，d，J 8.5Hz)，6.70(1H，d，J 8.5Hz)，6.20(1H，d，J 15.5Hz)，6.17(1H，d，J 15.5Hz)，5.33(1H，td，J 10.5，4.5Hz)，5.13(1H，m)，3.68(1H，dd，J 10，3Hz)，2.2～1.6(5H，m)图4表示1H-NMR波谱。图4中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。根据这些结果确认化合物(2)为3，5-二咖啡酰奎尼酸。采用与实施例4-(1)同样的方法研究3，5-二咖啡酰奎尼酸的HGF产生增强活性。结果，得知如表13所示3，5-二咖啡酰奎尼酸具有HGF产生增强活性。表133，5-二咖啡酰奎尼酸浓度(μM) HGF产生量(％)114210 206100 290(其中，对照的HGF产生量为6.27ng/ml。)实施例9(1)将艾蒿干燥品(阪本汉方堂社制)10g粉碎，用氯仿100ml提取5次，用乙醇100ml提取5次，向得到的残渣中加入水150ml，在60℃下提取1小时，得到提取滤液。向该滤液13lml中加入乙醇326ml，在-20℃下静置30分钟后，进行离心。将得到的上清液冷冻干燥，得到艾蒿热水提取低分子级分(级分4)。将其溶解于水4.5ml中，添加至最终浓度为0.01、0.1％，采用与实施例4-(1)同样的方法研究HGF产生增强活性。结果，如表14所示，可以得知级分4具有HGF产生增强活性。表14级分4终浓度(％)HGF产生量(％)0.01 2580.1294(其中，对照的HGF产生量为7.76ng/ml。)(2)另外，按照与实施例7-(3)同样的方法测定级分4中含有的绿原酸、3，5-二咖啡酰奎尼酸的含量，结果试样原液中分别以7.7mM、13mM的浓度含有。由以上结果可知，绿原酸、3，5-二咖啡酰奎尼酸分别是艾蒿提取物产生的HGF产生增强活性的活性物质中的一种。实施例10(1)将国产菊花(干菊JA青森经济连JA南部町制)15g冷冻干燥后，粉碎，向其中加入1000ml的氯仿，在室温下进行提取。将除去残渣得到的液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到氯仿提取级分。接着，向残渣中加入500ml的乙醇，在室温下进行提取。将除去残渣的液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到乙醇提取级分。接着，向残渣中加入150ml的蒸馏水，在60度下提取2小时。向除去残渣的液体部分加入2.5倍量的乙醇，在负30度下静置2小时。然后，将以10,000G的离心除去沉淀物的液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到国产菊花的水提取级分。
(2)按照与实施例4-(1)同样的方法研究实施例10-(1)中得到的国产菊花的水提取级分的HGF产生增强活性。添加国产菊花的水提取级分，使最终浓度为1％。结果，如表15所示，可知国产菊花的水提取级分有HGF产生增强活性。表15国产菊花的水提取级分终浓度(mg/ml)HGF产生量(％)4.04 383(其中，对照的HGF产生量为12.51ng/ml。)
(3)将中国产菊花(由中国大连市的本地市场得到)20g冷冻干燥后，粉碎，向其中加入500ml的氯仿，在室温下进行提取。将除去残渣得到的液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到氯仿提取级分。接着，向残渣中加入500ml的乙醇，在室温下进行提取。将除去残渣得到的液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到乙醇提取级分。接着，向残渣中加入300ml的蒸馏水，在60度下提取2小时。向除去残渣得到的液体部分加入2.5倍量的乙醇，在负30度下静置2小时。然后，以10,000G的离心分级成沉淀物和液体部分。液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到水提取级分。
(4)按照与实施例4-(1)同样的方法研究实施例10-(3)中得到的中国产菊花的水提取级分的HGF产生增强活性。添加中国产菊花的水提取级分，使最终浓度为1、5、10％。结果，如表16所示，可知中国产菊花的水提取级分有HGF产生增强活性。表16中国产菊花的水提取级分终浓度(mg/ml)HGF产生量(％)0.712673.553737.10367(其中，对照的HGF产生量为12.51ng/ml。)实施例11按照与实施例4-(1)相同的方法研究后述实施例38-(1)中配制的紫郁金乙醇提取级分-2、水提取级分-1、水提取级分-2的HGF产生增强活性。添加乙醇提取级分-2，使最终浓度为10μg/ml，添加水高分子级分-1，使最终浓度为132、1320μg/ml，添加水高分子级分-2，使最终浓度为2.2、22μg/ml。HGF的产生量以阴性对照作为100％进行表示。其结果如表17所示。实验全部进行2次，取其平均值。如表17所示，紫郁金乙醇提取级分-2、水提取级分-1、水提取级分-2增强HGF的产生。表17试样 浓度(μg/ml)HGF产生量(％)紫郁金乙醇提取级分-20 10010 157紫郁金水提取级分-1 0 100132 1851320324紫郁金水提取级分-2 0 1002.2 18222 207(其中，对照的HGF产生量为13.99ng/ml。)实施例12(1)将春菊冷冻干燥、粉碎，向得到的物质10g中加入氯仿100ml，进行搅拌、过滤，回收残渣。该添加氯仿、回收残渣共进行5次。向残渣中加入乙醇100ml，进行搅拌、过滤，回收残渣。该添加乙醇、回收残渣共进行5次。向残渣中加入蒸馏水100ml，在60℃下保温1小时后，冷冻干燥过滤得到的滤液，得到试样。将该提取物溶解在蒸馏水中，按照与实施例4-(1)相同的方法研究HGF产生增强活性，如表18所示，可以确认活性。表18级分4终浓度(μg/ml) HGF产生量(％)0 1001 12510148100 314(其中，对照的HGF产生量为8.21ng/ml。)(2)将市售的春菊900g冷冻干燥，与80％的乙醇2升一起加入到混合器中进行磨碎，使用纱布进行过滤，得到提取液。将该提取液通过减压浓缩浓缩至200ml，配制春菊的粗提取液。
接着将得到的粗提取液100ml部分供于Amberlite XAD-2树脂(Organo社制)200mL，依次用水、30％、40％、60％的甲醇水溶液以及甲醇各500ml洗脱。将各洗脱级分浓缩至50ml，按照与实施例4-(1)相同的方法确认各级分的HGF产生增强活性，如表19所示，在60％甲醇洗脱级分的浓缩物中发现HGF产生增强活性。
另外，添加该浓缩物，使之为0.1％、10％(体积比)。
用1H-NMR解析该60％甲醇洗脱级分，可知含有高浓度的3，5-二咖啡酰奎尼酸。表19试样浓度(％) 0 0.1 1HGF产生量(％) 100220 349(其中，对照的HGF产生量为8.22ng/ml。)实施例13将小鼠成纤维细胞L-M细胞(ATCC CCL-1.2)在含有0.5％的细胞培养用蛋白胨(Gibco社制)的M199培养基(ICN社制)中悬浊至1.5×105细胞/ml，在96孔板中各接种0.1ml，进行无菌培养。培养3天后，除去培养基，更换至含有0.5％的牛血清白蛋白(Sigma社制)的M199培养基中。向其中添加由菊科红花(Carthamus tinctoriusLINNE)的花提取得到的黄色色素(粉末亮黄(sun yellow)No.2，三荣源F·F·I社制)，使最终浓度为1.25、2.5、5mg/ml，培养20小时。培养结束后，通过酶免疫测定法(NGF Emax Immuno Assay SystemPromega社制)测定培养液中的神经增殖因子的浓度。将未添加试样的细胞培养液中的NGF浓度作为100％，表示NGF产生增强。实验进行2次，取其平均值。结果，红花黄色色素浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。结果如表20所示。表20红花黄色色素浓度(mg/ml)NGF产生量(％)0 1001.25277.62.5 441.35 808.4(其中，对照的NGF产生量为0.507ng/ml。)实施例14将实施例13中所述的红花黄色色素中的活性成分用反相色谱法纯化分离。下面表示其条件。柱使用TSK gel ODS-80Ts(直径21.5mm×长30cmTosoh社制)。对于溶剂A(0.1％三氟乙酸水溶液)和溶剂B(以体积比1比1混合蒸馏水和乙腈而成的物质，并含有0.1％三氟乙酸)的洗脱比，从0分钟到50分钟，将溶剂B比从0％直线保持至100％，接着的15分钟将溶剂B比保持为100％，最后将溶剂B比保持在0％15分钟。洗脱速度为5ml/分钟，检测在215nm下进行。每3分钟后收集级分，按照与实施例13同样的方法测定各级分的NGF产生增强活性。结果表明含有32.5分钟和41.8分钟的峰的级分有NGF产生增强活性。对含有32.5分钟的峰的级分进行质谱解析，检测出分子量为613的信号。而且，1H-NMR波谱、13C-NMR波谱解析的结果确定活性成分为safflomin A(分子量612.53)。按照与实施例13同样的方法测定这样得到的纯化safflomin A的NGF产生增强活性。添加纯化safflomin A，使之为2.5mg/ml。结果，纯化的safflomin A增强L-M细胞的NGF产生。关于safflomin A的结果如表21所示，关于含有41.8分钟的峰的级分的结果如表22所示。表21safflomin A浓度(mg/ml) NGF产生量(％)0 1002.5130.7(其中，对照的NGF产生量为0.739ng/ml。)表22分级红花黄色色素级分浓度(mg/ml)NGF产生量(％)0 1001.25 350.72.5 643.4(其中，阴性对照的NGF产生量为0.736ng/ml。)实施例15将菊科红花(Carthamus tinctorius LINNE阪本汉方堂制)10g粉碎，向得到的物质中加入800ml的氯仿，室温下进行提取。将除去残渣得到的液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到氯仿提取级分。接着，向残渣中加入1400ml的乙醇，在室温下进行提取。将除去残渣得到的液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到乙醇提取级分。接着，向残渣中加入150ml的蒸馏水，在60度下提取2小时。向除去残渣得到的液体部分加入2.5倍量的乙醇，在负30度下静置2小时。然后，将以10,000G的离心除去沉淀物的液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到水提取级分。按照与实施例13同样的方法测定这样配制的各级分的NGF产生增强活性。添加红花氯仿提取级分，使之为0.393、0.785mg/ml。添加乙醇提取级分，使之为0.313、0.625mg/ml。添加水提取级分，使之为2.76、5.51mg/ml。其结果如表23所示。红花氯仿提取级分、乙醇提取级分、水提取级分浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。表23试样 浓度(mg/ml)NGF产生量(％)红花氯仿提取级分 0 1000.393 535.60.785 986.0红花乙醇提取级分 0 1000.313 345.30.625 1449.5红花水提取级分0 1002.76 477.85.51 806.3(其中，阴性对照的NGF产生量为0.190ng/ml。)实施例16将国产菊花(Chrysanthemum morifolium，干菊JA青森经济连JA南部町制)15g冷冻干燥后粉碎，向得到的物质中加入1000ml的氯仿，室温下进行提取。将除去残渣得到的液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到氯仿提取级分。接着，向残渣中加入500ml的乙醇，在室温下进行提取。将除去残渣得到的液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到乙醇提取级分。接着，向残渣中加入150ml的蒸馏水，在60度下提取2小时。向除去残渣得到的液体部分加入2.5倍量的乙醇，在负30度下静置2小时。然后，将以10,000G的离心除去沉淀物的液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到水提取级分。按照与实施例13同样的方法测定这样配制的各级分的NGF产生增强活性。添加菊花氯仿提取级分，使之为1.8、3.6、7.2mg/ml。添加菊花乙醇提取级分，使之为0.517、1.03、2.07mg/ml。添加菊花水提取级分，使之为16.8、33.7、67.3mg/ml。结果，菊花氯仿提取级分、乙醇提取级分、水提取级分浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。其结果如表24～26所示。表24国产菊花氯仿提取级分浓度(mg/ml)NGF产生量(％)0 1001.80209.63.60447.37.201019.9(其中，对照的NGF产生量为0.474ng/ml。)表25国产菊花乙醇提取级分浓度(mg/ml)NGF产生量(％)0 1000.517 164.61.03195.32.07265.1(其中，对照的NGF产生量为0.474ng/ml。)表26国产菊花水提取级分浓度(mg/ml)NGF产生量(％)0 10016.8 200.233.7 257.667.3 336.9(其中，对照的NGF产生量为0.474ng/ml。)实施例17(1)将国产菊花(干菊JA青森经济连JA南部町制)245g冷冻干燥后粉碎，向得到的物质中加入9000ml的氯仿，室温下进行提取，分成氯仿提取液和氯仿提取残渣。将氯仿提取液用旋转蒸发器浓缩，得到菊花氯仿提取物。
(2)将菊花氯仿提取物供于硅胶色谱(silica chromatography)，以氯仿∶甲醇＝100∶1(1250ml)为洗脱溶剂进行洗脱，每8ml分别收集为1级分。将得到的级分44～49减压浓缩，得到国产菊花氯仿提取级分A。接着，以甲醇(400ml)为洗脱溶剂进行洗脱，将洗脱物减压浓缩，得到国产菊花氯仿提取级分B。
(3)按照与实施例13同样的方法测定实施例17-(2)中配制的级分A、级分B的NGF产生增强活性。添加级分A，使之为0.5、1.0、2.0mg/ml。添加级分B，使之为0.5、1.0、2.0mg/ml。其结果如表27所示。级分A、级分B浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。表27试样 浓度(mg/ml) NGF产生量(％)国产菊花氯仿提取级分A 01000.5 114.01.0 304.62.0 677.0国产菊花氯仿提取级分B 01000.5 121.31.0 134.92.0 154.4(其中，阴性对照的NGF产生量为0.190ng/ml。)实施例18(1)再将实施例17-(2)中配制的国产菊花氯仿提取级分A供于硅胶色谱，依次分步用乙酸乙酯∶己烷＝1∶10(500ml)、1∶8(500ml)、1∶6(500ml)、1∶4(500ml)洗脱，每6ml分别收集为1级分。将得到的级分264～290减压浓缩，得到国产菊花氯仿提取级分A-a。将得到的级分206～240减压浓缩，得到国产菊花氯仿提取级分A-b。将得到的级分241～263减压浓缩，得到国产菊花氯仿提取级分A-c。将得到的级分291～320和接着以甲醇(400ml)为展开剂而得到的洗脱物合并，将该物质减压浓缩，得到国产菊花氯仿提取级分A-d。
(2)按照与实施例13同样的方法测定实施例18-(1)中配制的级分A-a、级分A-b、级分A-c、级分A-d的NGF产生增强活性。添加级分A-a，使之为0.125、0.25mg/ml。添加级分A-b，使之为0.25、0.5mg/ml。添加级分A-c，使之为0.25、0.5mg/ml。添加级分A-d，使之为0.25、0.5mg/ml。其结果如表28、29所示。级分A-a、级分A-b、级分A-c、级分A-d浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。表28试样 浓度(mg/ml)NGF产生量(％)国产菊花氯仿提取级分A-0 100a0.125 120.00.25 280.6国产菊花氯仿提取级分A-0 100b0.25 216.10.5959.1国产菊花氯仿提取级分A-0 100c0.25 124.40.5224.8(其中，阴性对照的NGF产生量为0.489ng/ml。)表29国产菊花氯仿提取级分A-d浓度 NGF产生量(％)(mg/ml)0 1000.25 157.10.5 409.6(其中，阴性对照的NGF产生量为0.575ng/ml。)实施例19(1)将实施例18-(1)中配制的国产菊花氯仿提取级分A-a在以氯仿∶甲醇＝50∶1为展开剂的薄层色谱上展开。切取Rf值0.9～0.95的部分，用展开剂再次洗脱，得到国产菊花氯仿提取级分A-a-1。切取Rf值0.55～0.68的部分，用展开剂再次洗脱，得到国产菊花氯仿提取级分A-a-2。切取Rf值0.30～0.38的部分，用展开剂再次洗脱，得到国产菊花氯仿提取级分A-a-3。
(2)按照与实施例13同样的方法测定实施例19-(1)中配制的级分A-a-1、级分A-a-2、级分A-a-3的NGF产生增强活性。添加级分A-a-1，使之为0.25、0.5mg/ml。添加级分A-a-2，使之为0.025、0.05mg/ml。添加级分A-a-3，使之为1.0mg/ml。其结果如表30所示。级分A-a-1、级分A-a-2、级分A-a-3浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。表30试样 浓度(mg/ml)NGF产生量(％)国产菊花氯仿提取级分A-a 0 100-10.25 193.30.5639.1国产菊花氯仿提取级分A-a 0 100-20.025 126.40.05 871.9国产菊花氯仿提取级分A-a 0 100-31.0220.6(其中，阴性对照的NGF产生量为0.183ng/ml。)(3)通过质量分析计(DX302日本电子社制)，采用FAB-MS方法测定实施例19-(1)中配制的、实施例19-(2)中确认了活性的国产菊花氯仿提取级分A-a-2的质谱(MS)。基体使用硝甲基苯甲醇。结果检测出m/z345(M+H)+的峰。图5表示国产菊花氯仿提取级分A-a-2的MS谱。在图5中，横轴表示m/z值，纵轴表示相对强度。
(4)使用核磁共振(NMR)波谱装置(JNM-A500日本电子社制)测定各种波谱，结构解析实施例19-(1)中配制的、实施例19-(2)中确认了活性的国产菊花氯仿提取级分A-a-2。下面表示NMR归属的信号。
1H-NMRδ1.42(3H，d，J＝7.0Hz，14-H)，1.85(1H，dt，J＝14.0，2.5Hz，9-H)，1.88(3H，t，J＝1.5Hz，5’-H)，1.94(1H，t，＝5.5Hz，1-H)，2.00(3H，dd，J＝1.5，7.0Hz，4’-H)，2.10(1H，d，J＝14.0Hz，9-H)，2.17(1H，m，10-H)，2.29(3H，s，15-H)，2.96(1H，dd，J＝5.5，10.0Hz，5-H)，3.11(1H，tt，J＝3.0，10.0Hz，7-H)，3.96(1H，t，J＝10.0Hz，6-H)，5.25(1H，dt，J＝2.5，10.0Hz，8-H)，5.63(1H，d，J＝3.0Hz，13-H)，5.94(1H，brs，3-H)，6.18(1H，d，J＝3.0Hz，13-H)，6.22(1H，dq，J＝1.5，7.0Hz，3’-H)其中，样品溶解于重氯仿中，以残留氯仿的化学位移值为7.24ppm进行表示。图6表示国产菊花氯仿提取级分A-a-2的1H-NMR波谱。在图6中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。
(5)对实施例19-(1)中配制的、实施例19-(2)中确认了活性的国产菊花氯仿提取级分A-a-2进行的质谱、NMR波谱解析的结果确定活性成分为愈创内酯(2-Oxo-8-angeloyloxy-guaia-3(4)，11(13)-dien-12，6-olide(分子量344))。实施例20(1)将实施例18-(1)中得到的国产菊花氯仿提取级分A-b供于以氯仿∶甲醇＝100∶1为展开剂的薄层色谱。切取Rf值0.43～0.57的部分，用展开剂再次洗脱，得到国产菊花氯仿提取级分A-b-1。
(2)按照与实施例13同样的方法测定实施例20-(1)中得到的级分A-b-1的NGF产生增强活性。添加级分A-b-1，使之为0.025、0.05mg/ml。其结果如表31所示。级分A-b-1浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。表31国产菊花氯仿提取级分A-b-1浓度NGF产生量(％)(mg/ml)0 1000.025 183.40.05 1053.3(其中，阴性对照的NGF产生量为0.183ng/ml。)(3)通过质量分析计(DX302日本电子社制)解析实施例20-(1)中配制的、实施例20-(2)中确认了活性的国产菊花氯仿提取级分A-b-1的质谱(MS)。基体使用硝甲基苯甲醇。结果检测出m/z345(M+H)+的峰。图7表示国产菊花氯仿提取级分A-b-1的MS谱。在图7中，横轴表示m/z值，纵轴表示相对强度。
(4)通过红外线吸收(IR)波谱(FTIR-8200PC岛津制作所社制)结构解析实施例20-(1)中配制的、实施例20-(2)中确认了活性的国产菊花氯仿提取级分A-b-1。结果检测出1716.5cm-1、1774.4cm-1的吸收。图8表示国产菊花氯仿提取级分A-b-1的IR波谱。图8中，横轴表示红外线波长的倒数，纵轴表示透过率。
(5)通过1H-核磁共振(NMR)波谱(JNM-A500日本电子社制)结构解析实施例20-(1)中配制的、实施例20-(2)中确认了活性的国产菊花氯仿提取级分A-b-1。
1H-NMRδ1.66(3H，s，H-15)，1.74(3H，d，1.0Hz，H-14)，1.88(3H，t，J3 ’，5’1.5Hz，J4’，5’1.5Hz，H-5’)，2.0(3H，dd，J3’，4’7.5Hz，H-4’)，2.26(1H，dd，Ja，b13.5Hz，J8，92.0Hz，H-9)，2.45-2.5(2H，m，H-2，H-9)，2.72(1H，d，Ja，b17.0Hz，H-2)，3.09(1H，d，J5，610.0Hz，H-5)，3.18(1H，ddd，J6，710.0Hz，J7，810.5Hz，J7，133.0Hz，H-7)，3.4(1H，s，H-3)，3.71(1H，t，H-6)，4.92(1H，dd，H-8)，5.52(1H，d，H-13)，6.13(1H，d，H-13)，6.18(1H，qd，H-3’)其中，样品溶解于重氯仿中，以残留氯仿的化学位移值为7.24ppm进行表示。图9表示国产菊花氯仿提取级分A-b-1的1H-NMR波谱。在图9中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。
(6)通过13C-核磁共振(NMR)波谱(JNM-A500日本电子社制)结构解析实施例20-(1)中配制的、实施例20-(2)中确认了活性的国产菊花氯仿提取级分A-b-1。
13C-NMRδ15.87(C-4’)，18.88(C-15)，20.45(C-5’)，22.06(C-14)，33.18(C-2)，41.45(C-9)，51.39(C-5)，56.59(C-7)，64.33(C-3)，66.78(C-4)，69.64(C-8)，77.93(C-6)，120.62(C-13)，128.0(C-2’)，128.61(C-1)，136.41(C-10)，136.95(C-11)，140.13(C-3’)，167.0(C-1’)，169.0(C-12)其中，样品溶解于重氯仿中，以重氯仿的化学位移值为77.93ppm进行表示。图10表示国产菊花氯仿提取级分A-b-1的13C-NMR波谱。在图10中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。
(7)对实施例20-(1)中配制的、实施例20-(2)中确认了活性的国产菊花氯仿提取级分A-b-1进行的质谱、IR波谱、1H-NMR波谱、13C-NMR波谱解析的结果确定活性成分为愈创内酯(3，4-Epoxy-8-angeloyloxy-guaia-1(10)，11(13)-dien-12，6-olide(分子量344))。实施例21(1)将实施例18-(1)中配制的国产菊花氯仿提取级分A-c供于以氯仿∶乙酸乙酯＝10∶1为展开剂的薄层色谱。切取Rf值0.33～0.42的部分，用展开剂再次洗脱，得到国产菊花氯仿提取级分A-c-1。
(2)按照与实施例13同样的方法测定实施例21-(1)中配制的级分A-c-1的NGF产生增强活性。添加级分A-c-1，使之为0.25、0.5mg/ml。其结果如表32所示。级分A-c-1浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。表32国产菊花氯仿提取级分A-c-1浓度NGF产生量(％)(mg/ml)0 1000.25 150.80.5434.4(其中，对照的NGF产生量为0.575ng/ml。)实施例22(1)再将实施例18-(1)中得到的国产菊花氯仿提取级分A-d供于硅胶色谱，依次分步用乙酸乙酯∶己烷＝1∶3(600ml)、1∶2(600ml)洗脱，每6ml分别收集为1级分。将得到的级分1～43减压浓缩，得到国产菊花氯仿提取级分A-d-1。将得到的级分44～73减压浓缩，得到国产菊花氯仿提取级分A-d-2。将得到的级分74～80减压浓缩，得到国产菊花氯仿提取级分A-d-3。将得到的级分124～140和接着以甲醇(400ml)为展开剂而得到的洗脱物合并，将该物质减压浓缩，得到国产菊花氯仿提取级分A-d-4。
(2)按照与实施例13同样的方法测定实施例22-(1)中配制的级分A-d-1、级分A-d-2、级分A-d-3、级分A-d-4的NGF产生增强活性。添加级分A-d-1，使之为2.0mg/ml。添加级分A-d-2，使之为0.5、1.0mg/ml。添加级分A-d-3，使之为0.25、0.5mg/ml。添加级分A-d-4，使之为0.5、1.0mg/ml。其结果如表33、34所示。级分A-d-1、级分A-d-2、级分A-d-3、级分A-d-4浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。表33试样浓度(mg/ml)NGF产生量(％)国产菊花氯仿提取级分A- 0 100d-12.0371.9国产菊花氯仿提取级分A- 0 100d-20.5119.31.0440.3国产菊花氯仿提取级分A- 0 100d-30.25 156.60.5687.2(其中，对照的NGF产生量为0.183ng/ml。)表34国产菊花氯仿提取级分A-d-4浓度NGF产生量(％)(mg/ml)0 1000.5 182.11.0 640.3(其中，对照的NGF产生量为0.107ng/ml。)实施例23(1)将实施例17-(2)中配制的国产菊花氯仿提取级分B供于硅胶色谱，以氯仿∶甲醇＝20∶1(600ml)为展开剂进行洗脱，每6ml分别收集为1级分。将得到的级分15～29减压浓缩，得到国产菊花氯仿提取级分B-a。
按照与实施例13同样的方法测定配制的级分B-a的NGF产生增强活性。添加级分B-a，使之为1.0mg/ml。其结果如表35所示。级分B-a增强L-M细胞的NGF产生。表35国产菊花氯仿提取级分B-a浓度NGF产生量(％)(mg/ml)0 1001.0 358.0(其中，阴性对照的NGF产生量为0.280ng/ml。)实施例24(1)向实施例16中配制的氯仿提取残渣中加入8000ml的乙醇，室温下进行乙醇提取，分成菊花乙醇提取液和乙醇提取残渣。将菊花乙醇提取液用旋转蒸发器浓缩，配制菊花乙醇提取物。
(2)将实施例24-(1)中配制的菊花乙醇提取物供于硅胶色谱，以氯仿∶甲醇＝9∶1(600ml)为展开剂进行洗脱，每6ml分别收集为1级分。将得到的级分15～22减压浓缩，得到国.菊花乙醇提取级分C。接着以甲醇(400ml)为展开剂进行洗脱，减压浓缩得到的洗脱物，得到国产菊花乙醇提取级分D。
(3)按照与实施例13同样的方法测定实施例24-(2)中配制的C级分、D级分的NGF产生增强活性。添加C级分，使之为1.0mg/ml。添加D级分，使之为2.0mg/ml。其结果如表36所示。C级分、D级分增强L-M细胞的NGF产生。表36试样浓度(mg/ml)NGF产生量(％)国产菊花氯仿提取级分C 0 1001.01120.1国产菊花氯仿提取级分D 0 1002.0455.9(其中，阴性对照的NGF产生量为0.107ng/ml。)实施例25将中国产菊花(由中国大连市本地市场得到)20g冷冻干燥后粉碎，向得到的物质中加入500ml的氯仿，室温下进行提取。将除去残渣得到的液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到氯仿提取级分。接着，向残渣中加入500ml的乙醇，在室温下进行提取。将除去残渣得到的液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到乙醇提取级分。接着，向残渣中加入300ml的蒸馏水，在60度下提取2小时。向除去残渣得到的液体部分加入2.5倍量的乙醇，在负30度下静置2小时。然后，以10,000G的离心分级成沉淀物和液体部分。液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到水提取级分-1。另一方面，将沉淀物再次溶解于蒸馏水中，得到水提取级分-2。按照与实施例13同样的方法测定这样配制的各级分的NGF产生增强活性。添加菊花氯仿提取级分，使之为0.114、0.227、0.454mg/ml。添加菊花乙醇提取级分，使之为0.241、0.481、0.962mg/ml。添加菊花水提取级分-1，使之为8.88、17.8、35.5mg/ml。添加菊花水提取级分-2，使之为0.02、0.04mg/ml。结果菊花氯仿提取级分、乙醇提取级分、水提取级分-1和2浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。其结果如表37所示。表37试样 浓度(mg/ml)NGF产生量(％)中国产菊花氯仿提取级分 0 1000.114 168.20.227 297.10.454 912.5中国产菊花乙醇提取级分 0 1000.241 326.50.481 450.10.962 582.5中国产菊花水提取级分-1 0 1008.88 264.117.8 261.835.5 229.1中国产菊花水提取级分-2 0 1000.02 135.00.04 187.3(其中，对照的NGF产生量为0.516ng/ml。)实施例26将干燥当归(Angelica Keiskei koidz)茎叶部(阪本汉方堂社制)20g粉碎，向得到的物质中加入600ml的氯仿，室温下进行提取。向除去液体部分的残渣中加入600ml的乙醇，室温下进行提取。向除去液体部分的残渣中加入360ml的蒸馏水，在60度下提取2小时。向除去固态残渣得到的液体部分加入2.5倍量的乙醇，在负30度下静置2小时。然后，以10,000G的离心分级成沉淀物和液体部分。液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到当归茎叶部水提取级分-1。另一方面，将沉淀物再次溶解于蒸馏水中，得到当归茎叶部水提取级分-2。按照与实施例13同样的方法测定这样配制的当归茎叶部水提取级分-1和2的NGF产生增强活性。添加当归茎叶部水提取级分-1，使之为2.59、5.19mg/ml。添加当归茎叶部水提取级分-2，使之为0.35、0.7mg/ml。结果当归茎叶部水提取级分-1和2浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。其结果如表38所示。表38试样 浓度(mg/ml)NGF产生量(％)当归茎叶部水提取级分-1 0 1002.59 475.25.19 644.9当归茎叶部水提取级分-2 0 1000.35 149.30.70 186.7(其中，对照的NGF产生量为0.553ng/ml。)实施例27将干燥当归根部(由韩国收集得到)20g粉碎，向得到的物质中加入300ml的氯仿，室温下进行提取。将除去残渣得到的液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到氯仿提取级分。接着，向残渣中加入300ml的乙醇，在室温下进行提取。将除去残渣得到的液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到乙醇提取级分。接着，向残渣中加入150ml的蒸馏水，在60度下提取2小时。向除去固态残渣得到的液体部分加入2.5倍量的乙醇，在负30度下静置2小时。然后，以10,000G的离心分级成沉淀物和液体部分。液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到当归根部水提取级分-1。另一方面，将沉淀物再次溶解于蒸馏水中，得到当归根部水提取级分-2。按照与实施例13同样的方法测定这样配制的各级分的NGF产生增强活性。添加当归根部氯仿提取级分，使之为0.03mg/ml。添加当归根部乙醇提取级分，使之为0.275、0.55、1.1mg/ml。添加当归根部水提取级分-1，使之为4.15、8.3、16.6mg/ml。添加当归根部水提取级分-2，使之为0.55、1.1mg/ml。结果当归根部氯仿提取级分、当归根部乙醇提取级分、当归根部水提取级分-1和2增强L-M细胞的NGF产生。其结果如表39所示。表39试样浓度(mg/ml)NGF产生量(％)当归根部氯仿提取级分 0 1000.03 198.4当归根部乙醇提取级分 0 1000.275 185.80.550 254.91.10 305.7当归根部水提取级分-1 0 1004.15 350.88.30 496.716.6 830.3当归根部水提取级分-2 0 1000.55 174.61.10 242.3(其中，对照的NGF产生量为0.473ng/ml。)实施例28
(1)将当归根部(由韩国收集得到)的冷冻干燥品600g粉碎，加入18000ml的氯仿，室温下进行提取。向通过过滤除去氯仿提取液的残渣中加入18000ml的乙醇，在室温下进行提取。向通过过滤除去乙醇提取液的残渣中加入4000ml的蒸馏水，在60度下提取2小时。向除去固态残渣得到的液体部分加入2.5倍量的乙醇，在负30度下静置2小时。然后，以10,000G的离心除去沉淀物，用旋转蒸发器将液体部分浓缩至200ml。将浓缩液供于Amberlite XAD-2(Organo社制树脂量400ml)，用蒸馏水2000ml充分冲洗非吸附物，接着用2000ml的甲醇洗脱吸附物。将甲醇洗脱液用旋转蒸发器浓缩，得到当归根部水提取低分子XAD-2处理物。
(2)使用反相色谱分级实施例28-(1)中配制的当归根部水提取低分子XAD-2处理物的活性成分。下面表示其条件。柱使用TSK gelODS-80Ts(直径21.5mm×长30cmTosoh社制)。对于溶剂A(蒸馏水)和溶剂B(以体积比1比1混合蒸馏水和乙腈而成的物质)的洗脱比，从0分钟到120分钟，将溶剂B比从0％直线保持至100％，接着的20分钟将溶剂B比保持为100％，最后将溶剂B比保持在0％20分钟。洗脱速度为5ml/分钟，检测在215nm下进行。每8分钟收集级分，按照与实施例13同样的方法测定各级分的活性。结果表明含有21.0、22.8、23.6、26.7、34.8、42.4、47.8、51.5、51.7、51.9、52.1、52.2、53.8、55.6、56.2、56.6、56.7、58.1、61.5、68.6、71.4、79.7、84.9、、85.8、89.7、101.5、104.5、120.9、124.7分钟的检测峰的级分有NGF产生增强活性。其结果如表40所示。表40分离级分 浓度(mg/ml) NGF产生量(％)(检测峰分钟)1(21.0、22.8、23.6)2.50 441.32(26.7)2.50 379.83(34.8)2.50 200.34(42.4)2.84 453.35(47.8)3.47 385.86(51.5、51.7、51.9、52.1、52.2、53.8) 1.48 409.97(55.6、56.2、56.6、56.7、58.1、61.5) 1.24 268.48(68.6)0.965299.79(79.7)1.16 1104.510(84.9、85.8、89.7) 1.25 1196.411(101.5、104.5) 3.17 267.912(120.9、124.7) 5.28 277.5(其中，对照的NGF产生量为0.210ng/ml。)(3)使用凝胶过滤色谱分级当归根部水提取低分子XAD-2处理物的活性成分。下面表示其条件。柱树脂使用トョパ-ルHW-40C(树脂量2000mlTosoh社制)。溶剂使用蒸馏水。供给干燥重量为1.0g的当归根部水提取低分子XAD-2处理物浓缩液，每10ml收集级分。按照与实施例13同样的方法测定各级分的NGF产生增强活性。将各级分试样浓缩10倍后进行添加，使之为培养基的10分之1。结果在多数级分中确认了NGF产生增强活性。
(4)收集、浓缩在实施例28-(3)中确认了活性的一部分级分，即级分69～79，使用反相色谱分级得到的物质。下面表示其条件。柱使用TSK gel ODS-80Ts(直径21.5mm×长30cmTosoh社制)。对于溶剂A(0.1％三氟乙酸水溶液)和溶剂B(以体积比1比1混合蒸馏水和乙腈而成的物质，并含有0.1％三氟乙酸)的洗脱比，从0分钟到60分钟，将溶剂B比从25％直线保持至100％，接着的10分钟将溶剂B比保持为100％，最后将溶剂B比保持在25％10分钟。洗脱速度为5ml/分钟，检测在215nm下进行。按照与实施例13同样的方法测定收集的级分的NGF产生增强活性。结果表明保持时间0～22.5分钟、22.5～25分钟、25～31.5分钟、31.5～32.5分钟、32.5～37分钟、37～43.5分钟、43.5～47分钟、47～50.5分钟、50.5～77分钟、77～78.5分钟、78.5～81.5分钟的级分有NGF产生增强活性。其结果如表41所示。表41级分(保持时间分钟) 浓度(mg/ml) NGF产生量(％)1(0～22.5) 9.60 415.022(22.5～25)0.175 172.103(25～31.5)7.00 854.944(22.5～25)0.30 149.795(31.5～32.5) 0.50 153.656(32.5～37)1.70 272.967(37～43.5)1.50 369.968(43.5～47)0.475 190.999(47～50.5)2.90 507.3010(50.5～77) 0.70 179.8311(78.5～81.5) 0.15 166.52(其中，对照的NGF产生量为0.143ng/ml。)(5)使用反相色谱再次分级实施例28-(4)中确认了强活性的保持时间25～31.5分钟的级分。下面表示其条件。柱使用TSK-GELCarbon-500(直径4.6mm×长10cmTosoh社制)。对于溶剂A(蒸馏水)和溶剂B(以体积比1比1混合蒸馏水和乙腈而成的物质)的洗脱比，从0分钟到15分钟，将溶剂B比从25％直线保持至45％，接着的10分钟将溶剂B比保持为45％，最后将溶剂B比保持在25％5分钟。洗脱速度为1ml/分钟，检测在215nm下进行。结果可以分级成分别含有7.82分钟和11.09分钟的峰的两个级分。
(6)通过质量分析计(DX302日本电子社制)，解析实施例28-(5)中用TSK-GEL Carbon-500色谱分级的含有7.82分钟峰的级分的质谱(MS)。基体使用甘油。结果检测出m/z131、185、223、321的峰。图11表示质谱。在图11中，横轴表示m/z值，纵轴表示相对强度。
(7)通过红外线吸收(IR)波谱(FTIR-8200PC岛津制作所社制)，结构解析实施例28-(5)中用TSK-GEL Carbon-500色谱分级的含有7.82分钟峰的级分。图12表示IR波谱。图12中，横轴表示红外线波长的倒数，纵轴表示透过率。
(8)通过1H-核磁共振(NMR)波谱(JNM-A500日本电子社制)结构解析实施例28-(5)中用TSK-GEL Carbon-500色谱分级的含有7.82分钟峰的级分。样品溶解于重水中。图13表示1H-NMR波谱。在图13中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。
(9)通过13C-核磁共振(NMR)波谱(JNM-A500日本电子社制)结构解析实施例28-(5)中用TSK-GEL Carbon-500色谱分级的含有7.82分钟峰的级分。样品溶解于重水中。图14表示13C-NMR波谱。在图14中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。
(10)通过质量分析计(DX302日本电子社制)，解析实施例28-(5)中用TSK-GEL Carbon-500色谱分级的含有11.09分钟峰的级分的质谱(MS)。基体使用甘油。结果检测出m/z131、185、223、321的峰。图15表示质谱。在图15中，横轴表示m/z值，纵轴表示相对强度。
(11)通过红外线吸收(IR)波谱(FTIR-8200PC岛津制作所社制)，结构解析实施例28-(5)中用TSK-GEL Carbon-500色谱分级的含有11.09分钟峰的级分。图16表示IR波谱。图16中，横轴表示红外线波长的倒数，纵轴表示透过率。
(12)通过1H-核磁共振(NMR)波谱(JNM-A500日本电子社制)结构解析实施例28-(5)中用TSK-GEL Carbon-500色谱分级的含有11.09分钟峰的级分。样品溶解于重水中。图17表示1H-NMR波谱。在图17中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。
(13)通过13C-核磁共振(NMR)波谱(JNM-A500日本电子社制)结构解析实施例28-(5)中用TSK-GEL Carbon-500色谱分级的含有11.09分钟峰的级分。样品溶解于重水中。图18表示含有峰的级分的13C-NMR波谱。在图18中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。实施例29(1)将当归干燥品(阪本汉方堂社制)480g用进料(フ-ド)处理器粉碎，用乙酸乙酯约1升提取2次，将得到的有机层级分减压浓缩后，将浓缩物供于硅胶色谱。依次分步用氯仿∶甲醇＝100∶1(600mL)、12∶1(600mL)洗脱吸附物，每8ml分别收集为1级分。集中得到的级分76以后的级分进行减压浓缩，将浓缩物供于以己烷∶乙酸乙酯＝1.8∶1为展开剂的硅胶色谱，从而得到在级分25～50中高浓度地含有黄香独活内酯的级分。由该级分用乙酸乙酯和己烷进行重结晶，从而得到高纯度的黄香独活内酯约200mg。NMR波谱的测定结果如下所示。
1H-NMRδ1.58(3H，s，-Me)，1.66(3H，s，-Me)，1.81(3H，s，-Me)，2.08(4H，m)，3.48(2H，d，J 7Hz)，5.04(1H，m)，5.29(1H，m)，6.40(1H，dJ5’，6’9Hz，H-5’)，6.86(2H，d，J5，69，J2，39Hz，H-2，6)，7.45(1H，d，Jα，β15Hz，H-α)，7.54(2H，d，H-3，5)，7.71(1H，d，H-6’)，7.82(1H，d，H-β)其中，样品溶解于重氯仿中，以残留氯仿的化学位移值为2.49ppm进行表示。
(2)按照与实施例13同样的方法测定实施例29-(1)中配制的黄香独活内酯的NGF产生增强活性。添加黄香独活内酯，使之为25、50、100μM。结果如表42所示。黄香独活内酯增强L-M细胞的NGF产生。表42黄香独活内酯浓度(μM)NGF产生量(％)25 126.150 202.6100 265.7(其中，对照的NGF产生量为0.199ng/ml。)实施例30(1)向干燥当归根部粉末5.8kg中加入24升的乙酸乙酯，室温下提取3小时。向抽滤后的残渣中加入18升的乙醇，室温下提取一夜。接着，向抽滤后的残渣中加入52升的蒸馏水，在60度下提取3小时。将除去固态残渣的液体部分用旋转蒸发器浓缩，向得到的物质中加入2.5倍量的乙醇，4℃下静置一夜。然后，通过抽滤分级成沉淀物和液体部分。将液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到当归根部水提取低分子级分。接着，将当归根部水提取低分子级分供于Amberlite XAD-2(Organo社制树脂量2升)，用蒸馏水30升充分冲洗非吸附物，接着用16升的甲醇洗脱吸附物。将甲醇洗脱液用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到当归根部水提取低分子XAD-2级分处理物。
(2)按照与实施例13相同的方法测定实施例30-(1)中记载的上述当归根部水提取低分子级分XAD-2处理物的NGF产生增强活性。添加当归根部水提取低分子级分XAD-2处理物，使之为0.85、1.7、3.4mg/ml。如表43所示，当归根部水提取低分子级分XAD-2处理物浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。表43试样浓度00.85 1.7 3.4(mg/ml)NGF(％) 100 655.3 858.8 1127.6(其中，对照的NGF产生量为0.074ng/ml。)(3)使用反相色谱分级实施例30-(1)中记载的当归根部水提取低分子级分XAD-2处理物的活性成分。下面表示其条件。树脂使用Cosmosil140 C18-OPN(nakalaitesque社制树脂量400ml)。供给当归根部水提取低分子级分XAD-2处理物，依次用1升的蒸馏水、20％乙腈水溶液、25％乙腈水溶液、40％乙腈水溶液、甲醇作为展开剂进行洗脱，减压浓缩各洗脱级分，配制各Cosmosil分级物。
(4)按照与实施例13相同的方法测定实施例30-(3)中记载的Cosmosil140色谱分级物的NGF产生增强活性。结果表明20％乙腈水溶液洗脱级分、25％乙腈水溶液洗脱级分、40％乙腈水溶液洗脱级分有NGF产生增强活性。其结果如表44所示。表44级分 试样浓度 NGF产生量(mg/ml) (％)010020％乙腈水溶液洗脱级分 4.05 301.08.1 436.716.2 1263.325％乙腈水溶液洗脱级分 0.7 161.71.5 1028.82.8 2110.440％乙腈水溶液洗脱级分 0.575465.31.15 653.12.3 1226.2(其中，对照的NGF产生量，20％乙腈水溶液洗脱级分为0.074，25％、40％乙腈水溶液洗脱级分为0.087ng/ml。)(5)使用反相色谱分级实施例30-(3)中记载的Cosmosil140的25％乙腈水溶液洗脱级分的活性成分。
下面表示其条件。柱使用TSK gel ODS-80Ts(21.5mm×30cmTosoh社制)。对于溶剂A(蒸馏水)和溶剂B(以体积比1比1混合蒸馏水和乙腈而成的物质)的洗脱比，从0分钟到120分钟，将溶剂B比从25％直线保持至100％，接着的20分钟将溶剂B比保持为100％，最后将溶剂B比保持在25％20分钟。洗脱速度为5ml/分钟，检测在235nm下进行。以紫外线吸收为指标收集级分。
(6)按照与实施例13相同的方法测定实施例30-(5)中记载的Cosmosil25％乙腈水溶液洗脱级分的ODS-80Ts色谱分级物的活性。结果表明多数级分有NGF产生增强活性。其结果如表45所示。表45分离级分 浓度 NGF产生量(检测峰分钟) (mg/ml) (％)1(46.0、47.2、49.0)2.00 250.82(53.2)2.00 275.23(54.0)2.00 318.74(54.9、55.5、56.4)2.00 293.05(57.6)2.00 320.56(58.6)2.00 297.87(59.3)2.00 324.88(60.5)2.00 324.89(61.3)2.00 402.810(62.2) 2.00 565.511(63.0) 2.00 616.912(64.1) 2.00 575.413(66.9) 2.00 805.314(68.4) 2.00 819.615(69.2) 2.00 510.216(70.3) 1.00 389.217(71.3、71.9) 1.00 609.118(73.0、73.8、74.9) 0.50 1002.519(75.4) 0.50 851.320(76.5) 1.00 838.521(77.7) 1.00 249.422(79.6、80.5) 0.50 234.323(82.4) 0.25 359.124(84.1) 0.25 285.825(85.5) 0.0625 359.126(86.9、87.5) 0.10 411.627(89.1) 0.50 443.328(91.4) 0.05 1058.129(92.8) 0.20 672.030(93.8、95.8、97.5、100.0、100.6) 0.50 593.6(其中，对照的NGF产生量，级分1～9为0.355，级分10～18为0.382，级分19～27为0.415，级分28～30为0.450ng/ml。)(7)通过质量分析计(DX302日本电子社制)，采用FAB-MS方法测定实施例30-(6)中确认了活性的来源于当归根部的级分10(含有保持时间62.2分钟的检测峰的级分)的质谱(MS)。基体使用甘油。结果检测出m/z245(M-OG1c)+的峰。图19表示来源于当归根部的级分10的FAB-MS波谱。在图19中，横轴表示m/z值，纵轴表示相对强度。
使用核磁共振(NMR)波谱装置(JNM-A500日本电子社制)，测定各种NMR波谱，结构解析来源于当归根部的级分10。下面表示NMR的归属信号。
1H-NMRδ1.36(3H，s，2’-CH3)，1.37(3H，s，2’-CH3)，3.08(2H，m，2”-H和4”-H)，3.12(1H，m，3”-H)，3.41(1H，m，5”-H)，3.81(1H，d，J＝4.5Hz，3’-H)，4.11(1H，dd，J＝7.0，11.5Hz，6”-H)，4.35，(1H，brd，J＝11.5Hz，6”-H)，4.53(1H，d，J＝7.5 Hz，1”-H)，5.14(1H，d，J＝4.5 Hz，4’-H)，6.28(1H，d，J＝9.5Hz，3-H)，6.78(1H，d，J＝8.5Hz，6-H)，7.54(1H，d，J＝8.5Hz，5-H)，7.98(1H，d，J＝9.5Hz，4-H)其中，在1H-NMR中，试样溶解于重二甲基亚砜中，以残留二甲基亚砜的化学位移值为2.49ppm进行表示。图20表示来源于当归根部的级分10的1H-NMR波谱。图20中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。
对来源于当归根部的级分10进行的质谱、NMR波谱解析的结果确定活性成分为3’-O-β-D-Glucopyranoyl Khellactone(分子量424)。
(8)使用反相色谱再次分级实施例30-(6)中确认了强活性的级分13(含有保持时间66.9分钟的检测峰的级分)。
下面表示其条件。柱使用TSK gel ODS-80TsQA(4.6mm×25cmTosoh社制)。溶剂A(含有0.1％三氟乙酸的蒸馏水)和溶剂B(以体积比1比1混合蒸馏水和乙腈而成的物质，并含有0.1％的三氟乙酸)的洗脱比为将溶剂B比保持在50％20分钟。洗脱速度为1ml/分钟，检测在235nm下进行。以紫外线吸收为指标收集级分。
(9)按照与实施例13相同的方法测定实施例30-(8)中用TSKgel ODS-80TsQA色谱分级的级分的活性。结果表明含有7.9、8.7、9.2、10.2、11.5、12.7、13.9分钟的检测峰的级分有NGF产生增强活性。其结果如表46所示。表46分离级分 浓度 NGF产生量(检测峰分钟) (mg/ml)(％)13-1(7.9) 0.56 654.313-2(8.7) 1.00 792.113-3(9.2) 0.56 366.913-4(9.7) 0.96 363.913-5(10.2) 0.96 361.013-6(11.5) 1.00 232.013-7(12.7) 0.50 261.313-8(13.9) 1.00 630.8(其中，对照的NGF产生量为0.053ng/ml。)(10)与实施例30-(7)同样，测定实施例30-(9)中确认了活性的来源于当归根部的级分13-2的质谱、NMR波谱。
通过质量分析，检测出m/z393(M+H)+的峰。图21表示来源于当归根部的级分13-2的MS波谱。在图21中，横轴表示m/z值，纵轴表示相对强度。
表示来源于当归根部的级分13-2的核磁共振(NMR)的NMR归属信号。
1H-NMRδ1.61(3H，s，3’-CH3)，1.78(3H，s，3’-CH3)，3.17(1H，t，J＝9.5Hz，4”-H)，3.28(1H，m，3”-H)，3.29(1H，m，2”-H)，3.38(1H，m，5”-H)，3.40(1H，m，1’-H)，3.46(1H，m，6”-H)，3.58(1H，m，1’-H)，3.69(1H，m，6’’-H)，4.94(1H，d，J＝7.5Hz，1”-H)，5.20(1H，m，2’-H)，6.30(1H，d，J＝9.5Hz，3-H)，7.11(1H，d，J＝8.5Hz，6-H)，7.51(1H，d，J＝8.5Hz，5-H)，7.98(1H，d，J＝9.5Hz，4-H)图22表示来源于当归根部的级分13-2的1H-NMR波谱。在图22中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。
13C-NMRδ17.8(3’-CH3)，21.6(1’-c)，25.5(3’-CH3)，60.6(6”-c)，69.7(4”-C)，73.4(2”-C)，76.7(3”-c)，77.1(5”-c)，100.8(1”-c)，111.5(6-c)，112.8(3-c)，113.4(10-c)，117.4(8-c)，121.3(2’-c)，126.8(5-c)，131.5(3’-c)，144.5(4-c)，152.1(9-c)，157.8(7-c)，160.2(2-c)其中，在13C-NMR中，试样溶解于重二甲基亚砜中，以重二甲基亚砜的化学位移值为39.5ppm进行表示。图23表示来源于当归根部的级分13-2的13C-NMR波谱。图23中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。
对来源于当归根部的级分13-2进行的质谱、NMR波谱解析的结果确定活性成分为7-0-β-D-Glucopyranosyloxy-8-prenylcoumarin(分子量392)。
(11)采用与实施例30-(8)相同的方法，使用反相色谱再次分级实施例30-(6)中确认了强活性的级分18(含有保持时间73.0、73.8、74.97分钟的检测峰的级分)。
(12)按照与实施例13相同的方法测定实施例30-(11)中用TSK gel ODS-80TsQA色谱分级的级分的活性。结果表明含有9.3、10.1、10.6、11.2、12.0、12.8、13.3、14.0、15.2、16.1、18.6分钟的检测峰的级分有NGF产生增强活性。其结果如表47所示。表47分离级分 浓度NGF产生量(检测峰分钟) (mg/ml) (％)18-1(9.3)0.201489.618-2(10.1) 0.502222.918-3(10.6) 0.253039.618-4(10.9) 0.0375 2510.418-5(11.2) 0.125 610.418-6(12.0) 0.50560.418-7(12.8) 0.50681.318-8(13.3) 0.40339.618-9(14.0) 1.00410.418-10(15.2) 1.002510.718-11(16.1) 1.003360.718-12(18.6) 1.001189.3(其中，对照的NGF产生量，18-1～9为0.027，18-10～12为0.015、ng/ml。)(13)与实施例30-(7)同样，测定实施例30-(12)中确认了活性的来源于当归根部的级分18-3的质谱、NMR波谱。
通过质量分析，检测出m/z195(M+H)+的峰。图24表示来源于当归根部的级分18-3的MS波谱。在图24中，横轴表示m/z值，纵轴表示相对强度。
表示NMR的归属信号。
1H-NMRδ3.68(3H，s，OCH3)，6.25(1H，d，J＝16.0Hz，2’-H)，6.75(1H，d，J＝8.0Hz，5-H)，6.98(1H，dd，J＝2.0，8.0Hz，6-H)，7.03(1H，d，J＝2.0，2-H)，7.46(1H，d，J＝16.0Hz，3’-H)，9.10(1H，s，3-OH)，9.56(1H，s，4-OH)图25表示来源于当归根部的级分18-3的1H-NMR波谱。在图25中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。
对来源于当归根部的级分18-3进行的质谱、NMR波谱解析的结果确定活性成分为咖啡酸甲酯(分子量194)。
(14)与实施例30-(5)同样，测定实施例30-(12)中确认了活性的所述来源于当归根部的级分18-4的质谱、NMR波谱。
通过质量分析，检测出m/z253(M+H)+的峰。图26表示来源于当归根部的级分18-4的MS波谱。在图26中，横轴表示m/z值，纵轴表示相对强度。
表示NMR的归属信号。
1H-NMRδ1.15(3H，s，2-CH3)，1.27(3H，s，2-CH3)，2.39(1H，dd，J＝8.0，17.0Hz，4-H)，2.76(，1H，dd，J＝5.0，17.0Hz，4-H)，3.62(1H，m，3-H)，3.81(3H，s，5-OCH3)，5.16(1H，d，J＝4.5 Hz，3-OH)，6.56(1H，d，J＝9.0Hz，6-H)，7.59(1H，d，J＝9.0Hz，10-H)，11.86(1H，brs，8-COOH)
图27表示来源于当归根部的级分18-4的1H-NMR波谱。在图27中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。
13C-NMRδ20.4(2-CH3)，25.4(2-CH3)，26.2(4-C)，55.7(5-OCH3)，67.0(3-C)，77.6(2-C)，101.8(6-C)，109.4(10-C)，112.5(8-C)，130.7(7-C)，153.3(9-C)，160.4(5-C)，166.6(8-COOH)图28表示来源于当归根部的级分18-4的13C-NMR波谱。图28中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。
来源于当归根部的级分18-4的质谱、NMR波谱解析的结果确定活性成分为8-Carboxyl-3-hydroxy-5-methoxyl-2-dimethylchroman(分子量252)。
(15)混合实施例30-(6)中确认了强活性的级分19(含有保持时间75.4分钟的检测峰的级分)、级分20(含有76.5分钟的检测峰的级分)，采用与实施例30-(8)相同的方法，使用反相色谱再次进行分级。
(16)按照与实施例13相同的方法测定实施例30-(15)中用TSK gel ODS-80TsQA色谱分级的级分的活性。结果表明含有13.7、14.3、15.1、15.5、16.4、18.8、20.5分钟的检测峰的级分有NGF产生增强活性。其结果如表48所示。表48分离级分 浓度 NGF产生量(检测峰分钟) (mg/ml) (％)19、20-1(13.7) 0.60 192.419、20-2(14.3) 1.00 246.619、20-3(15.1) 1.00 372.219、20-4(15.5) 0.60 529.819、20-5(16.4) 1.00 487.919、20-6(18.8) 1.00 337.719、20-7(20.5) 0.364305.7(其中，对照的NGF产生量为0.063ng/ml。)
(17)与实施例30-(7)同样，测定实施例30-(16)中确认了活性的来源于当归根部的级分19、20-5的质谱、NMR波谱。
通过质量分析，检测出m/z393(M+H)+的峰。图29表示来源于当归根部的级分19、20-5的MS波谱。在图29中，横轴表示m/z值，纵轴表示相对强度。
表示NMR的归属信号。
1H-NMRδ1.67(3H，s，3’-CH3)，1.69(3H，s，3’-CH3)，3.15(1H，m，4”-H)，3.29(3H，m，1’-H，2”-Hぉょび3”-H)，3.37(1H，dd，J＝7.5，15.5Hz，1’-H)，3.45(2H，m，5”-Hぉょび6”-H)，3.72(1H，dd，J＝10.5，6”-H)，4.97(1H，d，J＝7.5Hz，1”-H)，5.31(1H，t，J＝7.5Hz，2’-H)，6.28(1H，d，J＝9.0Hz，3-H)，7.07(1H，s，5-H)，7.41(1H，s，8-H)，7.98(1H，d，J＝9.0Hz，4-H)图30表示来源于当归根部的级分19、20-5的1H-NMR波谱。在图30中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。
13C-NMRδ17.6(3’-CH3)，25.5(3’-CH3)，27.4(1’-C)，60.6(6”-C)，69.6(4”-C)，73.1(2”-C)，76.3(3”-C)，77.0(5”-C)，100.4(1”-C)，102.0(8-C)，112.8(10-C)，112.9(3-C)，121.8(2’-C)，127.4(6-C)，128.0(5-C)，132.4(3’-C)，144.4(4-C)，153.4(9-C)，157.9(7-C)，160.6(2-C)图31表示来源于当归根部的级分19、20-5的13C-NMR波谱。图31中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。
对来源于当归根部的级分19、20-5进行的质谱、NMR波谱解析的结果确定活性成分为7-β-D-Glucopyranosyloxy-6-prenylcoumarin(分子量392)。
(18)测定实施例30-(15)中记载的来源于当归根部的级分19、20-6的质谱、NMR波谱。
通过质量分析计，检测出m/z245(M-2Glc-Angel)+、669(M+H)+、691(M+Na)+、707(M+K)+的峰。图32表示来源于当归根部的级分19、20-6的MS波谱。在图32中，横轴表示m/z值，纵轴表示相对强度。
表示NMR的归属信号。
1H-NMRδ1.36(3H，s，2’-CH3)，1.43(3H，s，2’-CH3)，1.79(3H，brs，，2”-CH3)，1.86(3H，brd，J＝7.0Hz，3”-CH3)，2.90(1H，t，J＝8.0Hz，2b-H)，2.99(1H，m，2a-H)，3.01(1H，m，4a-H)，3.02(1H，m，4b-H)，3.05(1H，m，3b-H)，3.13(1H，t，J＝9.5Hz，3a-H)，3.35(1H，m，5a-H)，3.39(1H，m，5b-H)，3.39(1H，m，6b-H)，3.49(1H，dd，J＝8.0，11.0Hz，6a-H)，3.64(1H，d，J＝11.5Hz，6b-H)，4.02(1H，d，J＝11.0Hz，6a-H)，4.21(1H，d，J＝8.0Hz，1b-H)，4.37(1H，d，J＝4.5Hz，3’-H)，4.46(1H，brs，6b-OH)，4.48(1H，d，J＝7.5Hz，1a-H)，4.51(1H，brs，2a-OH)，4.72(1H，brs，3b-OH)，4.83(1H，brs，2b-OH)，4.86(1H，brs，4a-OH)，5.03(2H，brs，4b-OH，3a-OH)，5.96(1H，brq，J＝7.0Hz，3”-H)，6.26(1H，d，J＝9.5Hz，3-H)，6.61(1H，d，J＝4.5Hz，4’-H)，6.83(1H，d，J＝8.5Hz，6-H)，7.59(1H，d，J＝8.5Hz，5-H)，7.96(1H，d，J＝9.5Hz，4-H)图33表示来源于当归根部的级分19、20-6的1H-NMR波谱。在图33中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。
13C-NMRδ15.2(3”-CH3)，20.0(2”-CH3)，21.3(2’-CH3)，26.4(2’-CH3)，59.1(4’-C)，61.0(6b-C)，69.2(6a-C)，70.0(glucose-C)，70.4(glucose-C)，73.4(glucose-C)，73.7(3’-C)，73.9(glucose-C)，76.1(glucose-C)，76.55(glucose-C)，76.59(glucose-C)，76.8(glucoSe-C)，77.8(2’-C’)，100.5(1a-C)，103.8(1b-C)，107.7(8-C)，112.1(3-C)，112.1(10-C)，114.2(6-C)，128.0(2”-C)，129.8(5-C)，136.1(3”-C)，144.5(4-C)，153.6(9-C)，156.2(7-C)，159.4(2-C)，166.3(1”-C)图34表示来源于当归根部的级分19、20-6的13C-NMR波谱。图34中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。
对来源于当归根部的级分19、20-6进行的质谱、波谱解析的结果确定活性成分为4’-O-Angeloyl-3’-O-〔6-O-(β-D-glucopyranosyl)-β-D-glucopyranosyl〕-khellactone(分子量668)。
(19)与实施例30-(7)相同，测定实施例30-(6)中确认了活性的来源于当归根部的级分28(含有保持时间91.4分钟的检测峰的级分)的质谱、NMR波谱。
通过质量分析，检测出m/z209(M+H)+的峰。图35表示来源于当归根部的级分28的MS波谱。在图35中，横轴表示m/z值，纵轴表示相对强度。
表示NMR的归属信号。
1H-NMRδ1.23(3H，t，J＝7.0Hz，2”-H)，4.14(2H，q，J＝7.0Hz，1”-H)，6.24(1H，d，J＝16.0Hz，2’-H)，6.74(1H，d，J＝8.0Hz，5-H)，6.98(1H，dd，J＝2.0，8.0Hz，6-H)，7.03(1H，d，J＝2.0Hz，2-H)，7.45(1H，d，J＝16.0Hz，3’-H)，9.11(1H，s，3-OH)，9.57(1H，s，4-OH)图36表示来源于当归根部的级分28的1H-NMR波谱。在图36中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。
对来源于当归根部的级分28进行的质谱、NMR波谱解析的结果确定活性成分为咖啡酸乙酯(分子量208)。
与实施例4-(1)相同，测定咖啡酸乙酯、咖啡酸甲酯的NGF产生增强活性。如表49所示，咖啡酸乙酯、咖啡酸甲酯增强L-M细胞的NGF产生。表49咖啡酸乙酯(μg/ml) 0 62.5NGF产生量(％) 100 1279.1咖啡酸甲酯(μg/ml) 0 62.5NGF产生量(％) 100 824.4(其中，对照的NGF产生量为0.109ng/ml。)实施例31(1)将洋葱的薄皮25g冷冻干燥后粉碎，向得到的物质中加入500ml的甲醇，室温下进行提取。将除去残渣的液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到甲醇提取物。按照与实施例13相同的方法测定这样配制的甲醇提取物的NGF产生增强活性。添加洋葱薄皮甲醇提取物，使之为0.096、0.192、0.384、0.576、0.768、0.96mg/ml。结果，洋葱薄皮甲醇提取物浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。其结果如表50所示。表50洋葱薄皮甲醇提取级分浓度(mg/ml)NGF产生量(％)0 1000.096 140.40.192 136.40.384 200.50.576 277.30.768 307.60.960 349.0(其中，对照的NGF产生量为0.050ng/ml。)(2)向银杏叶(100％GINKGO BILOBA TEAGINKGOTON社制)3g中加入蒸馏水200ml，在100℃下进行提取。取除去残渣的液体部分，得到银杏叶水提取物。按照与实施例13相同的方法测定这样配制的水提取物的NGF产生增强活性。添加银杏叶水提取物，使之为0.625、1.25、2.5、5％(v/v)。结果，银杏叶提取物浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。其结果如表51所示。表51银杏叶水水提取物浓度(mg/ml)NGF产生量(％)0 1000.625 272.91.25305.02.5 255.25.0 231.9(其中，对照的NGF产生量为0.055ng/ml。)实施例32将蔷薇花(由中国本地市场得到)2g粉碎，向得到的物质中加入40ml的氯仿，室温下进行提取。向通过过滤除去氯仿提取液的残渣中加入40ml的乙醇，在室温下进行提取。将除去残渣得到的液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到乙醇提取级分。接着，向残渣中加入40ml的蒸馏水，在60度下提取1小时。向除去残渣得到的液体部分加入2.5倍量的乙醇，在负30度下静置2小时。然后，以10,000G的离心分级成沉淀物和液体部分。液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到水提取级分-1。另一方面，将沉淀物再次溶解于蒸馏水中，得到水提取级分-2。按照与实施例13同样的方法测定这样配制的各级分的NGF产生增强活性。添加蔷薇花乙醇提取级分，使之为0.115、0.23mg/ml。添加水提取级分-1，使之为0.41、0.821mg/ml。添加水提取级分-2，使之为0.084、0.167mg/ml。其结果如表52所示。蔷薇花乙醇提取级分、水提取级分-1、水提取级分-2浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。表52试样 浓度(mg/ml)NGF产生量(％)蔷薇花乙醇提取级分 0 1000.115 623.50.23 615.6蔷薇花水提取级分-1 0 1000.41 307.70.821 365.9蔷薇花水提取级分-2 0 1000.084 195.80.167 219.7(其中，对照的NGF产生量为0.136ng/ml。)实施例33按照与实施例13相同的方法，测定来源于蛇麻花的黄腐酚级分(ホップスタィナ-社制)的NGF产生增强活性。添加黄腐酚级分，使最终浓度为0.0148、0.0297、0.0594、0.119mg/ml。结果如表53所示。黄腐酚级分浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。表53黄腐酚级分浓度(mg/ml) NGF产生量(％)01000.0148 144.00.0297 242.70.0594 401.60.119438.6(其中，对照的NGF产生量为0.206ng/ml。)实施例34(1)将通过实施例33确认了NGF产生促进活性的黄腐酚级分(ホップシュタィナ-社制)0.4g用氯仿3ml溶解，供于硅胶色谱。依次分步用氯仿(1000ml)、氯仿∶甲醇＝50∶1(1000ml)、氯仿∶甲醇＝20∶1(1000ml)进行洗脱，每8ml分别收集为1级分。将得到的级分67～100减压浓缩，得到来源于蛇麻花的黄腐酚级分-级分A。
(2)再使用反相色谱纯化、分离上述黄腐酚级分-级分A。下面表示其条件。柱使用TSK gel ODS-80Ts(直径21.5mm×长30cmTosoh社制)。对于溶剂A(以体积比3比2混合蒸馏水和乙腈而成的物质，并含有0.1％三氟乙酸)和溶剂B(以体积比1比4混合蒸馏水和乙腈而成的物质，并含有0.1％三氟乙酸)的洗脱比，从0分钟到60分钟，将溶剂B比从50％直线保持至100％，接着的20分钟将溶剂B比保持为100％，最后将溶剂B比保持在50％20分钟。洗脱速度为5ml/分钟，检测在370nm下进行。每1分钟收集1级分。
(3)按照与实施例13相同的方法测定上述黄腐酚级分-级分A的反相色谱级分的NGF产生增强活性。结果表明含有21.1、22.2、24.2、25.7、28.6分钟的峰的级分有NGF产生增强活性。其结果如表54所示。表54级分(保持时间分钟) 浓度(mg/ml)NGF产生量(％)A-1(21.1) 0.025 92.40.05 151.4A-2(22.2) 0.05 109.50.1136.20.2208.6A-3(24.2) 0.0125 134.30.025 151.40.05 202.90.1298.1A-4(25.7) 0.025 197.10.05 345.70.1416.2A-5(28.6) 0.0125 145.70.025 189.50.05 229.50.1517.1(其中，对照的NGF产生量为0.093ng/ml。)
(4)通过质量分析计(DX302日本电子社制)，采用FAB-MS方法测定上述级分A-5(含有保持时间28.6分钟的检测峰的级分)的质谱(MS)。基体使用甘油。结果检测出m/z371(M+H)+的峰。图37表示来源于黄腐酚级分的级分A-5的MS波谱。在图37中，横轴表示m/z值，纵轴表示相对强度。
再使用核磁共振(NMR)波谱装置(JNM-A500日本电子社制)，测定各种NMR波谱，进行结构解析，结果确定活性成分为黄腐酚B(分子量370)和黄腐酚D(分子量370)的混合物(混合比1∶1.65)。下面表示NMR的归属信号。黄腐酚B1H-NMRδ1.21(3H，s，6”-H)，1.27(3H，s，6”-H)，2.70(2H，m，4”-H)，3.65((1H，m，5”-H)，3.87(3H，s，6’-OCH3)，6.00(1H，s，5’-H)，6.80(2H，m，3-H和5-H)，7.55(2H，m，2-H 和6-H)，7.70(1H，m，β-H)，7.75(1H，m，α-H)，10.12(1H，s，4-OH)，14.18(1H，s，2’-OH)黄腐酚D1H-NMRδ1.71(3H，s，5”-H)，2.60(2H，m，1”-H)，3.85(3H，s，6’-OCH3)，4.20(1H，m，2”-H)，4.58(1H，s，4”-H)，4.61(1H，s，4”-H)，6.04(1H，s，5’-H),6.80(2H，m，3-H和5-H),7.55(2H，m，2-H和6-H)，7.70(1H，m，β-H)，7.75(1H，m，α-H)，10.09(1H，s，4-OH)，10.58(1H，s，4’-OH)，14.69(1H，s，2’-OH)其中，试样溶解于重二甲基亚砜中，以残留二甲基亚砜的化学位移值为2.49ppm进行表示。图38表示来源于黄腐酚级分的级分A-5的1H-NMR波谱。图38中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。
(5)使用反相色谱，对来源于蛇麻花的黄腐酚级分中的活性成分如下所述进行纯化、分离。
下面表示其条件。
柱使用TSK gel ODS-80TsQA(直径4.6mm×长25cmTosoh社制)。对于溶剂A(以体积比3比1混合蒸馏水和乙腈而成的物质，并含有0.1％三氟乙酸)和溶剂B(以体积比1比3混合蒸馏水和乙腈而成的物质，并含有0.1％三氟乙酸)的洗脱比，从0分钟到20分钟，将溶剂B比从50％直线保持至100％，接着的5分钟将溶剂B比保持为100％，最后将溶剂B比保持在50％5分钟。洗脱速度为1ml/分钟，检测在215nm下进行。每1分钟收集1级分，按照与实施例13相同的方法测定各级分的活性。
结果表明含有12.8分钟的检测峰的级分有活性。对该级分进行质谱解析，检测出分子量为355的信号。而且，进行1H-NMR波谱解析时，可知活性成分为黄腐酚(分子量354.4)。NMR波谱、质谱的测定结果如下所示。
1H-NMRδ1.60(3H，s，-Me)，1.69(3H，s，-Me)，3.12(2H，d，J 7Hz，H-1”a，b)，3.86(3H，s，-OMe)，5.13(1H，t，J 7Hz，H-2”)，6.07(1H，s，H-5’)，6.83(2H，d，J2，39Hz，J5，69Hz，H-2，6)，7.56(2H，d，H-3，5)，7.66(1H，d，Ja，b16Hz)，7.75(1H，d)，10.05(1H，s，OH-4)，10.55(1H，s，OH-4’)，14.63(1H，s，OH-2’)其中，试样溶解于重二甲基亚砜中，以残留二甲基亚砜的化学位移值为2.49ppm进行表示。图39表示1H-NMR波谱。图39中，横轴表示化学位移值(ppm)，纵轴表示信号强度。
FAB-MSm/z355(M+H)+(其中，基体使用甘油。)实施例35(1)按照与实施例13相同的方法测定实施例34中得到的纯化黄腐酚的NGF产生增强活性。添加纯化黄腐酚，使之为12.5、25、50μM。结果如表55所示。纯化黄腐酚增强L-M细胞的NGF产生。表55黄腐酚浓度(μM)NGF产生量(％)010012.5 235.525 387.950 443.0(其中，对照的NGF产生量为0.095ng/ml。)(2)将来源于蛇麻花的黄腐酚级分(ホップシュタィナ-社制)0.4g用氯仿3ml溶解，供于硅胶色谱。依次分步用氯仿(1000ml)、氯仿∶甲醇＝50∶1(1000ml)、氯仿∶甲醇＝20∶1(1000ml)进行洗脱，每8ml分别收集为1级分。将得到的级分67～100减压浓缩，得到来源于蛇麻花的黄腐酚级分-级分A。再使用反相色谱，纯化来源于蛇麻花的黄腐酚级分-级分A。下面表示其条件。柱使用TSK gel ODS-80Ts(直径21.5mm×长30cmTosoh社制)。对于溶剂A(以体积比3比2混合蒸馏水和乙腈而成的物质，并含有0.1％三氟乙酸)和溶剂B(以体积比1比4混合蒸馏水和乙腈而成的物质，并含有0.1％三氟乙酸)的洗脱比，从0分钟到60分钟，将溶剂B比从50％直线保持至100％，接着的20分钟将溶剂B比保持为100％，最后将溶剂B比保持在50％20分钟。洗脱速度为5ml/分钟，检测在370nm下进行，每1分钟收集1级分。通过将含有保持时间42.5分钟的检测峰的级分浓缩干燥固化，能够配制高纯度的黄腐酚(19.4mg)。
(3)将配制的黄腐酚13.5mg溶解于二甲基亚砜溶液0.75ml中，将得到的物质添加至200ml的10mM乙酸钠缓冲液(pH5.5，含有10％的蔗糖)中，在100℃下加热2小时。冷却后，使用反相色谱分级反应液。下面表示其条件。树脂使用Cosmosil140 C18-OPN(nakalaitesque社制树脂量20ml)。将反应液供于柱，依次用50ml的蒸馏水、20％、30％、40％、50％、60％、70％的乙腈水溶液、甲醇作为展开剂进行洗脱。结果，通过将40％乙腈水溶液洗脱级分浓缩干燥固化，能够得到异黄腐酚(2.1mg)，通过测定各种NMR波谱，解析其结构，从而可以确认结构。
(4)按照与实施例13相同的方法测定配制的异黄腐酚的NGF产生增强活性。添加异黄腐酚，使之为50、100、200μM。如表56所示，异黄腐酚浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生，可知啤酒类饮料中的异黄腐酚的生理活性。表56异黄腐酚试样浓度(μM)0 50 100 200NGF产生量(％)100110.7121.4198.0(其中，对照的NGF产生量为0.181ng/ml。)实施例36(1)将啤酒3个品种(市售品A、市售品B、市售品C)和非酒精啤酒饮料(市售品D)各150ml用旋转蒸发器浓缩至60ml，得到各自的浓缩物。
(2)按照与实施例13相同的方法测定上述浓缩物的NGF产生增强活性。添加啤酒3个品种的浓缩物，使之为2.5、5、10％(体积比)。添加非酒精饮料浓缩物，使之为10％(体积比)。结果如表57所示。啤酒3个品种的浓缩物和非酒精饮料浓缩物浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。表57市售品A浓缩物试样浓度(％)0 2.5 510NGF产生量(％)100 115.5109.3209.9市售品B浓缩物试样浓度(％)0 2.5 510NGF产生量(％)100 86.3 126.2272.4市售品C浓缩物试样浓度(％)0 2.5 510NGF产生量(％)100 111.1153.2365.1市售品D浓缩物试样浓度(％)0 10NGF产生量(％)100 127.0(其中，对照的NGF产生量为0.183ng/ml。)另外，与实施例4-(1)同样测定市售品B浓缩物、市售品D浓缩物的HGF产生增强活性。添加市售品B浓缩物，使之为1％(体积比)。添加市售品D浓缩物，使之为1和5％(体积比)。结果如表58所示。各浓缩物增强MRC-5细胞的HGF产生。表58市售品B浓缩物试样浓度(％)0 1HGF产生量(％)100 218市售品D浓缩物试样浓度(％)0 1 5HGF产生量(％)100 160 158(其中，对照的HGF产生量为4.04ng/ml。)(3)使用质量分析装置，测定市售品A～D、啤酒市售品E～I和发泡酒市售品J～O中的黄腐酚和异黄腐酚含量(参照Journal ofChromatography A，第832卷，第97～107页(1997))。结果如表59所示。在各市售品中，在0.0005～0.032μg/ml的范围含有黄腐酚。另外，在0.0082～1.27μg/ml的范围含有异黄腐酚。特别是黄腐酚含量越多，这些化合物越显示良好的啤酒风味的功能。表59市售品 黄腐酚异黄腐酚(μg/ml) (μg/ml)A 0.021 0.70B 0.00730.58C 0.00700.57D 0.00060 0.034E 0.00600.57F 0.00730.53G 0.017 0.48H 0.021 1.27I 0.00054 0.0082J 0.00360.59K 0.00410.16L 0.00870.77M 0.010 0.23N 0.030 0.62O 0.032 1.10实施例37(1)将蛇麻花(Humulus lupulus)干燥品50g粉碎，加入1000ml的蒸馏水，在60℃下提取1小时。将通过过滤除去残渣的蛇麻花水提取液用旋转蒸发器浓缩至150ml。加入浓缩液225ml的氯仿。进行振荡，分级成水层、氯仿层和中间层。将氯仿层级分用旋转蒸发器蒸馏除去溶剂后，进行浓缩，得到蛇麻花水提取物-氯仿移动级分。
(2)按照与实施例13相同的方法测定上述蛇麻花水提取物-氯仿移动级分的NGF产生增强活性。添加蛇麻花水提取物-氯仿移动级分，使最终浓度为0.02、0.04mg/ml。其结果如表60所示。蛇麻花水提取物-氯仿移动级分浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。表60蛇麻花水提取物-氯仿移动级分NGF产生量(％)(mg/ml)0 1000.02 159.60.04 253.4(其中，对照的NGF产生量为0.120ng/ml。)(3)将蛇麻花干燥品50g粉碎，加入1000ml的乙醇，在4℃下提取18小时。将通过过滤除去残渣的蛇麻花乙醇提取液用旋转蒸发器浓缩，向浓缩液中加入氯仿∶水＝3∶2的混合液，进行振荡，分级成水层和氯仿层。将氯仿层级分用旋转蒸发器蒸馏除去溶剂后，进行浓缩，得到蛇麻花乙醇提取物-氯仿移动级分。
(4)按照与实施例13相同的方法测定实施例37-(3)中得到的蛇麻花乙醇提取物-氯仿移动级分的NGF产生增强活性。添加蛇麻花乙醇提取物-氯仿移动级分，使最终浓度为0.05、0.1mg/ml。其结果如表61所示。蛇麻花乙醇提取物-氯仿移动级分增强L-M细胞的NGF产生。表61蛇麻花乙醇提取物-氯仿移动级分NGF产生量(％)(mg/ml)0 1000.05245.20.1 240.7(其中，对照的NGF产生量为0.120ng/ml。)实施例38(1)将紫郁金(莪术)5g冷冻干燥后粉碎，向得到的物质中加入200ml的氯仿，室温下进行提取。对抽滤后的残渣反复进行该提取操作2次。集中过滤后的液体部分，用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到氯仿提取级分。接着，向氯仿提取后的残渣中加入200ml的乙醇，在室温下进行提取。对抽滤后的残渣反复进行该操作2次。集中过滤后的液体部分，用旋转蒸发器浓缩干燥固化，将干燥固化物溶解于4ml的乙醇中。集中溶解于乙醇的部分，用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到乙醇提取级分-1。另外，将未溶解于乙醇而溶解于蒸馏水的部分集中，用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到乙醇提取级分-2。接着，向乙醇提取后的残渣中加入25ml的蒸馏水，在60度下提取2小时。向除去残渣得到的液体部分加入2.5倍量的乙醇，在负20度下静置1小时。然后，以10,000G的离心分级成沉淀物和液体部分。液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到水提取级分-1。另一方面，将沉淀物再次溶解于蒸馏水中，得到水提取级分-2。
(2)按照与实施例13同样的方法测定实施例38-(1)中配制的紫郁金氯仿提取级分、乙醇提取级分-1、水提取级分-1、水提取级分-2的NGF产生增强活性。添加紫郁金氯仿提取级分，使之为0.108、0.215mg/ml。添加紫郁金乙醇提取级分-1，使之为0.02、0.04mg/ml。添加紫郁金水提取级分-1，使之为0.825、1.65、3.3mg/ml。添加紫郁金水提取级分-2，使之为0.55mg/ml。其结果如表62所示。紫郁金氯仿提取级分、乙醇提取级分-1、水提取级分-1、水提取级分-2浓度依存性地增强L-M细胞的NGF。表62试样 浓度(mg/ml) NGF产生量(％)紫郁金氯仿提取级分 0 1000.108 172.40.215 296.8紫郁金乙醇提取级分-1 0 1000.02149.80.04214.3紫郁金水提取级分-1 0 1000.825 458.61.65500.53.3 559.3紫郁金水提取级分-2 0 1000.55212.0(其中，对照的NGF产生量为0.122ng/ml。)(3)将150g的紫郁金冷冻干燥后粉碎，向得到的物质中加入300ml的氯仿，室温下进行提取。对抽滤后的残渣反复进行该提取操作2次。向氯仿提取后的残渣中加入300ml的乙醇，在室温下进行提取。对抽滤后的残渣反复进行该操作2次。向乙醇提取后的残渣中加入900ml的蒸馏水，在60度下提取2小时。对抽滤后的残渣反复进行该操作。将通过抽滤除去残渣的液体部分浓缩至500ml后，加入2.5倍量的乙醇，在负20度下静置1小时。然后，以10,000G的离心除去沉淀部分，将得到的液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到紫郁金水提取级分-3。
接着，使用合成吸附剂分级紫郁金水提取级分-3的活性成分。
下面表示其条件。
树脂使用Amberlite XAD-2(Organo社制树脂量70ml)。将3.4g的紫郁金水提取级分-3供于XAD-2，用蒸馏水140ml充分冲洗非吸附物，接着用350ml的甲醇洗脱吸附物。将甲醇洗脱物用旋转蒸发器浓缩，得到紫郁金水提取低级分-3的XAD-2处理物。
(4)按照与实施例13同样的方法测定上述紫郁金水提取级分-3的XAD-2处理物的NGF产生增强活性。添加紫郁金水提取级分-3的XAD-2处理物，使之为0.5、1、2mg/ml。其结果如表63所示。紫郁金水提取级分-3的XAD-2处理物浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。表63试样浓度(mg/ml)0 00.5 1.0 2.0NGF产生量(％) 100 340.2526.6607.2(其中，对照为0.328ng/ml。)另外，按照与实施例4-(1)同样的方法测定该处理物的HGF产生增强活性。添加紫郁金水提取低级分-3的XAD-2处理物，使之为2000、1000、500、250μg/ml。其结果如表64所示。紫郁金水提取低级分-3的XAD-2处理物浓度依存性地增强MRC-5细胞的HGF产生。表64试样浓度(μg/ml) 0 2505001000 2000HGF产生量(％) 100112128149192(其中，对照的HGF产生量为8.02ng/ml。)(5)使用反相色谱分级紫郁金水提取级分-3的XAD-2处理物的活性成分。
下面表示其条件。
树脂使用Cosmosil140 C18-OPN(nakalaitesque社制树脂量70ml)。供给紫郁金水提取级分-3的XAD-2处理物0.444g，依次用140ml的蒸馏水、5％乙腈水溶液、10％乙腈水溶液、20％乙腈水溶液、40％乙腈水溶液、乙腈、丙酮作为展开剂进行洗脱，减压浓缩各洗脱级分。
(6)按照与实施例13同样的方法测定由紫郁金水提取级分-3的XAD-2得到的反相色谱级分的NGF产生增强活性。其结果如表65所示。如表所示，可知蒸馏水洗脱级分、10％乙腈水溶液洗脱级分、20％乙腈水溶液洗脱级分、40％乙腈水溶液洗脱级分、乙腈洗脱级分、丙酮洗脱级分有NGF产生增强活性。表65浓度(mg/ml)NGF产生量(％)蒸馏水洗脱级分 0.25 103.20.5133.01.0147.110％乙腈水溶液洗脱级分 0.25 117.70.5130.61.0157.120％乙腈水溶液洗脱级分 0.25 154.60.5192.71.0229.940％乙腈水溶液洗脱级分 0.25 185.10.5255.41.0373.8乙腈洗脱级分 0.025 135.60.05 163.60.1170.0丙酮洗脱级分 0.025 110.40.05 121.00.1140.1(其中，对照的NGF产生量为0.307ng/ml。)另外，按照与实施例4-(1)同样的方法测定由紫郁金水提取低级分-3的XAD-2得到的反相色谱级分的HGF产生增强活性。结果表明蒸馏水洗脱级分、5％乙腈水溶液洗脱级分、10％乙腈水溶液洗脱级分、20％乙腈水溶液洗脱级分有HGF产生增强活性。其结果如表66所示。表66级分 浓度(μg/ml)NGF产生量(％)蒸馏水洗脱级分 20 1272 1065％乙腈水溶液洗脱级分 200 11920 12110％乙腈水溶液洗脱级分 2000264200 12620％乙腈水溶液洗脱级分 2000169200 111(其中，对照的HGF产生量，蒸馏水洗脱级分、5％乙腈水溶液洗脱级分为8.10ng/ml，10％乙腈水溶液洗脱级分为9.00ng/ml，20％乙腈水溶液洗脱级分为9.56ng/ml。)实施例39(1)向粉碎大豆胚芽(纪文社制)而成的物质10g中加入200ml的氯仿，室温下进行提取。对抽滤后的残渣反复进行该提取操作2次。向氯仿提取后的残渣中加入200ml的乙醇，在室温下进行提取。对抽滤后的残渣反复进行该操作2次。集中过滤后的液体部分，用旋转蒸发器浓缩干燥固化，将干燥固化物溶解于5ml的乙醇中。集中溶解于乙醇的部分，用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到乙醇提取级分-1。另外，将未溶解于乙醇而溶解于蒸馏水的部分集中，用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到乙醇提取级分-2。接着，向乙醇提取后的残渣中加入200ml的蒸馏水，在60度下提取2小时。向以10,000G的离心除去残渣得到的液体部分加入2.5倍量的乙醇，在负20度下静置1小时。然后，以10,000G的离心分级成沉淀物和液体部分。液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到水提取级分-1。另-方面，将沉淀物溶解于蒸馏水中，得到水提取级分-2。
(2)按照与实施例13同样的方法测定上述大豆胚芽乙醇提取级分-2、水提取级分-1、水提取级分-2的NGF产生增强活性。添加大豆胚芽乙醇提取级分-2，使之为0.8875、1.775、3.55mg/ml。添加大豆胚芽水提取级分-1，使之为4.998、9.975、19.95mg/ml。添加大豆胚芽水提取级分-2，使之为3.36、6.72、13.44mg/ml。其结果如表67、68所示。大豆胚芽乙醇提取级分-2、水提取级分-1、水提取级分-2浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。表67乙醇提取级分-2试样浓度(mg/ml)0 0.88751.775 3.55NGF产生量(％)100543.9 52 3.3589.2水提取级分-1试样浓度(mg/ml) 0 4.988 9.975 19.95NGF产生量(％)100287.4 465.6 1215.3(其中，对照的NGF产生量为0.251ng/ml。)表68水提取级分-2试样浓度(mg/ml)03.366.7213.44NGF产生量(％) 100 250.1 259.1 299.8(其中，对照的NGF产生量为0.223ng/ml。)另外，按照与实施例4-(1)同样的方法测定大豆胚芽水提取级分-1、水提取级分-2的HGF产生增强活性。添加大豆胚芽水提取级分-1，使之为1995、199.5μg/ml。添加大豆胚芽水提取级分-2，使之为1344、134.4μg/ml。其结果如表69所示。大豆胚芽水提取级分-1、水提取级分-2浓度依存性地增强MRC-5细胞的HGF产生。表69大豆胚芽水提取级分-1试样浓度(μg/ml)0 199.51995HGF产生量(％) 100125 138大豆胚芽水提取级分-2试样浓度(μg/ml)0 134.41344HGF产生量(％) 100107 116(其中，对照的HGF产生量为14.92ng/ml。)(3)向粉碎大豆种皮(纪文社制)而成的物质10g中加入200ml的氯仿，室温下进行提取。对抽滤后的残渣反复进行该提取操作2次。向氯仿提取后的残渣中加入200ml的乙醇，在室温下进行提取。对抽滤后的残渣反复进行该操作2次。集中过滤后的液体部分，用旋转蒸发器浓缩干燥固化，将干燥固化物溶解于3ml的乙醇中。集中溶解于乙醇的部分，用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到种皮乙醇提取级分-1。另外，将未溶解于乙醇而溶解于蒸馏水的部分集中，用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到种皮乙醇提取级分-2。接着，向乙醇提取后的残渣中加入70ml的蒸馏水，在60度下提取2小时。向通过抽滤除去残渣得到的液体部分加入2.5倍量的乙醇，在负20度下静置1小时。然后，以10,000G的离心分级成沉淀物和液体部分。液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到种皮水提取级分-1。另一方面，将沉淀物溶解于蒸馏水中，得到种皮水提取级分-2。
(4)按照与实施例13同样的方法测定上述大豆种皮乙醇提取级分-2、种皮水提取级分-1、种皮水提取级分-2的NGF产生增强活性。添加大豆种皮乙醇提取级分-2，使之为0.275、0.55mg/ml。添加大豆种皮水提取级分-1，使之为3.125、6.25、12.5mg/ml。添加大豆种皮水提取级分-2，使之为0.654、1.308、2.616mg/ml。其结果如表70、71所示。大豆种皮乙醇提取级分-2、种皮水提取级分-1、种皮水提取级分-2浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。表70种皮乙醇提取级分-2试样浓度(mg/ml) 0 0.2750.55NGF产生量(％) 100 379.1462.5(其中，对照的NGF产生量为0.251ng/ml。)表71种皮水提取级分-1试样浓度(mg/ml)0 3.1256.25 12.5NGF产生量(％) 100131.4144.1307.9种皮水提取级分-2试样浓度(mg/ml)0 0.6541.3082.616NGF产生量(％) 100310.2436.8512.3(其中，对照的NGF产生量为0.223ng/ml。)另外，按照与实施例4-(1)同样的方法测定大豆种皮水提取级分-1、水提取级分-2的HGF产生增强活性。添加大豆种皮水提取级分-1，使之为125、1250μg/ml。添加大豆种皮水提取级分-2，使之为26.16、261.6μg/ml。其结果如表72、73所示。大豆种皮水提取级分-1、水提取级分-2浓度依存性地增强MRC-5细胞的HGF产生。表72大豆种皮水提取级分-1试样浓度(μg/ml)0 1251250HGF产生量(％) 100 134218(其中，对照的HGF产生量为14.92ng/ml。)表73大豆种皮水提取级分-2试样浓度0 26.16261.6(μg/ml)HGF产生量(％) 100115 128(其中，对照的HGF产生量为8.24ng/ml。)(5)向粉碎大豆粗粉(纪文社制)而成的物质10g中加入200ml的氯仿，室温下进行提取。对抽滤后的残渣反复进行该提取操作2次。向氯仿提取后的残渣中加入200ml的乙醇，在室温下进行提取。对抽滤后的残渣反复进行该操作2次。集中过滤后的液体部分，用旋转蒸发器浓缩干燥固化，将干燥固化物溶解于3ml的乙醇中。集中溶解于乙醇的部分，用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到大豆粗粉的乙醇提取级分-1。另外，将未溶解于乙醇而溶解于蒸馏水的部分集中，用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到大豆粗粉的乙醇提取级分-2。接着，向乙醇提取后的残渣中加入100ml的蒸馏水，在60度下提取2小时。向以10,000G的离心除去残渣得到的液体部分加入2.5倍量的乙醇，在负20度下静置1小时。然后，以10,000G的离心分级成沉淀物和液体部分。液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到大豆粗粉水提取级分-1。另-方面，将沉淀物溶解于蒸馏水中，得到大豆粗粉水提取级分-2。
(6)按照与实施例13同样的方法测定上述大豆粗粉乙醇提取级分-2、大豆粗粉水提取级分-1的NGF产生增强活性。添加大豆粗粉的乙醇提取级分-2，使之为0.488、0.975mg/ml。添加大豆粗粉的水提取级分-1，使之为2.625、5.25mg/ml。其结果如表74、75所示。大豆粗粉乙醇提取级分-2、大豆粗粉水提取级分-1浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。表74大豆粗粉乙醇提取级分-2试样浓度(mg/ml)0 0.4880.975NGF产生量(％)100 426.5400.7(其中，对照的NGF产生量为0.251ng/ml。)表75大豆粗粉水提取级分-1试样浓度0 2.6255.25(mg/ml)NGF产生量(％) 100 284.7283.5(其中，对照的NGF产生量为0.223ng/ml。)另外，按照与实施例4-(1)同样的方法测定大豆粗粉水提取级分-1、水提取级分-2的HGF产生增强活性。添加大豆粗粉水提取级分-1，使之为105、1050μg/ml。添加大豆粗粉水提取级分-2，使之为56.5、565μg/ml。其结果如表76所示。大豆粗粉水提取级分-1、水提取级分-2浓度依存性地增强MRC-5细胞的HGF产生。表76大豆粗粉水提取级分-1试样浓度0 1051050(μg/ml)HGF产生量(％) 100 142131大豆粗粉水提取级分-2试样浓度0 56.5 565(μg/ml)HGF产生量(％) 100 127171(其中，对照的HGF产生量为14.47ng/ml。)实施例40(1)向mulukhiya叶粉末(皇汉药品研究所制)5g中加入200ml的氯仿，室温下进行提取。对抽滤后的残渣反复进行该提取操作2次。向氯仿提取后的残渣中加入200ml的乙醇，在室温下进行提取。对抽滤后的残渣反复进行该操作2次。集中过滤后的液体部分，用旋转蒸发器浓缩干燥固化，将干燥固化物溶解于17ml的乙醇中。集中溶解于乙醇的部分，用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到乙醇提取级分-1。另外，将未溶解于乙醇而溶解于蒸馏水的部分集中，用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到乙醇提取级分-2。接着，向乙醇提取后的残渣中加入80ml的蒸馏水，在60度下提取2小时。向以10,000G的离心除去残渣得到的液体部分加入2.5倍量的乙醇，在负20度下静置1小时。然后，以10,000G的离心分级成沉淀物和液体部分。液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到水提取级分-1。另一方面，将沉淀物再次溶解于蒸馏水中后，对蒸馏水进行透析(透析膜SeamlessCellurose Tubing UC36-32-100，三光纯药社制)。向透析内液加入2.5倍量的乙醇，在负20度下静置1小时。然后，以10,000G的离心分级成沉淀物和液体部分。将沉淀物溶解于蒸馏水中，得到水提取级分-2。
(2)按照与实施例13同样的方法测定上述mulukhiya叶乙醇提取级分-2、水提取级分-1、水提取级分-2的NGF产生增强活性。添加mulukhiya叶乙醇提取级分-2，使之为0.15、0.3mg/ml。添加mulukhiya叶水提取级分-1，使之为1.41mg/ml。添加mulukhiya叶水提取级分-2，使之为0.01、0.02、0.04mg/ml。其结果如表77所示。mulukhiya叶乙醇提取级分-2、水提取级分-1、水提取级分-2浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。表77乙醇提取级分-2试样浓度0 0.150.3(mg/ml)NGF产生量(％) 100 256.1 295.7水提取级分-1试样浓度 0 1.41(mg/ml)NGF产生量(％) 100 843.4水提取级分-2试样浓度 0 0.01 0.020.04(mg/ml)NGF产生量(％) 100 250.5300.2 372.6(其中，对照的NGF产生量为0.122ng/ml。)另外，按照与实施例4-(1)同样的方法测定mulukhiya叶水提取级分-1、水提取级分-2的HGF产生增强活性。添加mulukhiya叶水提取级分-1，使之为225.5、22.55、2.255μg/ml。添加mulukhiya叶水提取级分-2，使之为20、8、4、0.4、0.04μg/ml。其结果如表78、79所示。mulukhiya叶水提取级分-1、水提取级分-2浓度依存性地增强MRC-5细胞的HGF产生。表78mulukhiya叶水提取级分-10 2.25522.55225.5试样浓度(μg/ml)HGF产生量(％) 100232 406 612(其中，对照的HGF产生量为5.96ng/ml。)表79mulukhiya叶水提取级分-20 0.04 0.4 4 820试样浓度(μg/ml)HGF产生量(％) 100117 129 188 266 449(其中，对照的HGF产生量为9.56ng/ml。)实施例41(1)向米糠10g中加入200ml的氯仿，室温下进行提取。对抽滤后的残渣反复进行该提取操作2次。集中过滤后的液体部分，用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到氯仿提取级分。向氯仿提取后的残渣中加入200ml的乙醇，在室温下进行提取。对残渣反复进行该操作2次。集中过滤后的液体部分，用旋转蒸发器浓缩干燥固化，将干燥固化物溶解于35ml的乙醇中。集中溶解于乙醇的部分，用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到乙醇提取级分-1。另外，将未溶解于乙醇而溶解于蒸馏水的部分集中，用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到乙醇提取级分-2。接着，向乙醇提取后的残渣中加入100ml的蒸馏水，在60度下提取2小时。向以10,000G的离心除去残渣得到的液体部分加入2.5倍量的乙醇，在负20度下静置1小时。然后，以10,000G的离心分级成沉淀物和液体部分。液体部分用旋转蒸发器浓缩干燥固化，得到水提取级分-1。另一方面，将沉淀物溶解于蒸馏水中，得到水提取级分-2。
(2)按照与实施例13同样的方法测定上述配制的米糠氯仿提取级分、乙醇提取级分-1、乙醇提取级分-2、水提取级分-1、水提取级分-2的NGF产生增强活性。添加米糠氯仿提取级分，使之为4.4、8.8mg/ml。添加米糠乙醇提取级分-1，使之为0.125、0.25、0.5、1.0mg/ml。添加米糠乙醇提取级分-2，使之为0.625、1.25、2.5、5.0mg/ml。添加米糠水提取级分-1，使之为.625、1.25、2.5、5.0mg/ml。添加米糠水提取级分-2，使之为0.625、1.25、2.5、5.0mg/ml。其结果如表80所示。米糠氯仿提取级分、乙醇提取级分-1、乙醇提取级分-2、水提取级分-1、水提取级分-2浓度依存性地增强L-M细胞的NGF产生。表80氯仿提取级分试样浓度(mg/ml)04.4 8.8NGF产生量(％) 100 125.8181.8乙醇提取级分-1试样浓度 00.1250.250.51.0(mg/ml)NGF产生量(％) 100 239.6318.6 357.3 373.0乙醇提取级分-2试样浓度 00.6251.252.55.0(mg/ml)NGF产生量(％) 100 313.0393.7 445.9 685.8水提取级分-1试样浓度(mg/ml)00.6251.252.55.0NGF产生量(％) 100 151.0177.4 291.1 559.1水提取级分-2试样浓度(mg/ml)00.6251.252.55.0NGF产生量(％) 100 138.1185.8 248.0 428.5(其中，对照的NGF产生量为0.172ng/ml。)另外，按照与实施例4-(1)同样的方法测定水提取级分-1的HGF产生增强活性。添加米糠水提取级分-1，使之为1000、100μg/ml。其结果如表81所示。米糠水提取级分-1浓度依存性地增强MRC-5细胞的HGF产生。表81水提取级分试样浓度(μg/ml)0 1001000HGF产生量(％) 100 107157(其中，对照的HGF产生量为4.04ng/ml。)实施例42(1)提取市售的乌龙茶叶至通常的2倍浓度，得到500ml。按照表82所示的配比，配制含酒精乌龙茶1000ml。表82

(2)将竹叶粉末7g悬浊于100ml的蒸馏水中，60℃下提取1小时，制备提取物的冷冻干燥物，配制向上述含酒精乌龙茶中添加该干燥物使之达到0.1μg/ml的酒精饮料。并配制添加该干燥物使该干燥物中的异东方蓼黄素达到100μg/ml的酒精饮料。
(3)将洋葱薄皮5g悬浊于100ml的蒸馏水中，100℃下提取15分钟，得到提取物，配制向上述含酒精乌龙茶中添加该提取物形成100倍稀释液得到的酒精饮料。
(4)将银杏茶叶3g悬浊于蒸馏水200ml中，100℃下提取15分钟，制备提取物的冷冻干燥物，将该干燥物溶解于蒸馏水8ml后，配制向上述含酒精乌龙茶中添加该溶解液形成100倍稀释液得到的酒精饮料。
(5)向艾蒿干燥品10g中添加蒸馏水150ml，60℃下提取1小时，制得提取物，配制添加到上述含酒精乌龙茶中使来源于该提取物的3，5-二咖啡酰奎尼酸达到5μg/ml得到的含酒精饮料。另外，配制添加后使来源于该提取物的绿原酸达到40μg/ml得到的含酒精饮料。
(6)将当归(叶茎部)干燥品480g悬浊于蒸馏水2升中，60℃下提取1小时，制得提取物，配制添加到上述含酒精乌龙茶中使该提取物中的绿原酸达到10μg/ml得到的含酒精饮料。
(7)将菊花干燥物15g悬浊于蒸馏水150ml中，60℃下提取2小时，制得提取物，配制向上述含酒精乌龙茶中添加该提取物形成100倍稀释液得到的含酒精饮料。
(8)将紫郁金干燥品5g悬浊于蒸馏水25ml中，60℃下提取2小时，制备提取物的冷冻干燥物，配制向上述含酒精乌龙茶中添加该干燥物达到10μg/ml得到的含酒精饮料。
(9)将洋李300g与500ml的乙醇一起进行匀化，通过过滤制备滤液，配制向上述含酒精乌龙茶中添加该提取物形成1000倍稀释液得到的含酒精饮料。并使用该提取物，配制饮料中的5-咖啡酰奎尼酸和4-咖啡酰奎尼酸分别达到100μg/ml得到的含酒精饮料。
(10)将花茎甘蓝300g与50％乙醇水溶液350ml一起进行匀化，通过过滤制备滤液，将该滤液浓缩至150ml。配制向上述含酒精乌龙茶中添加该浓缩液形成1000倍稀释液得到的含酒精饮料。
(11)将春菊的冷冻干燥物10g粉碎，用乙醇洗涤后，加入100ml的水，60℃下加热1小时，制备提取液，配制向上述含酒精乌龙茶中添加该浓缩液形成1000倍稀释液得到的含酒精饮料。
(12)将春菊900g与80％乙醇水溶液2升一起进行匀化，通过过滤制备滤液，将该滤液浓缩至50ml。配制向上述含酒精乌龙茶中添加该浓缩液形成1000倍稀释液得到的含酒精饮料。另外，使用该浓缩液，使该含酒精饮料中3，5-二咖啡酰奎尼酸达到10μg/ml，配制含酒精饮料。
(13)将市售的啤酒(上述市售品B)15升浓缩至6升，配制向上述含酒精乌龙茶中添加该浓缩液形成100倍稀释液得到的含酒精饮料。
(14)将市售的非酒精啤酒饮料(上述市售品D)15升浓缩至6升，配制向上述含酒精乌龙茶中添加该浓缩液形成100倍稀释液得到的含酒精饮料。
(15)用乙醇200ml将大豆胚芽粉碎物10g洗净后，加入200ml的水，60℃下加热2小时，制得提取液。将提取液过滤，得到滤液后，向滤液中加入2.5倍量的乙醇，分别制备乙醇可溶级分和乙醇不溶级分的干燥物。配制向上述含酒精乌龙茶中添加乙醇可溶级分的干燥物达到200μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，配制向上述含酒精乌龙茶中添加乙醇不溶级分的干燥物达到130μg/ml得到的含酒精饮料。
(16)用乙醇200ml将大豆种皮粉碎物10g洗净后，加入70ml的水，60℃下加热2小时，制得提取液。将提取液过滤，得到滤液后，向滤液中加入2.5倍量的乙醇，分别制备乙醇可溶级分和乙醇不溶级分的干燥物。配制向上述含酒精乌龙茶中添加乙醇可溶级分的干燥物达到130μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，配制向上述含酒精乌龙茶中添加乙醇不溶级分的干燥物达到30μg/ml得到的含酒精饮料。
(17)用乙醇200ml将大豆粗粉粉碎物10g洗净后，加入100ml的水，60℃下加热2小时，制得提取液。将提取液过滤，得到滤液后，向滤液中加入2.5倍量的乙醇，分别制备乙醇可溶级分和乙醇不溶级分的干燥物。配制向上述含酒精乌龙茶中添加乙醇可溶级分的干燥物达到100μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，配制向上述含酒精乌龙茶中添加乙醇不溶级分的干燥物达到60μg/ml得到的含酒精饮料。
(18)用乙醇200ml将mulukhiya叶粉末5g洗净后，加入80ml的水，60℃下加热2小时，制得提取液。将提取液过滤，得到滤液后，向滤液中加入2.5倍量的乙醇，分别制备乙醇可溶级分和乙醇不溶级分的干燥物。配制向上述含酒精乌龙茶中添加乙醇可溶级分的干燥物达到2μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，配制向上述含酒精乌龙茶中添加乙醇不溶级分的干燥物达到4μg/ml得到的含酒精饮料。
(19)用乙醇200ml将米糠10g洗净后，加入100ml的水，60℃下加热2小时，制得提取液。将提取液过滤，得到滤液后，向滤液中加入2.5倍量的乙醇，制备乙醇可溶级分的干燥物。配制向上述含酒精乌龙茶中添加乙醇可溶级分的干燥物达到1mg/ml得到的含酒精饮料。
(20)上述实施例42-(2)～(19)记载的含酒精饮料风味好，而且是具有HGF产生增强能力的清凉酒精饮料。
另外，对这些饮料进行碳酸饱和，制备发泡型饮料。
另外，制备含有这些饮料中的具有HGF产生增强能力的有效成分20倍量的非酒精型饮料。这些饮料均显示良好的风味以及较高的HGF产生增强能力。实施例43(1)按照表83记载的配比，配制含酒精果汁。表83

(2)向上述含酒精果汁中添加市售的红花黄色色素，使该色素达到1.25mg/ml，配制含酒精饮料。该饮料中作为其有效成分富含safflomin A。另外，将红花干燥物10g悬浊于蒸馏水150ml中，60℃下提取2小时，制备提取物的冷冻干燥物，配制向上述含酒精果汁中添加该冷冻干燥物使该干燥物中的safflomin A达到3mg/ml得到的含酒精饮料。
(3)将市售的菊花干燥物15g悬浊于蒸馏水150ml中，60℃下提取2小时，制备提取物的冷冻干燥物，配制向上述含酒精果汁中添加该冷冻干燥物使该干燥物达到20mg/ml得到的含酒精饮料。
另外，配制向上述含酒精果汁中添加上述冷冻干燥物使愈创内酯达到20μg/ml得到的含酒精饮料。
(4)将当归干燥物(叶茎部)20g悬浊于蒸馏水360ml中，60℃下提取2小时，制备提取物的冷冻干燥物，配制向上述含酒精果汁中添加该冷冻干燥物使该干燥物达到400μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，将当归干燥物(根部)20g悬浊于蒸馏水360ml中，60℃下提取2小时，制备提取物的冷冻干燥物，配制向上述含酒精果汁中添加该冷冻干燥物使该干燥物达到600μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，配制向上述含酒精果汁中添加该干燥物使黄香独活内酯达到10μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，配制向上述含酒精果汁中添加该干燥物使3’-O-β-D-吡喃葡糖酰凯林内酯达到50μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，配制向上述含酒精果汁中添加该干燥物使7-O-β-D-吡喃葡萄糖基氧-8-异戊烯基香豆素达到30μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，配制向上述含酒精果汁中添加该干燥物使咖啡酸甲酯达到20μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，配制向上述含酒精果汁中添加该干燥物使8-羧基-3-羟基-5-甲氧基-2-二甲基色满达到3μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，配制向上述含酒精果汁中添加该干燥物使7-β-D-吡喃葡萄糖基氧-6-异戊烯基香豆素达到300μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，配制向上述含酒精果汁中添加该干燥物使4’-O-当归酰基-3’-O-〔6-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)-β-D-吡喃葡萄糖基〕-凯林内酯达到400μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，配制向上述含酒精果汁中添加该干燥物使咖啡酸乙酯达到30μg/ml得到的含酒精饮料。
(5)将洋葱薄皮25g悬浊于95％v/v乙醇500ml中，室温下进行提取，制备提取液的干燥物，配制向上述含酒精果汁中添加该干燥物达到100μg/ml得到的含酒精饮料。
(6)将银杏茶叶3g悬浊于蒸馏水200ml中，100℃下提取1小时，制备提取物的冷冻干燥物，配制向上述含酒精果汁中添加该干燥物达到700μg/ml得到的含酒精饮料。
(7)将市售的蔷薇花2g悬浊于蒸馏水40ml中，60℃下提取1小时，制备提取物的冷冻干燥物，配制向上述含酒精果汁中添加该干燥物达到80μg/ml得到的含酒精饮料。
(8)使用市售的蛇麻花提取物，添加到上述含酒精果汁中，使黄腐酚含量达到3μg/ml，配制含酒精饮料。
(9)向上述含酒精果汁中添加市售的蛇麻花提取物，使之作为干燥重量达到10μg/ml，配制含酒精饮料。
(10)使用市售的蛇麻花提取物，添加到上述含酒精果汁中，使黄腐酚B、黄腐酚D的总量达到20μg/ml，配制含酒精饮料。
(11)使用市售的蛇麻花提取物，添加到上述含酒精果汁中，使异黄腐酚含量达到80μg/ml，配制含酒精饮料。
(12)将市售的啤酒(上述市售品B)15升浓缩至6升，配制向上述含酒精果汁中添加该浓缩液形成10倍稀释液得到的含酒精饮料。
(13)将市售的非酒精啤酒饮料(上述市售品D)15升浓缩至6升，配制向上述含酒精果汁中添加该浓缩液形成10倍稀释液得到的含酒精饮料。
(14)使用市售的蛇麻花提取物，添加到上述含酒精果汁中，使黄腐酚含量达到0.04μg/ml，异黄腐酚含量达到1.3μg/ml，配制含酒精饮料。
另外，使用市售的蛇麻花提取物，添加到上述含酒精果汁中，使黄腐酚含量达到0.9μg/ml，异黄腐酚含量达到4μg/ml，配制含酒精饮料。
(15)将蛇麻花干燥物50g粉碎，用1升乙醇提取，将提取液浓缩。将浓缩物添加到上述含酒精果汁中，使之作为干燥重量达到20μg/ml，配制含酒精饮料。
(16)将紫郁金5g的粉碎物悬浊于蒸馏水25ml中，60℃下提取2小时，制备提取物的冷冻干燥物，添加到上述含酒精果汁中，使该干燥物达到600μg/ml，配制含酒精饮料。
(17)用乙醇200ml将大豆胚芽粉碎物10g洗净后，加入200ml的水，60℃下加热2小时，制得提取液。将提取液过滤，得到滤液后，向滤液中加入2.5倍量的乙醇，分别制备乙醇可溶级分和乙醇不溶级分的干燥物。配制向上述含酒精果汁中添加乙醇可溶级分的干燥物达到5mg/ml得到的含酒精饮料。
另外，配制向上述含酒精果汁中添加乙醇不溶级分的干燥物达到3mg/ml得到的含酒精饮料。
(18)用乙醇200ml将大豆种皮粉碎物10g洗净后，加入70ml的水，60℃下加热2小时，制得提取液。将提取液过滤，得到滤液后，向滤液中加入2.5倍量的乙醇，分别制备乙醇可溶级分和乙醇不溶级分的干燥物。配制向上述含酒精乌龙茶中添加乙醇可溶级分的干燥物达到3mg/ml得到的含酒精饮料。
另外，配制向上述含酒精果汁中添加乙醇不溶级分的干燥物达到600μg/ml得到的含酒精饮料。
(19)用乙醇200ml将大豆粗粉粉碎物10g洗净后，加入100ml的水，60℃下加热2小时，制得提取液。将提取液过滤，得到滤液后，向滤液中加入2.5倍量的乙醇，分别制备乙醇可溶级分和乙醇不溶级分的干燥物。配制向上述含酒精果汁中添加乙醇可溶级分的干燥物达到3mg/ml得到的含酒精饮料。
另外，配制向上述含酒精乌龙茶中添加乙醇不溶级分的干燥物达到60μg/ml得到的含酒精饮料。
(20)用乙醇200ml将mulukhiya叶粉末5g洗净后，加入80ml的水，60℃下加热2小时，制得提取液。将提取液过滤，得到滤液后，向滤液中加入2.5倍量的乙醇，分别制备乙醇可溶级分和乙醇不溶级分的干燥物。配制向上述含酒精果汁中添加乙醇可溶级分的干燥物达到500μg/ml得到的含酒精饮料。
另外，配制向上述含酒精果汁中添加乙醇不溶级分的干燥物达到5μg/ml得到的含酒精饮料。
(21)用乙醇200ml将米糠10g洗净后，加入100ml的水，60℃下加热2小时，制得提取液。将提取液过滤，得到滤液后，向滤液中加入2.5倍量的乙醇，分别制备乙醇可溶级分和乙醇不溶级分的干燥物。配制向上述含酒精果汁中添加乙醇可溶级分的干燥物达到500μg/ml得到的含酒精饮料。另外，配制向上述含酒精果汁中添加乙醇不溶级分的干燥物达到500μg/ml得到的含酒精饮料。
(22)上述实施例43-(2)～(21)记载的含酒精果汁饮料风味好，而且是具有NGF产生增强能力的清凉酒精饮料。
另外，对这些饮料进行碳酸饱和，制备发泡型饮料。
另外，制备含有这些饮料中的具有NGF产生增强能力的有效成分20倍量的非酒精型饮料。这些饮料均显示良好的风味以及较高的NGF产生增强能力。工业实用性按照本发明，提供含有来源于植物的生长因子产生增强物质的生长因子产生增强用组合物，含有该组合物的对于必需增强生长因子产生的疾病有效的药物、食品、饮料或饲料。该药物具有生物体内的生长因子产生增强活性，作为肝炎、重症肝炎、剧症肝炎、肝硬化、肝内胆汁淤滞等肝障碍、药物等引起的肾障碍、胃肠障碍、血管障碍、慢性肾炎、肺炎、创伤、糖尿病、癌、痴呆症或神经障碍等必需增强生长因子产生的疾病的治疗剂或预防剂有用。另外，该食品或饮料通过作为日常的饮食品进行摄取，能够改善需要增强生长因子产生的疾病症状等。因此，以来源于植物的具有生长因子产生增强作用的物质作为有效成分的功能性饮食品是基于其生长因子产生增强作用，对维持生物体的稳定有用的功能性饮食品。该饲料具有改善生物的身体状况等效果，很有用。而且，按照本发明，还提供来源于植物的生长因子产生增强剂，该增强剂对于生长因子的功能研究、有关生长因子的疾病用药物的筛选有用。
权利要求
1.一种生长因子产生增强用组合物，其特征在于，含有来源于植物的生长因子产生增强物质作为有效成分。
2.如权利要求1所述的生长因子产生增强用组合物，其中，含有来源于从伞形科、菊科、百合科、银杏科、禾本科、蔷薇科、桑科、豆科、椴科、十字花科和姜科的植物中选择的1种以上植物的生长因子产生增强物质作为有效成分。
3.如权利要求1或2所述的生长因子产生增强用组合物，其中，来源于植物的生长因子产生增强物质是从绿原酸(chlorogenicacid)、二咖啡酰奎尼酸(dicaffeoyl-quinic acid)、咖啡酰奎尼酸(caffeoyl-quinic acid)、异东方蓼黄素(isoorientin)、safflominA、愈创内酯(guaianolide)、黄香独活内酯(xanthoangelol)、3’-O-β-D-吡喃葡糖酰凯林内酯(3’-O-β-D-glucopyranoylkhellactone)、7-O-β-D-吡喃葡萄糖基氧-8-异戊烯基香豆素(7-O-β-D-glucopyranosyloxy-8-prenylcoumarin)、咖啡酸甲酯(caffeic acid methyl ester)、咖啡酸乙酯(caffeic acid ethylester)、8-羧基-3-羟基-5-甲氧基-2-二甲基色满(8-carboxyl-3-hydroxy-5-methoxyl-2-dimethylchroman)、7-β-D-吡喃葡萄糖基氧-6-异戊烯基香豆素(7-β-D-glucopyranosyloxy-6-prenylcoumarin)、4’-O-当归酰基-3’-O-〔6-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)-β-D-吡喃葡萄糖基〕-凯林内酯(4’-O-angeloyl-3’-O-[6-O-(β-D-glucopyranosyl)-β-D-glucopyranosyl]-khellactone)、异黄腐酚(isoxanthohumol)、黄腐酚B(xanthohumolB)、黄腐酚D(xanthohumol D)以及黄腐酚(xanthohumol)中选择的1种以上化合物。
4.如权利要求1～3中任意一项所述的生长因子产生增强用组合物，其中，含有包含生长因子产生增强物质的来源于植物的提取物或者由该植物提取物得到的级分。
5.如权利要求1～4中任意一项所述的生长因子产生增强用组合物，其中，高浓度和/或高纯度地含有来源于植物的生长因子产生增强物质。
6.如权利要求1～5中任意一项所述的生长因子产生增强用组合物，其中，生长因子是肝细胞增殖因子或神经生长因子。
7.一种必需增强生长因子产生的疾病的治疗剂或预防剂，其中，含有权利要求1～6中任意一项所述的生长因子产生增强用组合物。
8.一种生长因子产生增强用的食品、饮料或饲料，其中，含有权利要求1～6中任意一项所述的生长因子产生增强用组合物。
9.一种食品、饮料或饲料，其特征在于，高浓度和/或高纯度地含有来源于植物的生长因子产生增强物质。
10.如权利要求9所述的食品、饮料或饲料，其中，来源于植物的生长因子产生增强物质是从绿原酸、二咖啡酰奎尼酸、咖啡酰奎尼酸、异东方蓼黄素、safflomin A、愈创内酯、黄香独活内酯、3’-O-β-D-吡喃葡糖酰凯林内酯、7-O-β-D-吡喃葡萄糖基氧-8-异戊烯基香豆素、咖啡酸甲酯、咖啡酸乙酯、8-羧基-3-羟基-5-甲氧基-2-二甲基色满、7-β-D-吡喃葡萄糖基氧-6-异戊烯基香豆素、4’-O-当归酰基-3’-O-〔6-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)-β-D-吡喃葡萄糖基〕-凯林内酯、异黄腐酚、黄腐酚B、黄腐酚D以及黄腐酚中选择的1种以上化合物。
11.一种食品、饮料或饲料，其中，高浓度和/或高纯度地含有权利要求1～6中任意一项所述的生长因子产生增强用组合物。
12.如权利要求11所述的食品、饮料或饲料，其中，来源于植物的生长因子产生增强用组合物是含有从绿原酸、二咖啡酰奎尼酸、咖啡酰奎尼酸、异东方蓼黄素、safflomin A、愈创内酯、黄香独活内酯、3’-O-β-D-吡喃葡糖酰凯林内酯、7-O-β-D-吡喃葡萄糖基氧-8-异戊烯基香豆素、咖啡酸甲酯、咖啡酸乙酯、8-羧基-3-羟基-5-甲氧基-2-二甲基色满、7-β-D-吡喃葡萄糖基氧-6-异戊烯基香豆素、4’-O-当归酰基-3’-O-〔6-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)-β-D-吡喃葡萄糖基〕-凯林内酯、异黄腐酚、黄腐酚B、黄腐酚D以及黄腐酚中选择的1种以上化合物的组合物。
13.一种神经生长因子产生增强用的食品、饮料或饲料，其中，含有黄腐酚0.00007重量％以上。
14.一种生长因子产生增强用的食品、饮料或饲料，其中含有包含生长因子产生增强物质的食品、饮料、饲料或者其处理物。
15.如权利要求1 4所述的生长因子产生增强用的食品、饲料或饮料，其中含有啤酒类。
16.一种生长因子产生增强用的食品、饮料或饲料，其中，含有蛇麻花提取物。
17.一种生长因子产生增强用组合物，其特征在于，含有愈创内酯作为有效成分。
18.一种必需增强生长因子产生的疾病的治疗剂或预防剂，其特征在于，含有愈创内酯作为有效成分。
19.一种生长因子产生增强用的食品、饮料或饲料，其特征在于，含有愈创内酯作为有效成分。
全文摘要
本发明提供含有来源于植物的生长因子产生增强物质的生长因子产生增强用组合物，含有该组合物的必需增强生长因子产生的疾病的治疗剂或预防剂，生长因子产生增强用的食品、饮料或饲料。另外，本发明还提供对于增强健康优良的功能性食品、饮料或饲料。
文档编号A61K36/00GK1422159SQ01807898
公开日2003年6月4日 申请日期2001年4月10日 优先权日2000年4月10日
发明者大野木宏, 白发正宏, 小林英二, 西村香织, 李拖平, 佐川裕章, 加藤郁之进 申请人:宝生物工程株式会社