专利名称：皂苷元衍生物,其合成与用途,以及采用该皂苷元衍生物的方法
技术领域：
本发明系有关于一种皂苷元及其衍生物，其合成与用途，以及基于其使用的方法。
皂苷元及其衍生物之用途系在于治疗认知功能障碍、非认知神经衰退、非认知神经肌肉衰退及受体丧失。更进一步，本发明系关于用于这些治疗的组成物。
背景技术：
认知功能障碍系痴呆状态及症状之特征，例如阿兹海默症(AD)、阿兹海默型态之老年痴呆(SDAT)、路易体(Lewi body)痴呆及血管性痴呆。较低程度之认知功能障碍亦是特定非痴呆状态及症状之特征，例如中度认知损伤(MCI)、年龄相关记忆损伤(AAMI)及孤独症。
非认知神经衰退(即没有认知功能障碍的神经衰退)及非认知神经肌肉衰退(即没有认知功能障碍的神经肌肉衰退)系如下列状态及症状之特征帕金森症、肌营养不良包括面肩胛臂肌营养不良(FSH)、杜兴肌营养不良、贝克尔肌营养不良及布鲁斯氏(Bruce’s)肌营养不良、富克斯营养不良、强直性肌营养不良、角膜营养不良、交感反射性营养不良综合征(RSDSA)、神经血管营养不良、重症肌无力、蓝伯特伊顿氏症(Lambert Eaton disease)、亨丁顿氏症、肌萎缩性脊髓侧索硬化(ALS)及多发性硬化症。
受体丧失-特别是烟碱和/或蕈毒碱受体和/或多巴胺受体和/或肾上腺素受体-系部分或所有前述状态及症状之特征。这种没有认知、神经及神经肌肉损伤之受体丧失亦是下列状态及症状之特征直立性低血压、慢性疲劳综合征、哮喘、对心力衰竭易感和黄斑变性。由于寿命增长及对外来疾病的管制，人口分布日益老化，上述症状及疾病已成为所有社会中重大且日益扩大的问题。因此，对于可治疗或有助于控制或预防这些病症之药剂有迫切的需要。
WO-A-01/23406，在此将此并入以供参考，要求的化合物中之一为具有化学式(I)的皂苷元衍生物
及其立体异构物及消旋混合物、其药学上可接受的前驱药物及盐类，其中-R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R10分别为H、OH、＝O或OR，其中R＝任选取代的烷基、任选取代的酰基、任选取代的羰基、烷氧羰基；-R9、R12、R11、R13可为H、OH、或OR，其中R＝任选取代的烷基、任选取代的酰基、任选取代的羰基、烷氧羰基；-R14＝任选取代的烷基，.... .表示任选的双键，但是同时具有下列条件者除外-R1＝R2＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝R10＝R11＝R9＝R12＝R13＝H，-R3＝βOH，-R14＝CH3，-位于C22之甲基为α，-C20为α，且C25具有S构型；以及采用这些化合物作为在人或非人动物中提高蕈毒碱受体数量或强化蕈毒碱受体功能之药剂，特别地，系用于治疗疾病中之认知功能障碍，更特别地，系用于治疗患有下列病症之患者的认知功能障碍AD、SDAT、帕金森症、路易体痴呆、孤独症、重症肌无力、蓝伯特伊顿氏症、直立性低血压、慢性疲劳综合征以及与老化有关之症状和疾病。
依据WO-A-01/23406所述定义，上述式(I)之可变基团中“酰基”指H-CO-或烷基-CO-基团，其中该烷基如下文所定义。优选的酰基包括低级烷基。酰基的例子包括甲酰基、乙酰基、丙酰基、2-甲基丙酰基、丁酰基及十六酰基；“烷基”指脂肪族之碳氢基团，其可为直链或支链，且在其链中具有大约1至大约20个碳原子。支链指或多个低级烷基如甲基、乙基或丙基与一线型烷基链接合。“低级烷基”指具有大约1至大约4个碳原子之直链或支链接构。烷基的例子有甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、3-戊基；“任选取代的”意指被指名之基团可以被一或多个取代者取代，此取代者可以是相同的或不同的，包含卤、烷基、环烷基、羟基、烷氧基、氨基、酰氨基、芳基、芳基氨基、羧基、烷氧羰基、芳烷氧基羰基、杂环芳烷氧基羰基、任选取代的氨甲酰基；“药学上可接受的”意指，在合理医学判断范围内，适合用于与人类及较低级动物之细胞接触而没有不适合之毒性、刺激、过敏反应及类似情况者，并且与一合理之益处/风险比例相符。“药学上可接受的前药”指化合物之前药，在合理医学判断范围内，适合用于与人类及较低级动物之细胞接触而没有不适合之毒性、刺激、过敏反应及类似情况者，并且与一合理之益处/风险比例相符，且在其欲达成之作用上是有效的，若有可能，亦包含该化合物之两性离子型式。“前药”一词指化合物，其在活体内迅速转化以产生具上述化学式之母化合物，例如经由在血液中水解。可经由代谢切割而迅速在活体内转化之功能基团形成一种易与羧基团反应之基团。由于这些化合物之代谢分割基团在活体中很容易地可以分割，这些具有此类分割的化合物可做为前药。对于药剂先驱物之彻底讨论如下列Design ofProdrugs，H.Bundgaard编，Elsevier，1985.，A Text book of Drug Design andDevelopment，Krogsgaard-Larsen和H.Bundgaard编，第5章，Design andApplications of Prodrugs第113-191页，1991，Advanced Drug DeliveryReviews，H.Bundfard，8，第1-38页，1992，Journal of Pharmaceutical Sciences，77，第285页，1988，Chem.Pharm.Bull.，N.Nakeya等，32，第692页，1984，Pro-drugs asNovel Delivery Systems，Y.Higuchi和V.Stella，A.C.S.Symposium Series第14卷，及Bioreversible Carriers in Drug Design，Edward B.Roche编，AmericanPharmaceutical Association and Pergamon Press，1987，这些在此作为参考文献。
“药学上可接受的盐”指该化合物之相对上非-毒性、非有机及有机之酸附加盐及碱附加盐。这些盐类可在该化合物的最后分离及纯化阶段同步制备。特别是，酸附加盐可经由各别将该化合物之纯化后的碱形式与一适当的有机或无机酸反应并将所得之盐分离而制得。例如可参见在此做为参考文献的S.M.Berge等，Pharmaceutical Salts，J.Pharm.Sci.，661-19(1977)。碱附加盐亦可经由各别将该化合物之纯化后的酸形式与一适当的有机或无机碱反应并将所得之盐分离而制得。碱附加盐包含药学上可接受的金属及胺类盐。
如WO-A-01/23406所述，具有化学式(I)之皂苷元、其立体异构物及消旋混合物、其药学上可接受的前药及盐，其功效至少有一部份系由于该化合物使受体数量正常化的能力，意即，避免受体数量因时间而减少，并为降低数量者补充受体数量而使其正常化(第20页，6至9行)。
DE-A-4303214之内容在此作为参考，其叙述使用极大范围之皂苷及皂苷元了治疗一系列病毒疾病，但并未提供充份数据以使一熟习此领域者针对任何特定疾病来选择一较佳化合物。虽然有提及阿兹海默症及帕金森症，这些病症被认为是非病毒引起的，因此该文件并未提供任何相关的指示。
WO-A-99/16786(1999年4月8日出版)之内容在此作为参考，其叙述使用天然皂苷治疗痴呆。皂苷倾向溶于水中，而皂苷元则是脂溶性的，因此皂苷在穿透脑血管屏障的效果较差。
中国申请专利CN-A-1096031号之内容在此作为参考，其叙述将螺甾烷皂苷和皂苷元使用于β-肾上腺素及M-胆碱受体的双向控制。特定药学活性并未被提出。然而，在“Synthesis and Applications of Isotopically Labelled Compounds”，1998，第315-320页中，Yi等叙述将皂苷元使用在治疗老化痴呆上。
然而在帕金森症、重症肌无力、蓝伯特伊顿氏症、直立性低血压及慢性疲劳综合征中，认知功能障碍虽然可能是数种可能的次级病征之一，但并不是基本病征。另外，这些病症并不是病毒疾病或痴呆。这些病症中有许多是所谓的“频谱”(spectrum)疾病，其中可发现许多不同的症状组合，且其严重程度的范围相当大。因此，在许多情况下，针对认知功能障碍(如痴呆)的治疗是不需要的。
本发明系立基于我们的发现特定皂苷及其衍生物，包含WO-A-01/23406中所述的化学式(I)化合物，具有一惊人的对抗非认知神经衰退及非认知神经肌肉衰退之活性，以及对抗没有认知、神经及神经肌肉损伤之受体丧失之活性。这项发现使得对于特定非病毒余像及非余像疾病的治疗得以改善，这些疾病例如帕金森症、肌营养不良包括面肩胛臂肌营养不良(FSH)、杜兴肌营养不良、贝克尔肌营养不良及布鲁斯氏(Bruce’s)肌营养不良、富克斯营养不良、强直性肌营养不良、角膜营养不良、交感反射性营养不良综合征(RSDSA)、神经血管营养不良、重症肌无力、蓝伯特伊顿氏症(Lambert Eaton disease)、亨丁顿氏症、肌萎缩性脊髓侧索硬化(ALS)及多发性硬化症、对心力衰竭易感和黄斑变性。
另外，我们发现特定化合物具有抗认知功能障碍的功能，且在这之前并未被揭露。
发明概述依据本发明之一观点，提供通式II的化合物的用法
其中R基团选自氢、烷羰基或烷氧羰基；其中任何烷基皆可任选地被芳基、氨基、单-或二-烷基-氨基、羧酸残基(-COOH)或其任何组合取代；(包含其所有立体异构物及消旋混合物)，以及其药学上可接受的盐。该用法系，治疗或预防(i)非认知神经衰退，(ii)非认知神经肌肉衰退，或(iii)没有认知、神经及神经肌肉损伤之受体丧失的方法，或用于治疗或预防上述病症的组成物之制备方法(例如，药物组合物、食品、食品补充物及饮料)，该方法系使用于患有或易感上述病症之人类或非人类之动物。
更特别的是，上述治疗可应用于患有下列症状之人类或非人类之动物帕金森症、肌营养不良包括面肩胛臂肌营养不良(FSH)、杜兴肌营养不良、贝克尔肌营养不良及布鲁斯氏(Bruce’s)肌营养不良、富克斯营养不良、强直性肌营养不良、角膜营养不良、交感反射性营养不良综合征(RSDSA)、神经血管营养不良、重症肌无力、蓝伯特伊顿氏症(Lambert Eaton disease)、亨丁顿氏症、肌萎缩性脊髓侧索硬化(ALS)及多发性硬化症、对心力衰竭易感和黄斑变性。
依据本发明之另一方面，提供具有式II的化合物的用法，其中，其中R基团选自氢、烷羰基、或烷氧羰基；其中任何烷基皆可任选地被芳基、氨基、单-烷基-氨基、二-烷基-氨基、羧酸(-COOH)或其任何组合取代；条件为R不是氢或非取代的乙酰基，除非同时C3的立体化学为α且C25的立体化学为S；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为R时，R不是非取代的乙氧基羰基；以及当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为S或C3的立体化学为R(α)且C25的立体化学为R时，R不是琥珀酰基；(如上述附带条件，包含其所有的立体异构物及消旋混合物)，以及其药学上可接受的盐；该用法系，用于治疗或预防(i)非认知神经衰退，(ii)非认知神经肌肉衰退，或(iii)没有认知、神经及神经肌肉损伤之受体丧失的方法，或用于治疗或预防上述病症的组成物之制备方法，该方法系使用于患有或易感上述病症之人类或非人类之动物。
在一方面，C25甲基为S构型；这些本发明之化合物有萨洒皂草配基及表萨洒皂草配基(episarsasapogenin)或其衍生物。另一方面，C25甲基为R构型；这些本发明之化合物有菝葜配基及表菝葜配基(epismilagenin)或其衍生物。
本发明亦提供对应之治疗人类及非人类动物的方法，及用于此治疗中，含有活性药剂的组成物的制备方法。另外，用于制备该活性药剂中的特定活性药剂及特定中间体系新颖的，并形成本发明之进一步范围，本发明之范围亦包含该活性药剂之制备方法。这些本发明之不同面向将在后文有更详细的描述。
详细发明说明活性药剂在上面定义的式II中当烷基有任选的氨基、单-烷基-氨基及二-烷基-氨基取代基时，优选在烷基的α位置有一单-取代基。
当烷基有任选的-COOH取代基时，它可位于此烷基的端点或任何其它位置。
“烷基”指脂肪族之碳氢基团，其可为直链或支链，且在其链中具有大约1至大约20个碳原子。较佳的烷基为具有1至12个碳原子者。支链指或多个低级烷基如甲基、乙基或丙基与一线型烷基链接合。“低级烷基”指具有大约1至大约4个碳原子之直链或支链接构。烷基的例子有甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、3-戊基；“酰基”指任何基团，其具有一芳香环或融合环之系统，优选为含有高达12个碳原子。酰基的一个例子是苯基团。酰基可任选地有单-或多-取代，例如被独立选自卤(如氯或溴)、烷基、环烷基、羟基、烷氧基、氨基、硝基、酰氨基、羧基及烷氧羰基的取代基取代。
“羧酸单位”指-COOH基团。
“药学上可接受的盐”指本发明之化合物中，其相对上非-毒性、非有机及有机之酸附加盐及碱附加盐。这些盐类可在该化合物的最后分离及纯化阶段同步制备。特别是，酸附加盐可经由各别将该化合物之纯化后的碱形式与一适当的有机或无机酸反应并将所得之盐分离而制得。参考，如在此做为参考文献之S.M.Berge等，Pharmaceutical Salts，J.Pharm.Sci.，661-19(1977)。碱附加盐亦可经由各别将该化合物之纯化后的酸形式与一适当的有机或无机碱反应并将所得之盐分离而制得。碱附加盐包含药学上可接受的金属及胺类盐。适合之酸附加盐之例子为与下列酸所形成者盐酸、硫酸、磷酸及硝酸。适合之酸附加盐之例子为与下列酸所形成者氢氧化钠、氢氧化钾及氢氧化铵。
“药学上可接受的”意指该材料为在合理医学及兽医学之判断范围内，适合用于与人类及较低级动物之细胞接触而没有不适合之毒性、刺激、过敏反应及类似情况者，并且与一合理之益处/风险比例相符。
在上述化学式II中，-OR可以是，例如，选自(除非被附带条件排除)羟基、乙基碳酸盐(cathylate)(乙氧基羰基氧基)、醋酸盐、琥珀酸盐、丙酸盐、丁酸盐、戊酸盐、异戊酸盐、己酸盐、异己酸盐、二乙基乙酸盐、辛酸盐、癸酸盐、月桂酸盐、肉豆蔻酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、苯甲酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、肉桂酸盐、对-硝基苯甲酸基、3，5-二硝基苯甲酸基)、对-氯苯甲酸基、2，4-二氯苯甲酸基、对-溴苯甲酸基、间-溴苯甲酸基、对-甲氧基苯甲酸基、邻苯二酰、氨基乙酸盐、丙氨酸盐、缬氨酸盐、苯丙氨酸盐、异亮氨酸盐、甲硫氨酸盐、精氨酸盐、天冬氨酸盐、半胱氨酸盐、谷氨酸盐、组氨酸盐、赖氨酸盐、脯氨酸盐、丝氨酸盐、苏氨酸、色氨酸盐、酪氨酸盐、延胡索酸盐(fumerate)及马来酸盐。
在上述式II中，R可以，例如，选自低级烷基及低级烷氧基，任选地有一末端羧酸(-COOH)残基被取代。
通式II的化合物及其药学上可接受的盐中，特别优选的为下列化合物(除非被附及条件排除)萨洒皂草配基，萨洒皂草配基乙基碳酸盐，萨洒皂草配基乙酸盐，萨洒皂草配基琥珀酸及其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基，表萨洒皂草配基乙基碳酸盐，表萨洒皂草配基乙酸盐，表萨洒皂草配基琥珀酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基，菝葜配基乙基碳酸盐，菝葜配基乙酸盐，菝葜配基琥珀酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基，表菝葜配基乙基碳酸盐，表菝葜配基乙酸盐，
表菝葜配基琥珀酸及其药学上可接受的盐。
萨洒皂草配基甘氨酸其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基甘氨酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基甘氨酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基甘氨酸及其药学上可接受的盐，萨洒皂草配基丙氨酸及其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基丙氨酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基丙氨酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基丙氨酸及其药学上可接受的盐，萨洒皂草配基缬氨酸及其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基缬氨酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基缬氨酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基缬氨酸及其药学上可接受的盐，萨洒皂草配基苯丙氨酸及其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基苯丙氨酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基苯丙氨酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基苯丙氨酸及其药学上可接受的盐，萨洒皂草配基异亮氨酸及其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基异亮氨酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基异亮氨酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基异亮氨酸及其药学上可接受的盐，萨洒皂草配基甲硫氨酸及其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基甲硫氨酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基甲硫氨酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基甲硫氨酸及其药学上可接受的盐。
特别优选的活性药剂为表萨洒皂草配基及其乙基碳酸、醋酸、琥珀酸、甘氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸及甲硫氨酸酯及其药学上可接受的盐。
此活性药剂可以配制成药学上可接受的前药，前药一词的定义与WO-A-01/23406所定义者相同，请参考上述。此类前药之范例包含3-OH化合物之形式，其中在3-位置之部份为磺酰基(-OSO3H)、磷酰基(-OP(O)(OH)2)，任选取代的芳基羰基氧基或任选取代的烷基-羰基氧基。
组合物及用途根据本发明再一方面，提供了在需要之人类中或非人类动物中对非认知神经衰退，非认知神经肌肉衰退或没有认知、神经或神经肌肉损伤时受体丧失之治疗或预防方法，所述方法包括对所述人或非人动物使用有效剂量的如上述所述的具有化学式II的化合物，或其药学上可接受的盐。
根据本发明再一方面，提供了在需要之人类中或非人类动物中对认知功能障碍之治疗或预防方法，所述方法包括对所述人或非人动物使用有效剂量的如上述所述的具有化学式II的化合物，或其药学上可接受的盐；附带条件为R不是氢或非取代的乙酰基，除非同时C3的立体化学为α且C25的立体化学为S；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为R时，R不是非取代的乙氧基羰基；且当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为S或C3的立体化学为R(α)且C25的立体化学为R时，R不是琥珀酰基。
此活性药剂可以以含有该活性药剂及适当的添加成份的组成物的方式使用。此组成物可以是，例如，一药物组合物、食品、食品补充物、或饮料。这些组成物可以包括特定化合物的混合物，和/或其药学上可接受的盐。
根据本发明再一方面，提供了在人类中或非人类动物中，具有对抗非认知神经衰退，非认知神经肌肉衰退或没有认知、神经或神经肌肉损伤时受体丧失之功能的组成物，其包括有效剂量的如上述所述的具有式II的化合物，或其药学上可接受的盐。
根据本发明再一方面，提供了在人类中或非人类动物中，具有对抗认知功能障碍之功能的组成物，它包括有效剂量的如上述所定义的具有式II的化合物，或其药学上可接受的盐；附带条件为R不是氢或非取代的乙酰基，除非同时C3的立体化学为α且C25的立体化学为S；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为R时，R不是非取代的乙氧基羰基；以及，当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为S或C3的立体化学为R(α)且C25的立体化学为R时，R不是琥珀酰基。
在本发明中，“药物组合物”一词系指组成物，其包括活性药剂且包含添加的药学上可接受的载体、稀释剂、佐药、赋形剂、或承载剂，例如防腐剂、填充料、分解剂、湿润剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、香料、芳香剂、抗菌剂、抗霉剂、涧滑剂及分散剂，依据使用方式及剂型的特性可做调整。
在此，“食品”、“食品补充物”及“饮料”等名词，其义意与平常相同，并不限于药物制剂。
活性药剂之剂量依据所要治疗或预防之症状的严重性，会有很大的变动。适当剂量的选择系在熟习此领域者之能力范围内，而不会有过分的负担。举例来说，活性药剂之剂量可以是于大约0.3mg/kg体重，优选为每天使用一次。更典型地说，剂量为介于大约1与大约25mg/kg体重之间，例如，介于大约1与大约10mg/kg体重之间，优选为每天使用一次。该组成物可适当地配制成单位剂型，适合给予患者使用介于大约1与大约10mg/kg之间之单位剂量，在一特定时间内之使用次数及频率则需要加以指示。用于人体时，合宜之剂量可以是每天介于大约70与大约700mg/kg。
“药学上可接受的剂型”指本发明之化合物或组成物之剂型，包含，例如片剂、糖衣丸、粉剂、酏剂、糖浆剂、液体制剂，包括悬液、喷雾剂、吸入剂、片剂、锭剂、乳剂、溶液、颗粒剂、胶囊剂及栓剂，以及注射用液体制剂，包含脂质体制剂。所述技术及配制方法可在最新一版的Remington，Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，PA中找到。
一般说来，此处对于一特定族群化合物之参考文献，其范围包含二或多个此类化合物之混合物。
根据本发明再一方面，提供一种治疗认知功能障碍的方法，其治疗对象为患有选自下列病症之一之患者阿兹海默症、阿兹海默型态之老年痴呆(SDAT)、年龄相关记忆损伤(AAMI)、路易体(Lewi body)痴呆及孤独症，所述方法包括对该患者使用有效剂量的如之具有式II的化合物，或其药学上可接受的盐；条件是，R不是氢或非取代的乙酰基，除非同时C3的立体化学为α且C25的立体化学为S；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为R时，R不是非取代的乙氧基羰基；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为S或C3的立体化学为R(α)且C25的立体化学为R时，R不是琥珀酰基。
根据本发明再一方面，提供一种治疗方法，它可治疗人或非人动物的以下症状(i)非认知神经衰退，(ii)非认知神经肌肉衰退，或(iii)没有认知、神经或神经肌肉损伤时受体丧失，所述患者患有以下症状帕金森症、肌营养不良包括面肩胛臂肌营养不良(FSH)、杜兴肌营养不良、贝克尔肌营养不良及布鲁斯氏(Bruce’s)肌营养不良、富克斯营养不良、强直性肌营养不良、角膜营养不良、交感反射性营养不良综合征(RSDSA)、神经血管营养不良、重症肌无力、蓝伯特伊顿氏症(Lambert Eaton disease)、亨丁顿氏症、肌萎缩性脊髓侧索硬化(ALS)、多发性硬化症、直立性低血压、慢性疲劳综合征、哮喘、对心力衰竭易感和黄斑变性，上述方法包含，在该患者上使用药物有效量的具有式II的化合物，或其药学上可接受的盐。
强化认知或神经功能的方法，及治疗特定如上述所述症状的方法，可以经由使用本发明之化合物、组成物或医药达成，其使用形式可以是药物组合物、食品、食品补充物、或饮料。
本发明亦提供了一种使用一或多个具有化学式II的化合物，或其药学上可接受的盐作为一药物组合物、食品、食品补充物、或饮料之成份，而用于治疗选自下列族群中之症状之用法帕金森症、肌营养不良包括面肩胛臂肌营养不良(FSH)、杜兴肌营养不良、贝克尔肌营养不良及布鲁斯氏(Bruce’s)肌营养不良、富克斯营养不良、强直性肌营养不良、角膜营养不良、交感反射性营养不良综合征(RSDSA)、神经血管营养不良、重症肌无力、蓝伯特伊顿氏症(Lambert Eatondisease)、亨丁顿氏症、肌萎缩性脊髓侧索硬化(ALS)、多发性硬化症、直立性低血压、慢性疲劳综合征、哮喘、对心力衰竭易感和黄斑变性。
本发明亦提供了使用一或多个具有式II的化合物，或其药学上可接受的盐的方法，条件是，R不是氢或非取代的乙酰基，除非同时C3的立体化学为α且C25的立体化学为S；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为R时，R不是非取代的乙氧基羰基；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为S或C3的立体化学为R(α)且C25的立体化学为R时，R不是琥珀酰基；此一或多个化合物作为一药物组合物、食品、食品补充物、或饮料之成份，而用于治疗阿兹海默症、SDAT、AAMI、MCI及孤独症。
制备使用于本发明之化合物菝葜配基、表菝葜配基、萨洒皂草配基及表萨洒皂草配基皆可在市场上购得。提供厂商包括Sigma Aldrich，Research Plus公司及Steraloids公司。这些材料之制备方法亦可在文献中找到(例如，JACS第5225页(1959)就提供一个关于萨洒皂草配基之制备方法)。表萨洒皂草配基可经由使用金属氢化物还原剂还原萨洒皂草配基而得。萨洒皂草配基可以利用Lajis等，Steroids，1993，58，387-389的方法制备。另外，作为一个起始材料，非取代的皂苷配质可以自然产生于多种植物中，包括下类种类菝葜属(Smilax)、芦笋属(Asparagus)、知母属(Anemarrhena)、丝兰属(Yucca)及龙舌兰属(Agave)。其中萨洒皂草配基及菝葜配基系依据本发明使用，可以是取自菝葜属、芦笋属、知母属、薯蓣属(Dioscorea)、丝兰属及龙舌兰属等植物之植物萃取物、或干燥植物材料粉末之形式。
具有化学式II的化合物，除了R＝H者之外，可以使用惯用之技术从R＝H之化合物制备而得。优选的反应为亲核取代反应，其中一具有化学式II且R＝H之化合物与一具有下列化学式之化合物反应L-R其中R选自氢，烷羰基或烷氧羰基；其中之任何烷基可选择性地以芳基、氨基、单-烷基-氨基、二-烷基-氨基、羧酸残基(-COOH)、或上述任何组合所取代；且在适于亲核性取代之环境下，L为离去基团。此反应可在适于亲核反应之条件下进行。
化合物L-R可以是，例如，羧酸，或者适合的话，酐、或酰卤(例如，酰氯)。例如，其中R为乙基碳酸盐(乙氧基羰基)结构，适当之L-R可为氯甲酸乙酯。
此反应适于于酸，如盐酸，存在下，在碱中进行，例如吡啶。
亲核取代反应之反应细节是习知的。参考，例如，RC Larock，ComprehensiveOrganic Transformations，VCH出版，1989。
在此叙述之反应可能需要保护活性功能基团，例如存在于最终产物之活性功能基团羟基、羰基或氨基，以避免其在反应中有不需要的变化。常用的保护基团可以依据标准程序使用。例如，参考TW Green and PGM Wuts，“Protective Group inOrganic Chemistry’，John Wiley & Sons，1991；JFW McOmie，“Protective Groupsin Organic Chemistry”，Plenum Press，1973。至于具有化学式L-R且R具有氨基取代的化合物，为了保护其氨基取代基团，使用烷氧羰基保护基团是较佳的，其中在合成步骤中，该氨基官能团是用烷氧基羰基氨基(优选为叔-丁氧基羰基氨基)之形式存在，直至在一干溶剂中之酸性环境中去保护为止。
由此制备之化合物可以由常见的方式从反应混合物中取出。例如，标题化合物可经由将反应混合物中的溶剂蒸馏取得，或者，如有需要，可在将反应混合物中的溶剂蒸馏后，将蒸馏后的物质倒入水中，接着再以可和水互溶之溶剂萃取，再将该溶剂自该萃取物中蒸馏掉。另外，如有需要，此产物可以进一步以不同习知技术纯化，例如重新结晶、重新沉淀、或各种层析技术，如柱层析或制备型薄层层析。
新化合物具有化学式II之中的特定化合物，以及其制备过程中受保护之中间体，及其盐类是具有新颖性的，这些新颖的化合物形成本发明进一步之范畴。
根据本发明再一方面，提供具有化学式II的化合物，其中R选自烷羰基或烷氧羰基；其中之任何烷基可选择性地以芳基、氨基、烷氧羰基氨基，单-烷基-氨基、二-烷基-氨基、N-烷基、N-烷氧羰基-氨基、或羧酸残基(-COOH)、或上述任何组合所取代；附带条件为R不是氢或非取代的乙酰基，除非同时C3的立体化学为α且C25的立体化学为S；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为R时，R不是非取代的乙氧基羰基；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为S或C3的立体化学为R(α)且C25的立体化学为R时，R不是琥珀酰基；及当C25立体化学是R且C3立体化学是S(β)时，R不是丙酰基、丁酰基、戊酰基、异戊酰基、己酰基、异己酰基、二乙基乙炔基、辛酰基、癸酰基、月桂酰、肉豆蔻酰、棕榈酰、硬脂酰、苯甲酰、苯乙酰、丙酸苯酯、肉桂酸酯、对-氯苯甲酸酯、2，4-二氯苯甲酸基、对-溴苯甲酸基、间-溴苯甲酸基、对-甲氧基苯甲酸基、糠酰、邻苯二酰；如上述附带条件，包含其所有的立体异构物及消旋混合物，以及其药学上可接受的盐。
在此可能提及特定新颖具有化学式II的化合物，而其R系上述除了乙酰基之外的任何基团。
具有化学式II的化合物的新颖盐类，包含具有化学式II的化合物而其本身是药学上不可接受者的盐类，可以在制备化学式II的化合物及其药学上可接受的盐的过程中作为中间体。
活性基础的讨论在不受限于理论的情况下，上述所述的本发明化合物被认为具有调节受体的功能。例如，这些化合物中有一些已被发现具有预防或逆转大脑中蕈毒碱受体丧失的功能。这些化合物被认为在接受治疗之动物中矫正受体数量或功能或再利用上的缺陷。
其中一个假设认为这些化合物提高神经营养因子的合成或释放，或减少神经营养因子之衰退率，神经营养因子之例子有衍生自脑部之生长因子和/或神经生长因子。这些对生长因子的影响可能是由化合物对细胞质或细胞核受体的作用引起的，或者是由化合物与一启动子区域结合所导致的对生长因子mRNA生产量的直接影响而引起的，又或者标题化合物提高另一因子的产量而引起。
淀粉样蛋白前体(APP)表现量的提高和/或不正常处理与淀粉样蛋白斑及脑血管类淀粉聚集体同为阿兹海默症的主要形态特征。特别有趣的是，APP经过蛋白裂解而形成淀粉样能(amyloidogenic)片断及非淀粉样能(nonamyloidogenic)片断过程的调节机制。由α-分泌酶(α-secretase)在APP之β-类淀粉序列上进行的APP裂解产生一非类淀粉C-端片断，以及可的APPsα片断；其中后者已被显示具有神经营养及神经保护的活性，同时，当注射到小鼠脑静脉内(ICV)中，可强化小鼠的记忆。相对来说，经由β-分泌酶(β-secretase)处理过的APP产生β-类淀粉的N-端，其系由γ-分泌酶(γ-secretase)在可变之C-端分割而形成的。所产生的β-类淀粉胜 包含39-43个胺基酸，已经被显示具有神经毒性且聚积成斑块进而干扰神经之间的联系。
数个研究显示，刺激蕈毒碱受体会使α-分泌酶的活性提高，结果使得由APP产生具有神经保护功能之APPsα的比例提高。同时，由β-及γ-分泌酶分解的APP下降，进而减少β-类淀粉的产量。其它传递子如神经生长因子(NGF)、脑部衍生神经营养因子(BDNF)、缓激肽及血管加压素可能在增加APP形成APPsα的比例上具有类似功效。可能有数种因子与NGF的功效有关，可能包括因子与酪氨酸激酶受体(TrkA)之结合，以及对磷脂酶Cγ的刺激和后续磷酸化及蛋白激酶C(PKC)活化及α-分泌酶相关活性的提升。
本发明之化合物逆转蕈毒碱受体数量的丧失和/或增加的功能特别地有用。其优点如下列三项所示。
1.蕈毒碱受体数量的增加导致突触传递的增加；烟碱受体数量之丧失和/或增加上的逆转系位于突触间隙的上游，其导致释放到突触间隙之乙酰胆碱的增加，或者逆转其丧失，进而增加蕈毒碱受体的活性，因此为整体的效果加倍。
2.受体数量的提高使得α-分泌酶的活性增加，而达到下列的效果2.1β-类淀粉产量的减少，进而减少斑块形成及神经丧失。
2.2增加APPsα并改善大脑功能之短期及长期记忆。
附图
简述为了对本发明作进一步的描述，以下配合图示及实施例作更详细的说明，其中实施例不是用以限定本发明。
图示中第1图显示一本发明的方法中所使用化合物作用的假设模式；第2图显示萨洒皂草配基、表萨洒皂草配基乙基碳酸盐及菝葜配基对年老大鼠之学习能力及记忆力上的作用；第3图显示萨洒皂草配基、表萨洒皂草配基乙基碳酸盐及菝葜配基对蕈毒碱受体数量的影响；第4图显示萨洒皂草配基、表萨洒皂草配基乙基碳酸盐及菝葜配基对大鼠初级脑皮质神经中谷氨酸引起神经衰退的影响；及第5图显示在一CHO-β2/m3转染细胞株中，表萨洒皂草配基醋酸在第4天时对m3及β2肾上腺素受体之密度的影响。
附图及实施例的详细描述参见第1图，其为一本发明的方法中所使用化合物之功能显示图。这些化合物被认为主要作用于细胞核上；然而本发明不是限制在任何特定的活性模式中。观察得知使用本发明之活性药剂使得受体数量增加，此结果被解释为蕈毒碱受体蛋白(以和/或烟碱和/或多巴胺受体蛋白)表现量提高的原因。分泌酶与β-类淀粉蛋白形成(如上述所讨论)之间的可能连结系如图中所示。
以下将配合实施例之讨论，对第2至5图使详细的说明。
表菝葜配基甲酸乙脂酸、表菝葜配基醋酸、萨洒皂草配基甲酸乙脂酸、表萨洒皂草配基甲酸乙脂酸、表萨洒皂草配基琥珀酸、表萨洒皂草配基乙基琥珀酸(比较组)、萨洒皂草配基、菝葜配基及表菝葜配基皆在数种活体内及体外分析进行测试。被认为对确认调节受体数量具有活性之可能性的重要分析/实验如下分析1细胞为基的分析使中国仓鼠卵巢(CHO)细胞共同转染具有蕈毒碱受体和/或β-肾上腺素受体编码之载体。大多数的实验使用此细胞株以及表现蕈毒碱受体之细胞株。
分析2阿兹海默症模式在一活体阿兹海默症模式中，将类淀粉β及鹅膏蕈氨酸注射进大鼠的脑部。
分析3学习及记忆测试使用Y-迷宫测试暴露于测验化合物下之大鼠的学习及记忆能力。之后这些大鼠被牺牲，且其脑部蕈毒碱受体之密度经由双区域比较结合分析法加以分析，并将在Y-迷宫中的表现、受体密度及活性化合物之活性加以比对。
分析4培养神经之神经保护对受测化合物之在对神经有害的环境下保护神经伤害之功能进行体外测试。
方法与结果这些实施例的方法及结果将叙述如下，同时提供合成方法的实施例。
实施例1细胞为基的分析针对表菝葜配基甲酸乙脂酸、萨洒皂草配基甲酸乙脂酸、表萨洒皂草配基甲酸乙脂酸、表萨洒皂草配基琥珀酸、表菝葜配基醋酸及萨洒皂草配基对m受体转染CHO细胞中，m受体表现量的影响进行观察。受体数量系使用[3H]NMS结合及减去非特异性结合之分析而得。化合物系溶于二甲基亚砜(DMSO)，且对照组为DMSO。
方法在实验进行的前一天，将具有高蕈毒碱受体表现量(每mg蛋白质约2.2pmol)之中国仓鼠卵巢(CHO)细胞培养于24井培养盘中。将培养液换成含有承载体(DMSO)或受测化合物的培养液。2/3天后，置换一次培养液，使细胞再放置2/3天。细胞系置于一饱合浓度的N-甲基-东茛菪碱([3H]NMS)中。以冰温的磷酸缓冲食盐水(PBS，3x)清洗，将受体在RIPA缓冲液中溶解并以液体闪烁计数确认结合的[3H]NMS。
使用共同转染且表现蕈毒碱受体及β-肾上腺素受体之CHO细胞株的结果如第5图所示。β-肾上腺素受体及m3受体之密度是用[3H]NMS及[3H]CGP测量。
结果结果如表1及第5图所示。在培养的过程中，表菝葜配基甲酸乙脂酸、萨洒皂草配基甲酸乙脂酸、表萨洒皂草配基甲酸乙脂酸、表萨洒皂草配基琥珀酸及萨洒皂草配基各自避免了蕈毒碱受体数量的减少。将共同转染之细胞株置于含表菝葜配基醋酸中(第5图)并未对m3受体的数量造成重大改变，然而β-肾上腺素受体数量的减少却被表菝葜配基醋酸有效地预防。
表1
因此，本实施例证明表菝葜配基甲酸乙脂酸、萨洒皂草配基甲酸乙脂酸、表萨洒皂草配基甲酸乙脂酸、表萨洒皂草配基琥珀酸及萨洒皂草配基中的每一个化合物皆可增加体外培养之CHO细胞内的蕈毒碱受体或肾上腺素受体。本发明之化合物具有正常化受体数量的功能，意即，这些化合物倾向于避免受体数量随着时间下降，且使用在低受体数量的细胞中时，倾向于补充受体以使受体数量回到正常值。
实施例2阿兹海默症模式在一活体阿兹海默症模式中，系将类淀粉β及鹅膏蕈氨酸注射进大鼠的脑部，引起大脑中的受体丧失及认知损害。之前的研究显示局部将类淀粉β注射到大鼠大脑的脉管核(nucleus vasalis)中导致胆碱能机能减退及行为损害，长达手术后2个月(Giovannelli等，1995Neuroscience，66，781-792)。另外，同时以良性协同的方式将类淀粉β及小量鹅膏蕈氨酸到大鼠海马中产生神经丧失，伴随着神经节细胞渗透到周围及离注射处较远的部位(Morimoto等，1998Neuroscience，84，479-487)。
方法我们的研究使用Morimoto的方法(Morimoto等，1998Neuroscience，84，479-487)，其中有一些修改(以单侧注射取代双侧注射)。三个月大的SpragueDawley大鼠被随机分成不同组。类淀粉β1-40及鹅膏蕈氨酸(两者皆来自Sigma)的注射系配合立体定为仪(Stoelting Co.)进行的，其定位坐标为AP＝-0.5mm(右至中线)，L＝-2.8mm(自冠状面反向)，H＝-7.0mm(腹侧至背侧)。各大鼠的剂量为1μg食盐水中含类淀粉β1-40(4μg)及鹅膏蕈氨酸(1μg)。注射步骤系在20分钟内完成且在10分钟后取出注射针。接着缝合皮肤。
本实施例分成下列8组操作控制注射正常食盐水(对照组)模式(对照注射类淀粉β+鹅膏蕈氨酸)模式+表萨洒皂草配基乙基碳酸盐(18mg/kg/天)*模式+萨洒皂草配基乙基碳酸盐(18mg/kg/天)*模式+表萨洒皂草配基乙基琥珀酸(18mg/kg/天)(比较组)模式+表萨洒皂草配基(18mg/kg/天)*模式+表菝葜配基(18mg/kg/天)*
模式+薯蓣皂苷配基(即阴性对照组，18mg/kg/天)*依据本发明之化合物药物施用表萨洒皂草配基乙基碳酸盐、萨洒皂草配基乙基碳酸盐、表萨洒皂草配基乙基琥珀酸(比较化合物)、表萨洒皂草配基、表菝葜配基及薯蓣皂苷配基(全部为18mg/kg/天之剂量)皆以稳定的CMC-Na(0.5％)悬浮液的形式，经由一肠管每天一次给予受测动物。对照组及阿兹海默症模式组每天一次接受同样容量的CMC-Na(0.5％)。药物及载体皆在手术前20天开始实行，持续两个月。
蕈毒碱受体密度测量将大脑样本均质化，离心，并将离心27000×g后之沉淀物再次均质化，用来测量。将3H-QNB的浓度选择为饱合范围。经过浸泡及分离后，以液体闪烁计数器测量与之结合的蛋白质数量。
避让条件反射(step-through)试验受测化合物对于记忆的影响系利用避让条件反射试验来测量。一个60×15cm的盒子中，分隔成两个一样大小的房间一个具有铜棒基底的暗房，使用时，该铜棒基底加以通电(40V交流)；另一个为亮房且不通电。这两个房间的中间有一可让大鼠通过的开口。每个大鼠的试验期为连续两天。第一天用来训练；当大鼠在盒子中适应3分钟后，将其置入亮房并背向开口，且将暗房通电5分钟。第二天用来测试，其间，将5分钟内的通过次数加以记录。通过次数的减少表示记忆力的增加。
结果在阿兹海默症模式的脑部，蕈毒碱受体密度明显低于对照组。表萨洒皂草配基乙基碳酸盐、萨洒皂草配基乙基碳酸盐、表萨洒皂草配基及表菝葜配基使脑部蕈毒碱受体密度显著提高，而薯蓣皂苷配基和表萨洒皂草配基乙基琥珀酸未曾使蕈毒碱受体密度有明显的变化。因此本实施例证明本发明之化合物具有使受体数量正常化的功能，意即，这些化合物使用在低受体数量的动物中时，倾向于补充受体以使受体数量回到正常值。
阿兹海默症模式组中，在5分钟中发生的错误反应的次数(错误值)比对照组高出许多，表示阿兹海默症模式组的记忆力损伤(参见表2)。表菝葜配基、表萨洒皂草配基乙基碳酸盐、表萨洒皂草配基及萨洒皂草配基乙基碳酸盐各自使错误反应的次数明显降低，而薯蓣皂苷配基和表萨洒皂草配基乙基琥珀酸皆对降低错误反应的次数没有效果。
表2
统计分析系使用非配对二样本t检验。*表示p＜0.05。
实施例3学习及记忆试验将年老的Sprague-Dawley大鼠随机分成4组，一组对照组，似及接受萨洒皂草配基、表萨洒皂草配基乙基碳酸盐、或菝葜配基(每天18mg/kg，n＝10)达3个月的3组。一不接受任何处理之年轻大鼠所组成的对照组(n＝14)也包含在本实施例中。每天的药物剂量系与一最少量的食物混合，且在每天早上给予各别的大鼠。
学习及记忆试验使用Y-迷宫。此Y-迷宫每一分支的地板上皆有一铜棒数组，在需要时可加以通上不同电压的电流。每的分支为45cm长且在尽头具有一15W的灯泡，可在需要时点亮。使用药物3个月后，每一只大鼠接受连续7天如下的训练。每一训练期中大鼠被置于Y-迷宫的一个分支，休息2分钟后，一电流通过铜棒且在顺时钟方向的灯泡会被点亮以标示没有刺激的区域。如果大鼠移至此分支，则记录为一次正确反应，否则，即记录为一次错误反应。这项刺激-反应试验每天重复20次，每两个连续试验之间间隔5秒钟。第7天训练的20次试验后的正确反应次数即用来表示学习能力(越多的次数表示越好的学习能力)。之后大鼠休息30天再将此程序重复一次。经过30天休息后，20个试验中的正确反应即表示记忆能力。
脑部蕈毒碱受体密度之测量组织制备在斩首后迅速地将脑部移出，在干冰中冻结，并移至一冷冻库。脑部经过均质化，所得之沉淀物最后在缓冲液中重新悬浮。
双位竞争配体结合分析以3H-QNB(奎宁基二苯乙醇盐(quinuclinidylbenzilate))做为一放射性配体，其在体外条件下对m受体的次型并没有选择性。Pirenzipine则做为选择性非放射性的竞争配体。蛋白质浓度是用微量劳里法测定。
本实施例之结果如第2及第3图所示。Y-迷宫试验显示年老大鼠的学习及记忆能力皆有衰退。在对年老大鼠使用萨洒皂草配基、表萨洒皂草配基乙基碳酸盐及菝葜配基后，恢复了其学习及记忆能力。年老大鼠的蕈毒碱受体密度大量地降低。萨洒皂草配基、表萨洒皂草配基乙基碳酸盐及菝葜配基则明显地增加了蕈毒碱受体的数量。
结论萨洒皂草配基、表萨洒皂草配基乙基碳酸盐及菝葜配基明显地恢复了年老大鼠脑部的蕈毒碱受体密度，使其接近年轻大鼠的密度。而经由萨洒皂草配基、表萨洒皂草配基乙基碳酸盐及菝葜配基恢复的年老大鼠脑部蕈毒碱受体密度与学习及记忆能力的提高是相关联的。
实施例4萨洒皂草配基、表萨洒皂草配基乙基碳酸盐及菝葜配基的神经保护功效已知谷氨酸会引起大鼠初级脑皮质组织培养的神经衰退，本实施例之目的即为检验萨洒皂草配基、表萨洒皂草配基乙基碳酸盐及菝葜配基对经谷氨酸处理之大鼠初级脑皮质培养组织的影响。
脑皮质神经之初级组织培养将大鼠脑皮质神经培养10天；在第10天将培养液换成无血清标准培养液。在第12天，暴露于谷氨酸之前24小时，清洗组织并置换含有阳性对照(β-雌二醇)、受测化合物(萨洒皂草配基、表萨洒皂草配基乙基碳酸盐、或菝葜配基)或载体对照(DMSO，0.25％)之新鲜培养液。
第13天时，使组织暴露于谷氨酸。
在浸泡期过后，以新鲜培养液清洗并置换培养液，补充相关化合物或载体来评估其对暴露于谷氨酸24小时之组织的保护功能。
在受测化合物处理或谷氨酸+受测化合物暴露的24小时后，存活的神经细胞经由测量释放至培养液中的乳酸脱氢酶(LDH)活性来估计，此过程使用CytoTox 96非放射性试剂组并在450nm的波长下的吸收量加以计量。
结果经过谷氨酸处理后24小时，释放至培养液中的乳酸脱氢酶提高，证明大鼠初级脑皮质组织的脑皮质神经明显地减少。
在24小时前接受萨洒皂草配基、表萨洒皂草配基乙基碳酸盐及菝葜配基前置处理的初级脑皮质组织中，谷氨酸引起的神经衰退被明显减少(第4图)。
结论在大鼠初级脑皮质体外组织中，萨洒皂草配基、表萨洒皂草配基乙基碳酸盐及菝葜配基皆具有对抗谷氨酸引起之神经衰退的显著效果。
实施例5萨洒皂草配基乙基碳酸盐(3-乙氧基羰基5β，20α 22α，25S-螺甾烷-3-β-醇)的合成将氯甲酸乙酯(1.40g，12.9mmol)逐滴加入搅拌中的萨洒皂草配基(2.08g，5.0mmol)的无水二氯甲烷(20ml)及无水吡啶(1.02g，12.9mmol)溶液中。在室温下搅拌此混合物18小时，接着使其在水(30ml)及二氯甲烷分开。以二氯甲烷萃取水溶性层两次，综合的有机层以水清洗并以MgSO4干燥。在真空中把溶剂蒸发，得到白色固体(2.6g)。将此物质以二氧化硅层析，以乙酸盐-己烷洗脱(1∶9)，从丙酮(2x)中再结晶，得萨洒皂草配基乙基碳酸盐之白色结晶(0.72g，29％)mp133-135℃；m/z 488(M+对于C30H48O5)；1H NMR(270MHz，CDCl3)δ0.76(3H，s，18-CH3)，0.98(3H，s，19-CH3)，0.99(3H，d，J＝6.4Hz，21-CH3)，1.08(3H，d，J＝7.0Hz，27-CH3)，1.09-2.10(27H，复合m，两性H)重迭于1.31(3H，t，J＝7Hz，CO2-C-CH3)，3.30(1H，brd，26-OCHH)，3.95(1H，brdd，J＝2.7，10.9Hz，26-OCHH)，4.18(2H，q，J＝7Hz，CO2CH2)，4.40(1H，brdd，J＝8.8，7.2Hz，16-OCH)，4.95(1H，br高峰，H-3)ppm；13C NMR(67MHz，CDCl3)δ14.3(C-21，C-C-O2C)，16.1，16.5，20.9，23.7，25.0，25.8，26.0，26.3，26.4，27.1，30.5，30.6，31.7，35.0，35.3，37.1，40.0，40.3，40.7，42.1，56.4(C-14)，62.1(C-17)，63.5(C-O2C)，65.1(C-26)，74.8(C-3)，81.0(C-16)，109.7(C-22)，154.8(羰基)ppm；Rf0.7(硅，乙基乙醯酸-己烷，1∶4)。
实施例6表萨洒皂草配基乙基碳酸盐(3-乙氧基羰基5β，20α 22α，25S-螺甾烷-3α-醇)的合成在20±5℃之氮气环境下，将锂3，4-丁氧基氢化铝(lithium tri-tert-butoxyaluminohydride)之四氢呋喃(1M，150ml，0.15mol)溶液小心加入(以20分钟的时间)一搅拌中的sarsasapogenone(如Lajis等，Steroids，1993，58，387-389的方法所制备)(41.1g，0.10mol)的无水四氢呋喃(400ml)溶液中。在室温下将反应混合物搅拌2小时。将所得之溶液以饱合硫酸钠(50ml)小心冷却，使用hyflo垫将无机盐滤掉，并以THF清洗。以真空将溶剂移除，将剩余物(约40g)在乙基醋酸(500ml)及1M盐酸(200ml)。在这两个溶剂的交界形成白色未溶解物质，将此物质以过滤取得并以水清洗(2×100ml)，在真空下干燥。将所得之固体在乙基醋酸中搅拌(2×250ml，各5分钟)，移除溶剂并将没有溶解的物质在真空中干燥。得23.1g的粗制表萨洒皂草配基，经由丙酮(1500ml)再结晶，得表萨洒皂草配基之白色结晶(12.6g，30％)mp 214-216℃；m/z 416(M+对于C27H44O3)；1H NMR(270MHz，CDCl3)δ0.75(3H，s，18-CH3)，0.94(3H，s，19-CH3)，0.99(3H，d，J＝6.6Hz，21-CH3)，1.08(3H，d，J＝7.3Hz，27-CH3)，1.1-2.1(27H，复合m，两性H)，3.30(1H，brd，J＝11.0Hz，26-OCHH)，3.55-3.72(1H，7行m，J＝11.0，5.5，5.5Hz，H-3)，3.95(1H，dd，J＝11.0，2.6Hz，26-OCHH)，4.40(1H，dd，J＝8.0，5.5Hz，16-OCH)ppm；13C NMR(67MHz，CDCl3)δ14.3(C-21)，16.1(C-27)，16.5(C-18)，20.6(C-11)，23.4(C-19)，25.8(C-24)，26.0(C-23)，26.7(C-6)，27.1(C-25，C-7)，30.5(C-2)，31.8(C-15)，34.7(C-10)，35.4(C-1)，35.5(C-8)，36.5(C-4)，40.3(C-12)，40.5(C-9)，40.6(C-13)，42.0(C-5)，42.1(C-20)，56.4(C-14)，62.1(C-17)，65.1(C-26)，71.8(C-3)，81.0(C-16)，109.7(C-22)ppm；Rf0.35(硅，乙基乙醯酸-己烷，1∶4)。后续得到第二批表萨洒皂草配基产物(5.2g)。所得之乙基醋酸萃取物被浓缩至约1/5的体积，得另一批表萨洒皂草配基(3.6g)。将氯甲酸乙酯(14.0g，0.13mol)逐滴加入一搅拌中的表萨洒皂草配基(10.0g，0.024mol)的无水二氯甲烷(200ml)及无水吡啶(10.2g，01.3mol)溶液中。在室温下搅拌此混合物18小时，接着使其在水(30ml)及二氯甲烷分开。以二氯甲烷萃取水溶性层两次，综合的有机层以水清洗并以MgSO4干燥。在真空中把溶剂蒸发，得到白色固体(13.4g)。以丙酮(约300ml)再结晶，得表萨洒皂草配基乙基碳酸盐之白色结晶(8.9g，76％)；mp 154-156℃；m/z 488(M+对于C30H48O5)；1H NMR(270MHz，CDCl3)δ0.75(3H，s，18-CH3)，0.95(3H，s，19-CH3)，0.99(3H，d，J＝6.6Hz，21-CH3)，1.08(3H，d，J＝7.0Hz，27-CH3)，1.1-2.1(27H，复合m，两性H)与1.30重迭(3H，t，J＝7.1Hz，CO2-C-CH3)，3.30(1H，brd，J＝11.0Hz，26-OCHH)，3.95(1H，dd，J＝11.0，2.6Hz，26-OCHH)，4.18(2H，q，J＝7Hz，CO2CH2)，4.41(1H，brdd，J＝8.0，6.2Hz，16-OCH)，4.51-4.66(1H，7行m，H-3)ppm；13C NMR(67MHz，CDCl3)δ14.3(C-C-O2C)，14.4(C-21)，16.1，16.5，20.6，23.3，25.8，26.0，26.5，26.6，26.9，27.1，31.7，32.1，32.8，34.7，35.0，35.4，40.3，40.5，40.6，41.8，42.1，56.4(C-14)，62.1(C-17)，63.6(C-O2C)，65.1(C-26)，77.9(C-3)，81.0(C-16)，109.7(C-22)，154.6(羰基)ppm；Rf0.75(硅，乙基乙醯酸-己烷，1∶4)。
实施例7表萨洒皂草配基琥珀酸盐(单-3α，5β，20α22α，25S-螺甾烷基琥珀酸盐)的合成将表萨洒皂草配基(8.0g，19.2mmol)及琥珀酸酐(8.0g，80mmol)以杵和研钵研成粉末，直到得到一均质的小粉粒混合物。将此粉状混合物在一油缸中搅拌加热至80℃，同时加入吡啶(0.2ml)。在氮气环境下搅拌此混合物，同时加热到120±5℃使其融化，并维持此温度半小时。冷却后，将所得之固体在水(300ml)中搅拌，以1M盐酸酸化并研成粉末。以过滤来收集所得之带灰色固体，以水清洗，干燥并以甲醇(约400ml)使之再结晶，接着以去色炭进行热过滤，得表萨洒皂草配基琥珀酸之白色结晶(7.46g，75％)；mp 195-197℃；m/z 516(M+对于C30H48O6)；1H NMR(270MHz，CDCl3)δ0.76(3H，s，18-CH3)，0.95(3H，s，19-CH3)，1.00(3H，d，J＝6.2Hz，21-CH3)，1.08(3H，d，J＝7.0Hz，27-CH3)，1.2-2.1(27H，复合m，两性H)，2.63(4H，m，COCH2CH2CO)，3.31(1H，brd，J＝11.0Hz，26-OCHH)，3.96(1H，dd，J＝11.0，2.6Hz，26-OCHH)，4.42(1H，brdd，J＝8.0，6.4Hz，16-OCH)，4.75(1H，m，H-3)ppm；13C NMR(67MHz，CDCl3)δ14.3(C-21)，16.1(C-27)，16.5(C-18)，20.6(C-11)，23.4(C-19)，25.8，25.9，26.6，27.0，27.1，29.1，29.3，31.7(CCO2)，32.1(CCO2)，34.7，35.1，35.5，40.2，40.6，40.7，41.9，42.2，56.3(C-14)，62.1(C-17)，65.1(C-26)，74.9(C-3)，81.0(C-16)，109.8(C-22)，171.7(酯羰基)，177.9(羧酸)ppm；Rf0.14(硅，乙基乙醯酸-己烷，3∶7)。
实施例8表菝葜配基乙基碳酸盐(3-乙氧基羰基-5β，20α，22α，25R-螺甾烷-3α醇)的合成将氯甲酸乙酯(14.0g，12.9mmol)逐滴加入一搅拌中的表菝葜配基(1.0g，2.4mmol)的无水二氯甲烷(30ml)及无水吡啶(1.02g，12.9mmol)溶液中。在室温下搅拌此粉红色混合物4小时，接着使其在水(50ml)及二氯甲烷分开。以二氯甲烷萃取水溶性层两次，综合的有机层以水清洗并以MgSO4干燥。在真空中蒸发溶剂，得到淡黄色固体(1.1g)。以丙酮再结晶，得表菝葜配基乙基碳酸盐之白色结晶(0.47g，40％)；mp 176-179℃；m/z 488(M+对于C30H48O5)；1H NMR(270MHz，CDCl3)δ0.75(3H，s，18-CH3)，0.79(3H，d，J＝6.2Hz，27-CH3)，0.95(3H，s，19-CH3)，0.96(3Hd，J＝7.3Hz，21-CH3)，1.0-2.05(27H，复合m，两性H)与1.30重迭(3H，t，J＝7.3Hz，CO2-C-CH3)，3.37(1H，t，J＝11.0Hz，26-OCHH)，3.48(1H，m，26-OCHH)，4.17(2H，q，J＝7.3Hz，CO2CH2)，4.40(1H，m，16-OCH)，4.58(1H，7行m，H-3)ppm；13C NMR(67MHz，mCDCl3)δ14.3(C-C-O2C)，14.5(C-21)，16.5(C-18)，17.2(C-27)，20.6(C-11)，23.3(C-19)，26.5，26.6，26.9，28.8，30.3，31.4，31.8，32.1，34.7，35.0，35.4，40.2，40.5，40.6，41.6，41.8，56.4(C-14)，62.2(C-17)，63.6(C-O2C)，66.8(C-26)，77.9(C-3)，80.9(C-16)，109.2(C-22)，154.6(羰酸)ppm；Rf0.8(硅，乙基乙醯酸-己烷，1∶4)。
实施例9盐酸表萨洒皂草配基甘氨酸的合成N-叔丁氧基羰基5β，20α，22α，25S-螺甾烷-3α基氨基乙酸盐(表萨洒皂草配基BOC氨基乙酸盐)将二环己基碳二亚胺(0.68g，3.3mmol)在1分钟内分次加入一搅拌中，0-5℃的表萨洒皂草配基(1.0g，2.4mmol)、N-叔丁氧基羰基甘氨酸(0.53g，3.0mmol)、4-二甲基氨基吡啶(10mg，0.1mmo)及无水二氯甲烷(20ml)中。所得之混合物在室温下搅拌一个晚上，过滤以移除二环己脲，接着在碳酸氢钠溶液(1.5g于20ml水中)与二氯甲烷(15ml)之间分离。将所得之有机层分离出来，以1N盐酸(15ml)清洗，接着以水清洗并以MgSO4干燥。在真空中将溶剂移除，得到非白色泡沫状物质。将此物质加以研磨并于乙醚中(25ml)搅拌3小时。放置一个晚上后，将此混合物过滤(以移除任何残余的二环己脲)，所得之滤液经过蒸发得到白色固体(约1.1g)。自甲醇(约30ml)中再结晶，得BOC甘氨酸衍生物之微晶体(0.40g)mp171-173℃；m/z 573.5(M+对于C34H55NO6)δH(270MHz，CDCl3)0.76(3H，s，18-CH3)，0.95(3H，s，19-CH3)，0.99(3H，d，J＝6.2Hz，21-CH3)，1.08(3H，d，J＝7.0Hz，27-CH3)，1.1-2.1(27H，复合m，两性H)与1.46重迭(9H，s，C(CH3)3)，3.30(1H，brd，J＝11.0Hz，26-OCHH)，3.86(2H，brd，J＝4.8Hz，CH2N)，3.95(1H，dd，J＝11.0，2.6Hz，26-OCHH)，4.42(1H，m，16-OCH)，4.79(1H，7line m，H-3)，5.04(1H，brs，NH).δc(270MHz，CDCl3)14.3(C-21)，16.1(C-27)，16.5(C-18)，20.7(C-11)，23.3(C-19)，25.8，26.0，26.6，26.9，27.1，28.4，31.8，32.2，34.7，35.0，35.5，40.2，40.6，40.7，41.9，42.2，42.8，56.4(C-14)，62.2(C-17)，65.2(C-26)，75.6(C-3)，79.9(CH2N)，81.0(C-16)，109.7(C-22)，155.7(氨基甲酸羰基)，169.8(酯羰基)Rf0.4(硅，乙基乙醯酸-己烷，1∶8)。
5β，20α，22α，25S-螺甾烷-3α基氨基乙酸盐盐酸(表萨洒皂草配基氨基乙酸盐盐酸)在0-5℃之温度下，无湿气的环境下，使一稳定的氯化氢细流经过一搅拌中的N-三级-丁氧基羰基5β，20α，22α，25S-螺甾烷-3α基氨基乙酸盐(0.40g，0.78mmol)之乙基醋酸-乙醚(24ml，1∶8)溶液。大约45分钟后，此反应混合物达到饱合(多余的气体引至一排气管)，停止供应氯化氢。继续搅拌此混合物并使其回温到室温。TLC研究显示去保护反应约在2-3小时后完成。将所得之白色悬浮物放置3小时，将粉状白色固体过滤出并以乙醚清洗。使此物质在空气中自然干燥，再进一步以真空CaCl2干燥至稳定重量为止，得0.24g之可自由流动的白色微晶体固体，mp 270-272℃(decomp).m/z 473(M+对于C29H47NO4)HCl盐M＝510.2δH(270MHz，CDCl3)0.76(3H，s，18-CH3)，0.95(3H，s，19-CH3)，0.99(3H，d，J＝6.2Hz，21-CH3)，1.08(3H，d，J＝7.0Hz，27-CH3)，1.1-2.1(27H，复合m，两性H)与1.46重迭(9H，s，C(CH3)3)，3.30(1H，brd，J＝11.0Hz，26-OCHH)，3.86(2H，brd，J＝4.8Hz，CH2N)，3.95(1H，dd，J＝11.0，2.6Hz，26-OCHH)，4.42(1H，m，16-OCH)，4.79(1H，7行m，H-3)，5.04(1H，brs，NH)δc(270MHz，CDCl3)14.3(C-21)，16.1(C-27)，16.5(C-18)，20.7(C-11)，23.3(C-19)，25.8，26.0，26.6，26.9，27.1，28.4，31.8，32.2，34.7，35.0，35.5，40.2，40.6，40.7，41.9，42.2，42.8，56.4(C-14)，62.2(C-17)，65.2(C-26)，75.6(C-3)，79.9(CH2N)，81.0(C-16)，109.7(C-22)，155.7(氨基甲酸羰基)，169.8(酯羰基)Rf0.6(硅，二氯甲烷-甲醇-0.88氨，9∶1∶0.1)。
实施例10盐酸萨洒皂草配基甘氨酸的合成标题化合物是用实施例9之化合物的相似方法合成的，使用萨洒皂草配基做为起始原料。
其中的中间体N-叔丁氧基羰基5β，20α，22α，25S-螺甾烷-3β基氨基乙酸盐(萨洒皂草配BOC氨基乙酸盐)是用白色微晶体取得，m/z 573.5(C34H55NO6之M+)Rf0.45(二氧化硅，乙酸盐-己烷，1∶4)，本实施例之化合物是用一可自由流动的白色微晶体固体的形式得到，mp 259-261℃(decomp.)m/z 473(C29H47NO4之M+)HCl盐M＝510.2 Rf0.5(二氧化硅，二氯甲烷-甲醇-0.88氨12∶1∶0.1)。
实施例11盐酸表菝葜配基甘氨酸的合成标题化合物是用实施例9之化合物的相似方法合成的，使用表菝葜配基做为起始原料。
其中的中间体N-叔丁氧基羰基5β，20α，22α，25R-螺甾烷-3α基氨基乙酸盐(表菝葜配基BOC氨基乙酸盐)是用白色微晶体取得，mp 100-103℃m/z 573.5(M+对于C34H55NO6)δH(500MHz，CDCl3)0.75(3H，s，18-CH3)，0.79(3H，d，J＝6.3Hz，27-CH3)，0.95(3H，s，19-CH3)，0.96(3H，d，J＝6.9Hz，21-CH3)，1.0-2.0(27H，复合m，两性H)与1.45重迭(9H，s，C(CH3)3)，3.37(1H，t，J＝10.9Hz，26-OCHH)，3.47(1H，m，26-OCHH)，3.87(2H，J＝5.3Hz，CH2N)，4.40(1H，m，16-OCH)，4.79(1H，7行m，H-3)，5.04(1H，br高峰，NH).δc(270MHz，CDCl3)14.7(C-21)，16.6(C-18)，17.3(C-27)，20.8(C-11)，23.5(C-19)，26.7，26.8，27.1，28.5，29.0，30.5，31.6，32.0，32.3，34.9，35.2，35.6，40.4，40.7，40.8，41.8，42.0，42.9，56.5(C-14)，62.4(C-17)，67.0(C-26)，75.7(C-3)，80.1(CO2C)，81.1(C-16)，109.4(C-22)，155.9(氨基甲酸羰基)，170.0(ester carbonyl)Rf0.46(硅，乙基乙醯酸-己烷，1∶4)。
本实施例之化合物是用一可自由流动的白色微晶体固体的形式得到，mp 273-275℃(decomp.)m/z 473(M+对于C29H47NO4)HCl盐M＝510.2；δH[500MHz，(CD3)2SO]0.71(3H，s，18-CH3)，0.75(3H，d，J＝6.3Hz，27-CH3)，0.91(3H，d，J＝6.9Hz，21-CH3)，0.92(3H，s，19-CH3)，1.0-2.0(27H，复合m，两性H)，3.20(1H，t，J＝11.1Hz，26-OCHH)，3.41(1H，m，26-OCHH)，3.71(2H，brs，CH2N)，4.28(1H，m，16-OCH)，4.75(1H，7行m，H-3)，8.54(3H，s，NH3)δc[125MHz，(CD3)2SO]14.6(C-21)，16.1(C-18)，17.0(C-27)，20.1(C-11)，22.9(C-19)，26.0，26.2，26.4，28.5，29.7，30.9，31.4，31.6，34.2，343.，34.9，41.0，41.1，55.5(C-14)，61.9(C-17)，65.9(C-26)，75.4(C-3)，80.2(C-16)，108.3(C-22)，166.9(羰基).Rf0.5(硅，二氯甲烷-甲醇-0.88氨，12∶1∶0.1)。
实施例12盐酸表菝葜配基L-丙氨酸的合成标题化合物是用实施例9之化合物的相似方法合成的，使用表菝葜配基及N-4-丁氧羰基-L-丙氨酸(N-叔丁氧基羰基-L-丙氨酸)做为起始原料。
其中的中间体N-叔丁氧基羰基5β，20α，22α，25R-螺甾烷-3α基L-丙氨酸盐(表菝葜配基BOC L-丙氨酸盐)是用白色微晶体取得，mp 171-173℃ m/z 587.5(M+对于C35H57NO6)δH(500MHz，CDCl3)0.76(3H，s，18-CH3)，0.79(3H，d，J＝6.4Hz，27-CH3)，0.95(3H，s，19-CH3)，0.97(3H，d，J＝7.0Hz，21-CH3)，1.0-2.03(27H，复合m，两性H)与1.37重迭(3H，d，J＝7.1Hz)和1.45(9H，s，C(CH3)3)，3.38(1H，t，J＝10.9Hz，26-OCHH)，3.47(1H，m，26-OCHH)，4.25(1H，m，CHN)，4.40(1H，m，16-OCH)，4.76(1H，7行m，H-3)，5.06(1H，br d，J＝5.7Hz，NH).δc(125MHz，CDCl3)14.7(C-21)，16.6(C-18)，17.3(C-27)，19.0(CH3-C-N)，20.8(C-11)，23.5(C-19)，26.7，26.8，27.1，28.5，29.0，30.5，31.6，32.0，323.3，34.9，35.2，35.6，40.4，40.7，40.9，41.8，42.0，49.6，56.5(C-14)，62.5(C-17)，67.0(C-26)，75.5(C-3)，79.9(CO2C)，81.1(C-16)，109.4(C-22)，155.3(氨基甲酸羰基)，173.1(酯羰基)Rf0.53(硅，乙基乙醯酸-己烷，1∶4)。
本实施例之化合物是用一可自由流动的白色微晶体固体的形式得到，mp 233-235℃(decomp.)m/z 487(M+对于C30H49NO4)HCl盐M＝510.2δH[500MHz，(CD3)2SO]0.71(3H，s，18-CH3)，0.75(3H，d，J＝6.3Hz，27-CH3)，0.90(3H，d，J＝6.9Hz，21-CH3)，0.92(3H，s，19-CH3)，1.0-1.95(27H，复合m，两性H)与1.42重迭(3H，d，J＝7.2Hz，CH3-C-N)，3.21(1H，t，J＝11.0Hz，26-OCHH)，3.41(1H，m，26-OCHH)，3.96(1H，q，J＝7.0Hz，CHN)，4.29(1H，m，16-OCH)，4.73(1H，7行m，H-3)，8.66(3H，s，NH3).δc[125MHz，(CD3)2SO]14.5(C-21)，15.6(AlaMe)，16.0(C-18)，17.0(C-27)，20.1(C-11)，22.8(C-19)，25.9，26.1，26.4，28.4，29.7，30.9，31.3，31.5，34.2，34.9，40.9，41.0，47.8，55.5(C-14)，61.9(C-17)，65.8(C-26)，75.4(C-3)，80.2(C-16)，108.2(C-22)，169.3(羰基)四讯息未被侦测，可能隐藏于溶液之波峰Rf0.56(硅，二氯甲烷-甲醇-0.88氨，12∶1∶0.1)。
实施例13盐酸表菝葜配基L-缬氨酸的合成标题化合物是用实施例9之化合物的相似方法合成的，使用表菝葜配基及N-4-丁氧羰基-L-缬氨酸(N-叔丁氧基羰基-L-缬氨酸)做为起始原料。
其中的中间体N-叔丁氧基羰基5β，20α，22α，25R-螺甾烷-3α基L-缬氨酸盐(表菝葜配基BOC L-缬氨酸盐)是用白色微晶体取得，mp 68-71℃ m/z 615.5(M+对于C35H61NO6)δH(500MHz，CDCl3)0.76(3H，s，18-CH3)，0.79(3H，d，J＝6.4Hz，27-CH3)，0.89(6H，d，J＝6.9Hz，C(CH3)2)，0.95(3H，s，19-CH3)，0.96(3H，d，J＝6.9Hz，21-CH3)，1.0-2.2(28H，复合m，两性H)与1.43重迭，1.45(9H，2xs，C(CH3)3)，3.38(1H，t，J＝10.9Hz，26-OCHH)，3.47(1H，m，26-OCHH)，4.17(1H，dd，J＝9.9，4.1Hz，CHN)，4.40(1H，m，16-OCH)，4.79(1H，7行m，H-3)，5.01(1H，br t，J＝9.9Hz，NH).δc(125MHz，CDCl3)14.7(C-21)，16.6(C-18)，17.3(C-27)，17.7(C-27)，17.7(Val Me)，19.2(ValMe)，20.8(C-11)，23.5(C-19)，26.7，26.9，27.1，28.5(t-丁基Me)，29.0，30.5，31.6，32.0，32.4，34.9，35.2，35.7，40.4，40.7，40.9，41.8，42.0，56.4(C-14)，58.8(CHN)，62.5(C-17)，67.1(C-26)，75.4(C-3)，79.8(CO2C)，81.1(C-16)，109.4(C-22)，155.9(氨基甲酸羰基)，172.1(酯羰基)Rf0.60(硅，乙基乙酰基-己烷，1∶4)。
本实施例之化合物是用一可自由流动的白色微晶体固体的形式得到，mp 171-173℃(decomp.)m/z 515.7(M+对于C32H53NO4)HCl盐M＝552.2；δH[500MHz，(CD3)2SO]0.71(3H，s，18-CH3)，0.74(3H，d，J＝6.4Hz，27-CH3)，0.90(3H，d，J＝6.9Hz，21-CH3)，0.93(3H，s，19-CH3)，0.95(3H，d，J＝6.9Hz，缬氨酸-CH3)，1.00(3H，d，J＝6.9Hz，缬氨酸-CH3)，1.01-2.0(27H，复合m，两性H)，2.22(1H，m，CH-C-N)，3.21(1H，t，J＝11.0Hz，26-OCHH)，3.41(1H，m，26-OCHH)，3.75(1H，m，CHN)，4.28(1H，m，16-OCH)，4.77(1H，7行m，H-3)，8.6(3H，br高峰，NH3).δc[125MHz，(CD3)2SO]14.5(C-21)，16.0(C-18)，17.0(C-27)，17.4(Val Me)，18.4(Val Me)，20.1(C-11)，22.9(C-19)，26.1，26.2，26.4，28.4(t-Bu)，29.2，29.7，30.9，31.3，31.7，34.2，34.9，41.0，41.1，55.5(C-14)，57.1(CHN)，61.9(C-17)，65.8(C-26)，75.4(C-3)，80.2(C-16)，108.3(C-22)，168.0(羰基)四讯息未被侦测可能隐藏于溶剂波峰Rf0.64(硅，二氯甲烷-甲醇-0.88氨，12∶1∶0.1)。
实施例14盐酸表菝葜配基L-异亮氨酸的合成标题化合物是用实施例9之化合物的相似方法合成的，使用表菝葜配基及N-4-丁氧羰基-L-异亮氨酸(N-叔丁氧基羰基-L-异亮氨酸)做为起始原料。
其中的中间体N-叔丁氧基羰基5β，20α，22α，25R-螺甾烷-3α基L-异亮氨酸盐(表菝葜配基BOC L-异亮氨酸盐)是用白色微晶体取得，mp 67-70℃ m/z 629.5(C38H63NO6之M+)Rf0.6(二氧化硅，乙酸盐-己烷，1∶4)。
本实施例之化合物是用一可自由流动的白色微晶体固体的形式得到，mp 169-171℃(decomp.)m/z 529.7(C33H55NO4之M+)HCl盐M＝566.2 Rf0.5(二氧化硅，二氯甲烷-甲醇-0.88氨，12∶1∶0.1)。
实施例15盐酸表菝葜配基L-苯丙氨酸的合成标题化合物是用实施例9之化合物的相似方法合成的，使用表菝葜配基及N-4-丁氧羰基-L-苯丙氨酸(N-叔丁氧基羰基-L-苯丙氨酸)做为起始原料。
其中的中间体N-叔丁氧基羰基5β，20α，22α，25R-螺甾烷-3α基L-苯丙氨酸盐(表菝葜配基BOC L-苯丙氨酸盐)是用白色微晶体取得，mp 66-68℃ m/z663.5(C41H61NO6之M+)Rf0.6(二氧化硅，乙酸盐-己烷，1∶5)。
本实施例之化合物是用一可自由流动的白色微晶体固体的形式得到，mp 254-356℃(decomp.)m/z 563.5(C36H53NO4之M+)HCl盐M＝600.2 Rf0.6(二氧化硅，二氯甲烷-甲醇-0.88氨，12∶1∶0.1)。
实施例16盐酸表菝葜配基L-甲硫氨酸的合成标题化合物是用实施例9之化合物的相似方法合成的，使用表菝葜配基及N-4-丁氧羰基-L-甲硫氨酸(N-叔丁氧基羰基-L-甲硫氨酸)做为起始原料。
其中的中间体N-叔丁氧基羰基5β，20α，22α，25R-螺甾烷-3α基L-甲硫氨酸盐(表菝葜配基BOC L-甲硫氨酸盐)是用白色微晶体取得，mp 76-79℃ m/z 647.9(C37H61NO6S之M+)Rf0.5(二氧化硅，乙酸盐-己烷，1∶5)。
本实施例之化合物是用一可自由流动的白色微晶体固体的形式得到，mp 173-176℃(decomp.)m/z 547.8(C32H53NO4S之M+)HCl盐M＝584.3 Rf0.5(二氧化硅，二氯甲烷-甲醇-0.88氨，12∶1∶0.1)。
权利要求
1.如通式II所示化合物 其中，R基团选自氢、烷羰基、或烷氧羰基；其中任何烷基皆可任选地被芳基、氨基、单-或二-烷基-氨基、羧酸残基(-COOH)或其任何组合取代；包含其所有立体异构物及消旋混合物，以及其药学上可接受的盐，在人和非人动物中治疗或预防(i)非认知神经衰退，(ii)非认知神经肌肉衰退，或(iii)没有认知、神经及神经肌肉损伤的受体丧失，或在制备用于治疗或预防上述病症的组成物中的应用，其中所示人或非人动物患有上述病症或易感上述病症。
2.如权利要求1所述的应用，其中，所述式II的化合物选自萨洒皂草配基，萨洒皂草配基乙基碳酸盐，萨洒皂草配基乙酸盐，萨洒皂草配基琥珀酸盐及其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基，表萨洒皂草配基乙基碳酸盐，表萨洒皂草配基乙酸盐，表萨洒皂草配基琥珀酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基，菝葜配基乙基碳酸盐，菝葜配基乙酸盐，菝葜配基琥珀酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基，表菝葜配基乙基碳酸盐，表菝葜配基乙酸盐，表菝葜配基琥珀酸及其药学上可接受的盐。
3.如权利要求1所述的应用，其中，所述化合物选自萨洒皂草配基甘氨酸及其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基甘氨酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基甘氨酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基甘氨酸及其药学上可接受的盐，萨洒皂草配基丙氨酸及其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基丙氨酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基丙氨酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基丙氨酸及其药学上可接受的盐，萨洒皂草配基缬氨酸及其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基缬氨酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基缬氨酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基缬氨酸及其药学上可接受的盐，萨洒皂草配基苯丙氨酸及其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基苯丙氨酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基苯丙氨酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基苯丙氨酸及其药学上可接受的盐，萨洒皂草配基异亮氨酸及其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基异亮氨酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基异亮氨酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基异亮氨酸及其药学上可接受的盐，萨洒皂草配基甲硫氨酸及其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基甲硫氨酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基甲硫氨酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基甲硫氨酸及其药学上可接受的盐。
4.如权利要求1所述通式II的化合物，其条件为R不是氢或非取代的乙酰基，除非同时C3的立体化学为α且C25的立体化学为S；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为R时，R不是非取代的乙氧基羰基；以及，当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为S或C3的立体化学为R(α)且C25的立体化学为R时，R不是琥珀酰基；如上述附带条件，包含其所有的立体异构物及消旋混合物，以及其药学上可接受的盐；在患有或易感认知功能障碍之人类或非人类之动物中治疗或预防认知功能障碍，或在制备用于治疗或预防认知功能障碍的组成物中的应用。
5.如权利要求4所述的应用，其中，所述式II的化合物选自萨洒皂草配基，萨洒皂草配基乙基碳酸盐，萨洒皂草配基乙酸盐，萨洒皂草配基琥珀酸盐及其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基，表萨洒皂草配基乙基碳酸盐，表萨洒皂草配基乙酸盐，表萨洒皂草配基琥珀酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基，菝葜配基乙基碳酸盐，菝葜配基乙酸盐，菝葜配基琥珀酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基，表菝葜配基乙基碳酸盐，表菝葜配基乙酸盐，表菝葜配基琥珀酸及其药学上可接受的盐，萨洒皂草配基甘氨酸及其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基甘氨酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基甘氨酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基甘氨酸及其药学上可接受的盐，萨洒皂草配基丙氨酸及其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基丙氨酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基丙氨酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基丙氨酸及其药学上可接受的盐，萨洒皂草配基缬氨酸及其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基缬氨酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基缬氨酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基缬氨酸及其药学上可接受的盐，萨洒皂草配基苯丙氨酸及其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基苯丙氨酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基苯丙氨酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基苯丙氨酸及其药学上可接受的盐，萨洒皂草配基异亮氨酸及其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基异亮氨酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基异亮氨酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基异亮氨酸及其药学上可接受的盐，萨洒皂草配基甲硫氨酸及其药学上可接受的盐，表萨洒皂草配基甲硫氨酸及其药学上可接受的盐，菝葜配基甲硫氨酸及其药学上可接受的盐，表菝葜配基甲硫氨酸及其药学上可接受的盐。萨洒皂草配基甘氨酸(氨基乙酸盐)及其药学上可接受的盐，
6.如权利要求1-5中任一项所述的应用，其中，所述活性药剂的C25甲基为R构型。
7.如权利要求1-5中任一项所述的应用，其中，所述活性药剂的C25甲基为S构型。
8.如权利要求1所述通式II的化合物，其中，所述R基团选自烷羰基或烷氧羰基；其中任何烷基皆可任选地被芳基、氨基、烷氧羰基氨基、单-烷基-氨基、二-烷基-氨基、N-烷基、N-烷氧羰基-氨基或羧酸残基(-COOH)，或其任何组合取代，其中，R不是非取代的乙酰基，除非同时C3的立体化学为α且C25的立体化学为S；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为R时，R不是非取代的乙氧基羰基；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为S或C3的立体化学为R(α)或S(β)且C25的立体化学为R时，R不是琥珀酰基；以及当C25立体化学是R且C3立体化学是S(β)时，R不是丙酰基、丁酰基、戊酰基、异戊酰基、己酰基、异己酰基、二乙基乙炔基、辛酰基、癸酰基、月桂酰、肉豆蔻酰、棕榈酰、硬脂酰、苯甲酰、苯乙酰、丙酸苯酯、肉桂酸酯、对-氯苯甲酸酯、2，4-二氯苯甲酸基、对-溴苯甲酸基、间-溴苯甲酸基、对-甲氧基苯甲酸基、糠酰、邻苯二酰；如上述附带条件，包含其所有的立体异构物及消旋混合物，以及其药学上可接受的盐。
9.如权利要求1所述通式II的化合物，其中，所述R基团选自低级烷羰基及低级烷氧羰基，任选地有一末端羧酸(-COOH)残基被取代。
10.如权利要求8或9所述的化合物，其中该C25甲基为R构型。
11.如权利要求8或9所述的化合物，其中该C25甲基为S构型。
12.一种化合物，其特征在于，羧酸化合物选自表菝葜配基乙基碳酸盐，萨洒皂草配基乙基碳酸盐，表萨洒皂草配基乙基碳酸盐，表萨洒皂草配基醋酸，表萨洒皂草配基琥珀酸，萨洒皂草配基甘氨酸，表萨洒皂草配基甘氧酸，菝葜配基甘氨酸，表菝葜配基甘氧酸，萨洒皂草配基丙氨酸，表萨洒皂草配基丙氨酸，菝葜配基丙氨酸，表菝葜配基丙氨酸，萨洒皂草配基缬氨酸，表萨洒皂草配基缬氨酸，菝葜配基缬氨酸，表菝葜配基缬氨酸，萨洒皂草配基苯丙氨酸，表萨洒皂草配基苯丙氨酸，菝葜配基苯丙氨酸，表菝葜配基苯丙氨酸，萨洒皂草配基异亮氨酸，表萨洒皂草配基异亮氨酸，菝葜配基异亮氨酸，表菝葜配基异亮氨酸，萨洒皂草配基甲硫氨酸，表萨洒皂草配基甲硫氨酸，菝葜配基甲硫氨酸，表菝葜配基甲硫氨酸以及其药学上可接受的盐。
13.如权利要求8-12中任一项所述的化合物，它被用作药物。
14.合成除R＝H以外的式II的化合物的方法，，所述方法包含使一R＝H之式II的化合物与一下列化学式化合物反应L-R，其中R选自烷羰基或烷氧羰基；其中之任何烷基可选择性地以芳基、氨基、单-烷基-氨基、二-烷基-氨基、羧酸残基(-COOH)、或上述任何组合所取代；且在适于亲核性取代之环境下，L为离去基团。
15.如权利要求14所述的方法，其中，所述L-R化合物为羧酸、酐或酰卤。
16.合成类固醇类皂苷元衍生物的方法，其特征在于，所述方法包括在碱存在下，用氯甲酸乙酯处理所选类固醇类皂苷元，以形成3-乙氧基羰基衍生物。
17.如权利要求16所述的方法，其中，所述碱包含溶于无水二氯甲烷的无水吡啶。
18.合成表菝葜配基乙基碳酸盐的方法，其特征在于，所述方法包括使表菝葜配基与氯甲酸乙酯或相关试剂及碱反应。
19.合成萨洒皂草配基乙基碳酸盐的方法，其特征在于，所述方法包括使萨洒皂草配基与氯甲酸乙酯或相关试剂及碱反应。
20.合成表萨洒皂草配基乙基碳酸盐的方法，其特征在于，所述方法包括使表萨洒皂草配基与氯甲酸乙酯或相关试剂及碱反应。
21.合成表萨洒皂草配基琥珀酸酸的方法，其特征在于，所述方法包括使表萨洒皂草配基与琥珀酸酐或相关试剂及碱反应。
22.如权利要求9-12中任一项所述化合物或其药学上可接受的盐在制造用于增加人中或非人类动物中受体数量或代谢率，或增强受体功能的药物中的应用。
23.一种组成物，它在人或非人动物中具有对抗非认知神经衰退，非认知神经肌肉衰退或没有认知、神经或神经肌肉损伤时的受体丧失的活性，它包含有效剂量的权利要求1至12项中任一项所述的通式II的化合物，或其药学上可接受的盐。
24.一种组成物，它在人或非人动物中具有对抗认知功能障碍的活性，它包含有效剂量的如权利要求1至12项中任一项所述的通式II的化合物，或其药学上可接受的盐，条件是，R不是氢或非取代的乙酰基，除非同时C3的立体化学为α且C25的立体化学为S；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为R时，R不是非取代的乙氧基羰基；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为S或C3的立体化学为R(α)且C25的立体化学为R时，R不是琥珀酰基。
25.一种药物组合物，其特征在于，所述组合物含有药物有效量的一或多个如权利要求8至12项中任一项所述的式II的化合物，或其药学上可接受的盐。
26.一种食品、食品补充物、或饮料，它含有药物有效量的一或多个如权利要求8至12项中任一项所述的式II的化合物，或其药学上可接受的盐。
27.一种具有认知功能加强特性的组成物，其特征在于，所述组合物包括药物有效量的表菝葜配基乙基碳酸盐，萨洒皂草配基乙基碳酸盐，表萨洒皂草配基乙基碳酸盐，表萨洒皂草配基醋酸，表萨洒皂草配基琥珀酸，萨洒皂草配基甘氨酸，表萨洒皂草配基甘氧酸，菝葜配基甘氨酸，表菝葜配基甘氧酸，萨洒皂草配基丙氨酸，表萨洒皂草配基丙氨酸，菝葜配基丙氨酸，表菝葜配基丙氨酸，萨洒皂草配基缬氨酸，表萨洒皂草配基缬氨酸，菝葜配基缬氨酸，表菝葜配基缬氨酸，萨洒皂草配基苯丙氨酸，表萨洒皂草配基苯丙氨酸，菝葜配基苯丙氨酸，表菝葜配基苯丙氨酸，萨洒皂草配基异亮氨酸，表萨洒皂草配基异亮氨酸，菝葜配基异亮氨酸，表菝葜配基异亮氨酸，萨洒皂草配基甲硫氨酸，表萨洒皂草配基甲硫氨酸，菝葜配基甲硫氨酸，表菝葜配基甲硫氨酸，或其药学上可接受的盐中的一种或多种。
28.一种药剂，其特征在于，所述药剂包括表菝葜配基乙基碳酸盐，萨洒皂草配基乙基碳酸盐，表萨洒皂草配基乙基碳酸盐，表萨洒皂草配基醋酸，表萨洒皂草配基琥珀酸，萨洒皂草配基甘氨酸，表萨洒皂草配基甘氧酸，菝葜配基甘氨酸，表菝葜配基甘氧酸，萨洒皂草配基丙氨酸，表萨洒皂草配基丙氨酸，菝葜配基丙氨酸，表菝葜配基丙氨酸，萨洒皂草配基缬氨酸，表萨洒皂草配基缬氨酸，菝葜配基缬氨酸，表菝葜配基缬氨酸，萨洒皂草配基苯丙氨酸，表萨洒皂草配基苯丙氨酸，菝葜配基苯丙氨酸，表菝葜配基苯丙氨酸，萨洒皂草配基异亮氨酸，表萨洒皂草配基异亮氨酸，菝葜配基异亮氨酸，表菝葜配基异亮氨酸，萨洒皂草配基甲硫氨酸，表萨洒皂草配基甲硫氨酸，菝葜配基甲硫氨酸，表菝葜配基甲硫氨酸，或其药学上可接受的盐中的一种或多种。
29.一种在有需要的人或非人动物中治疗或预防非认知神经衰退，非认知神经肌肉衰退或没有认知、神经或神经肌肉损伤时受体丧失的方法，其特征在于，所述方法包括对所述人或非人动物使用有效剂量的如权利要求1至12项中任一项所述的通式II的化合物，或其药学上可接受的盐。
30.一种在有需要的人或非人动物中治疗或预防认知功能障碍的方法，其特征在于，所述方法包括对所述人或非人动物使用有效剂量的如权利要求1至12项中任一项所述的通式II的化合物，或其药学上可接受的盐；条件是，R不是氢或非取代的乙酰基，除非同时C3的立体化学为α且C25的立体化学为S；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为R时，R不是非取代的乙氧基羰基；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为S或C3的立体化学为R(α)且C25的立体化学为R时，R不是琥珀酰基。
31.一种在患者中治疗认知功能障碍的方法，所述患者患有以下疾病之一阿兹海默症、阿兹海默型态之老年痴呆(SDAT)、年龄相关记忆损伤(AAMI)、路易体痴呆及孤独症，其特征在于，所述方法包括对所述人或非人动物使用有效剂量的如权利要求1至12项中任一项所述的式II的化合物，或其药学上可接受的盐，条件是，R不是氢或非取代的乙酰基，除非同时C3的立体化学为α且C25的立体化学为S；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为R时，R不是非取代的乙氧基羰基；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为S或C3的立体化学为R(α)且C25的立体化学为R时，R不是琥珀酰基。
32.一种在人或非人动物中强化认知功能的方法，其特征在于，所述方法包括对病患时使用有效剂量的如权利要求1至12项中任一项所述的式II的化合物，或其药学上可接受的盐；条件是，R不是氢或非取代的乙酰基，除非同时C3的立体化学为α且C25的立体化学为S；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为R时，R不是非取代的乙氧基羰基；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为S或C3的立体化学为R(α)且C25的立体化学为R时，R不是琥珀酰基。
33.如权利要求32项所述的方法，其中，所述治疗是在正常受试者上实践的非治疗方法，以增强所述受试者的认知功能。
34.在人或非人动物中治疗(i)非认知神经衰退，(ii)非认知神经肌肉衰退，或(iii)没有认知、神经或神经肌肉损伤时受体丧失的方法，所述患者患有以下症状帕金森症、肌营养不良包括面肩胛臂肌营养不良(FSH)、杜兴肌营养不良、贝克尔肌营养不良及布鲁斯氏(Bruce’s)肌营养不良、富克斯营养不良、强直性肌营养不良、角膜营养不良、交感反射性营养不良综合征(RSDSA)、神经血管营养不良、重症肌无力、蓝伯特伊顿氏症(Lambert Eaton disease)、亨丁顿氏症、肌萎缩性脊髓侧索硬化(ALS)、多发性硬化症、直立性低血压、慢性疲劳综合征、哮喘、对心力衰竭易感和黄斑变性，其特征在于，所述方法包括对患者施用药物有效量的如权利要求1-12中任一项所述的式II的化合物，或其药学上可接受的盐。
35.作为药物组合物、食品、食品补充物或饮料成分的一种或多种如权利要求1-12中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐在用于治疗帕金森症、肌营养不良包括面肩胛臂肌营养不良(FSH)、杜兴肌营养不良、贝克尔肌营养不良及布鲁斯氏(Bruce’s)肌营养不良、富克斯营养不良、强直性肌营养不良、角膜营养不良、交感反射性营养不良综合征(RSDSA)、神经血管营养不良、重症肌无力、蓝伯特伊顿氏症(Lambert Eaton disease)、亨丁顿氏症、肌萎缩性脊髓侧索硬化(ALS)、多发性硬化症、直立性低血压、慢性疲劳综合征、哮喘、对心力衰竭易感和黄斑变性的方法中的应用。
36.作为药物组合物、食品、食品补充物或饮料成分的一种或多种如权利要求1-12中任一项所述的式II的化合物或其药学上可接受的盐在用于治疗阿兹海默症、阿兹海默型态之老年痴呆(SDAT)、年龄相关记忆损伤(AAMI)、MCI痴呆及孤独症的方法中的应用，条件是，R不是氢或非取代的乙酰基，除非同时C3的立体化学为α且C25的立体化学为S；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为R时，R不是非取代的乙氧基羰基；当C3的立体化学为S(β)且C25的立体化学为S或C3的立体化学为R(α)且C25的立体化学为R时，R不是琥珀酰基。
37.增强患有年龄相关认知功能障碍的患者认知功能的方法，其特征在于，所述方法包括对该患者施用药物有效量的如权利要求1至12项中任一项所述的化合物。
38.如权利要求30、31、32或36所述的方法，它用来治疗阿兹海默症或阿兹海默型老年痴呆。
39.一种治疗帕金森症、路易体痴呆、直立性低血压、孤独症、慢性疲劳综合征、重症肌无力、蓝伯特伊顿氏症、亨丁顿氏症、多发性硬化、哮喘、心力衰竭、癫痫症以及与老化相关的疾病和问题的方法，其特征在于，所述方法包括对患者施用药物有效量的如权利要求1至12项中任一项所述的化合物及其药学上可接受的盐。
40.一种治疗帕金森症、路易体痴呆、直立性低血压、孤独症、慢性疲劳综合征、重症肌无力、蓝伯特伊顿氏症、亨丁顿氏症、多发性硬化、哮喘、心力衰竭、癫痫症以及与老化相关的疾病和问题的方法，其特征在于，所述方法包括对患者施用药物有效量的萨洒皂草配基。
41.如权利要求40所述的方法，其中，所述萨洒皂草配基为植物萃取物或干粉化的植物物质，所述植物衍生自菝葜属、芦笋属、知母属、薯蓣属、丝兰属及龙舌兰属。
42.如权利要求40及41所述的方法，其特征在于，所述方法包括施用含有有效剂量萨洒皂草配基的食品或饮料。
43.作为食品或饮料成分的萨洒皂草配基在用于治疗帕金森症、路易体痴呆、直立性低血压、孤独症、慢性疲劳综合征、重症肌无力、蓝伯特伊顿氏症、亨丁顿氏症、多发性硬化、哮喘、心力衰竭、癫痫症及与老化相关的疾病和问题的方法中的应用。
全文摘要
本发明揭露一种特定类固醇类皂苷元及其衍生物，及其在治疗认知功能障碍、非认知神经衰退、非认知神经肌肉衰退及对于认知消失、神经及神经肌肉损伤的受体丧失中的应用。本发明还揭示了合成方法、治疗及药物组合物。
文档编号A61P3/00GK1678325SQ02807427
公开日2005年10月5日 申请日期2002年3月28日 优先权日2001年3月28日
发明者P·巴勒克拉夫, J·哈森, P·冈宁, D·里斯, 夏宗勤, 胡雅儿 申请人:费托泰克有限公司