专利名称：趋化因子受体活性的四氢吡喃基环戊基四氢吡啶并吡啶调节剂的制作方法
背景技术：
趋化因子是具有强力趋化活性的小的(70-120个氨基酸)前炎性细胞因子的家族。趋化因子为由吸引至炎症部位的各种细胞例如单核细胞、巨噬细胞、T细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和中性粒细胞释放的趋化性细胞因子(在Schall，Cytokine，3，165-183(1991)和Murphy，Rev.Immun.，12，593-633(1994)中综述)。这些分子最初通过四种保守的半胱氨酸定义并基于第一个半胱氨酸对的排布分为两个亚家族。在CXC-趋化因子家族中，它包括IL-8、GROα、NAP-2和IP-10，这两种半胱氨酸被单一氨基酸分开，而在CC-趋化因子家族中，它包括RANTES、MCP-1、MCP-2、MCP-3、MIP-1α、MIP-1β和嗜伊红趋化原(eotaxin)，这两个残基是相邻的。
趋化因子通过多种细胞类型分泌并且结合在存在于白细胞和其它的细胞上的特异性G-蛋白偶联受体(GPCRs)(在Horuk，TrendsPharm.Sci.，15，159-165(1994)中综述)。这些趋化因子受体形成GPCRs的亚家族，后者目前由15个已鉴定的成员和一些孤独的膜组成。不像混栖化学引诱物例如C5a、fMLP、PAF和LTB4的受体那样，趋化因子受体更选择性地在白细胞亚型上表达。因此，特异性趋化因子的生成提供特殊白细胞亚型的反射增进机制。
在结合它们的同源配体上，趋化因子受体通过有关的三聚化G蛋白传导胞内信号，导致细胞内钙浓度迅速增加。至少有7种人趋化因子受体结合具有下面已确证类型的β-趋化因子或者对其有反应CCR-1(或者“CKR-1”或者“CC-CKR-1”)[MIP-1α、MIP-1β、MCP-3、RANTES](Ben-Barruch等，J.Biol.Chem.，270，22123-22128(1995)；Beote等，Cell，72，415-425(1993))、CCR-2A和CCR-2B(或者“CKR-2A”/”CKR-2A”或者“CC-CKR-2A”/”CC-CKR-2A”)[MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4]、CCR-3(或者“CKR-3”或者“CC-CKR-3”)[嗜伊红趋化原、嗜伊红趋化原2、RANTES、MCP-2、MCP-3](Rollins等，Blood，90，908-928(1997))、CCR-4(或者“CKR-4”或者“CC-CKR-4”)[MIP-1α、RANTES、MCP-1](Rollins等，Blood，90，908-928(1997))、CCR-5(或者“CKR-5”或者“CC-CKR-5”)[MIP-1α、RANTES、MIP-1β](Sanson等，Biochemistry，35，3362-3367(1996))和Duffy-血-群抗原[RANTES、MCP-1](Chaudhun等，J.Biol.Chem.，269，7835-7838(1994))。β-趋化因子包括嗜伊红趋化原、MIP(“巨噬细胞炎性蛋白”)、MCP(“单核细胞化学引诱物蛋白”)和在其它趋化因子中的(“调节-向上-激活，正常T表达和分泌的”)RANTES。
趋化因子受体例如CCR-1、CCR-2、CCR-2A、CCR-2B、CCR-3、CCR-4、CCR-5、CXCR-3、CXCR-4已作为重要的介质参与炎性和免疫调节紊乱和疾病，包括哮喘、鼻炎和变应性疾病，以及自身免疫病理学例如类风湿性关节炎和动脉粥样硬化。在CCR-5基因上的32-碱基对剔除的同源的人似乎对类风湿性关节炎不太易感(Gomez等，Arthritis & Rheumatism，42，989-992(1999))。嗜酸性粒细胞在变应性炎症中的作用的综述由Kita，H等，J.Exp.Med.183，2421-2426(1996)提供。趋化因子在变应性炎症中的作用的一般综述由Lustger，A.D.，New England J.Med.，338(7)，426-445(1998)提供。趋化因子的亚型为单核细胞和巨噬细胞的有效化学诱导物。这些中鉴定最充分的为MCP-1(单核细胞化学诱导物蛋白-1)，其初级受体为CCR2。各种物种，包括啮齿动物和人，在对炎性刺激的反应中，会在多种细胞类型中产生MCP-1，并且刺激单核细胞和淋巴细胞亚型中的趋化性。具体地说，MCP-1产生与炎症部位的单核细胞和巨噬细胞浸润相关。通过小鼠体内同源重组消除MCP-1或者CCR2导致对巯基乙酸注射和单核细胞增生李司忒氏菌(Listeria monocytogenes)感染的应答的单核细胞反射增进的显著减弱(Lu等，J.Exp.Med.187，601-608(1998)；Kurihara等，J.Exp.Med.186，1757-1762(1997)；Boring等，J.Clin.Invest.，100，2552-2561(1997)；Kuziel等.Proc.Natl.Acad.Sci.，94，12053-12058 91997))。另外，这些动物显示由注射血吸虫或者分枝杆菌抗原诱导的单核细胞浸润进入肉芽肿性病变部位的减少(Boring等，J.Clin.Invest.，100，2552-2561(1997)；Warmington等，Am.J.Path.，154，1407-1416(1999))。这些数据提示MCP-1诱导的CCR2激活在单核细胞对炎症部位的反射增进中起主要作用，并且这种活性的拮抗作用应产生足够的免疫应答抑制以在免疫炎性疾病和自身免疫疾病中产生治疗效果。因此，调节趋化因子受体例如CCR-2受体的药物在这样的紊乱和疾病中应是有用的。另外，单核细胞对血管壁上炎性病变的反射增进是致动脉粥样化斑块形成的主要原因。在高胆固醇血症中血管壁损伤后，MCP-1通过内皮细胞和血管内膜平滑肌细胞产生和分泌。作为对释放的MCP-1的应答，对损伤部位反射增进的单核细胞浸润血管壁并分化为泡沫细胞。目前几个小组已证实与维持高脂肪食物喂饲的APO-E-/-、LDL-R-/-或者Apo B转基因小鼠回交的MCP-1-/-或者CCR-2-/-小鼠中主动脉病变大小、巨噬细胞含量和坏死均减弱或减小(Boring等，Nature，394，894-897(1998)；Gosling等，J.Clin.Invest.，103，773-778(1999))。因此，通过修复单核细胞反射增进和动脉壁上的分化，CCR2拮抗剂可以抑制动脉粥样硬化病变形成和病理学的发展。
发明概述本发明另外涉及化合物，它们是趋化因子受体活性的调节剂并且用于预防或者治疗某些炎性和免疫调节紊乱和疾病、变应性疾病、特异反应性疾病包括过敏性鼻炎、皮炎、结膜炎和哮喘，以及自身免疫病理学疾病例如类风湿性关节炎和动脉粥样硬化。本发明也涉及含这些化合物的药用组合物和这些化合物及组合物在预防或者治疗其中趋化因子受体参与的此类疾病中的用途。
发明详述本发明涉及式I的化合物及其药学上可接受的盐和它们各自的非对映体 其中R3为氧或者不存在；R8选自(a)氢，(b)C1-3烷基，其为未取代的或者由1-6个氟取代，(c)-O-C1-3烷基，(d)氟，和(e)羟基。
在本发明的一个实施方案中，R3不存在。
在本发明的一个实施方案中，R3为氧。
在本发明中，优选R8选自(a)氢，(b)三氟甲基，(c)甲基，(d)甲氧基，(e)乙氧基(f)乙基，(g)氟，和(h)羟基。
本发明的代表性化合物包括存在于实施例中的那些化合物及其药学上可接受的盐和它们各自的非对映体。
本发明的化合物在环戊基环的1-和3-位具有至少两个不对称中心，在吗啉环的4-位具有一个不对称中心，并且在吗啉环的3-位任选具有一个不对称中心。依分子上的各种取代基的性质而定，可存在其它的不对称中心。每一这样的不对称中心应独立产生两个光学异构体并且打算将混合物中所有可能的光学异构体和非对映体和作为纯的或者部分纯的化合物均包括在本发明的范围内。如本领域已知的，通过在此公开的方法学的合适的改进，可以实现非对映体和对映体的独立合成或者它们的色谱分离。如果必要，用含已知绝对构型的不对称中心的试剂，通过它们衍生的结晶产物或者结晶中间体的X-射线结晶学，可以测定它们的绝对立体化学。
如本领域技术人员所意识到的，可把C1-3烷基定义为具有以线性或者分支排布的1、2或者3个碳的基团，即C1-3烷基具体包括甲基、乙基、正丙基和异丙基。
在此使用的术语“药学上可接受的”指这些化合物、材料、组合物和/或剂型，它们在合理的医学判断的范围内，适用于与人体和动物组织接触而没有过度的毒性、刺激性、变应性应答或者其它的问题或者复杂性，与合适的效益/风险比相匹配。如在此使用的，“药学上可接受的盐”指衍生物，其中通过制备它们的酸性或者碱性盐修饰母体化合物。药学上可接受的盐的实例包括(但不限于)碱性残基例如胺的矿物酸或者有机酸盐、酸性残基例如羧酸的碱或者有机盐等。药学上可接受的盐包括所形成母体化合物例如非毒性无机或者有机酸的常规非毒性盐或者季铵盐。例如，这样的常规非毒性盐包括衍生自无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的那些盐；和由有机酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、枸橼酸、抗坏血酸、双羟萘酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、磺胺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、羟乙磺酸等制备的盐。
通过常规化学方法，自含碱性或者酸性部分的母体化合物可制备本发明的药学上可接受的盐。通常，在水或者在有机溶剂中，或者在两者的混合物中，通过使这些化合物的游离的酸或者碱形式与化学计算量的合适的碱或者酸反应，可制备这样的盐；通常，非水介质例如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或者乙腈为优选。在例如Remington’s Pharmaceutical Sciences，第17版，Mack PublishingCompany，Easton，PA，1985，第1418页中可发现合适的盐。
本发明中的具体的化合物包括选自实施例的标题化合物的化合物及其药学上可接受的盐和它们各自的非对映体。
所研究的化合物用于调节需要这样调节的患者体内趋化因子受体活性的方法，方法包括给予有效量的所述化合物。本发明涉及前述化合物作为趋化因子受体活性调节剂的用途。具体地说，这些化合物用作趋化因子受体尤其是CCR-2的调节剂。
通过本领域已知的方法学，例如由Van Riper等，J.Exp.Med.，177，851-856(1993)公开的趋化因子结合试验，后者可易于适用于测量CCR-2结合。可以证实作为趋化因子受体活性的调节剂的本发明的化合物的用途。
通过测量125I-MCP-1对包括单核细胞THP-1细胞在内的各种细胞类型的内源性CCR-2受体的抑制作用，或者在真核细胞内的已克隆受体的异种表达后，测量CCR-2结合试验中的受体亲和力。把细胞悬浮于结合缓冲液(50mM HEPES，pH7.2，5mM MgCl2，1mMCaCl2，0.50％BSA)中并在室温下于1小时内加入到受试化合物或者DMSO及125I-MCP-1中以使结合。然后在GFB滤膜上收集细胞，用25mM含500mM NaCl的HEPES缓冲液冲洗并定量细胞结合的125I-MCP-1。
在趋化性试验中，采用分离自静脉全血或者leukophoresed的血的排除了PMBC的T细胞进行趋化性并且通过Ficoll-Hypaque离心纯化，随后用神经氨酸酶处理的绵羊红细胞进行玫瑰花瓣试验。一旦分离后，用含0.1mg/ml BSA的HBSS冲洗细胞并在1×107个细胞/ml下悬浮。于37℃在暗处用2μM Calcien-AM(Molecular Probes)荧光标记细胞30分钟。把已标记的细胞冲洗两次并在RPMI 1640中在5×106个细胞/ml下用含0.1mg/ml BSA的L-谷氨酰胺(无酚红)悬浮。把在相同的培养基中于10ng/ml稀释的MCP-1(Peprotech)或者培养基单独加入到底部孔(27μl)中。用DMSO或者用各种浓度的受试化合物预温育15分钟后，将单核细胞(150000个细胞)加入到滤膜(30μl)的顶部。将等浓度的受试化合物或者DMSO加入到底部孔中以防止通过扩散稀释。于37℃在5％CO2下温育60分钟后，移去滤膜并用含0.1mg/ml BSA的HBSS冲洗顶部以除去未迁移至滤膜上的细胞。在化学引诱物不存在下测量自发迁移(化学激活现象)。
具体地说，在上面提到的试验中，下面实施例的化合物具有结合CCR-2受体的活性，通常具有约小于1μM的IC50。这样的结果是在用作趋化因子受体活性调节剂的化合物内在活性的指标。
哺乳动物趋化因子受体提供用于干扰或者促进哺乳动物例如人体内嗜酸性粒细胞和/或淋巴细胞功能的靶标。抑制或者促进趋化因子受体功能的化合物特别用于调节治疗目的的嗜酸性粒细胞和/或淋巴细胞功能。因此，抑制或者促进趋化因子受体功能的化合物将用于治疗、预防、改善、控制或者减少广泛种类的炎性和免疫调节紊乱和疾病、变应性疾病、包括过敏性鼻炎、皮炎、结膜炎和哮喘在内的特异反应性疾病以及自身免疫病理学例如类风湿性关节炎和动脉粥样硬化的风险。例如，可以给予其抑制哺乳动物趋化因子受体(例如人趋化因子受体)一种或者更多种功能的本发明化合物以抑制(即减少或者预防)炎症。结果，一种或者更多种炎症过程，例如白细胞迁移、趋化、胞吐作用(例如，酶、组胺的胞吐作用)或者炎性介质释放受到抑制。
除灵长类例如人以外，按照本发明的方法可治疗各种其他的哺乳动物。例如，可治疗哺乳动物，包括(但不限于)牛、绵羊、山羊、马、犬、猫、豚鼠、大鼠或者其他的牛、绵羊、马、犬、猫、啮齿动物或者海洋动物物种。然而，这一方法也可在其他的物种中实践，例如鸟类(例如，鸡)。
采用本发明的化合物可治疗与炎症和感染有关的疾病和病症。在一个优选的实施方案中，疾病和病症是一种为调节炎性应答而淋巴细胞的作用被抑制或者促进的疾病。
可用趋化因子受体功能抑制剂治疗的人或其它物种的疾病或状况包括(但不限于)炎性或变应性疾病和病征，包括呼吸道变应性疾病如哮喘(特别是支气管哮喘)、变应性鼻炎、过敏性肺疾病、过敏性肺炎、嗜酸性肺炎(例如吕弗勒氏综合征、慢性嗜酸性肺炎)、迟发型过敏、间隙肺疾病(ILD)(例如特发性肺纤维化或与类风湿性关节炎相关的ILD、系统性红斑狼疮、关节强硬性脊椎炎、全身性硬皮症、斯耶革伦氏综合征、多肌炎或皮肤肌炎)；全身性过敏反应或过敏性应答、药物过敏(例如对青霉素、头孢菌素过敏)、昆虫蛰伤性过敏；自身免疫疾病例如类风湿性关节炎、牛皮癣关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、重症肌无力、青少年糖尿病发作；肾小球性肾炎、自身免疫性甲状腺炎、贝切特氏疾病；移植排斥(例如在移植术中)，包括同种异体移植物排斥或移植物抗宿主疾病；炎性肠疾病例如克朗氏病和溃疡性结肠炎；椎关节病；硬皮病；牛皮癣(包括T-细胞介导的牛皮癣)和炎性皮肤病例如皮炎、湿疹、特异反应性皮炎、变应性接触性皮炎、荨麻疹；脉管炎(例如引起坏死的、皮肤的和过敏性脉管炎)；嗜酸性肌炎、嗜酸性筋膜炎；伴有皮肤或器官白血球浸润的癌症。其中不合需要的炎性应答被抑制的其它疾病或病征可被治疗，包括(但不限于)再灌注损伤、动脉粥样硬化、某些血液学恶性病变、细胞因子诱导的毒性(例如脓毒性休克、嗜伊红趋化原性休克)、多肌炎、皮肤肌炎。
人或其它物种的可用趋化因子受体功能调节剂治疗的疾病或状况包括(但不限于)免疫抑制，例如在患有免疫缺陷综合征如AIDS或其它的病毒感染的个体，经历引起免疫抑制放射疗法、化学疗法、用于自身免疫疾病的疗法或药物疗法(例如皮质类固醇疗法)的个体中；由于先天性的受体功能缺陷或其它原因引起的免疫抑制；和感染疾病例如牛皮癣病，包括(但不限于)蠕虫感染例如线虫(园线虫)、(鞭虫病、蛲虫病、蛔虫病、钩虫、类圆线虫病、旋毛虫病、丝虫病)、吸虫(吸虫)(血吸虫病、华支睾吸虫病)、绦虫(绦虫)(棘球蚴病、牛肉绦虫病、囊尾蚴病)、内脏蠕虫、内脏蚴虫偏头痛(例如弓蛔虫)、嗜酸性胃肠炎(例如异尖属sp.、Phocanema sp.)和皮肤幼虫偏头痛(巴西钩口线虫、犬钩口线虫)。另外，上述炎性、变应性和自身免疫疾病的治疗也期待趋化因子受体功能的促进剂，如果人们期待传递足够的化合物以通过诱导趋化因子受体内在化引起在细胞上的受体表达减少或者以导致细胞迁移的错误指向的方式传递化合物。
本发明化合物因此用于治疗、预防、改善、控制或减少广泛范围的炎性和免疫调节紊乱和疾病、变应性疾病、特异反应性疾病以及自身免疫病理学的风险。在具体的实施方案中，本发明涉及本发明化合物用于治疗、预防、改善、控制或减少自身免疫疾病例如类风湿性关节炎或牛皮癣关节炎的风险的用途。
另一方面，本发明可用于评价趋化因子受体包括CCR-2的推定的特异性激动剂或拮抗剂。因此，本发明涉及这些化合物在制备和实施调节趋化因子受体活性的化合物的筛选实验中的用途。例如，本发明的化合物用于分离受体突变体，后者是优越的筛选更有效的化合物的工具。另外，本发明的化合物用于建立或确定其它的化合物与趋化因子受体的结合位点，例如通过竞争性抑制。本发明的化合物也用于评价趋化因子受体包括CCR-2的推定的特异性调节剂。如本领域所认识到的，以上趋化因子受体的特异性激动剂和拮抗剂的充分评价因缺乏可利用的对这些受体具有高结合亲和力的非肽基(代谢抗性)化合物而受到阻碍。因此，本发明化合物是用于这些目的的可以购买获得的商业产品。
本发明另外涉及用于制备在人和动物调节趋化因子受体活性的药物的方法，方法包括使本发明的化合物与药用载体或稀释剂混合。
本发明另外涉及本发明化合物在治疗、预防、改善、控制或减少由逆转录病毒，特别是疱疹病毒或人免疫缺陷病毒(HIV)引起的感染的风险和治疗及延迟跟着发生的病理疾病例如AIDS的发作中的用途。治疗AIDS或者预防或治疗由HIV引起的感染被定义为包括(但不限于)治疗范围广泛的HIV感染状态AIDS、ARC(AIDS相关复征)、有症状和无症状两者、实际上或潜在地暴露于HIV。例如，本发明化合物用于治疗在被怀疑经例如血液输入、器官移植、体液置换、咬合、意外针状物剌入或者在手术期间暴露于患者血液引起的暴露于HIV后由HIV引起的感染。
在本发明的一个优选方面，本发明化合物可用于抑制靶细胞的趋化因子结合于趋化因子受体例如CCR-2的方法，方法包括使靶细胞与一定量的有效抑制趋化因子与趋化因子受体结合的化合物接触。
用以上方法治疗的受治疗者为哺乳动物，优选为人，男性或女性，其中趋化因子受体活性的调节是需要的。如在此使用的“调节”打算包括拮抗作用、激动作用、部分拮抗作用、反向激动作用和/或部分激动作用。在本发明的一个优选方面，调节指趋化因子受体活性的拮抗作用。术语“治疗有效量”意欲被研究人员、兽医、医生或其他临床医师探寻的对组织、系统、动物或人产生生物学或医学应答的本发明化合物的量。
如在此使用的术语“组合物”打算包括包含以特定量存在的特定成分的产物以及直接或间接由以特定量存在的特定成分的组合产生的任何产物。“药学上可接受的”意指载体、稀释剂或赋形剂，必须与制剂中的其它成分相适配并且对其接受者无害。术语“给予”和/或“给出”化合物应理解为意指需要治疗的个体提供本发明的化合物。如在此使用的，术语“治疗”指治疗和预防或预防性治疗以上提及的疾病。
调节趋化因子受体活性因而用于治疗、预防、改善、控制或减少炎性和免役调节紊乱和疾病，包括哮喘和变应性疾病，以及自身免疫病理学如类风湿性关节炎和动脉粥样硬化和以上指出的那些病理学的风险的联合疗法通过本发明化合物和已知用于这些用途的其它化合物的联合来阐述。
例如，在治疗、预防、改善、控制或减少炎症的风险中，本发明化合物可与抗炎或镇痛药例如阿片激动剂、脂氧合酶抑制剂如5-脂氧合酶的抑制剂、环加氧酶抑制剂如环加氧酶-2抑制剂、白介素抑制剂如白介素-1抑制剂、NMDA拮抗剂、氧化氮抑制剂或氧化氮合成的抑制剂、非甾体抗炎药或抑制细胞因子的抗炎药一起使用，例如，与化合物如对乙酰氨基酚、阿司匹林、可待因、依那西普(embrel)、芬太尼、布洛芬、吲哚美辛、酮咯酸、吗啡、萘普生、非那西丁、吡罗昔康、甾体镇痛药、舒芬太尼、舒林酸、替尼达普等一起使用。相似地，本发明化合物可与疼痛缓解药；增效剂如咖啡因、H2-拮抗剂、西甲硅油、氧化铝或氢氧化镁；减充血药如去氧肾上腺素、苯丙醇胺、伪麻黄碱、羟甲唑啉、肾上腺素、萘甲唑啉、赛洛唑啉、丙君或左-脱氧-麻黄碱；镇咳药如可待因、氢可酮、卡拉美芬、喷托维林或右美沙芬(dextramethorphan)；利尿药和镇静性或非镇静性抗组胺药一起给药。
同样地，本发明化合物可与用于治疗/预防/抑制或改善本发明化合物是有用的疾病或状况的其它药物联合使用。这样的其它药物可以通过途径和以常规使用的量，与本发明化合物同时或连续给药。当本发明化合物与一种或更多种其它药物同时使用时，除本发明化合物以外，还包含这样的其它药物的药用组合物为优选。因此，本发明的药用组合物除包括本发明化合物以外，还包含一种或更多种其它活性成分的那些药用组合物。
可与本发明化合物联合给药(或者分开给药或者以在相同的药用组合物中给药)的其它活性成分的实例包括(但不限于)(a)VLA-4拮抗剂例如在US5510332、WO95/15973、WO96/01644、WO96/06108、WO96/20216、WO96/22966、WO96/31206、WO96/40781、WO97/03094、WO97/02289、WO98/42656、WO98/53814、WO98/53817、WO98/53818、WO98/54207和WO98/58902中描述的那些；(b)甾体类例如倍氯米松、甲泼尼龙、倍他米松、泼尼松、地塞米松和氢化可的松；(c)免役抑制剂例如环胞菌素、他克莫司、雷帕霉素和其它的FK-506型免役抑制剂；(d)抗组胺药(H1-组胺拮抗剂)例如溴苯那敏、氯苯那敏、右氯苯那敏、曲普利啶、氯马斯汀、苯海拉明、二苯拉林、曲吡那敏、羟嗪、甲地嗪、异丙嗪、阿利马嗪、阿扎他定、赛庚啶、安他唑啉、非尼拉明、美吡拉敏、阿司咪唑、特非那定、氯雷他定、地氯雷他定、西替利嗪、非索非那定、去乙氧羰基氯雷他定(descarboethoxyloratadine)等；(e)非甾体抗哮喘药例如β2-激动剂(特布他林、奥西那林、非诺特罗、异他林、沙丁胺醇、比托特罗和吡布特罗)、茶碱、色甘酸二钠、阿托品、异丙托溴铵、白三烯拮抗剂(扎鲁司特、孟鲁司特、普仑司特、伊拉司特、泊比司特、SKB-106203)、白三烯生物合成抑制剂(齐留通、BAY-1005)；(f)非甾体抗炎药(NSAIDs)例如丙酸衍生物(阿明洛芬、苯噁洛芬、布氯酸、卡洛芬、芬布芬、非诺洛芬、氟洛芬、氟比洛芬、布洛芬、吲哚洛芬、酮洛芬、咪洛芬、萘普生、噁丙嗪、吡洛芬、普拉洛芬、舒洛芬、噻洛芬酸和硫噁洛芬)、乙酸衍生物(吲哚美辛、阿西美辛、阿氯芬酸、环氯茚酸、双氯芬酸、芬氯酸、芬克洛酸、芬替酸、呋罗芬酸、异丁芬酸、伊索克酸、oxpinac、舒林酸、硫平酸、托美丁、齐多美辛和佐美酸)、灭酸类衍生物(氟芬那酸、甲氧芬那酸、甲芬那酸、尼氟酸和托芬那酸)、联苯羧酸衍生物(二氟尼柳和氟苯柳)、昔康类(伊索昔康、吡罗昔康、舒多昔康和替诺昔康)、水杨酸酯类(乙酰水杨酸、柳氮磺吡啶)和吡唑酮类(阿扎丙宗、bezpiperylon、非普拉宗、莫非布宗、羟布宗、保泰松)；(g)环加氧酶-2(COX-2)抑制剂；(h)磷酸二酯酶IV型(PDE-IV)抑制剂；(i)趋化因子受体尤其是CCR-1、CCR-2、CCR-3、CXCR-3和CCR-5的其它的拮抗剂；(j)降低胆固醇药物例如HMG-CoA还原酶抑制剂(洛伐他汀、辛伐他汀和普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀、罗苏伐他汀和其它的他汀类)、螯合剂(考来烯胺和考来替泊)、胆固醇吸收抑制剂(依泽替米贝)、烟酸、非诺贝酸衍生物(吉非贝齐、氯贝丁酯、非诺贝特和苯扎贝特)和丙丁酚；(k)抗糖尿病药例如胰岛素、磺酰脲类、双胍类(二甲双胍)、α-葡萄糖苷酶抑制剂(阿卡波糖)和格列酮类(曲格列酮和吡格列酮)；(1)干扰素β的制剂(干扰素β-1α、干扰素β-1β)；(m)其它的化合物例如5-氨基水杨酸和它们的前药、抗代谢药例如硫唑嘌呤和6-巯基嘌呤以及细胞毒的癌化学治疗药物。
本发明化合物与第二种活性成分的重量比例可以变化并且依每一种成分的有效剂量而定。通常使用每一种成分的有效剂量。因此，例如，当本发明的化合物与NSAID联合时，本发明化合物与NSAID的重量比例通常在约1000∶1-1∶1000，优选为约200∶1-1∶200的范围内。本发明的化合物与其它活性成分的联合通常也在上述范围内，但是在每一种情况中，应使用每一种活性成分的有效剂量。在这样的联合中，本发明的化合物与其它活性药物可以分开或一起给药。另外，一种成分可在给予其它药物之前、同时或随后给药。
本发明化合物可通过口服、非肠道(例如肌内、腹膜内、静脉内、ICV、脑池内注射或灌输、皮下注射或埋入)，通过吸入喷雾、鼻、阴道、直肠、舌下或局部给药途径给药，并且可单独或一起，以包含常规非毒性药学上可接受的载体、佐剂和适合于每一种给药途径的媒介物的合适的剂量单位制剂配制。除了治疗温血动物例如小鼠、大鼠、马、牛、绵羊、狗、猫、猴等，本发明的化合物有效用于人中。
用于给予本发明的化合物的药用组合物可便利地以剂型存在并且可通过药学领域熟知的任何方法制备。所有的方法包括使活性成分与构成一种或更多种辅助成分的载体混合在一起的步骤。通常，通过使活性成分与液体载体或细分的固体载体或两者均匀和紧密地混合在一起，然后如果必要，使产物成型为所需的制剂来制备药用组合物。除了药用组合物以外，活性的本发明化合物以足以对疾病的过程或状况产生所需作用的量被包括在内。如在此使用的，术语“组合物”打算包括包含以具体量存在的具体成分的产物以及其直接或间接由以具体量存在的具体成分的组合产生的任何产物。
包含活性成分的药用组合物可以适合于口服用途，例如作为片剂、糖锭剂(troches)、锭剂(lozenges)、含水或油混悬剂、可分散粉末或颗粒、乳剂、硬或软胶囊或者糖浆剂或酏剂的形式存在。按照对药用组合物制备领域已知的任何方法可制备打算用于口服用途的组合物，并且这样的组合物可包含一种或更多种选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的物质，以提供药学上精致的和适口的制剂。片剂包含与非毒性药学上可接受的适合于制备片剂的赋形剂混合在一起的活性成分。这些赋形剂可为例如惰性稀释剂如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒和崩解剂例如玉米淀粉或藻酸；粘合剂例如淀粉、明胶或阿拉伯胶和润滑剂例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂可为未包衣的或者它们可通过已知技术包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，并且因此提供较长时间的持续作用。例如，可使用时间延迟原料如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。它们也可通过在美国专利4256108、4166452和4265874号中描述的技术包衣，以形成用于控制释放的渗透治疗片剂。
用于口服用途的制剂也可作为其中活性成分与惰性固体稀释剂如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合在一起的硬明胶胶囊，或作为其中活性成分与水或油介质例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合在一起的软明胶胶囊存在。含水悬浮液包含与适合于制备含水悬浮液的赋形剂混合在一起的活性原料。这样的赋形剂为悬浮剂，例如羧基甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟基-丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶；分散剂或甜味剂可为天然存在的磷脂，例如卵磷脂，或者环氧烷与脂肪酸的缩合产物例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或者环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物例如十七碳乙烯氧基十六烷醇的缩合产物，或者环氧乙烷与衍生于脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物例如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯，或者环氧乙烷与衍生于脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物例如聚乙烯山梨糖单油酸酯。含水悬浮液也可包含一种或更多种防腐剂例如乙基或正丙基、对-羟基苯甲酸酯，一种或更多种着色剂、一种或更多种矫味剂和一种或更多种甜味剂例如蔗糖或糖精。通过把活性成分悬浮于植物油例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油中，或悬浮于矿物油例如液体石蜡中，可配制油状悬浮液。油状悬浮液可包含增稠剂例如黄蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可加入例如以上阐述的那些甜味剂和矫味剂以提供可口的口服制剂。通过加入抗氧化剂例如抗坏血酸，这些组合物可被防腐。适合于通过加入水制备含水悬浮液的可分散粉末和颗粒提供与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或更多种防腐剂混合在一起的活性成分。合适的分散或润湿剂和悬浮剂通过以上已经提及的那些举例说明。另外的赋形剂，例如甜味剂、矫味剂和着色剂，也可存在。本发明的药用组合物也可以水包油乳剂的形式存在。油相可为植物油例如橄榄油或花生油，或者矿物油例如液体石蜡或这些油的混合物。合适的乳化剂可为天然存在的树胶例如阿拉伯胶或黄蓍胶、天然存在的磷脂例如豆油、卵磷脂和衍生于脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯例如山梨醇单油酸酯，和所述部分酯与环氧乙烷的缩合产物例如脱水聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯。乳剂也可包含甜味和矫味剂。糖浆剂和酏剂也可用甜味剂例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖配制。这样的制剂也可包含湿润剂、防腐剂和矫味剂及着色剂。
药用组合物可以以灭菌可注射含水或油状悬浮液的形式存在。按照已知技术，使用以上已经提及的那些合适的分散剂或甜味剂和悬浮剂可配制这个悬浮液。灭菌可注射制剂也可为在非毒性非肠道可接受的稀释剂或溶剂中的灭菌可注射溶液剂或悬浮液，例如作为在1，3-丁二醇中的溶液剂。在可接受的媒介物和溶剂中，可使用的为水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，灭菌的固定油被常规用作溶剂或悬浮介质。为此目的，任何品牌的固定油可被使用，包括合成的单-或二甘油酯。另外，脂肪酸例如油酸发现在注射剂的制备中具有用途。本发明的化合物也可以用于直肠给药的栓剂形式给药。通过把药物与合适的非刺激性赋形剂混合可制备这些组合物，该赋形剂在常温下为固体但是在直肠温度下为液体并且因此在直肠熔化以释放药物。这样的原料为可可脂和聚乙二醇。对于局部使用，使用包含本发明的化合物的霜剂、软膏剂、凝胶剂、溶液剂或悬浮液等。(为了这个应用的目的，局部应用应包括口腔洗剂和漱口水)。
本发明的药用组合物和方法可另外包括如在此指出的通常用于治疗这样病理疾病的其它的治疗活性化合物。在治疗、预防、改善、控制或减少需要趋化因子受体调节的疾病的风险中，合适的剂量水平通常为约每天0.01-500mg/kg患者体重，其可以单或多剂量给药。优选地，剂量水平为每天约0.1-250mg/kg，更优选为每天约0.5-100mg/kg。合适的剂量水平可为每天约0.01-250mg/kg、约每天0.05-100mg/kg，或每天约0.1-50mg/kg。在这个范围内，剂量范围可为每天0.05-0.5、0.5-5或5-50mg/kg。为了口服给药，组合物优选以包含1.0-1000mg的活性成分，优选2.0-500，更优选3.0-200，特别是1、5、10、15、20、25、30、50、75、100、125、150、175、200、250、300、400、500、600、750、800、900和1000mg的活性成分的片剂形式提供，根据症状调节给予所治疗患者的剂量。化合物可按照每天1-4次，优选每天一或两次的方案给药。
然而，应理解对于任何具体患者的具体的剂量水平和给药频率可以改变并且将依多种因素而定，包括所使用的具体化合物的活性、所述化合物的代谢稳定性和作用时间长度，年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药方式和次数、排泄速率、药物联合、具体疾病的严重性和宿主经历的疗法。
在以下实施例中阐述用于制备本发明化合物的几种方法。合适时，通过修饰在实施例中公开的方法可制备本发明化合物。通过已知方法或如阐述的那样制备起始原料。提供以下实施例目的仅为进一步阐述本发明并且不打算限制所公开的发明。以下为用于制备在以下实施例中使用的或可替代在以下实施例中使用的并非在市场上可得到的化合物的化合物的代表性方法。
浓缩溶液通常在减压下于旋转蒸发器上实施。快速层析法在硅胶(230-400目)上实施。除非另外指明，MPLC指中效液相层析法并且在硅胶固定相上实施。除非另外指明，NMR光谱在CDCl3溶液中得到。偶合常数(J)以(Hz)表示。缩写乙醚(ether)、三乙胺(TEA)、N，N二异丙基乙胺(DIEA)饱和水溶液(sat’d)、室温(rt)、小时(h)、分钟(min)。
在某些情况中，实施上述反应流程的顺序可以改变以便利于反应或避免不需要的反应产物。提供以下实施例目的仅为进一步阐述并且不打算限制所公开的发明。
浓缩溶液通常在减压下于旋转蒸发器上实施。快速层析法在硅胶(230-400目)上实施。除非另外指明，NMR光谱在CDCl3溶液中得到。偶合常数(J)以(Hz)表示。缩写乙醚(ether)、三乙胺(TEA)、N，N二异丙基乙胺(DIEA)饱和水溶液(sat’d)、室温(rt)、小时(h)、分钟(min)。
以下为用于制备在以下实施例中使用的或可替代在以下实施例中使用的市场上不可得到的化合物的化合物的代表性方法。
中间体1 按照在J.Am.Chem.Soc.，1991，113，2079-2089中描述的方法制备中间体1。
中间体2 在-78℃下，向四氢-4H-吡喃-4-酮(5.0g，50mmol)和六甲基磷酰胺(8.70mL)在四氢呋喃(150mL)中的溶液中缓慢加入二异丙基氨化锂(31.25mL，2M溶液)在125mL四氢呋喃中的溶液。将反应混合物搅拌5分钟，然后加入碘乙烷(16.0mL，200mmol)。于2小时内把混合物逐渐温热至0℃。用饱和NH4Cl溶液猝灭反应混合物，然后用乙醚(4×100mL)提取。用盐水洗涤乙醚层，干燥(无水硫酸镁)，浓缩，经快速柱层析法纯化，用己烷/乙酸乙酯(4∶1)洗脱，得到中间体2(1.20g，20％)。
中间体3 步骤A 于0℃下，向5，6-二氢-4-甲氧基-2H-吡喃(10.0g，87.5mmol)在甲醇(200mL)中的溶液中通过加料漏斗滴加3-氯过氧苯甲酸(30.2g，175mmol)在甲醇(50mL)中的溶液。把生成的溶液搅拌5小时，使之温热至室温。减压除去甲醇，得到白色固体。把物料溶于500mL的二氯甲烷中并冷却至0℃。伴随剧烈搅拌下，向混合物中分批加入过量的固体氢氧化钙(50-60g)。搅拌另外30分钟后，通过硅藻土垫过滤混合物，减压蒸发滤液，得到11.62g(82％)为澄明的油的所需产物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ3.88-3.80(m，2H)，3.73-3.68(m，2H)，3.54-3.48(m，1H)，3.28(s，3H)，3.27(s，3H)，2.00-1.93(m，1H)，1.82-1.77(m，1H)。
步骤B 在氮气下，向得自步骤A的产物、中间体3(9.40g，58.0mmol)在四氢呋喃(200mL)中的冷却的(0℃)溶液中缓慢加入NaH(2.32g，58.0mmol)并把生成的浆状物在0℃下搅拌1小时。然后借助注射器向浆状物中加入碘甲烷(7.22mL，116mmol)，把生成的混合物搅拌过夜，使之温热至室温。用饱和氯化铵溶液(200mL)猝灭反应物，然后使用分液漏斗除去有机层。用乙醚(3×150mL)提取水层，合并所有的有机物，经无水硫酸钠干燥，过滤，真空蒸发。经快速柱实现纯化，使用10-60％乙醚/己烷的阶式梯度洗脱剂，得到8.46g(83％)为澄明的油的所需产物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ3.98(dd，J＝2.5，12.4Hz，1H)，3.77(ddd，J＝3.5，7.1，10.8Hz，1H)，3.57(dd，J＝1.4，12.4Hz，1H)，3.50(dd，J＝2.5，11.7Hz，1H)，3.46(s，3H)，3.25(s，3H)，3.22(s，3H)，3.22-3.20(m，1H)，1.96(ddd，J＝4.7，11.8，16.5Hz，1H)，1.75(br dd，J＝1.7，14.2Hz，1H).
步骤C 将得自步骤B的产物、中间体3(3.0g，17.04mmol)在四氢呋喃/水(60mL/10mL)中的溶液用浓盐酸(6mL)处理，把生成的溶液在室温下搅拌1小时。真空浓缩混合物以除去四氢呋喃，然后用乙醚(6×50mL)提取水层，合并有机物，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸发，得到为澄明的油的中间体24(1.75g，79％)。
1H NMR(500MHz，CDl3)δ4.23(dddJ＝1.2，11.4，12.4Hz，1H)，4.15-4.09(m，1H)，3.82(dd，J＝5.95，8.7Hz，1H)，3.74(ddd，J＝5.5，8.5，13.6Hz，1H)，3.56(dd，J＝8.8，11.3Hz，1H)，3.50(s，3H)，2.61(app dd，J＝5.0，8.9Hz，2H).
中间体4 除了用碘乙烷替代碘甲烷，以与中间体3类似的方法制备这个中间体。经MPLC纯化(从0-40％乙酸乙酯/己烷梯度洗脱)，得到683mg(66％)为澄明的油的最终化合物。
中间体5 于室温下，向5，6-二氢-4-甲氧基-2H-吡喃(0.5g，4mmol)在乙腈/水(15mL，1∶1)中的混合物中一次性加入1-(氯代甲基)-4-氟-1，4-diazonia双环[2.2.2.]辛烷双(四氟硼酸盐)(1.5g，4.4mmol，SELECTFLUORTM)并在室温下搅拌生成的反应混合物直到反应完成。然后加入固体NaCl，然后用乙醚(4×50mL)提取反应混合物。干燥(无水硫酸镁)乙醚层，浓缩，得到0.34g(65％)不需要进一步纯化的标题化合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)d4.95(m，1H)，4.4-4.21(m，2H)，3.72-3.65(m，2H)，2.75(m，2H)。
中间体6
步骤A 将四氢-4H-吡喃-4-酮(10.0g，100mmol)和吡咯烷(11g，150mmol)的混合物在室温下搅拌1小时。真空除去过量的吡咯烷，把残余物在高真空下干燥过夜。得到为黄色液体的烯胺(14.7g)，其无须进一步纯化即可用于下一步。
步骤B 将在步骤A中制备的烯胺，中间体6(1.54g，10mmol)和4-N，N-二甲基吡啶(1.22g)用N，N-二甲基甲酰胺(25mL)处理。把混合物冷却至0℃，加入固体三氟甲磺酸5-(三氟甲基)二苯并噻吩鎓(thiophen-ium)(4.0g，10mmol)。把生成的混合物在0℃下搅拌1小时，然后用30mL浓HCl水溶液猝灭。把生成的混合物搅拌2小时，然后用乙醚(4×70mL)提取。用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤合并的乙醚层，经Na2SO4干燥，过滤，蒸发。把残余物在硅胶上纯化(洗脱剂10％乙醚/己烷)，得到两种成分。更高极性的成分(200mg)为所需产物。1H-NMR显示它可能以半缩酮的形式存在。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ4.43-3.38(m，5H)，3.24，3.18(ss，3H)，2.52(m，1H)，1.82(m，1H)。较低极性的产物(100mg)被证实为α，α’二-三氟甲基四氢-4H-吡喃-4-酮。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ4.59(dd，2H)，3.24，3.80(t，J＝11.3Hz，2H)，3.42(m，2H)。
中间体7 步骤A 向5-三氟甲基-2-吡啶醛(pyridinal)(51g，310mmol)和乙酸钠(26.2g，319mmol)在冰乙酸(200mL)中的溶液中加入溴(16.7mL，325mmol)，把生成的混合物在80℃下加热2.5小时。使反应物冷却至室温，然后减压蒸发。用饱和NaHCO3溶液中和残余物，用乙酸乙酯(3×200mL)提取。合并有机物，经MgSO4干燥，过滤，真空蒸发，得到74.45g(98％)的粗品产物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.04(d，J＝2.6Hz，1H)，7.89(m，1H)。
步骤B 在氮气下，将在步骤A中描述的取代的吡啶，中间体7(48.8g，202mmol)以小份分次加入到NaH(8.9g，220mmol)在无水四氢呋喃(500mL)中的悬浮液中。加入中间体完成后，把反应混合物冷却至-78℃，借助注射器滴加叔丁基锂(260mL，444mmol)处理。搅拌5分钟后，缓慢加入N，N-二甲基甲酰胺(50mL，707mmol)以维持温度低于-50℃。然后把生成的混合物搅拌10小时，使之温热至室温。用2N HCl猝灭混合物，然后用乙酸乙酯(1000mL)稀释。分离有机层，用盐水洗涤，经MgSO4干燥，真空蒸发。所需产物从乙酸乙酯和己烷中沉淀出，过滤，得到浅棕色固体(28.55g，74％)。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ10.13(s，1H)，8.21(s，2H)。
步骤C 将得自步骤B的中间体，中间体7(18g，95mmol)、甲酸钠(7.1g，110mmol)、羟胺盐酸盐(7.3g，110mmol)和甲酸(150mL)的混合物在室温下搅拌2小时，然后加热至回流过夜。冷却反应混合物，使之在室温下放置7天。把反应物倾入到水中，用乙酸乙酯(3x)提取。用水(2x)、饱和NaHCO3和盐水洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，得到为棕色粉末的所需产物(17.84g，90％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.37(d，J＝2.7Hz，1H)，8.19(q，J＝0.7Hz，0.3Hz，1H)。
步骤D 向磷酰氯(13.4mL，144mmol)和喹啉(8.7mL，73mmol)的混合物中加入得自步骤C的产物，中间体8(24.6g，131mmol)，把生成的混合物加热至回流3小时。把反应物冷却至100℃，之后缓慢加入水(70mL)。将混合物进一步冷却至室温，用饱和NaHCO3溶液小心中和。用乙酸乙酯(3x)提取水层，合并有机层，经MgSO4干燥，过滤，真空蒸发。经快速层析法纯化粗品产物，得到(23.5g，87％)的要求的化合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.88(d，J＝2.0Hz，1H)，8.26(d，J＝2.5Hz，1H)。
步骤E
于氮气下，借助注射器，向NaH(7.8g，200mmol)在四氢呋喃(100mL)中的悬浮液中滴加叔丁基甲基丙二酸酯(20mL，120mmol)在无水四氢呋喃(100mL)中的溶液。将反应混合物搅拌0.5小时，之后借助注射器缓慢加入在步骤D中制备的中间体，中间体8(20.1g，97.6mmol)在四氢呋喃(200mL)中的溶液。把反应物在室温下搅拌过夜，然后用NH4Cl的饱和溶液猝灭。分离有机层，用乙酸乙酯(3x)提取水层。用水(3x)洗涤合并的有机层，经Na2SO4干燥，过滤，真空蒸发。快速层析法得到31.76g(95％)纯的所需产物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ9.03(d，J＝1.5Hz，1H)，8.25(d，J＝2.0Hz，1H)，5.25(s，1H)，3.86(s，3H)，1.52(s，9H)。
步骤F 将兰尼Ni(1g)和得自步骤E的产物，中间体7(18.2g，52.9mmol)在乙醇(130mL)中的悬浮液置于帕尔装置中并在40磅/平方英寸H2下氢化过夜。通过硅藻土过滤悬浮液，真空蒸发滤液，得到16.35g(98％)的粗品产物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.83(s，1H)，7.89(s，1H)，7.82(s，1H)，4.83(d，J＝16Hz，1H)，4.72(s，1H)，4.49(d，J＝16Hz，1H)，1.45(s，9H)。
步骤G 向得自步骤F的产物，中间体7(16g，51mmol)在二氯甲烷(60mL)中的混合物中加入TFA(30mL)，把生成的混合物在室温下搅拌0.5小时。减压蒸发溶液，把残余物溶于二氯甲烷中。通过缓慢加入饱和碳酸氢钠溶液中和混合物，除去有机层。用二氯甲烷(4x)提取水层，经Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，真空蒸发。得到10.42g(95％)所需产物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.81(s，1H)，7.78(s，1H)，7.30(s，1H)，4.63(s，2H)，3.90(s，2H)。
步骤H 向得自步骤G的产物，中间体7(18.0g，83.3mmol)在四氢呋喃(50mL)中的溶液中加入在四氢呋喃中的1.0M硼烷(417mL，420mmol)，把生成的溶液在室温下搅拌过夜。减压蒸发溶液，用1％HCl/甲醇溶液处理残余物。将生成的混合物在50℃下加热过夜以分解(breakdown)硼烷复合物。把用酸性甲醇处理重复两次以确保除去硼烷复合物。将这个粗品产物(83.3mmol，假定100％转化)和二异丙基乙胺(43mL，250mmol)在二氯甲烷中的溶液用二碳酸二叔丁基酯(36.4g，167mmol)处理，把生成的混合物在室温下搅拌过夜。用饱和碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤溶液。合并水层，用二氯甲烷(2x)回洗。然后经Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，蒸发至干。经快速层析法和MPLC纯化粗品产物，得到黄色固体(11.89g，47％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.69(s，1H)，7.66(s，1H)，4.67(s，2H)，3.79(t，J＝6.0Hz，2H)，3.08(t，J＝5.5Hz，2H)，1.51(s，9H)。
步骤I 用在二噁烷中的4N HCl溶液处理在步骤H中描述的产物，中间体8(11.89g)。把溶液在室温下搅拌2小时，然后真空蒸发，得到为黄色粉末的中间体8(10.85g，99％)。对C9H10F3N2的LC-MS计算值202.07，实测值[M+H]+203.0。
中间体8 方法A步骤A 将在乙酸乙酯(200mL)中的(1S)-(+)-2-氮杂双环[2.2.1]庚-5-烯-3-酮(10.3g，94.4mmol)和10％Pd/C(0.5g)的混合物在室温下氢化。24小时后，过滤反应混合物，蒸发，剩下10.4g(100％)的产物，将其用250mL甲醇和HCl(12M，6mL)处理。在室温下搅拌生成的混合物，直到反应完成(72小时)。蒸发甲醇，随后在高真空下干燥，得到为灰白色固体的标题化合物(16.0g，96％)。1H NMR(500MHz，D2O)δ3.70(s，3H)，3.01(m，1H)，2.38(m，1H)，2.16-1.73(m，6H)。
步骤B 在室温下，向得自步骤A的中间体(10.2g，56.8mmol)在干燥二氯甲烷(200mL)中的悬浮液中加入二苯甲酮亚胺(10.2g，56.8mmol)，把生成的混合物搅拌24小时。过滤反应混合物，蒸发滤液，剩下黄色的油，将其用乙醚(100mL)研磨，过滤，蒸发。把这个操作重复两次以确保产物不含氯化铵杂质。将生成的油在真空下彻底干燥，得到标题化合物(18.03g，＞100％)并且不需要进一步纯化。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.5-7.18(m，10H)，3.75(m，1H)，3.7(s，3H)，2.78(m，1H)，2.26-1.71(m，6H)。
步骤C 向二异丙基氨化锂(从二异丙基胺制备(7.7g，76mmol))和正丁基锂(30.4mL，2.5M在己烷中，76mmol)在四氢呋喃(120mL)中的于-78℃下的溶液中加入得自步骤B的酯(18.0g，58.6mmol)。把生成的burgundy色溶液搅拌20分钟，之后用2-碘丙烷(14.9gm，88mmol)将其猝灭。把反应混合物于3小时内逐渐温热至0℃并把这个温度维持另外3小时。用水猝灭反应物，用乙酸乙酯提取。用水、盐水洗涤有机层，干燥(无水硫酸镁)，浓缩，得到油。向粗品席夫碱(20.0g)在四氢呋喃(100mL)中的溶液中加入HCl(5.0mL，12M)。使生成的反应混合物在室温下搅拌3小时。除去所有的挥发物后，用二氯甲烷(250mL)溶解盐酸盐，加入饱和碳酸氢钠溶液(250mL)和二碳酸二叔丁基酯(26.0g，1.4当量)。将生成的混合物在室温下剧烈搅拌过夜。分离有机层，用水、盐水洗涤，干燥(无水硫酸镁)，浓缩，得到油。经快速柱层析法纯化(洗脱剂己烷/乙酸乙酯19∶1)，得到所需产物(4.91g，30％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)4.79(br，1H)，4.01(m，1H)，3.71(s，3H)，2.18-1.60(m，6H)，1.44(s，9H)，0.87(d，J＝6.9Hz，3H)，0.86(d，J＝6.9Hz，3H)。
步骤D 向得自步骤C的酯(4.91g，17.2mmol)在甲醇(100mL)中的溶液中加入LiOH(3.6g，85mmol)在水(20mL)和四氢呋喃(10mL)中的溶液。把生成的混合物在80℃下加热直到反应完成(18小时)。真空除去甲醇，用水/乙酸乙酯(200mL，1∶4)溶解粗品产物并冷却至0℃。将混合物的酸度调节至pH6。分离乙酸乙酯层，用水、盐水洗涤，干燥(无水硫酸镁)，浓缩，得到油。经快速柱层析法纯化(洗脱剂己烷/乙酸乙酯1∶1+2％AcOH)，得到中间体8(3.9g，84％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)11.36(br，1H)，6.49(br，1H)，4.83(m，1H)，3.71(s，3H)，2.30-1.55(m，6H)，1.46(s，9H)，0.94(d，J＝6.9Hz，3H)，0.933(d，J＝6.9Hz，3H)。
方法B步骤A 通过经典方法，将市场上可得到的(1R，4S)-4-氨基环戊-2-烯-1-羧酸转化为它的甲酯盐酸盐。
步骤B 向得自步骤A的胺(6.31g，35.5mmol)在丙酮(40mL)和水(20mL)中的悬浮液中分批加入固体NaHCO3(6.6g，78mmol)。5分钟后，加入二叔丁基二碳酸酯(8.5g，39mmol)在丙酮(60mL)中的溶液并在室温下搅拌反应混合物。3小时后，真空除去丙酮，在乙醚(500mL)和饱和NaHCO3水溶液(120mL)之间分配残余物。用NaHCO3水溶液(1×100mL)、盐水(1×100mL)进一步洗涤乙醚层，经无水Na2SO4干燥，浓缩，经快速层析法纯化(15％乙酸乙酯/己烷)，得到产物(7.25g，85％)。
步骤C 在-78℃下，于10分钟内，向双(三甲基甲硅烷基)氨化锂(10.4g，62.1mmol)在四氢呋喃(100mL)中的溶液中加入得自步骤B的中间体(6.71g，27.8mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液。把生成的溶液在-78℃下搅拌30分钟，之后一份加入异丙基碘(3.3mL，33mmol)。使反应物温热至-25℃并把这个温度维持过夜。然后用饱和NH4Cl水溶液(250mL)猝灭反应物。分离有机层，用乙醚(3×100mL)进一步提取水层。然后用盐水(1×100mL)洗涤合并的有机层，经无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩，经快速层析法纯化(5-10％乙酸乙酯/己烷)，得到为澄明的油的产物(5.66g，72％)(顺式/反式＝4.3/1)。1H NMR(500MHz，CDCl3)顺式异构体δ5.79(s，2H)，4.75(m，1H)，3.72(s，3H)，2.28-2.20(m，2H)，2.0(dd，J＝15，4Hz，1H)，1.45(s，9H)，0.85(d，J＝6.6Hz，3H)，0.81(d，J＝7Hz，3H)。
步骤D 向得自步骤C的产物(1.6g，5.7mmol)在四氢呋喃(50mL)、甲醇(50mL)和水(10mL)中的溶液中加入LiOH单水合物(400mg)，把反应物加热至回流反应过夜直到TLC表明反应完成。真空除去有机溶剂，用乙醚(1x)洗涤水层，然后用浓HCl缓慢酸化直到pH达到4。用CH2Cl2(3x)提取生成的悬浮液。经无水MgSO4干燥合并的有机层，过滤，浓缩，得到为泡沫状黄色固体的两种顺式/反式异构体混合物的产物(1.5g)。将这个固体伴随加热下溶于乙酸乙酯(2mL)中，用己烷(50mL)稀释，得到澄明的溶液。使这个溶液于1小时内缓慢冷却至室温，然后在冰箱中于-25℃下维持过夜。把反式异构体与一些要求的顺式异构体一起结晶出来(总共500mg)。收集母液，浓缩，得到标题化合物(1g，66％，仅有顺式异构体)。1H NMR(500MHz，CDCl3)顺式异构体δ5.80(m，2H)，4.80(m，1H)，2.40-2.20(m，2H)，2.15-2.0(m，1H)，1.5(m，9H)，1.0-0.8(m，3H)。
步骤E 向得自步骤D的产物(1g)在乙醇(30mL)中的溶液中加入10％Pd/C(100mg)，把生成的混合物在帕尔装置中于50Ib的H2压力下搅拌过夜。通过硅藻土过滤混合物，真空浓缩，得到标题化合物(1g，99％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)11.36(br，1H)，6.49(br，1H)，4.83(m，1H)，3.71(s，3H)，2.30-1.55(m，6H)，1.46(s，9H)，0.94(d，J＝6.9Hz，3H)，0.933(d，J＝6.9Hz，3H)。
中间体9 步骤A 将中间体8(4.6g，16mmol)和中间体11(4.0g，14mmol)首先经用甲苯(3×50mL)共沸蒸馏干燥，在高真空下放置30分钟。在氮气下，连续加入4-二甲基氨基吡啶(1.08g，8.60mmol)、无水二氯甲烷(40mL)和二异丙基乙胺(7.0mL，40mmol)。在中间体8于溶液中后，加入溴代-三重-吡咯烷基(pyrrolidino)-磷鎓六氟磷酸盐(6.80g，14.3mmol)，随后立即加入另外的二异丙基乙胺(7.0mL，40mmol)。把反应混合物在室温下搅拌过夜，然后用饱和NaHCO3猝灭。用二氯甲烷(3×50mL)回洗水层，合并有机层，经Na2SO4干燥，过滤，真空蒸发。经快速层析法(阶式梯度0-60％，乙酸乙酯/己烷)纯化粗品产物，得到为黄色泡沫的产物(4.80g，74％)。
1H NMR(500MHz，CDCL3)δ8.72(s，1H)，7.70(s，1H)，4.88(brd，J＝17.0Hz，1H)，4.78(d，J＝17.6Hz，1H)，4.04-3.84(m，2H)，3.52(br s，1H)，3.12(brt，J＝5.6Hz，1H)，2.32-2.06(m，3H)，1.98-1.70(m，4H)，1.64-1.54(m，1H)，1.44(s，9H)，0.92-0.82(m，6H).对C23H32F3N3O3的LC-MS计算值455.24，实测值[M+H]+456.2。
步骤B 将得自步骤B的中间体19(1.2g，2.6mmol)溶于在二噁烷中的4NHCl(50mL)中，把生成的溶液在室温下搅拌1小时。真空蒸发反应物，得到为白色粉末的产物(904mg，97％)。对C18H24F3N3O的LC-MS计算值355.20，实测值[M+H]+356.2。
中间体10 步骤A
向在步骤A中描述的产物，中间体19(2.0g，4.4mmol)在二氯甲烷(80mL)中的溶液中加入3-氯过氧苯甲酸(2.11g，8.83mmol)，把生成的溶液在室温下搅拌过夜。将混合物冷却至0℃，同时伴随剧烈搅拌下分批加入固体氢氧化钙(大约6g)。把悬浮液搅拌另外30分钟，然后通过硅藻土过滤以除去所有的固体。真空蒸发滤液，经MPLC(梯度洗脱剂40-100％乙酸乙酯/己烷)纯化残余物，得到1.32g(64％)所需产物。
1H NMR(500MHz，CDCL3)δ8.46(s，1H)，7.28(s，1H)，4.88(br d，J＝17.2Hz，1H)，4.78(d，J＝17.7Hz，1H)，4.05-3.84(m，2H)，3.12(br s，1H)，2.34-2.06(m，3H)，1.88-1.70(M，4H)，1.62-1.54(m，1H)，1.43(s，9H)，0.90-0.85(m，6H).对C23H32F3N3O5的LC-MS计算值471.20，实测值[M+H]+472.2。
步骤B 将得自步骤B的产物，中间体20(1.32g，2.82mmol)溶于在二噁烷中的4N HCl(50mL)中，把生成的溶液在室温下搅拌1小时。真空蒸发反应物，得到为白色粉末的产物(1.10g，98％)。对C18H24F3N3O2的LC-MS计算值371.20，实测值[M+H]+372.2。
实施例1 将中间体9(890mg，2.08mmol)、四氢-4H-吡喃-4-酮(320mg，3.13mmol)、二异丙基乙胺(1.10mL，6.24mmol)和粉碎分子筛(4，500mg)在二氯甲烷(50mL)中的溶液用三乙酰氧基硼氢化钠(2.20g，10.4mmol)处理并在室温下搅拌过夜。用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)猝灭反应物，用另外的25mL二氯甲烷稀释。分离有机层，用二氯甲烷(2×25mL)洗涤水层。合并有机物，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸发。经反相HPLC纯化粗品产物，得到实施例1(915mg，86.0％)。对C23H31F3N3O2的LC-MS计算值439.24，实测值[M+H]+440.2。
实施例2 将中间体9(304mg，0.712mmol)、中间体1(160mg，1.42mmol)、二异丙基乙胺(370μL，2.14mmol)和粉碎分子筛(4，150mg)在二氯甲烷(25mL)中的溶液用三乙酰氧基硼氢化钠(755mg，3.56mmol)处理并在室温下搅拌过夜。用饱和碳酸氢钠溶液(25mL)猝灭反应物，用另外的25mL二氯甲烷稀释。分离有机层，用二氯甲烷(2×20mL)洗涤水层。合并有机物，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸发。经制备型TLC(洗脱剂0.5％NH4OH/5％甲醇/94.5％CH2Cl2)纯化残余物，得到239mg(74％)为四种非对映体的混合物的最终产物。通过配备有制备型ChiralCel OD柱的HPLC拆分互为对照的吡喃环顺式和反式外消旋物(洗脱剂5％乙醇/95％己烷)。通过使用制备型ChiralPak AD柱进一步拆分顺式外消旋物(洗脱剂5％乙醇/95％己烷)。对C24H35F3N3O2的LC-MS计算值453.26，实测值[M+H]+454.3。
实施例3 除了用中间体2替代中间体1外，以与实施例2类似的方法制备该产物。经制备型TLC(洗脱剂0.5％NH4OH/5％甲醇/94.5％CH2Cl2)纯化，得到203mg(92％)四种非对映体的混合物。通过在配备有制备型ChiralCel OD柱的HPLC上纯化，用5％乙醇/95％己烷洗脱，流速为9mL/分钟，得到单一异构体。对所有4种异构体C25H36F3N3O2的LC-MS计算值467.28，实测值[M+H]+468.3。
实施例4 除了用中间体5替代中间体1外，以与实施例2类似的方法制备该产物。纯化得到312mg(88％)四种非对映体的混合物。对C30H36ClF3N3O4的LC-MS计算值593.23，实测值[M+H]+594.3。
实施例5 向在实施例4中描述的产物(286mg，0.482mmol)在甲醇(5mL)中的溶液中加入在甲醇中的0.5M甲醇钠溶液(1.2mL，0.58mmol)，把生成的混合物在室温下搅拌2小时。反应完成后，真空蒸发混合物，经制备型TLC(洗脱剂1.0％NH4OH/10％甲醇/89％CH2Cl2)纯化，得到为四种非对映体的混合物的实施例21(201mg，91.6％)。对C23H33F3N3O3的LC-MS计算值455.24，实测值[M+H]+456.25。
实施例6 将中间体9(500mg，1.17mmol)、中间体3(458mg，3.51mmol)、二异丙基乙胺(407μL，2.34mmol)和粉碎分子筛(4，250mg)在二氯甲烷(25mL)中的溶液用三乙酰氧基硼氢化钠(1.24g，5.85mmol)处理并在室温下搅拌过夜。用饱和碳酸氢钠溶液(25mL)猝灭反应物，用另外的25mL二氯甲烷稀释。分离有机层，用二氯甲烷(2×20mL)洗涤水层。合并有机物，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸发。经制备型TLC(洗脱剂1.0％NH4OH/10％甲醇/89％CH2Cl2)纯化残余物，得到210mg(86％)为四种非对映体的混合物的最终产物。通过使用配备有制备型ChiralCel OD柱的HPLC，用20％乙醇和80％己烷洗脱，流速为9mL/分钟，得到单一的异构体。对C24H34F3N3O3的LC-MS计算值为469.21，实测值[M+H]+470.2对所有4种异构体。ODChiralCel柱洗脱的第三种异构体1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.72(s，1H)，7.69(s，1H)，4.87(br d，J＝17.2Hz，1H)，4.75(d，J＝17.4Hz，1H)，4.12(dd，J＝3.1，12.4Hz，1H)，3.99-3.86(m，3H)，3.47-3.39(m，1H)，3.41(s，重叠，3H)，3.35-3.30(m，2H)，3.20-3.08(m，3H)，2.87-2.80(m，1H)，2.62-2.54(m，1H)，2.16-2.02(m，2H)，1.95(br s，1H)，1.88-1.81(m，1H)，1.78-1.57(m，6H)，1.41-1.32(m，1H)，0.96(d，J＝6.7Hz，3H)，0.84(d，J＝6.6Hz，3H).
OD ChiralCel柱洗脱的第四种异构体1HNMR(500MHz，CDCl3)d1HNMR(500MHz，CDCl3)，8.72(s，1H)，7.69(s，1H)，4.87(br d，J＝17.6Hz，1H)，4.75(d，J＝17.5Hz，1H)，4.10(dd，J＝3.1，12.3Hz，1H)，3.99-3.88(m，3H)，3.46-3.39(m，1H)，3.41(s，重叠，3H)，3.35-3.30(m，2H)，3.17-3.09(m，3H)，2.86-2.80(m，1H)，2.64-2.55(m，1H)，2.16-2.10(m，1H)，2.05(br s，1H)，1.95-1.82(m，2H)，1.76-1.55(m，6H)，1.33-1.24(m，1H)，0.95(d，J＝6.7Hz，3H)，0.83(d，J＝6.6Hz，3H).
实施例7 除了用中间体4替代中间体1，以与实施例2类似的方法制备该产物。通过使用配备有制备型ChiralCel OD柱的HPLC，用15％乙醇和85％己烷洗脱，流速为9mL/分钟，得到单一的异构体。对C25H36F3N3O3的LC-MS计算值483.23，实测值[M+H]+484.2(对所有4种异构体)。
实施例8 除了用中间体5替代中间体1，以与实施例2类似的方法制备该产物。对C24H31F4N3O2的LC-MS计算值457.23，实测值[M+H]+458.2(对所有4种异构体)。
实施例9 除了用中间体6替代中间体1，以与实施例2类似的方法制备该产物。通过使用配备有制备型ChiralCel OD柱的HPLC，用5％乙醇和95％己烷洗脱，流速为9mL/分钟，得到单一的异构体。对C24H31F6N3O2的LC-MS计算值507.23，实测值[M+H]+508.2(对所有4种异构体)。
实施例10 将中间体10(641mg，1.60mmol)、四氢-4H-吡喃-4-酮(220mg，2.24mmol)、二异丙基乙胺(279μL，1.60mmol)和粉碎分子筛(4，320mg)在二氯甲烷(20mL)中的溶液用三乙酰氧基硼氢化钠(1.70g，8.00mmol)处理，在室温下搅拌不超过5小时。用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)猝灭反应物，用另外的30mL二氯甲烷稀释。分离有机层，用二氯甲烷(2×30mL)洗涤水层。合并有机物，经无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸发。经制备型TLC(洗脱剂0.75％NH4OH/7.5％甲醇/91.75％CH2Cl2)纯化残余物，得到626mg(86％)的最终产物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.45，(s，3H)，7.25(s，1H)，4.88(br d，J＝17.4Hz，1H)，4.77(d，J＝17.6Hz，1H)，4.00-3.85(m，4H)，3.41(app t，J＝11.7Hz，2H)，3.22(p，J＝6.8Hz，1H)，3.13-3.07(m，2H)，2.82-2.74(m，1H)，2.54-2.47(m，1H)，2.14(dd，J＝6.8，12.8Hz，1H)，2.07-2.00(m，1H)，1.94-1.86(m，2H)，1.84-1.77(m，3H)，1.65-1.57(m，2H)，1.46-1.26(m，3H)，0.93(d，J＝6.8Hz，3H)，0.83(d，J＝6.8Hz，3H)对C23H32F3N3O3的LC-MS计算值455.24，实测值[M+H]+456.2。
实施例11 除了用中间体1替代四氢-4H-吡喃-4-酮，以与实施例10类似的方法制备该产物。通过使用配备有制备型ChiralCel OD柱的HPLC，用7％乙醇和93％己烷洗脱，流速为9mL/分钟，得到单一的异构体。对C24H34F3N3O3的LC-MS计算值469.24，实测值[M+H]+470.2(对所有4种异构体)。
实施例12 除了用中间体2替代四氢-4H-吡喃-4-酮，以与实施例10类似的方法制备该产物。通过使用配备有制备型ChiralCel OD柱的HPLC，用5％乙醇和95％己烷洗脱，流速为9mL/分钟，得到单一的异构体。对C25H36F3N3O3的LC-MS计算值483.24，实测值[M+H]+484.2(对所有4种异构体)。
实施例13 除了用中间体3替代四氢-4H-吡喃-4-酮，以与实施例10类似的方法制备该产物。通过使用配备有制备型ChiralCel OD柱的HPLC，用21％乙醇和79％己烷洗脱，流速为9mL/分钟，得到单一的异构体。对C24H34F3N3O4的LC-MS计算值485.25，实测值[M+H]+486.3(对所有4种异构体)。
虽然参照其某些具体实施方案已经描述和阐明本发明，本领域技术人员仍应意识到在不违背本发明的精神和范围下可以进行方法和方案的各种改进、变化、修饰、替代、删除或者增加。例如，在用以上指明的本发明化合物治疗的任何适应征的哺乳动物应答中，以上在此列出的有效剂量而不是具体剂量可以作为变化的结果得到应用。同样，按照本发明的研究对象和实践，所观察到的特异性药理学应答可以根据和依所选择的具体的活性化合物或者现有的药用载体以及所使用的剂型和给药模式而定，并且结果中的这样的期待的变化或者差异可被考虑在内。因此，本发明打算由其随后的权利要求书的范围来限定并且这样的权利要求书应在合理的情况下尽可能宽地被解释。
权利要求
1.一种式I的化合物及其药学上可接受的盐及它们各自的非对映体 其中R3为氧或不存在；R8选自(a)氢，(b)C1-3烷基，其为未取代的或由1-6个氟取代，(c)-O-C1-3烷基，(d)氟，和(e)羟基。
2.权利要求1的化合物，其中R3不存在。
3.权利要求1的化合物，其中R3为氧。
4.权利要求1的化合物，其中R8选自(a)氢，(b)三氟甲基，(c)甲基，(d)甲氧基，(e)乙氧基，(f)乙基，(g)氟，和(h)羟基。
5.一种选自以下的化合物及其药学上可接受的盐及它们各自的非对映体
6.一种药用组合物，它包含惰性载体和权利要求1的化合物。
7.一种用于在哺乳动物中调节趋化因子受体活性的方法，它包括给予有效量的权利要求1的化合物。
8.一种用于制备在人和动物中调节趋化因子受体活性的药物的方法，它包括使权利要求1的化合物与药用载体或稀释剂混合。
9.一种用于治疗、改善、控制或减少炎性和免疫调节紊乱或疾病的风险的方法，它包括给予患者有效量的权利要求1的化合物。
10.一种用于治疗、改善、控制或减少类风湿性关节炎的风险的方法，它包括给予患者有效量的权利要求1的化合物。
全文摘要
本发明涉及式(I)的化合物(其中R
文档编号A61P29/00GK1662532SQ03815041
公开日2005年8月31日 申请日期2003年4月25日 优先权日2002年4月29日
发明者焦新宇, G·莫里洛, 杨立虎, C·莫耶斯 申请人:麦克公司, 默克·夏普-道姆公司