专利名称：一种脉宁注射用微球及其制备方法
技术领域：
本发明属于医药领域，具体涉及一种脉宁注射用微球及其制备方法。
背景技术：
在心脑血管疾病的治疗药物中，中西药的应用各有侧重，中药以其副作用小的优势也占据较大的市场份额。在目前众多治疗心脑血管疾病的中成药中，以有效部位为主要活性成分如三七总皂苷、丹参总酚酸、葛根黄酮、绞股蓝总苷等的中成药愈来愈受到人们的重视。治疗心脑血管疾病的各种中药有效部位的功效各有不同和侧重，因此，临床上存在联合用药的巨大需求。目前各单一有效部位的中药品种，特别是中药有效部位的注射剂如血塞通、血栓通等，难以满足临床联合用药的需求。另外，未经国家药品食品监督管理局的批准而将中药注射剂简单地混和使用，将冒巨大的风险，有可能引起不可预料的不良反应，如血压急剧增高，发热，过敏反应等等。因此，提供更加方便有效的中药有效部位复方制剂具有重要的临床意义。
但由于普通的制剂，使得其中的活性成分面临着一系列的问题，如临床给药次数频繁，使用不方便，患者的顺应性(compliance)差等。
发明内容
本发明目的在于提供了一种全新的缓释、高生物利用度的注射用中药微球。
本发明的另一目的在于提供了这种注射用微球的制备方法。
本发明所述的药物组合物的组方为(以重量百分含量计)丹参提取物5.0％～70.0％三七提取物10.0％～85.0％黄芪提取物5.0％～70.0％冰片或降香油 1.0％～15.0％
本发明的中药组合物，优选为按重量百分比包括下列组分丹参提取物 15.0％～50.0％三七提取物 25.0％～65.0％黄芪提取物 15.0％～50.0％冰片或降香油2.0％～12.0％本发明的中药组合物，更优选为按重量百分比包括下列组分丹参提取物 20.0％～30.0％三七提取物 30.0％～55.0％黄芪提取物 20.0％～30.0％冰片或降香油4.0％～10.0％本发明的中药组合物，最佳为按重量百分比包括下列组分丹参提取物 23％三七提取物 45％黄芪提取物 23％冰片9％上述药物处方配比为所使用生药的重量配比，如果将其制成制剂需要对所述药材进一步加工与适当辅料制成缓释微球。
上述中药组合物中的丹参提取物，可利用现有技术的制备方法获得，例如可利用中国专利申请CN1352985A、CN1247855A、CN1242364A、CN1384090A、02117923.9，郭莹等(云南中医学院学报，2001，24(4)6)的制备方法获得。也可以自行摸索制备工艺获得。本发明丹参提取物中丹酚酸B含量在45％-70％，丹酚酸E含量在2-10％，迷迭香酸含量在4％-20％，紫草酸含量在1％-10％，其总酚酸含量在70％以上，最好在80％以上。无论是通过现有技术还是自行摸索制备工艺制备本发明的丹参提取物，如果未达到上述含量标准，则应进行精制，使之符合上述含量标准。其含量测定和指纹图谱如下(1)上述丹参提取物中丹酚酸B、丹酚酸E、迷迭香酸、紫草酸的含量测定(高效液相色谱法)色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水-磷酸(23.5∶76.5∶0.02)为流动相；检测波长为288nm。理论板数按丹酚酸B峰计算，应不低于5000。
对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品，加流动相制成每1ml含0.2mg的溶液；丹酚酸E制成每1ml含0.02mg的溶液；迷迭香酸制成每1ml含0.05mg的溶液；紫草酸制成每1ml含0.01mg的溶液。
供试品溶液的制备精密称取本品约35mg，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
(2)上述丹参提取物总酚酸的测定(分光光度法)对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品，用乙腈-水-磷酸(23.5∶76.5∶0.02)混合溶液制成每1ml含20μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备精密称取本品约25mg，置50ml量瓶中，用乙腈-水-磷酸(23.5∶76.5∶0.02)混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置50ml量瓶中，加上述混合溶液稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别取对照品溶液与供试品溶液，以乙腈-水-磷酸(23.5∶76.5∶0.02)为空白，照分光光度法(中国药典1995版一部附录VA)，在288nm波长处测定吸收度，按下式计算，即得。
总酚酸含量(％)＝f(A-B)+B式中f为校正因子0.626；A为分光光度法测定以丹酚酸B为对照计算的总酚酸的含量；B为高效液相色谱法测定的丹酚酸B的含量。
(3)上述丹参提取物HPLC指纹图谱测定方法参见(1)上述丹参提取物中丹酚酸B、丹酚酸E、迷迭香酸、紫草酸的含量测定(高效液相色谱法)。纪录色谱时间为60分钟。
采用共有指纹峰中峰面积较大且相对稳定的共有峰丹酚酸B作为参照峰，以参照峰为基础计算相对保留时间和相对峰面积。上述丹参提取物的指纹图谱应有5-7个共有峰，一般为6个共有峰。6个共有峰的相对保留时间依次为0.55-0.65(丹酚酸E峰)，0.66-0.70(迷迭香酸峰)，0.71-0.79(紫草酸峰)，1(丹酚酸B)，1.03-1.12，1.21-1.30。共有峰中单峰面积占总峰面积大于20％的只有丹酚酸B(即参照峰)，丹酚酸B峰面积(即参照峰)占总峰面积的57％-87％，其相对峰面积为1；相对保留时间为0.66-0.70的共有峰(即迷迭香酸峰)峰面积占总峰面积的3％-18％，其相对峰面积为0.03-0.25。非共有峰总面积不大于总峰面积的10％。上述中药组合物中的三七提取物，可利用现有技术的制备方法获得，例如可利用中国专利ZL1095363C、中国专利申请CN1352985A、钱天香等(国外医学·植物药分册，1997，12(4))、唐第光(中成药1990，12(8)5)、国家部颁标准WS3-B-3590-2001(Z)的制备方法获取三七提取物。也可以自行摸索制备工艺提取三七提取物。还可以直接从市场上购得三七提取物，例如含量为95％(UV测定)的三七总皂苷(其中Rb1≥30％、Rg1≥20％、R1≥5％，HPLC测定)。本发明三七提取物中三七皂苷R1含量应为2％-10％，人参皂苷Re含量应为2％-6％，人参皂苷Rg1含量应为15％-40％，人参皂苷Rb1含量应为15％-40％，人参皂苷Rd含量应为5％-12％，其三七总皂苷的含量应在70％以上，最好在80％以上。无论是通过现有技术制备还是市场购买，如纯度未达到上述含量标准，则应进行精制，使之符合上述含量标准。其含量测定和指纹图谱如下(1)上述三七提取物中人参皂苷Re、人参皂苷Rd、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量测定(高效液相色谱法)色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温40℃，流速0.7ml/min，检测波长为203nm；梯度洗脱之流动相如下
对照品溶液的制备精密称取对照品，加甲醇分别制成每1ml含0.2mg人参皂苷Re的溶液，每1ml含0.4mg人参皂苷Rd的溶液，每1ml含0.2mg人参皂苷R1的溶液，每1ml含0.4mg三七皂苷Rg1的溶液，每1ml含0.4mg人参皂苷Rb1的溶液。
供试品溶液的制备精密称取本品约20mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本发明三七提取物HPLC指纹图谱。
(2)上述三七提取物总皂苷的测定(分光光度法)(3)上述三七提取物HPLC指纹图谱测定方法参见(1)上述三七提取物中人参皂苷Re、人参皂苷Rd、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量测定(高效液相色谱法)。纪录色谱时间为30分钟。
采用共有指纹峰中峰面积较大且相对稳定的共有峰人参皂苷Rg1作为参照峰，以参照峰为基础计算相对保留时间和相对峰面积。上述三七提取物的指纹图谱应有9-12个共有峰，一般为11个共有峰。11个共有峰的相对保留时间依次为0.77-0.85(三七皂苷R1峰)，0.87-0.97(人参皂苷Re峰)，1(人参皂苷Rg1峰即参照峰)，2.58-2.67，0.68-2.76，2.77-2.81，2.82-2.91(人参皂苷Rb1峰)，2.95-3.03，3.05-3.13，3.15-3.22(人参皂苷Rd峰)，3.24-3.91。共有峰中单峰面积占总峰面积大于20％的有人参皂苷Rg1峰和人参皂苷Rb1峰。人参皂苷Rg1峰面积(即参照峰)占总峰面积的20％-35％，其相对峰面积为1；人参皂苷Rb1峰面积占总峰面积的30％-50％，其相对峰面积为0.85-2.50；三七皂苷R1峰面积占总峰面积的2％-8％，其相对峰面积为0.06-0.40；人参皂苷Rd峰面积占总峰面积的5％-14％，其相对峰面积为0.14-0.70。非共有峰总面积不大于总峰面积的10％。
上述中药组合物中的黄芪提取物，可利用现有技术的制备方法获得，例如可利用中国专利CN1096269C、余灏等(华西药学杂志，1993，8(3)163)、滕兴隆等(黑龙江医药，2002，15(5)340)、王志洁等(浙江中医学院学报，2001，25(5)43)的制备方法获取黄芪提取物。也可以自行摸索制备工艺提取黄芪提取物。还可以直接从市场上购得黄芪提取物，例如含量为80～98％(UV测定)的黄芪提取物。本发明黄芪提取物中黄芪甲苷含量为5％-15％，其黄芪提取物的含量在70％以上，最好在80％以上。无论是通过现有技术制备还是市场购买，如纯度未达到上述含量标准，则应进行精制，使之符合上述含量标准。
上述中药组合物中的冰片为人工冰片或天然冰片。
上述中药组合物中的降香油为降香经蒸馏所得。
本发明所述注射用微球直径为1～250μm，由微球总重量0.2％～50％(w/w)的活性成分及其衍生物和微球总重量50～99.8％(w/w)的分子量在5000～1000000道尔顿的可生物降解的高分子药用辅料组成。其中所述的可生物降解的高分子药用辅料选自于聚丙交酯、乙交酯、聚乳酸、聚乙醇酸、聚-3-羟基丁酸酯、聚乳酸-聚羟乙酸、聚乳酸.乙醇酸、聚邻酯、聚内酯、聚酐、聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯共聚物、聚乙醇酸、聚丙烯葡聚糖、羟基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇、聚羟乙酸。聚乙二醇其中的一种；优选聚丙交酯-乙交酯、聚乳酸、聚乳酸.聚羟乙酸、聚乳酸.乙醇酸、聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯共聚物，最佳为聚丙交酯、乙交酯，分子量为12000～15000道尔顿；丙交酯-乙交酯的聚合比例为40∶60-6∶40。
本发明所述的微球可以采用微球的常规制备方法制得，如采用乳化分散法、喷雾干燥法和溶剂挥发法，优选喷雾干燥法。当用乳化分散法制备本发明的微球时，用二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧六环、乙醚、丙酮、四氢呋喃、冰醋酸以及由它们所组成的混合酸把石杉碱甲或其衍生物和可生物降解的药用辅料溶解配制成有机相，其中药用辅料在有机溶剂中的重量体积百分数为1～30％，有机相采用的乳化剂为HBL＝4.5～6.0的非离子型乳化剂，用量为有机相的0.01-12％；另外用聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚甲基丙烯酸钠、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠水溶液配制连续水相，其中它们在水相中的重量百分数为0.01～10.0％，水相中的乳化剂为HLB＝14.0～15.5的非离子型乳化剂，用量为水相的0.01～12％；有机相与水相的体积比为1∶4～100；将有机相通过细管慢慢注入到连续相中，充分乳化后，过筛分离所形成的微球，干燥即得。当采用溶剂挥发法时，是在分散相通过细管慢慢注入到连续相中充分乳化后，减压挥发溶剂，离心分离得到所形成的微球，干燥即得。
当采用喷雾干燥法制备微球时，是用二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧六环、乙醚、丙酮、四氢呋喃、冰醋酸以及由它们所组成的混合酸把中药提取物和可生物降解的药用辅料充分溶解配制成有机溶液；过滤，喷雾干燥制成微球。
本发明所述的微球是将制好的微球无菌粉末先在无菌的0.9％的生理盐水溶剂中混悬，均匀后肌注来给药的。
祖国医学中对丸剂有“丸者缓也，舒缓而治之……”的记载(李杲，1180-1251)。可见我国古代医药家早已认识到并应用了药剂学方法，来达到平稳持久疗效的目的。
传统剂型，大多数的释药过程均按一级动力学进行，其药物的血药浓度有可能低于最低有效血药浓度和在治疗浓度内维持时间短的缺点。为达到治疗目的和降低副作用常采取多次服药方式，这样使得患者服药的依从性下降。缓释制剂正是克服了传统制剂的不足，提供了平稳、持久的血药浓度。
本发明中药微球采用了西药缓释制剂的设计原理在辅料选择、质量评价等方面取得了成果，为中药缓释制剂的研究借鉴。
以下通过体外释放试验说明微球的有益效果实验样品根据本发明实施例1、2、3所述的方法制备的微球。
实验试剂一定PH值的缓冲溶液(4.0、5.5)。
实验仪器恒温振荡器、离心机。
实验条件温度37±10℃；转速30rp/分钟。
实验方法精密称取实验样品约10mg置于容积为15ml的具盖塑料离心管中，加5ml释放介质(PH＝4.0和5.5磷酸缓冲溶液)置于恒温振荡器中，保持一定的温度和转速按时取样。
取样方法3600转条件下离心50min，精取3ml溶液，再补加3ml的释放介质，取出液用HPLC检测。具体检测指标为丹参素，检测波长281nm。
取样时间点(天)0、1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20。
试验结果控释微球体外释放试验结果表1。
表1、微球中丹参素体外释放结果
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，下述该实施例仅用于说明本发明而对本发明没有限制。
实施例1丹参提取物按中国专利申请(申请号02117923.9)的制备方法获得。具体提取方法为丹参5kg粉碎成粗粉，加去离子水在100℃微沸状态下加热提取3次。第一次5.5倍水，加热1小时；第二、三次各加3倍量水分别加热0.5小时。提取液用10％盐酸调PH值为2后，滤过，滤液上聚酰胺柱(干树脂量为生药量2/3)。用5倍量去离子水洗，继续用0.1％碳酸氢钠水溶液洗脱，用量为柱体积的5倍。收集洗脱液，用10％盐酸调PH到2后上D101大孔吸附树脂，用去离子水冲洗至中性，继续用95％乙醇洗脱，待色带下来即收集此色带。减压浓缩收集液至尽干，用适量水溶解后冰箱冷藏过夜，通过0.3μm混合纤维素微孔滤膜过滤即得丹参总酚酸提取液，以2％氢氧化钠调节PH值到6.0后立即冷冻干燥，得丹参提取物原料冻干粉221g，成品收率为生药量的4.4％。
上述丹参提取物中丹酚酸B为53.73％，丹酚酸E为3.7％，迷迭香酸为5.2％，紫草酸为1.7％，其丹参总酚酸含量为83.94％。丹参提取物HPLC指纹图谱(10批次平均)有6个共有峰。6个共有峰的平均相对保留时间依次为0.60(丹酚酸E峰)，0.68(迷迭香酸峰)，0.73(紫草酸峰)，1(丹酚酸B)，1.08，1.26。共有峰中单峰面积占总峰面积大于20％的只有丹酚酸B(即参照峰)，丹酚酸B峰面积(即参照峰)占总峰面积的72％(平均)，其相对峰面积为1；迷迭香酸峰面积占总峰面积的10％(平均)，其相对峰面积为0.14(平均)。非共有峰总面积不大于总峰面积的10％。丹参提取物HPLC指纹图谱见
图1。
从市场购得三七总皂苷，经进一步精制，得三七提取物。三七提取物中人参皂苷Re为3.9％，人参皂苷Rg1为34.3％，人参皂苷Rb1为31.0％，人参皂苷Rd为8.8％，三七皂苷R1为6.8％，其三七总皂苷含量为94％。三七提取物HPLC指纹图谱(10批次平均)有11个共有峰。11个共有峰的平均相对保留时间依次为0.82(三七皂苷R1峰)，0.94(人参皂苷Re峰)，1(人参皂苷Rg1峰即参照峰)，2.63，2.74，2.79，2.g5(人参皂苷Rb1峰)，2.99，3.08，3.18(人参皂苷Rd峰)，3.28。共有峰中单峰面积占总峰面积大于20％的有人参皂苷Rg1峰和人参皂苷Rb1峰。人参皂苷Rg1峰面积(即参照峰)占总峰面积的28％(平均)，其相对峰面积为1；人参皂苷Rb1峰面积占总峰面积的39％(平均)，其相对峰面积为1.36(平均)；三七皂苷R1峰面积占总峰面积的6％(平均)，其相对峰面积为0.20(平均)；人参皂苷Rd峰面积占总峰面积的10％(平均)，其相对峰面积为0.37(平均)。非共有峰总面积不大于总峰面积的10％。三七提取物HPLC指纹图谱见图2。
从市场购得黄芪提取物，经进一步精制，得黄芪提取物。黄芪提取物中黄芪甲苷含量为9.5％，黄芪提取物的含量在88.9％。
微球的制备将上述丹参提取物75mg、上述三七提取物150mg、上述黄芪提取物75mg、冰片30mg，混合均匀与200mg聚丙交酯-乙交酯溶于3ml二氯甲烷中，用针筒在激烈搅拌下将其滴至装有300ml内含3.5Ghlb＝14乳化剂的10％PVA的三颈瓶中，充分乳化1小时后，在30℃0.03MPa的压力下，挥发溶剂1.5小时，离心分离，用蒸馏水洗反应物三次，在30℃真空烘箱内烘干，用环氧乙烷在30℃灭菌48小时，确保残留环氧乙烷含量在5ppm以下，灌装。
权利要求
1.一种脉宁缓释微球，包括0.2～50％的由中药材的提取物为活性成分和微球重量的50～99.8％的分子量范围在5,000～1,000,000之间的可生物降解的药用高分子辅料组成，其中药材的组成按重量配比为丹参提取物5.0％～70.0％，三七提取物10.0％～85.0％，黄芪提取物5.0％～70.0％，冰片或降香油1.0％～15.0％。
2.权利要求1所述的微球，其中所述的药用高分子辅料选自于聚丙交酯-乙交酯、聚乳酸、聚乙醇酸、聚-3-羟基丁酸酯、聚乳酸-聚羟乙酸、聚乳酸.乙醇酸、聚邻酯、聚内酯、聚酐、聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯共聚物、聚乙醇酸、聚丙烯葡聚糖、羟基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇、聚羟乙酸.聚乙二醇其中的一种或其中的两种或两种以上混合。
3.权利要求1所述的微球，其中所述的药用高分子辅料选自于聚丙交酯-乙交酯、聚乳酸、聚乳酸.聚羟乙酸、聚乳酸-乙醇酸、聚羟基丁酸酯-羟基戊酸酯共聚物其中的一种或其中的两种或两种以上的混合。
4.权利要求1所述的微球，其中药用高分子辅料为聚丙交酯-乙交酯。
5.权利要求1所述的微球，其中所述聚丙交酯-乙交酯其分子量在12000～15000道尔顿之间。
6.权利要求1所述的微球，其中聚丙交酯-乙交酯中丙交酯和乙交酯聚合比例在40∶60～60∶40之间。
7.权利要求1所述的微球，其中的活性成分原药材的重量百分含量为丹参提取物15.0％～50.0％，三七提取物25.0％～65.0％，黄芪提取物15.0％～50.0％，冰片或降香油2.0％～12.0％。
8.权利要求1所述的微球，其中的活性成分原药材的重量百分含量为丹参提取物20.0％～30.0％，三七提取物30.0％～55.0％，黄芪提取物20.0％～30.0％，冰片或降香油4.0％～10.0％。
9.权利要求1所述的微球，其中的活性成分原药材的重量百分含量为丹参提取物23％，三七提取物45％，黄芪提取物23％，冰片9％。
10.权利要求1所述微球的制备方法，它是采用乳化分散法制成，其特征在于用二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧六环、乙醚、丙酮、四氢呋喃、冰醋酸以及由它们所组成的混合酸把药材提取物和可生物降解的药用辅料溶解，其中药用辅料在有机溶剂中的重量体积百分数为1～30％，有机相采用的乳化剂为HLB＝4.5～6.0的非离子型乳化剂，用聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、用量为有机相的0.01～12％；另外聚甲基丙烯酸钠、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠水溶液，配制连续水相，其中它们在水相中的重量百分数为0.01～10.0，水相中的乳化剂为HLB＝14.0～15.5的非离子型乳化剂，用量为水相的0.01～12％；将分散相通过细管慢慢注入到连续相中，乳化，然后过筛，干燥即得。
11.权利要求1所述微球的制备方法，它是采用溶剂挥发法制成，其特征在于用二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧六环、乙醚、丙酮、四氢呋喃、冰醋酸以及由它们所组成的混合酸把药材提取物和可生物降解的药用辅料溶解，其中药用辅料在有机溶剂中的重量体积百分数为1～30％，有机相采用的乳化剂为HLB＝4.5～6.0的非离子型乳化剂，用量为有机相的0.01～12％；另外用聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚甲基丙烯酸钠、聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠水溶液，配制连续水相，其中它们在水相中的重量百分数为0.01～10.0，水相中的乳化剂为HLB＝14.0～15.5的非离子型乳化剂，用量为水相的0.01～12％；将分散相通过细管慢慢注入到连续相中，充分乳化，然后减压挥发溶剂，离心分离，干燥即得。
12.权利要求1所述微球的制备方法，它是采用喷雾干燥法制成，其特征在于用二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、二氧六环、乙醚、丙酮、四氢呋喃、冰醋酸以及由它们所组成的混合酸溶解0.2～50％药材提取物及其衍生物和50～99.8％的分子量在5000～1000000道尔顿的可生物降解的高分子药用辅料，搅拌充分溶解后，过滤，采用喷雾干燥法制得微球。
全文摘要
本发明公开了一种注射用微球，包括丹参提取物5.0％～70.0％，三七提取物10.0％～85.0％，黄芪提取物5.0％～70.0％，冰片或降香油1.0％～15.0％为活性成分和微球重量的50～99.8％的分子量范围在5,000～1,000,000之间的可生物降解的药用高分子辅料组成，本发明还公开了其制备方法。
文档编号A61K31/045GK1872156SQ20051001368
公开日2006年12月6日 申请日期2005年6月3日 优先权日2005年6月3日
发明者郑永锋, 范立君 申请人:天津天士力制药股份有限公司