专利名称：抑制炎症的化合物的制作方法
抑制炎症的化合物本申请是中国申请02807263.4的分案申请，作为母案的该中国申请的 国际申请日是2002年2月8日，发明名称为"抑制炎症的化合物"。十三肽a-促黑激素(aMSH)是由前体激素丙炔黑色皮质素(POMC)生成 得到的。有多种生物活性肽激素来源于POMC基因产物，这些激素的例子 如卩-促脂解素、促肾上腺皮质激素(ACTH)、)3-内啡肽和黑素细胞刺激素(a-、 P-和？MSH)。加工这些肽需要具有不同特异性的蛋白水解酶。另外，还可 能发生翻译后的修饰例如发生乙酰化反应。a-MSH和其它POMC肽对各种组织的影响是通过一个特异性受体家族 介导的。这些黑素细胞刺激素(MC)受体属于G蛋白偶联受体类。目前已经 克隆了 5种不同的黑素细胞刺激素受体(MC-1至MC-5)。 一种看法认为 aMSH是调节各种黑素细胞功能的重要信号。例如，通常认为aMSH影 响黑素细胞的增殖、分化和细胞因子的产生。现有技术已经表明POMC基因产物能够影响免疫反应和炎症反应。 例如， 一种理论认为otMSH下调若干促炎细胞因子(proinflammatory cytokine),而otMSH刺激抗炎细胞因子IL-10的产生。这意味着ocMSH在抑 制免疫反应和炎症反应方面有重要作用。若干研究表明ocMSH通过其C-末端区域(氨基酸11-13:Lys-Pro-Val)介导aMSH的免疫调节和抗炎作用，因 为给予C-末端三肽足以诱导这些作用(Catania和Lipton, 1993， Endocr. Rev. 14， 564-576; Bhardvaj等.，1996, J. Immunol. 156， 2517-2521)。WO 88/00833公开了三肽Lys-Pro-Val在制备用于治疗炎症的药物中的 应用。aMSH的C-末端三肽也被建议作为防止头发损失的试剂(FR 2 733 421)。本发明的一个目的是提供另一些抑制炎症的化合物。 现已令人惊奇地发现三肽Lys-Pro-Thr具有抗炎活性。令人意外地，更小的化合物例如Lys-Pro和Lys也显示有利的特性。因此，本发明涉及式(I)化合物或其可药用盐在治疗和/或预防炎性疾病中的应用<formula>formula see original document page 5</formula>" (1〉.其中X为羟基、氨基、烷氧基、Pro或Pro-Thr。术语"炎性疾病"不仅包 括发炎，还包括涉及炎症的疾病，例如自身免疫病或移植排斥反应。本发明的化合物可以是赖氨酸或二肽赖氨酸-脯氨酸，但优选应用三肽 赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸^KPT)。天然氨基酸通常具有(L)构型。本发明的氨基酸可以具有(L)或(D)构型。 因此，KPT结构的可能化合物为(L)Lys-(D)Pro-(L)Thr，(L)Lys曙(L)Pro陽(D)Thr，(L)Lys誦(D)Pro-(D)Thr，(L)Lys-(L)Pro-(L)Thr，(D)Lys-(D)Pro-(L)Thr，(D)Lys-(D)Pro-(D)Thr，(D)Lys-(L)Pro-(L)Thr，(D)Lys-(L)Pro-(D)Thr，其中最优选的化合物为(L)Lys-(D)Pro-(L)Thr。本发明的化合物还可显示 氨基酸替换，其中一个氨基酸被保守替换。本发明的式(I)化合物可以在N-末端和/或C-末端进行化学修饰，例如在 N-末端进行酰化反应(优选进行乙酰化反应)和/或在C末端进行酰胺化或酯 化反应。还可以用本领域技术人员已知的其它保护性基团进行保护。这些 修饰还可以影响赖氨酸侧链的氨基或苏氨酸的羟基。也可以考虑在氨基侧 进行其它修饰，例如延长一个甘氨酸，和其它氨基酸残基直至达到ot-MSH 的长度。就本申请来说，术语"式(I)化合物"还包括该化合物的可药用盐。 所述化合物能够用于治疗所有类型的急性或慢性炎症。这些炎症特别 包括例如皮肤的急性和慢性炎症、牛皮痱、特应性皮炎、各种变态反应(从 接触变应原所致鼻炎至哮喘和食物变态反应)、自身免疫病、纤维组织形成 和硬皮病、移植排斥以及血管性疾病。这些化合物优选用于治疗皮肤炎症，在此情况下以软膏或乳膏的局部剂型给药较有利。这些化合物在软膏或乳膏剂型中的浓度通常为lpM至lmM、优选10pM至100fiM。这些软膏或 乳膏还可以另外含有常规成分，例如在Braun-Falco等，(1996) Dermatologie und Venerologie ， Springer Verlag ， Berlin或 Merk ， Bickers (1992) Dermatopharmakologie und Dermatotherapie中描述的成分。在优选的实施方案中，还可以把本发明的肽用于治疗炎性肠疾病。炎 性疾病的例子除了包括由轻度食物中毒引起的短期肠刺激外，还包括慢性 肠疾病例如Crohn's疾病或溃疡性结肠炎。在另一个优选的实施方案中，可以把本发明的化合物用于治疗炎性疾 病，其中炎症发生于接触环境的机体部位。这些部位特别包括口腔粘膜和 胃肠道以及肺部。然而，本发明的化合物还对炎症的治疗或预防具有全身活性。此时优 选以腹腔、静脉内或口服方式给药所述化合物。给药剂量通常为 20^ig-10mg/kg体重、优选100pg-lmg/kg体重。最后，所述化合物还可以喷雾剂形式给药，例如经吸入方式给药用于 治疗气道的炎症。还可以应用一组不同的式(I)化合物进行治疗。在此实施方案中，至少 用两种不同的式(I)化合物以治疗炎症。还可以把式(I)化合物用于制备治疗和/或预防炎症的药物。所有上面指 出的实施方案可以类似地用于此用途。通常把所述化合物与可药用载体或 稀释剂混合。本领域技术人员已知的制备药物的方法记载于Forth， Henschler，Rummel (1996) Allgemeine und spezielle Pharmakologie und Toxikologie,Urban & Fischer中。还可把式(I)化合物加入到食物中以降低某些食物成分的过敏反应活 性。因此，本发明还涉及式(I)化合物作为食品添加剂的应用。在食物中的 浓度可以是lpM-lmM。还可以把式(I)化合物用作化妆品中的非药物添加剂。例如，可以把含 有式(I)化合物的乳膏用于刺激后的皮肤或者用于日光浴后的皮肤。令人惊奇地，本发明的发明人还发现在体外用半抗原和aMSH处理 树突状细胞，然后把这些细胞注射至实验动物中，这样会导致半抗原特异 性耐受性的产生，并将导致CHS反应("接触超敏反应")的抑制。因此，试验结果见表5。试验结果表明拮抗细菌G-14对甜瓜细菌性斑点病均具有-
定的防效。综合分析，预防处理优于治疗处理。
表5拮抗菌抹G-14田间防治效果
菌株 FT^
发病率病指防效发病率病指防效发病率病指 防效
100 56.07 19.77 60.00 32.31 50.81 58.06 35.48 37.19
100 63.53 9.10 93.21 53.44 18.64 67.85 39.20 30.45
100 69.89 100 65.68 89.87 56.49
G
防理疗理
预处治处g应性(接触超敏反应，CHS反应)的发生，并且诱导变应原特异性的长期耐受性。这两部分可以在CHS反应中区别开与抗原的最初接触(诱导期)建立 后续CHS反应的基础，与抗原的再次接触导致反应的出现(接触性皮炎即肿 胀和瘙痒等)。可在这两部分之前应用本发明的化合物，当在最初接触前应 用(注射或局部应用)，出现对CHS的抑制和对耐受的诱导，当在诱导接触 性皮炎时应用，这些化合物能够防止皮炎的发生。在所有这些应用中，变 态反应基本上完全被抑制。另外还发现Lys-Pro-Thr降低树突状细胞表面协同刺激分子的表达。 这最可能是与抑制CHS和诱导耐受性有关的机理的一部分。同时，这些化 合物增加了单核细胞中抗炎性IL-IO的分泌。这种作用也是与变应性接触皮 炎有关的机理的一部分。不愿以任何方式被一种理论所束缚，本发明的化合物可能结合P-肾上腺 素能受体。另外还有一种理论是本发明的肽能够结合IL-1的I型受体。但不能认为本发明的肽还结合其它受体(例如K阿片样物质受体)。基于这种假设，可以推测本发明的肽能够结合多种受体，而这些受体被其原始配 体活化后在炎性反应中能够干扰促炎途径。本发明的肽与这些受体的结合 可以防止这些受体与其原始配体的结合，从而防止诱导促炎作用。另一方 面，本发明的肽与其起始物质(aMSH)的受体的结合活化这些受体，从而诱 导该作用机理的另一种成分，从而全面抗炎。
图1表示静脉给药aMSH、 KPV或KPT抑制CHS致敏期。 图2表示静脉给药aMSH、 KPV或KPT能够诱导耐受性。 图3说明人PBL用aMSH、 KPV或KPT处理24小时后分泌IL-10的 情况。图4说明人PBL用aMSH、 KPV或KPT处理48小时后分泌IL-10的情况。图5显示THP-1细胞表达aMSH的受体。图6a至d、 7a至d和8a至d显示在竟争性测试中，未标记的aMSH、 KPV或KPT能够替换THP-1细胞的结合部位的生物素-标记的aMSH。图9a显示用TNFa + aMSH或TNFa + KPT处理24小时后，HMEC-1 细胞表面的细胞粘附分子(CAMS)的表达。图9b显示HDMEC对淋巴细胞的粘附性(铬释放试验)。A: molt4 T淋巴细胞；B:JYB淋巴细胞。图IO显示在LPS-处理的HMEC-1细胞中，aMSH、 KP、 KPV或KPT 对NF-KB活化的影响。图lla显示用aMSH处理降低了组织切片中E-选择蛋白表达型导管 (vessels)的数量。图llb显示在LPS-处理的小鼠的耳朵中，用aMSH处理降低了痴点 损害的数目。图12显示用aMSH或KP体外处理BMDC，可抑制CHS，并且能够诱 导耐受性。图13a显示在NF-kB条带移位分析中，各种aMSH衍生肽降低NF-kB p65/p50杂二聚物条带的强度。图13b显示在BalbC小鼠中，ctMSH、 KP或K对CHS反应的影响和 ocMSH或KP对诱导耐受性的影响。图14显示用荷抗原的、经aMSH或衍生物处理的DC在体外接触T-细胞后，T-细胞对CHS的抑制。图15显示用荷抗原的、经aMSH处理的DC体外接触T细胞后，T 细胞对耐受性的诱导。图16显示用荷抗原的、经aMSH或衍生物处理的DC接触T-细胞后， T细胞中CTLA-4上调的情况。A:CD4阳性T细胞；B: CD8 P日性T细胞。下列实施例用于更详细地解释本发明。实施例1小鼠实验动物采用7-10周龄雌性Balb/C小鼠，其来自Charles River (SulzfeW,德国)，并按照政府制定的规则保存。 给药aMSH或KPV或KPT或KP:在2(TC储存等份量的aMSH和所述肽备用。在注射前，把具体化合物 溶解于PBS, 0.1%小鼠血清中，置于冰上直至静脉注射至小鼠的尾静脉中。 每只小鼠注射5 pgaMSH或1.5 pg肽(KP:50pg), 2小时后进行致敏。测定CHS和耐受性将未经处理的小鼠腹部剃毛，涂敷75^1 0.5%DNFB在丙酮/橄榄油(4:l) 中的溶液。在小鼠一只耳朵的双侧施用10^U0.3%DNFB以便诱导CHS。在接触抗原24小时后，用弹簧量规测量耳朵的肺胀程度，把接触抗原灼耳朵 与另一只对照处理的耳朵的肿胀程度进行比较，通过此方式测定CHS。把 耳朵接触了抗原但事先未致敏的小鼠用作阴性对照。为了确定在给药半抗 原前注射otMSH或肽是否会诱导耐受性，在致敏之前2小时如上所述对小 鼠静脉注射(腹部)或接触(左耳)aMSH或肽。为了证实CHS受到经aMSH-诱导的抑制，在致敏7天后，让小鼠的一只耳朵接触半抗原，24-36小时后 测定耳肿胀反应。14天后，同一只小鼠在已经剃毛的小鼠背部(现在没有外 源性aMSH)再次致敏， 一星期后让半抗原第二次接触小鼠的右耳，研究其 诱导CHS反应的能力。在某些实验中局部应用aMSH制剂。在这些实验中，将其应用于小鼠 的要致敏的部位(腹部)，然后立即或者在3小时或24小时后进行致敏反应。结果在DNFB接触7天后，静脉注射aMSH和KPV或KPT或KP抑制小鼠 诱导CHS反应的能力。这些小鼠因此不导致DNFB-特异性致敏作用。KPT 能够最有效地抑制CHS反应(参见图1和13b)。为了区分开暂时的免疫抑制和特异性免疫耐受性，再次使小鼠致敏， 并让小鼠接触半抗原。即使再次给药致敏剂量的半抗原也不能使在首次致 敏前注射了 aMSH或KPV或KPT的小鼠致敏，这表明这些小鼠已经发展了 对DNFB的耐受性。KPV显示弱的作用，而aMSH和KPT和KP非常明显 地抑制耳肿胀反应(参见图2和13b)。实施例2材料和方法用Ficoll Hypaque密度梯度离心法从人血沉棕黄层分离单核细胞 (PBMC)。逸些细胞(lxl0Vml)用含抗生素和10%FCS的RPMI 1640培养， 对这些细胞不进行处理，或者用含有或不含IL-1 P(10U/ml)的aMSH或肽 KPV或KPT刺激。在孵育24或48小时后收集PBMC培养物的上清液，在 -20°<:下储存直至下一步应用。应用市售的ELISA纟全测IL-IO。结果在孵育24小时后，用各种浓度otMSH或肽处理的人PBMC或未处理的 人PBMC仅仅产生低浓度的IL-10 (5-10 pg/ml)。 aMSH(l(T11 M)、 KPV(1(T8 至10-9M)和KPT(10-8至1Q-9M)明显诱导IL-10的生成(参见图3)。在將育48小时后，人PBMC产生大量的IL-10。aMSH、KPV和KPT明 显增加人PBLC中IL-10的生成。aMSH和肽之间没有本质区另'J(参见图4)。这些显示的结果证明在静脉给药后，与aMSH和KPV—样，肽KPT 能够抑制CHS的致敏，并且能够诱导半抗原特异性的耐受性。KPT还能够 在体内和体外诱导IL-IO。这些数据还表明aMSH在体内的免疫抑制作用 可能不仅仅依赖于IL-10的诱导。实施例3材料和方法所有步骤在0-4。C进行。把THP-1单核细胞系在PBS中洗涤一次，用 酸性甘氨酸緩冲液(50mM甘氨酸、100mM氯化钠，pH3)洗涤一次，以及 用RPMI洗涤三次。再把细胞(2.5xl06/ml)重新悬浮于lOOpl RPMI/1%BSA 中，然后转移至96-孔微量滴定板中。加入生物素-标记的aMSH(10^M)后， 让细胞在4'C保温1小时，用PBS洗涤一次，将其重新悬浮于100^1 PBS/1% BSA中，然后在4C用FITC-标记的链霉抗生物素(40[ag/ml)避光保温30分 钟。经最后洗涤步骤后，让细胞重新悬浮于PBS中。应用流式细胞仪分析 结合的生物素-标记的aMSH的含量。在对照实验中，在无生物素标记的 aMSH但有FITC-链霉抗生物素的条件下培养细胞。在即将进行FACS分析 之前加入石舆化丙啶以排除死细胞。加入未标记的aMSH(l(T6至10"M)或 KPV或KPT(10"至10"M)测定生物素标记的MSH的结合的特异性。结果根据用生物素标记的aMSH进行的FACS分析，与仅仅应用FITC-链霉 抗生物素保温的对照混合物相比，未刺激的THP-1细胞表达显著量的aMSH 特异性结合部位。aMSH在该实验中的应用浓度为10"GM(参见图5)。为了确定THF-1细胞是否表达一种已知的黑素细胞刺激素受体(MC)之 一，应用MC-l-、 MC-2-、 MC-3-和MC-4-特异性的引物进行RT-PCR。从 THP-1细胞中获取总RNA。检测含有预期长度416bp的MC-1特异性PCR 产物(Rajora等.，1996, J. Leuk. Biol., 59, 248)。不检测MC-2、 MC-3 或MC-4特异性的PCR产物。所得结果显示THP-1细胞表达MC-1，与其 它黑素细胞刺激素受体相比，所述MC-1对aMSH和ACTH具有特异性。为了研究在THP-1上表达的结合部位是否对ocMSH具有特异性，应用 aMSH或KPV或KPT进行竟争实验。通过应用生物素标记的aMSH(10"0M)和各种浓度的未标记的aMSH或肽培养THP-1细胞来测定特异性结合。浓 度为10—s的未标记aMSH能够显著抑制aMSH结合。当以10-6M、 1(T"M或 1(T12M的浓度应用aMSH时没有观察到显著的抑制(图6a至6d)。当应用未标记的KPV时，仅仅在1(T6M时观察到显著的抑制(参见图7a 至7d)。而对于肽KPT来说，各个测试浓度下(10-6至10"2 M)均观察到对aMSH 结合有显著的抑制(参见图8a至8d)。这些结果表明KPT肽结合到对aMSH有特异性的THP-1细胞的黑素 细胞刺激素受体，从而显示aMSH和KPT具有共同的结合部位。然而，由 于在非常低的浓度下KPT显示对受体的竟争，因此，该肽比MSH对MC-1 受体可能事实上具有更高的亲和力。实施例4材料和方法在应用或不应用所述肽之一的情况下，应用TNFa或LPS处理人皮肤微 血管内皮细胞(HDMEC)和HMEC-1(人微血管内皮细胞系-l)细胞系。在处理 后的3小时和6小时之时收集细胞用于RNA分离，或者在处理后的3、 6、 16或24小时之时收集细胞用于粘附分子EIA或FACS分析。RNA进行反 转录，利用PCR测定样品中的E选择蛋白、ICAM-1 、 VCAM或作为管家 基因的P-肌动蛋白，以便进行半定量分析。为了进行淋巴细胞粘附试验， 把内皮细胞引入皿中，与"Cr-标记的淋巴细胞一起保温。洗涤后，测定样 品中的放射活性以确定结合到EC层的剩余淋巴细胞的量。结果用aMSH或KPT处理内皮细胞抑制了 LPS-或TNFa-诱导的粘附分子表 达。10-6至1(T12M浓度的aMSH或肽观察到该作用。肽KPT对粘附分子 mRNA的表达具有最强的作用。所有这些激动剂均把LPS-或TNFa-诱导的粘附分子的表面表达降低至 较小程度。这些数据可以通过EIA(应用完整细胞)获得，也可以应用特异性 抗体经FACS获得(参见图9a,其显示EIA数据)。aMSH明显降低了 T和B细胞与LPS-或TNF-aMSH-处理的EC层的结 合(参见图9b)。总之，这些结果显示ocMSH对淋巴细胞与EC之间的粘附 有影响，因此也降低了组织炎症状况下淋巴细胞的外渗。这种结论得到了或溃疡'f生结肠炎。
12、 权利要求7-ll之一的应用，其特征在于该药物为软膏或乳膏。
13、 权利要求12的应用，其特征在于式(I)化合物在软膏或乳膏中的 浓度为lpM至lmM。
14、 权利要求7-11中任意一项的应用，其特征在于该药物为以腹腔、 静脉内或者口服方式给药的制剂。
15、 权利要求14的应用，其特征在于式(I)化合物的给药剂量为 20pg匿10mg/kg体重。
16、 权利要求7-15之一的应用，其特征在于应用至少两种不同的式 (I)化合物。细胞。首先用PBS洗涤细胞两次，然后立即进行再次注射。往各个动物中 静脉注射5xl0-s细胞。对照组细胞单独应用DNBS处理，或者单独用ocMSH 处理，或者不作处理。注射5天后，让这些动物的耳朵接触DNFB,然后在 第二天测定耳朵厚度。2周后，用DNFB再次致敏动物，5天后再次接触耳朵。最后，测定耳朵肿胀程度。 结果不出所料，注射了未处理细胞或经aMSH处理的细胞的动物在第一次 攻击后没有显示免疫反应。注射了 DNBS-处理的BMDC的动物在第一次攻 击时显示适当的CHS反应。该反应在注射了预先用TNBS和aMSH或用 TNBS和KP体外处理的细胞的动掷中受到抑制。因此，DC与aMSH或肽 接触足以诱导CHS的抑制(参见图12)。在第二次攻击时和相应的再致每文反应时，用DNBS处理的细胞再次注 射的动物未显示免疫反应，而用DNBS/aMSH-处理的细胞注射的动物未显 示免疫反应，这表明aMSH-诱导的耐受性也由DC介导(参见图12)。实施例8"应用经aMSH或aMSH衍生物处理的树突状细胞或T细胞进行的免 疫治疗"(从血液、骨髓或组织中)分离树突状细胞(DC)。然而也可应用含有DC 的细胞混合物(例如表皮细胞混合物)，在GM-CSF和IL-4的存在下(优选各 个物质的浓度为250-1000n/ml)培养。经过一个成熟期(优选6-9天)后，向细胞上添加抗原(其浓度取决于具体 的抗原，经过类似的时间^殳)，然后用aMSH或其彩f生物处理。这些书f生物 至少相当于aMSH的氨基酸12和13(Lys-Pro)，优选含有Lys-Pro-Val-的衍生 物。D和L构型的氨基酸是可能的，保守的AA交换也是可能的。这也导 致可能应用来源于IL-1P的Lys-Pro-Thr，及其带有N-末端延伸物的衍生物。 也可以应用带有C-末端延伸物的衍生物。肽可以在加入抗原之前，同时， 或之后，加入一次或多次(优选的剂量取决于具体的肽，例如对于aMSH来 说，其剂量为1(T8M-10"4M)。然后将如此处理的细胞静脉注射至受体生物(也可以应用腹腔注射或皮 下注射方式)；小鼠:2xl()S细胞接近下限。根椐抗原的不同，有的进行单次注 射就足够，有的在必要时进行多次注射。还可能需要在长时间(此处没有获得数据)后重复注射。一种可能的选择是让DC与T细胞在体外接触，然后注射该混合物或T 细胞。在此情况下，DC可以在接触T细胞之前或期间加载抗原。而且，T 细胞可以来自已经被特定抗原致敏的个体。小鼠中的下限为约1百万T细 胞，优选更多的细胞(图14和15)。这种应用模式的优点在于防止各种类型的不需要的免疫反应，它们是 抗原特异性的，其中抗原特异性淋巴细胞(B或T细胞)具有致病作用。其中 包括变态反应、自身免疫病、慢性炎症或植入。如果应用足够大量的细胞， 还可能治疗预先存在的疾病。不愿被一种理论所束縳，可以从上述出人意外的结果得出的事实是 aMSH是一个强效的免疫调节剂，具有多种抗炎特性。这包括减少DC表 面协同刺激分子的表达。类似的特性也可以通过本发明的aMSH衍生物显 示，所述^ 汙生物包括C-末端三肽和二肽Lys-Pro。具有不同氨基酸组成的书亍 生物(保守性AA交换)也具有相当的特性，这些包括来源于IL-1 e的 Lys-Pro-Thr(因此，可推观']:与IL-1 P具有序列共线性的N-末端(类似于aMSH) 延长型肽具有相同的作用)。aMSH及其衍生物能够在体内诱导半抗原特异性的耐受性。DC是专职 抗原呈递细胞，其能够诱导许多类型的免疫反应，并且能够决定这些反应 的过程。这些免疫反应特别包括T-细胞介导的免疫反应。现在已经有可能表明在aMSH或其衍生物的存在下，用抗原体外处 理DC或DC/T细胞混合物，很可能导致细胞在注射至生物体后诱导半抗原 特异性的耐受性。此时，所述才几理看来是由DC呈递的抗原受aMSH或其书t生物调控。 因此可能显示在相应混合物中的T细胞显示CTLA-4的高表达(图16)。这 是抑制性T细胞特有的表面分子之一。有可能用以此种方式产生的DC或T细胞预防性阻止自身免疫病、慢性 炎症或变态反应。如杲应用足够大量的细胞，还有可能治疗预先存在的疾 病。本发明的化合物也可以借助树突状细胞的原位活化而用于肿瘤治疗。 该方法也可以在存在本发明肽的情况下用于耐受作用(tolerization)。
权利要求
1. 体外产生能赋予对抗原的耐受性的细胞的方法，包括下列步骤a)提供抗原呈递细胞，b)让这些细胞接触αMSH或其生物活性衍生物或片断，和c)让这些细胞接触抗原，其中步骤b)和c)可以按照任意顺序进行或者同时进行。
2、 权利要求l的方法，其特征在于抗原呈递细胞基本上是树突状细胞。
3、 权利要求1的方法，其特征在于抗原呈递细胞基本上是表皮细胞。
4、 权利要求l-3任意一项的方法，其特征在于在步骤b)中让所述细 胞接触含有aMSH、 Lys-Pro-Val、 Lys-Pro-Thr、 Lys-Pro或Lys的化合物。
5、 aMSH或其生物活性衍生物或片断在制备用于诱导抗原耐受性的药 物中的应用。
6、 权利要求5的应用，其特征在于所述药物含有通过权利要求13-16 任意一项的方法可获得的细胞。
7、 式(I)化合物或其可药用盐在制备用于治疗和/或预防炎性肠疾病的药 物中的应用，<formula>formula see original document page 2</formula>^ ①，其中X为Pro或Pro-Thr。
8、 权利要求7的应用，其特征在于式(I)化合物在N末端酰化，和/ 或在C末端酰胺化或酯化。
9、 权利要求7的应用，其特征在于式(I)化合物为二肽赖氨酸-脯氨酸或 者三肽赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸。
10、 权利要求7-9之一的应用，其特征在于所述炎性肠疾病是慢性肠疾病。
11、 纟又利要求10的应用，其特4正在于所述'隄性肠疾病为Crohn's疾病或溃疡'f生结肠炎。
12、 权利要求7-ll之一的应用，其特征在于该药物为软膏或乳膏。
13、 权利要求12的应用，其特征在于式(I)化合物在软膏或乳膏中的 浓度为lpM至lmM。
14、 权利要求7-11中任意一项的应用，其特征在于该药物为以腹腔、 静脉内或者口服方式给药的制剂。
15、 权利要求14的应用，其特征在于式(I)化合物的给药剂量为 20pg匿10mg/kg体重。
16、 权利要求7-15之一的应用，其特征在于应用至少两种不同的式 (I)化合物。
全文摘要
本发明涉及式Lys-X化合物或其可药用盐在治疗炎症中的应用，其中X为羟基、氨基、烷氧基、Pro或Pro-Thr。本发明还涉及αMSH在诱导耐受性中的应用。
文档编号A61P37/08GK101215544SQ200610092558
公开日2008年7月9日 申请日期2002年2月8日 优先权日2001年2月14日
发明者托马斯·卢格尔 申请人:托马斯·卢格尔;托马斯·布罗斯卡;斯蒂芬·格拉贝