专利名称：葫芦素新的医药用途的制作方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及已知物质葫芦素(Cucurbitacins)的新用途。具体地说，系指葫芦素及其药学组合物在治疗喉癌、提高放射治疗患者的白血球数量药物中的新用途。
背景技术：
葫芦素(Cucurbitacins)属于19-甲基出现在C-9位上的一类四环三萜化合物，主要分布于葫芦科植物中，在十字花科、玄参科、秋海棠科、杜英科、四数木科等高等植物及一些大型真菌中也有发现。中国科学院昆明植物所研究员邱明华带领科技人员在发现的一系列新型葫芦素的基础上，研究了229个几乎所有的葫芦素类化合物，提出了新的结构分类模式，由此前的5类结构类型重新分为12类，得到了国际学术界的认可。目前，我国批准生产的葫芦素又叫葫芦素BE，为中药甜瓜蒂(别名苦丁香)提取物，主要含葫芦素B、E等成分，现有的提取物中葫芦素B含量为60％以上，其质量标准收载于我国部颁标准中。葫芦素片用于治疗慢性肝炎(葫芦素片药学通报1986，21(6)357)，经上海、北京、重庆等地十三家医院临床，其有效率为75.2％，显效率为44.6％。临床上观察到葫芦素片能较全面地改善慢性肝炎常见症状和主要体征，并有明显的降酶(S-GPT)、降浊(TTT、ZnTT)和降胆红质作用，停药后不引起S-GPT反跳，对蛋白倒置和高球蛋白血症也有明显的纠正作用，还能提高慢性肝炎患者的非特异性细胞免疫能力，无明显毒副作用。除此而外，葫芦素片还能用于治疗原发性肝癌，经上海、北京、广西等地六家医院临床观察，统计169例，有效率69％，显效率39％。临床观察表明，该药与5-氟脲嘧啶比较，其改善症状、消除肝痛、缩小瘤体、延长生存期、恢复体力等，均优于对照组，且无一般化疗药物的毒副作用(治疗肝炎、肝癌新药葫芦素片，中草药，1987，18(10)21；葫芦素治疗原发性肝癌50例临床观察，新药与临床，1984，3(2)21-22；葫芦素的药理与临床应用，中草药，1992，23(11)605～608)。最近有作者将葫芦素片与化疗药联合，治疗中晚期肝癌，中位生存期由单一化疗药的6.1±7.12月，提高到12.5±7.54月(葫芦素片加化疗药治疗中晚期原发性肝癌的临床疗效观察，癌症，1989，8(6)434～436)；另有文发现葫芦素B，E对鼻咽癌细胞具有较强的杀伤作用；有文献指出，长疗程用药(6周)能明显抑制肝纤维组织增生，防止肝脂肪变性以及肝硬变的形成和发展。现有专利多为与剂型相关的专利，如“纳米葫芦素制剂药物及其制备方法，申请号01103658.3”、“葫芦素环糊精包合物及其制剂，申请号02153647.3”、“葫芦素脂质体组方及其制剂，申请号02144633.4”、“葫芦素滴丸及其制备方法，申请号200310100943.3”最近公开了一项新用途专利“200610046738.7”，将葫芦素用于升白和与化疗药物联合治疗，逆转化疗药物的降白作用。但未见有关将“葫芦素”、“瓜蒂素”用于治疗喉癌和将其用于与放疗结合提高疗效，降低毒副作用，特别是升高化疗患者白细胞的报道。
喉癌(carcinoma of larynx)发病率约占全身肿瘤的1～5％，在耳鼻喉科领域中仅次于鼻咽癌和鼻腔，鼻窦癌，居第三位。好发年龄为50～70岁。男性较女性多见，约为8∶1，以东北、华北和华东地区发病率最高。喉癌的治疗方法主要为放射治疗或者手术治疗，手术治疗常常导致患者丧失语言功能，而放射治疗会造成白细胞下降；另外，如果肿瘤的范围很大时，会出现肺部转移等远处病灶，此时必须使用化疗，而目前尚未有同时具备治疗作用和提高白细胞的药物。
发明内容
本发明提供了一种同时具备治疗喉癌作用和提高白细胞的药物，即以葫芦素来治疗喉癌、提高放射治疗患者的白血球数量及含有葫芦素的用于治疗喉癌及提高放射治疗患者白血球数量的药学组合物。葫芦素为葫芦科植物、十字花科、玄参科、秋海棠科、杜英科、四数木科植物及一些大型真菌中提取的一类四环三萜化合物；还包括粗提物-瓜蒂素。
葫芦素主要成分为葫芦素B，尚可以包括葫芦素E、异葫芦素B、双氢葫芦素B、葫芦素I、葫芦素Q其中的一种或者多种成分；葫芦素B含量大于30％。
以葫芦素或其药用组合物作为主要成分的药物可以制备成多种剂型，如片剂、散剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、糖浆剂、口服液、软膏剂、贴剂、注射剂。给药途径包括外用、口服和注射。可以单独给药或者联合治疗，用于肿瘤患者因为化疗、放疗造成的白细胞低下症。葫芦素给药剂量按照总葫芦素计算，小鼠以0.001mg/公斤～1mg/公斤体重给药，健康成人用剂量为0.1mg～5mg/日；最佳剂量分别为小鼠0.01mg/公斤～0.5mg/公斤体重给药，健康成人用剂量为0.3mg～3mg/日，分1次～4次给药。
图1为实施例1中葫芦素B体外对喉癌细胞Hep-2的增殖的影响图2为实施例2中葫芦素B对裸鼠喉癌移植瘤的影响图3为实施例2中裸鼠体重变化情况
具体实施例方式本发明的详细组分由下列实施例给出，但本发明的保护范围，不仅局限于此。
实施例1葫芦素B(CuB，HPLC面积归一化法测定的纯度大于99％)体外抗人喉癌细胞研究体外实验(MTT)方法1.将人喉癌细胞Hep-2用含10％胎牛血清的RPMI1640培养液培养，置37℃、5％CO2培养箱中，每3～4天传代1次。选对数生长期的细胞用于实验。
2.贴壁细胞用0.25％胰酶(含EDTA1mM/L)消化后悬浮于培养液中，调细胞浓度为2.5×104/mL，按每孔100μL接种于96孔板上，每孔设3个复孔。空白对照孔(blank)只加培养液。
3.培养18-24h待细胞贴壁后，分组加入不同浓度药物(0.5μL)，另一组为对照组(不加药)。
4.继续培养24、48或72小时，每孔加入5mg/mL MTT试剂10μL，继续培养4小时，每孔加入10％SDS(含10mM/L盐酸)100μL，培养箱内过夜。
5.用酶标仪(570nm波长)测每孔的OD值。根据OD值求出Hep-2细胞抑制率，计算公式为抑制率(inhibit rate，IR)＝[(对照组OD值均数-blank组OD值均数)-(实验组OD值均数-blank组OD值均数)]/(对照组OD值均数-blank组OD值均数)。
即1-(OD实验-OD空白)/(OD对照-OD空白)结果见附图1。
实施例2葫芦素B(CuB，HPLC面积归一化法测定的纯度大于99％)体内抗人喉癌药效学研究方法1.将人喉癌细胞Hep-2用含10％胎牛血清的RPMI1640培养液培养，置37℃、5％CO2培养箱中，每3～4天传代1次。选对数生长期的细胞用于实验。
2.贴壁细胞用0.25％胰酶(含EDTA1mM/L)消化后悬浮于生理盐水中，调细胞浓度为2.5×107/mL。
3.18-20克裸鼠(BALB/C，5-6周，雌性，购自中国医学科学院中国协和医科大学实验动物研究所)40只，右侧腋下接种细胞5×106/只，待瘤块生长到大于100mm3时，随机分为4组，分别为阴性对照组(0.9％氯化钠，0.2ml/只·天)，CucB低剂量组(25μg/kg·天)、中剂量组(50μg/kg·天)、高剂量组(100μg/kg·天)，连续给药14天。
4.每天称鼠重、测量肿瘤大小，计算肿瘤体积和抑瘤率。
5.最后一次给药后24小时内处死动物，取肿瘤称重。
结果见附图2、3。
由图可知，采用本品治疗，与对照组相比，给药组小鼠体重没有明显下降，这是常规化疗药物所不具备的特点，显著优于现有化疗药物。
另外，所有试验组的白细胞数(×109·L-1)分别为7.3±0.7，6.6±0.6，6.2±0.6，7.1±0.7，即本品在治疗肿瘤时并未引起小鼠白细胞下降，是现有抗肿瘤药物所不具备的特点。
实施例3粗提物-瓜蒂素以及葫芦素E(HPLC面积归一化法测定的纯度大于95％)体内抗人喉癌药效学研究参见“实施例2”的方法18-20克裸鼠18只，右侧腋下接种细胞5×106/只，待瘤块生长到大于100mm3时，随机分为3组，分别为阴性对照组(0.9％氯化钠，0.2ml/只·天)，瓜蒂素组(按照粗提物重量计算给药剂量，灌胃给药，300μg/kg·天)、葫芦素E组(乳剂，静脉注射给药，200μg/kg·天)，连续给药14天。最后一次给药后24小时内处死动物，取肿瘤称重，计算抑瘤率。结果瓜蒂素组与葫芦素E组的抑瘤率分别为39.2％和51.6％；与正常对照组相比，治疗组小鼠的体重和白细胞均未明显改变。
实施例4葫芦素与放疗的联合治疗作用葫芦素BE(其中葫芦素B含量为62.6％，余下成分主要为葫芦素E，采用市售原料，天津药物研究院药业有限责任公司)脂质体(制备方法见专利“200610046738.7”)联合放射治疗提高疗效。试验分三组，第一组为单纯放射治疗组，500拉德照射；第二组为单纯乳剂组，高、中、低剂量分别为100μg/kg、50μg/kg、25μg/kg；第三组为联合组。给药途径静脉注射；给药方案每天一次，共治疗10天；结果第一组的抑瘤率为21％；第二组的抑瘤率分别为48％、37％、28％；第三组联合治疗，抑瘤率分别提高为71％、62％、51％；白细胞(×109·L-1)分别为第一组，2.6；第二组，7.1、6.6、7.3；第三组，6.3、6.7、5.8；正常组6.9。
实施例5临床患者使用实例4位患者(3位男性，一位女性，年龄分别为55、61、46、53岁)在进行放射治疗后口服葫芦素BE软胶囊(采用市售原料，天津药物研究院药业有限责任公司，0.3mg/丸，自制。
其自制方法为葫芦素BE 1g，MCT 1000g，维生素E 100g，将MCT与维生素E混合均匀，加入处方量的葫芦素，60℃加热溶解即得澄清透明的溶液。该溶液可以继续按照常规方法制备软胶囊。
结果表明其食欲/体重/睡眠等生命指征均有明显改善，肿瘤得到控制，特别是白细胞数，放射治疗结束后，4位患者的白细胞(×103)分别为3.2、3.8、3.1、3.6，使用4天后，白细胞(×103)分别提高为4.6、4.3、5.1、4.2，继续服用达2周后，白细胞(×103)分别提高为6.7、5.7、6.2、5.5，具有非常明显的升白作用。
权利要求
1.葫芦素新的医药用途，其特征在用于葫芦素在治疗喉癌的药物及在提高放射治疗患者白血球数量的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的葫芦素在治疗喉癌及提高放射治疗患者的白血球数量中的应用，其特征在于可以单独给药或者联合治疗，用于肿瘤患者因为放疗造成的白细胞低下症。
3.根据权利要求1所述的葫芦素新的医药用途，其特征在于葫芦素或其药用组合物可以与药学上可接受的载体制成片剂、散剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、糖浆剂、口服液、软膏剂、贴剂、注射剂，用于外用、口服和注射。
4.根据权利要求1所述的葫芦素新的医药用途，其特征在于所述的葫芦素为葫芦科植物、十字花科、玄参科、秋海棠科、杜英科、四数木科植物及一些大型真菌中提取的一类四环三萜化合物、葫芦素粗提物-瓜蒂素。
5.根据权利要求4所述的葫芦素新的医药用途，其特征在于所述的葫芦素，可以是葫芦素B单体或者，主要成分为葫芦素B，尚可以包括葫芦素E、葫芦素I、葫芦素Q其中的一种或者多种成分；葫芦素B含量大于30％。
6.根据权利要求1或3所述的葫芦素新的医药用途，其特征在于所述葫芦素给药剂量按照总葫芦素计算，健康成人用剂量为0.1mg～5mg/日。
7.根据权利要求6所述的葫芦素新的医药用途，其特征在于所述葫芦素给药剂量为健康成人用剂量为0.3mg～3mg/日，分1次～4次给药。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，公开了葫芦素(Cucurbitacins)的新用途。即葫芦素及其药学组合物治疗喉癌、提高放射治疗患者的白血球数量的新用途。以葫芦素或其药用组合物作为主要成分的药物可以制备成多种剂型，如片剂、散剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、糖浆剂、口服液、软膏剂、贴剂、注射剂。可以单独给药或者联合治疗，用于肿瘤患者因为放疗造成的白细胞低下症。葫芦素给药剂量按照总葫芦素计算，小鼠以0.001mg/公斤～1mg/公斤体重给药，健康成人用剂量为0.1mg～5mg/日；最佳剂量分别为小鼠0.01mg/公斤～0.5mg/公斤体重给药，健康成人用剂量为0.3mg～3mg/日，分1次～4次给药。
文档编号A61K9/06GK101062041SQ20071001151
公开日2007年10月31日 申请日期2007年5月31日 优先权日2007年5月31日
发明者邓意辉, 张美霞 申请人:沈阳药科大学