用作血管再形成刺激剂的细胞制备物的制作方法

专利名称：：用作血管再形成刺激剂的细胞制备物的制作方法用作血管再形成刺激剂的细胞制备物本发明涉及细胞制备物和该细胞制备物作为刺激血管再形成(revascularization)的作用剂的用途。本文针对多种疾病，它们均为导致血管系统变性或破坏的疾病。特别是当向组织或器官中的动脉血供给减少或停止时会遭遇这样的情况。细胞治疗确切地是指降解组织(无论是何种组织)的再生，其基础是体外培养或以其它方法培养特定细胞，然后将所述细胞植入降解的组织。通过这些细胞治疗的手段来治疗多种疾病已经取得了许多进展。繁殖并分化生成特化细胞的能力，所述特化细胞可获得它们所植入的组织的形态和特定功能。胚胎干细胞在受精之后的最初阶段是未分化的，并且将能够导致所有身体组织的形成。相反，成体干细胞已经参与了特定的组织程序(tissueprogram),它们仅能够导致特定组织的形成或再生；它们被称为是多能(multipotent)的，而胚胎干细胞是全能(totipotent)的。另外，通过干细胞分化而衍生的前体细胞在它们的发育过程中已经得到了某种程度的特化并且具有生理学功能。由此，已经有人提出了以来自骨骼肌的组织为基础来制备多能干细胞群体的想法。具体可以参考文献WO03/027281,其描述了一种制备这样的多能干细胞的方法，所述多能干细胞能够分化成骨骼肌细胞和许多其它的细胞，具体而言分化成平滑肌细胞、心肌细胞、血细胞、血管内皮细胞、脂肪细胞等。这种方法能够以多种类型组织的再生为目的来制备多能千细胞群体，另一方面，其实施相对较复杂。另外，由于心肌(myocardium)的组织缺乏能够形成心肌细胞来进行再生的干细胞，已经提出了这样一种想法，制备相对同质的细胞群体，群体中的优势类型具有成肌细胞(myoblasticcell)的特征，再将这些群体直接注射至心肌组织中或者间接注射至动脉循环中。也可以参考文献WO01/94555,其中描述了这种方法。同样，对不同细胞群体的分选需要观察特异性的细胞标记物。另外，获得的细胞群体专门适合于心肌的再生。因此，上文分析的第一篇文献为获得的多能干细胞群体提供了较宽的使用范围，然而并未能获得关于促血管生成活性(pro-angiogenicactivity)的令人信服的结果，而第二篇所文献公开的是呈现成肌细胞特征的特定细胞群体，因此它们的用途更受局限。同样，还有这样一个问题，这也是而本发明旨在解决的问题，即提供一种用作刺激血管再形成的作用剂的细胞制备物，该细胞制备物被施用时，使得哺乳动物(特别是人)的受损组织的血管系统的重建成为可能。另外，必须能够相对容易地获得这样的制备物。以解决这个问题为目的，本发明提出了一种含有内皮细胞的前体(EPC，代表内皮前体细胞(EndothelialPrecursorCells))和平滑肌细胞的前体(SMC，代表平滑肌细胞(SmoothMuscleCells))的细胞制备物，其作为同时(simultan6e)、分开(s印ar&)或时间上分散(6tal6edansletemps)施用的组合产品，用作刺激血管再形成的作用剂。因此，本发明的一个特征在于利用两种类型的细胞，即内皮前体细胞和平滑肌细胞前体二者，然后它们相互作用从而刺激在预先存在的血管的基础上形成和发育毛细血管。这样，从(^partirde)任何一种其中血液循环减少或停止的细胞组织，将内皮前体细胞和平滑肌细胞前体注射到梗塞组织中将诱导毛细血管的再生，当然，条件是血液循环正常重现。的体外分化获得的脐带血、或造血骨髓、或外周循环血、或任何其它组织。如后文将会更详细阐释的，分离单个核细胞(mononuclearcell),例如从脐带血分离单核细胞，然后诱导其体外分化，从而随后回收它们并且将它们与平滑肌前体细胞组合。特别有利的是，所述内皮前体细胞(EPC)表达能够接受蛋白质材料从而活化所述内皮前体细胞(EPC)的特异性受体。由此内皮前体细胞的活化可诱导这些前体细胞和平滑肌细胞前体之间的补充性协同作用(supplementarysynergy),然后这种协同作用导致血管再形成或促血管生成活性，这样的血管再形成或促血管生成活性大于单独的未活化的前体细胞或单独的平滑肌细胞前体的血管再形成或促血管生成活性。有利的是，所述特异性受体是具有酪氨酸激酶活性的Eph受体，例如EphB型的，更确切地说是EphB4。另外，蛋白质材料优选含有所述标记物的特异性配体，所述配体与结合性多肽相结合。进一步地，且根据优选的实施方式，特异性配体是肝配蛋白配体，例如肝配蛋白B或更确切地说是肝配蛋白B2或另外的肝配蛋白Bl。至于结合性多肽，其优选是Fc免疫球蛋白片段。如此，获得了展示特异性受体的内皮细胞，所述特异性受体与由配体和结合性多肽组成的蛋白质材料结合；然后将这种内皮前体细胞活化。至于平滑肌细胞前体(SMC)，优选通过源自脐带血、造血骨髓、外周循环血、或事实上任何其它组织的祖细胞的体外分化来获得。正如内皮前体细胞一样，首先分离单个核细胞，例如>^人脐带血分离单个核细胞，然后诱导其分化成平滑肌细胞前体。然后将它们回收，再与内皮前体细胞组合来施用。根据本发明的另一种实施方式，所述平滑肌细胞前体(SMC)获得自肌肉细胞前体。事实上可基于特异性的细胞标记物而清楚地鉴定这些平滑肌细胞前体。根据另一方面，本发明提出了使用组合了内皮前体细胞和平滑肌细胞前体的细胞制备物用于制备细胞组合物的用途，所述细胞组合物旨在用于刺激哺乳动物特别是人体内缺血组织的血管再形成或血管发生。此外，还预期了这些内皮前体细胞和平滑肌细胞前体的组合，所述组合用于制备旨在用于正常化肺瘤血管再生的药物。更宽泛地，预期了使用组合了内皮前体细胞和平滑肌细胞前体的细胞制备物用于制备药物的用途，所述药物旨在用于刺激处于愈合阶段的损伤组织的血管再形成。因此，预期了在本发明的细胞制备物的辅助下对以下述为例的病理状态的治疗方丈射性皮炎或》丈射后皮炎(radiationorpost-radiationdermatitis)、灼伤(burns)或创伤后或任何其它来源的皮肤损伤。此外，组合了内皮前体细胞和平滑肌细胞前体的细胞制备物适合于制备旨在用于防止或治疗癌症的治疗性组合物，将所述治疗性组合物在通过化疗或放疗进行的抗癌治疗之前或与之同时施用。其也适合于治疗血管畸形，特另寸是血管瘤(angiomas)。更概括地，预期了属于依据本发明的类型的细胞制备物作为促血管生成活性成分与生理学可接受的赋形剂相组合用于制备组合物的用途；所述组合物在对血管机能不全(vascularinsufficiency)的治疗中用于治疗，特别是在心、脑或外周缺血组织的血管再形成中用于治疗。式的描述来体现，其旨在提供信息，而非进行限定，并参考单独随附的图示，即-图1,显示本发明的主题细胞制备物的促血管生成活性效力的比较的柱状图。第一种实施方式如此，根据本发明的第一种实施方式，内皮前体细胞(EPC)和平滑肌细胞前体(SMC)共同(jointly)自人的脐带血获得。同样，根据第一种制备模式，首先收集人脐带血样品，每个样品30-50ml，再将它们置于装有肝素钠抗凝溶液的无菌试管中。然后通过用Pancoll(1.077g/ml(gparmilliliter),产口$由Z)o附Zw/《MeZ)w&c/zer万rwwa/Zz,F/Ywce4肖售)密度梯度离心从脐带血分离单个核细胞。然后通过在37。C塑料盒上培养24小时，将分离的单核细胞与贴壁细胞分开。然后回收经分离并和除去了贴壁细胞的单核细胞混合物，并且再将所述混合物置于平板的孔中，所述平板具有六个覆盖有确定成分基质(definedmatrix)的孔。这种确定成分基质含有纤连蛋白、层粘连蛋白、硫酸乙酰肝素钠、I型和IV型胶原(这些产品全部由^Vgma-J/A/c//供应)和生长因子hVEGF(ic&Z)5ywem又OxfordUK)。以这种方式，在培养15天之后，可清楚地辨别鳞片型集落和纺锤型集落的出现(叩pearance)。然后将这些集落中的每一种回收从而将它们再次彼此独立地挑出，然后扩增它们以获得大量的这两种类型的细胞。鳞片型细胞事实上是内皮前体细胞，因为它们表达这种细胞类型的主要标记物，冯维勒布兰德因子(VonWillebrandFactor)、CD31、eNOS、VE-Cadherine、VEGF-R1或VEGF-R2。而纺锤型细胞是平滑肌细胞前体，因为它们表达的标记物是aSMA、钙调理蛋白(calponin)、SM22a和SM-MHC。按照下文定义的第一方案，将含有内皮前体细胞和平滑肌细胞前体的第一细胞制备物在多个批次的雄性棵小鼠上进行测试。将前述制备物的效力相对于不含细胞集落的含有PBS的中性对照制备物(緩沖液137mMNaCl、2.7mMKC1、10mMNa2HP04、1.84mMKH2P04)、以及相对于仅含内皮前体细胞的制备物和仅含平滑肌细胞前体的制备物进行比较。因此将准备四个批次，每个批次六只动物，并且向四个批次的动物分别施用所述四种制备物。首先，在^0的时刻，为所有七周龄的小鼠进行右侧股动脉结扎以刺激缺血。五个小时之后，将第一种内皮前体细胞和平滑肌细胞前体的细胞制备物在眶后窦(retro-orbitalsinus)的水平通过静脉内途径同时进行注射，对于第一批次的每只小鼠以大约250,000个细胞的比率注射所述两种类型的细胞，将其它制备物分别注射给另外三个批次的动物。被测试的其它细胞制备物含有约500,000个细胞。然后，在结扎之后12天，处死小鼠并取出缺血小腿(ischemizedleg)和未缺血小腿(non-ischemizedleg)的腓肠肌。然后测量了三个参数，血管造影得分(angiographyscore)、毛纟田血管密度(capillarydensity)和皮血流量(cutaneousbloodflow)。血管造影得分是血管的密度的量度，其是通过微血管造影术来测定的(操作流程见SilvestreJ.S等，i仏，2M/;卵259-264的文章中)。在这个特定的情况下，测量每只动物缺血肢和未缺血肢的血管的密度，并且将获得的结果以比例形式呈现用缺血小腿除以非缺血小腿。毛细血管密度代表每平方毫米的毛细血管数，毛细血管密度是这样来测量的，依靠针对标记物CD31的抗体来标记朋，肠肌的切片(如上所述，CD31是内皮细胞特异性的)，再将这些切片与来自未缺血肢的相同肌肉的切片比较。由此获得的结果以比例的形式呈现，用缺血小腿除以未缺血小腿。对于皮血流量，通过在缺血肢上测得的血流量与在未缺血肢上测得的血流量的比值来定量地评估皮血流量。这证实(check)了血管数的变化与功能性适应相对应，并且因此与缺血肢灌注的变化相对应。结果表I将对于每组六个个体的四个组中每一组的前述三个参数的测量结果列于下表。该测量结果取的是六只动物的平均值。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>皮血流量100150±6141±5217±18由此可见，注射内皮前体细胞EPC或平滑肌细胞前体SMC引起血管密度与施用对照PBS的"对照，，组动物的相比稍有增加，分别为大约60%和35%(或分别增加到1.60和1.35倍)。出乎意料的是，当同时注射内皮前体细胞和平滑肌细胞前体时，血管的密度与"对照"组动物的相比基本上增加到了2.4倍。至于毛细血管密度，可见同时注射了内皮前体细胞和平滑肌细胞前体的动物展现了与仅施用内皮前体细胞或仅施用平滑肌细胞前体的动物的毛细血管密度相比基本上高50%的毛细血管密度。四组动物的皮血流量测量值进一步支持了以上结果，因为同时施用了内皮前体细胞和平滑肌细胞前体的动物的皮血流量比4又施用内皮前体细胞或仅施用平滑肌细胞前体的动物的血流量高约50%。由此可见，所测量的三个参数(血管造影得分、毛细血管密度和皮血流量，它们是生血管活性或血管再形成的量度)的结果看起来是一致的，并且还成相当的比例。因此在预先造成缺血的组织内，内皮前体细胞和平滑月几细胞前体的联合作用似乎诱导了血管和毛细血管的再生。因此，内皮前体细月包和平滑肌细胞前体的协同作用由于某种增强效应而在缺血化的组织内诱导了这种血管再生。由此可见，本发明的包含内皮前体细胞和平滑肌细胞前体的细胞制备物可以作为药物施用，尤其是用于治疗血管机能不全，尤其是在缺血的心、脑或外周组织的血管再形成中。另外，这样的制备物也适用于使肿瘤血管形成正常化，并且因此使化疗中施用的药物能够更好地分散在肿瘤中。事实上，肿瘤血管形成与健康组织的正常血管形成的相似之处非常少，特别是肿瘤血管形成伴有止血紊乱和化学紊乱。因此纟皮施用的药物更难到达肿瘤核心，这同样降低了它们的功能和效力。现在，前述细胞制备物具有使肿瘤恢复正常的血管形成，从而使紳瘤正常地接收血液中循环的药物的作用。胞的单位剂量的形式包装，或者以单独剂量的形式包装。在这种情况下，将两种细胞组合物或者同时施用，或者分开施用，或者时间上分散地(6tal6edansletemps)施用。此外，可以将内皮前体细胞和平滑肌细胞前体独立地冷冻并贮藏在-80。C。必要时，将它们解冻，然后培养约一周的时间用于同时或分开施用。所述细胞制备物尤其适用于制备意图用于治疗动脉炎、冠状血管或心机能不全和脑血管机能不全的组合物。在前述动物模型中，其在对下肢所谓的严重(critical)缺血的治疗中提供了良好的结果，因此有很大希望能够治愈处于类似状况的人，使避免截肢成为可能。因此本发明的细胞组合物能够按照本身已知的流程在哺乳动物中施用，并且尤其能够在人中施用。例如，可以将所述细胞组合物注射于血管病变(vascularlesion)处或其附近，注射入血液，或者依靠适当的载体直接导入病变部位。作为变化的形式，可以通过注射途径在一方面施用内皮前体细胞，并且在另一方面单独地施用平滑肌细胞前体。在成年人中，可以通过注射施用含有105和109个细胞的本发明的细胞组合物。第二种实施方式根据本发明的第二种实施方式，将活化的内皮前体细胞EPC和平滑肌细胞前体SMC组合。为了做到这点，提供在细胞的外膜的表面上展现特异性细胞标记物的内皮前体细胞，所述细胞标记物选自由Eph组成的组，特别是EphB4或EphBl，并且具有结构L-K的蛋白质材料与所述细胞标记物结合(combined)。所述蛋白质材料由所述标记物的特异性配体(L)和结合性肽(K)(特别是Fc免疫球蛋白或抗体片段)组成。全部这些形成一个能够提供具有结构EPC-Eph-L-K的细胞群体或细胞材料的系统。可以参考文献FR0508029,其中描述了对这样的细胞材料的利用。因此，为了刺激血管发生，通过属于肝配蛋白家族的特异性配体L活化含有Eph标记物的EPC细胞。配体L也可以由肝配蛋白的肽片段(例如由肝配蛋白B2的肽片,殳)组成，其中所述片段具有相同的生物学活性(quiauraitalorslamemeactivit6biologique)。在这样的情况下，这些活性内皮前体细胞将与平滑肌细胞前体组合施用，从而刺激先前造成缺血的组织的血管再形成或血管发生。优选地，按照本发明的这种第二种实施方式，内皮前体细胞藉由细胞标记物EphB4被活化；肝配蛋白B2配体附着于细胞标记物EphB4，而该配体本身与Fc抗体片段结合。由此获得了EPC-EphB4-肝配蛋白B2-Fc形式的活化内皮前体细胞。首先，有必要获得主要含有展现标记物EphB4的内皮前体细胞的细胞群体。根据第一种获得方式，回收了来源于按照前述第一种制备模式获得的细胞制备物的鳞片型细胞集落。这种细胞制备物含有具有标记物EphB4的内皮前体细胞等。然后用3!xg/ml肝配蛋白-B2-Fc融合蛋白在37。C进行为期30分钟的温育来处理这些细胞集落。通过用PBS清洗将每个未结合的融合蛋白去除(需要至少两次清洗)。由此获得了具有结构EPC-EphB4-肝配蛋白B2-Fc的内皮前体细胞的组合物。接着，必须将这种细胞组合物与平滑肌细胞前体组合从而构成本发明的第二种细胞制备物。按照第一种制备模式获得的前述细胞制备物含有平滑肌细胞前体，可以通过它们的纺锤形来加以鉴别。因此，这些平滑月几细胞前体将被选入这样的制备物，并且将它们与具有结构EPC-EphB4-肝配蛋白2-Fc的内皮前体细胞组合。根据第二种获得方式，在本发明第一种实施方式中叙述的第一种制备模式的第一部分结束时，回收细胞组合物。由此通过离心分离了来自脐带血的单个核细胞，然后通过在塑料盒上在37。C培养24小时将这些与贴壁的细胞分开。然后获得了含有表达标记物EphB4的单个核细胞和不表达所述标记物的单个核细胞的细胞混合物。然后，通过标准免疫磁性分离技术，特别是利用含有抗CD34单克隆抗体的"CDM分离试剂盒，，(由M/丄7EA07B/07EO/，ParisFrance销售)，从非贴壁性细胞分离并纯化CD34+标记的细胞。通过流式细胞仪并且利用与FITC偶联的抗CD34单克隆抗体(优选不同于前述抗体)，对由此获得的细胞的分析显示它们中的75%(士5.6%)拥有CD34标记。由此获得的细胞混合物含有1.5x106至3.5x106个CD34+细胞，可以将所述细胞混合物置于覆盖有含纤连蛋白、层粘连蛋白、硫酸乙酰肝素钠、和I型及IV型胶原的基质(由前述的57GM4-^LDiJ/C7/销售的产品)的6孔板的孔中含有hVEGF、bFGF和IGF1的培养基(由称为ic&Z)5TS7EMS/7VC，Oxford,UnitedKingdom的公司销售的产品)中。在15天的培养之后，回收富集了EPC-EphB4的细胞混合物。然后将这种培养物按照与第一种获得方式相同的方法，用3ing/ml的肝配蛋白-B2-Fc融合蛋白处理。然后获得了主要包含具有结构EPC-EphB4-肝配蛋白B2-Fc的内皮前体细胞的细胞组合物。接着，在按照第一种制备模式的细胞制备物中，将类似于第一种获得方式选择的平滑肌细胞前体与这种细胞组合物组合。由此获得本发明的第三种细胞制备物。也应注意，所述平滑肌细胞前体也可以按照前述的第二种获得方式来获^曰付。按照与上述第一方案基本上相同的第二方案，在多个批次的雄性棵小鼠上测试同时含有具有EPC-EphB4-肝配蛋白B2-Fc结构的内皮前体细胞和平滑肌细胞前体的第二种细胞制备物。应当指出，前述第三种细胞制备物将产生与第二种制备物相同的结果。第二种制备物的效力将相对于对照制备物(PBS)进行比较，并且也相对于仅含具有EPC-EphB4-肝配蛋白B2-Fc结构的内皮前体细胞的制备物进行比较。因此将准备三个批次，每批次六只动物，并且将所述三种制备物分别施用给这三个批次的动物。按照这第二种方案，并且类似于第一种，在1=0的时刻，对全部七周龄的小鼠的右股动脉进行结扎从而刺激缺血。五个小时之后，在眶后窦的水平通过静脉内途径以两种类型的细胞250,000个细胞的比率对第一批次的每只小鼠注射第二种细胞制备物，同时给另外两个批次的动物分别注射前述制备物以〗乍为比4交。接着，在结扎之后12天，处死小鼠并且取出使其缺血的小腿和未使其缺血的小腿的腓肠肌。然后测量了在上文已经出现过的三个参数，血管造影得分、毛细血管密度和皮血流量。结果表II在下表中列出了对三组中每一组(每组六个个体)的前述三个参数的测量结果。该测量结果是在六只动物中观察到的结果的平均值。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>血管造影得分100206±10350±20毛细血管密度100219±16259±13因此，相当令人惊奇的是，观察到藉由它们的与肝配蛋白B2和抗体片段Fc连接的EphB4标记物所活化的内皮前体细胞与平滑肌细胞前体的组合引起了血管密度的增加，其相当于用不含细胞的对照组合物所得血管密度的3.5倍。此夕卜，仅包含藉由它们与配体肝配蛋白B2和Fc抗体片段组合的EphB4才示i己物而活4匕的内皮细月包的细月包纟且合物(cellcompositioncontainingonlyendothelialcellsactivatedbymeansoftheirEph4markercombinedwiththeligandephrineB2andwiththeFcantibodyfragment)已经可以引起血管密度的增加，达对照组合物的两4咅。因此，本发明的包含活化的内皮前体细胞并且与平滑肌细胞前体组合的第二种细胞制备物也可以作为药物施用来治疗血管机能不全，特别是在心、脑或外周缺血组织的血管再形成中。正如第一种细胞制备物一样，这第二种制备物适合于创造用于正常化肺瘤血管形成的药物。然后可参照图i,图i以柱状图的形式呈现按照本发明测试的细胞制备物的血管造影得分。如此，如果发现内皮细胞的祖细胞和平滑肌细胞前体独立地产生促血管生成效果，那么值得注意的是这两种细胞类型的组合作用具有显著的促血管生成效果。血管的密度相对于对照组合物的血管密度确实增加到了2.4倍。此外，同样值得注意的是，平滑肌细胞前体和藉由它们的EphB4受体而活化的内皮细胞前体的组合使血管的密度相对于用对照组合物获得的血管密度增加到3.5倍。权利要求1.一种包含内皮前体细胞(EPC)和平滑肌细胞前体(SMC)的细胞制备物，其作为供同时、分开或时间上分散施用的组合产品，用于作为血管再形成刺激剂使用。2.权利要求1的细胞制备物，其特征在于所述内皮前体细胞(EPC)是通过源自脐带血的祖细胞的体外分化来获得的。3.权利要求1或2的细胞制备物，其特征在于所述内皮前体细胞(EPC)是通过源自循环血的祖细胞的体外分化来获得的。4.权利要求1至3中任一项的细胞制备物，其特征在于所述内皮前体细胞(EPC)是通过源自造血骨髓的祖细胞的体外分化来获得的。5.权利要求1至4中任一项的细胞制备物，其特征在于所述内皮前体细胞(EPC)表达具有酪氨酸激酶活性的特异性Eph受体，其能够接受蛋白质材料以活化所述内皮前体细胞(EPC)。6.权利要求5的细胞制备物，其特征在于所述特异性受体是EphB型的受体。7.权利要求6的细胞制备物，其特征在于所述特异性受体是EphB4型的受体。8.权利要求5至7中任一项的细胞制备物，其特征在于所述蛋白质材料含有所述标记物的特异性配体，所述配体与结合性多肽结合。9.权利要求8的细胞制备物，其特征在于所述标记物的所述特异性配体是肝配蛋白配体。10.权利要求9的细胞制备物，其特征在于所述标记物的所述特异性配体是肝配蛋白B配体。11.权利要求10的细胞制备物，其特征在于所述标记物的所述特异性配体是肝配蛋白B2配体。12.权利要求8至11中任一项的细胞制备物，其特征在于所述结合性多肽是Fc免疫球蛋白片段。13.权利要求1至12中任一项的细胞制备物，其特征在于所述平滑肌细胞前的。14.权利要求1至13中任一项的细胞制备物，其特征在于所述平滑肌细胞前体(SMC)是通过源自造血骨髓的祖细胞的体外分化来获得的。15.权利要求1至16中任一项的细胞制备物，其特征在于所述平滑肌细胞前体(SMC)是从肌肉活检获得的。16.权利要求1至15中任一项的细胞制备物用于制备药物的用途，所述药物旨在用于刺激缺血组织的血管再形成。17.权利要求1至15中任一项的细胞制备物用于制备药物的用途，所述药物旨在用于使肿瘤血管形成正常化以允许化疗中施用的药物散布到胂瘤中。18.权利要求1至15中任一项的细胞制备物用于制备药物的用途，所述药物旨在用于刺激处于愈合阶段的损伤组织的血管再形成。全文摘要本发明涉及一种含有内皮细胞前体(EPC)和平滑肌细胞前体(SMC)的细胞制备物，其作为组合产品用于同时、分开或时间上分散(time-spread)施用，用作血管再形成刺激剂。本发明还涉及这样的细胞制备物的用途。文档编号A61K35/14GK101600446SQ200780050922公开日2009年12月9日申请日期2007年12月6日优先权日2006年12月6日发明者杰勒德·托贝莱姆,索菲·勒里库西-鲁桑尼,菲利普·福伯特,让-塞巴斯蒂安·西尔韦斯特雷申请人:血管与血液研究院;公共救济事业局-巴黎医院;巴黎大学迪德罗特第七分校