专利名称：一种猪2型圆环病毒疫苗的制备方法
技术领域：
本发明属于生物疫苗制备技术领域，涉及一种猪用疫苗的制备方法，特别 是涉及一种猪2型圆环病毒疫苗的制备方法。
背景技术：
猪2型圆环病毒(PCV2)是一种新的猪传染病，主要引起断奶仔猪多系统衰 竭综合症和肾病皮炎综合症，同时在一定程度上还会产生免疫抑制，造成其它 疾病的继发和并发感染。20世纪90年代加拿大首次暴发该病，随后世界上许多 国家和地区都有该病发生的报道，给养猪业造成了严重的经济损失。PCV2是一 种DM病毒，病毒的变异率低，在细胞培养中不产生细胞变异，难以产生高滴 度的病毒粒子，用常规技术制备PCV2疫苗十分不便，因此，至今国内外均无猪 2型圆环病毒的常规疫苗上巿，缺乏对该病的有效防治措施，同时也没有对该病 的有效治疗药物和有效控制能力。随着科技的发展，人们对于将猪器官用于人 中异种移植的兴趣不断增加，而目前的现状无形中对人造成了潜在的公共卫生 危险。
中国专利CN101240264A "猪圆环病毒2型灭活疫苗"公开了一种从病猪场 釆集病料，进行病毒分离、纯化后，接种至PK-15细胞中大量增殖，然后经甲 醛灭活，加入白油佐剂乳化，制备成常规白油佐剂疫苗的方法。该项技术存在 的问题是病毒的增殖难度大、成本高、难于大量供应疫苗来满足生产需求。
发明内容
本发明的目的是提供一种猪2型圆环病毒疫苗的制备方法，利用病猪的敏 感内脏器官作为病毒源材料，通过灭活工艺制成猪2型圆环病毒灭活疫苗，以 解决目前对猪2型圆环病毒无法预防的问题。
本发明的猪2型圆环病毒疫苗的制备方法是
1).选择刚病死的典型2型圆环病毒猪或典型发病的2型圆环病毒猪，在无
菌条件下从其体内分离出脏器组织，用胶体磨研磨，过滤除去杂质，得到脏器
组织提取物，按照脏器组织提取物甲醛=40: i的体积比加入甲醛，在30°c
条件下灭活5天，过滤除菌，以生理盐水稀释至脏器组织提取物的体积浓度为 40%,制成原始灭活疫苗，存放于2 8'C环境下备用；
2) .将上述疫苗接种到健康猪体内，促使其发病；
3) .当接种的健康猪呈典型2型圆环病毒发病或死亡时，在无菌条件下釆集 脏器组织，用胶体磨研磨，过滤除去杂质，得到脏器组织提取物，按照脏器组 织提取物甲醛=40 : 1的体积比加入甲醛，在3(TC条件下灭活5天，过滤除 菌，以生理盐水稀释至脏器组织提取物的体积浓度为40%,制成猪2型圆环病毒 灭活疫苗，分装在灭菌瓶中，存放于2-8'C环境下备用。
上述脏器组织提取物是指在无菌条件下，从典型猪2型圆环病毒发病或死 亡的猪体内釆集的内脏器官心、肝、脾、肺和肾脏的提取物。
本发明制备得到的猪2型圆环病毒疫苗的体积百分比组成为 甲醛 1% 脏器组织提取物 40% 生理盐水 59%。 如果以猪场内的病死猪制作原始疫苗，生产猪2型圆环病毒灭活疫苗后仍 接种于该猪场预防猪2型圆环病毒，则效果更好。
本发明的猪2型圆环病毒疫苗的使用方法是在仔猪5日龄时，每头猪肌 肉注射猪2型圆环病毒灭活疫苗2mL。
选择健康的5日龄仔猪20只作为供试对象，分为两组，每组10只。免疫 组每头猪肌肉注射猪2型圆环病毒灭活疫苗2mL，对照组不接种免疫，观察其健 康状况。
釆集一典型2型圆环病毒病死猪的内脏，以胶体磨研磨后，制成猪2型圆 环病毒提取液。 25日后，向试验仔猪注射猪2型圆环病毒提取液，两组猪均注射，每头猪 肌肉注射lmL，进行强毒攻击，观察猪的病、死情况。
试验结果显示，免疫组全部10只仔猪中，8只健活，没有发病症状，2只 有发病症状，无死亡情况发生；对照组10只仔猪全部发病，死亡6只。免疫组 与对照组相比，免疫保护率达80%。
本发明利用病猪的的各敏感内脏器官作为原始灭活疫苗，再接种至健康猪 体内生产制备猪2型圆环病毒灭活疫苗，制备出的疫苗抗原性好，免疫保护率 高，解决了目前猪2型圆环病毒疫苗生产中的病毒增殖难度大、生产成本高的 问题。
本发明的猪2型圆环病毒灭活疫苗制备方法简单，使用方便，便于推广应用。
具体实施例方式
实施例1
无菌条件下，从刚刚病死的典型猪2型圆环病毒病猪体内取出心、肝、脾、 肺和肾脏等脏器组织，以胶体磨充分研磨，过滤除去杂质，得到脏器组织提取 物。取脏器组织4mL,加入0. lmL甲醛，在3(TC条件下灭活5天，经灭检合格 后过滤除菌，加入5. 9mL生理盐水混合均匀，通过无菌检验、效力检验和安全 检验，制成原始灭活疫苗。
将原始灭活疫苗肌肉注射到一头健康猪体内，促使其发病，当接种的健康 猪呈典型猪2型圆环病毒病发病时，在无菌条件下釆集其心、肝、脾、肺和肾 脏等脏器组织，以胶体磨充分研磨，过滤除去杂质，得到脏器组织提取物。取 脏器组织800mL,加入20mL甲醛，在30'C条件下灭活5天，灭检合格后过滤除 菌，加入1180mL生理盐水混合均匀，通过无菌检验、效力检验和安全检验，配 制成猪2型圆环病毒灭活疫苗，分装在灭菌的100mL瓶中，于2 8"C的条件下 存放备用。
实施例2
无菌条件下，从典型发病的典型猪2型圆环病毒病猪体内取出心、肝、脾、 肺和肾脏等脏器组织，以胶体磨充分研磨，过滤除去杂质，得到脏器组织提取 物。取脏器组织4mL,加入0. lmL甲醛，在30。C条件下灭活5天，经灭检合格 后过滤除菌，加入5.9mL生理盐水混合均匀，通过无菌检验、效力检验和安全 检验，制成原始灭活疫苗。
将原始灭活疫苗肌肉注射到一头健康猪体内，促使其发病，当接种的健康 猪呈典型猪2型圆环病毒病发病死亡后，在无菌条件下釆集其心、肝、脾、肺 和肾脏等脏器组织，以胶体磨研磨，过滤除去杂质，得到脏器组织提取物。取 脏器组织800mL,加入20mL甲醛，在3(TC条件下灭活5天，灭检合格后过滤除 菌，加入1180mL生理盐水混合均勻，通过无菌检验、效力检验和安全检验，配 制成猪2型圆环病毒灭活疫苗，分装在灭菌的100mL瓶中，于2 8'C的条件下 存放备用。
权利要求
1、一种猪2型圆环病毒疫苗的制备方法，是以下述步骤制备:1). 选择刚病死的典型2型圆环病毒猪或典型发病的2型圆环病毒猪，在无菌条件下从其体内分离出脏器组织，用胶体磨研磨，过滤除去杂质，得到脏器组织提取物，按照脏器组织提取物∶甲醛＝40∶1的体积比加入甲醛，在30℃条件下灭活5天，过滤除菌，以生理盐水稀释至脏器组织提取物的体积浓度为40％，制成原始灭活疫苗，存放于2～8℃环境下备用；2). 将上述疫苗接种到健康猪体内，促使其发病；3). 当接种的健康猪呈典型2型圆环病毒发病或死亡时，在无菌条件下采集脏器组织，用胶体磨研磨，过滤除去杂质，得到脏器组织提取物，按照脏器组织提取物∶甲醛＝40∶1的体积比加入甲醛，在30℃条件下灭活5天，过滤除菌，以生理盐水稀释至脏器组织提取物的体积浓度为40％，制成猪2型圆环病毒灭活疫苗，分装在灭菌瓶中，存放于2～8℃环境下备用。
2、 根据权利要求1所述的猪2型圆环病毒疫苗的制备方法，其特征是所述 的脏器组织提取物是指在无菌条件下，从典型猪2型圆环病毒发病或死亡的猪 体内采集的内脏器官心、肝、脾、肺和肾脏的提取物。
3、 权利要求1所述猪2型圆环病毒疫苗的制备方法制备得到的猪2型圆环 病毒疫苗，其体积百分比组成为甲醛 1% 脏器组织提取物 40% 生理盐水 59%。
全文摘要
一种猪2型圆环病毒疫苗的制备方法，是从典型2型圆环病毒病猪体内分离出脏器组织，经研磨、过滤得到脏器组织提取物，加入甲醛灭活，以生理盐水稀释制成原始灭活疫苗，将该疫苗接种到健康猪体内促其发病或死亡后，采集脏器组织，经研磨、过滤，加入甲醛灭活，以生理盐水稀释制成猪2型圆环病毒灭活疫苗。采用本发明方法制备得到的猪2型圆环病毒疫苗抗原性好，免疫保护率高，解决了目前猪2型圆环病毒疫苗生产中的病毒增殖难度大、生产成本高的问题。
文档编号A61K39/12GK101376026SQ200810079560
公开日2009年3月4日 申请日期2008年10月10日 优先权日2008年10月10日
发明者乔云龙, 孙建刚 申请人:山西海森生物制品有限公司