专利名称：一种含苯并2-氨基咪唑骨架的抑制剂类化合物及其制备方法
技术领域：
本发明属化学合成领域，涉及含苯并2-氨基咪唑骨架的抑制剂类化合物及其制备方法。
背景技术：
血栓栓塞类疾病具极高的致死率和致残率，全世界每三例死亡中就有一例死于血栓类疾病，因此这类疾病是人类健康中极不和谐的因素。抗凝治疗作为抗栓治疗的主流已有60余年的历史，临床实践以及有关报道强有力的证明了抗凝治疗可预防深部静脉血栓形成引起的血管性疾病及降低其病死率。
现有技术公开了较多种类的抗凝药物，能够临床应用的大致包括肝素和低分子量肝素、口服抗凝剂、水蛭素及新型抗凝药物。肝素Heparin(一种硫酸氨基葡聚糖的钠盐)作用迅速，多用于短期治疗，由于其不能从肠道吸收，只能注射给药，故使用时需要投入大量细致的监护以避免并发症的出现；低分子量肝素LMWH(从肝素中分离出来的分子量为6.5D的葡胺聚糖链混合物)经皮下注射后生物利用度高，故可大致预测用药剂量，但因其是一类具有独特化学性质，药代及药效动力学特点的化合物，常常因为制剂生产工艺的不同而不能随意混用。临床监测表明肝素类化合物的不当使用会造成出血，骨质疏松等并发症或诱导血小板减少症。口服抗凝药物华法林(如Warfarin为双香豆素类中效抗凝剂)抗凝作用机制独特，可作为静脉血栓栓塞的一级和二级预防等，但由于它们抗凝效果过强而易引发出血并发症，且有可能导致皮肤坏死等副作用而使其应用受到很大范围的限制。非肠道的直接凝血酶抑制剂有水蛭素、Bivalirudin和阿加曲班等。早期的天然凝血酶抑制剂水蛭素(IC500.3pM)(Hirudin是由65—66个氨基酸组成的多肽)提取于药用水蛭的唾液腺分泌物，用于防止重大矫形外科手术后深部静脉血栓的形成，其与肝素和低分子量肝素相比有较大的优越性，但不能口服的特点使它成为预防和治疗亚急性和慢性血栓栓塞类疾病的重要障碍。Bivalirudin是一个能与凝血酶活性位点结合的由20个氨基酸残基组成的半合成多肽链。但其抑制作用较为短暂。
有关具有口服抗凝活性的凝血酶抑制剂的研究已经取得了巨大的进展。从总体发展趋势来看，凝血酶抑制剂的合成大致经历了两个阶段。第一代凝血酶抑制剂如阿加曲班(Argatroban，Ki＝38nM)—首次(1990年于日本)能够应用于临床的第一代凝血酶抑制剂，用来治疗动脉栓塞和由急性中风而引起的出血。2000年，其已经通过了美国FDA认证，专门用于治疗血小板减少症(HIT)。但阿加曲班的口服生物利用度较低，只能通过静脉给药，且在人体中的半衰期仅有30分钟。此即第一代凝血酶抑制剂所存在的普遍缺点。因此，第一代凝血酶抑制剂始终向着具有高效的，选择性好和高口服生物利用度以及合适的药代、药动学性质方向发展。而针对以上存在的缺点，在其应对策略上发展起来了第二代凝血酶抑制剂部分正在进入二期临床阶段的研究。典型的如希美加群(Ximelagatran)是一种不带电的亲脂类药物，是Melagatran的双前酯化合物。在肠胃道吸收好，血浆半衰期为3—4小时。每天给药2次，剂量固定，不需凝血监测。但副作用可使转氨酶升高。二期临床试验证明Ximelagatran用于选择性髋或膝关节成形术后可预防静脉血栓的形成，同时对静脉栓塞的治疗也有作用，其特点是用药时不增加出血风险，安全性高。由于该药使用方便，可代替华发林治疗心房颤动。Ximelagatran长期应用于治疗急性冠脉综合症的效果正在接受二期临床试验评价。
德国Boehringer Ingelheim Pharma KG公司开发的第二代凝血酶抑制剂BIBR-953及其前药BIBR-1048其结构中含有新的1，2，5—三取代苯并咪唑的中心骨架，与凝血酶结合后的晶体结构显示它的作用模式是非极性的亲脂作用。体内外实验显示它与凝血酶具有极高的亲和力(Ki＝9.3nm)，并具有良好的体内活性前景(J.Med.Chem.2002，45，1757-1766)。在此基础上合成的双前药BIBR-1048具有优越的口服生物活性，现已经进入二期临床试验。最近报道了它与Ximelagatran的口服生物活性比较，结构表明，尽管体内血药浓度BIBR-1048(约5％)较Ximelagatran(20％)低，但是BIBR-953的半衰期(约12小时)比Ximelagatran的活性原药Melagatran的半衰期(3-5小时)大大提高。因此该化合物被认为是目前继Ximelagatran之后最有可能被开发成功的高活性口服凝血酶抑制剂。
BIBR-953及其前药BIBR-1048作为一种高效、高选择性的凝血酶抑制剂，体内外试验显示它与凝血酶具有极高的亲和力，并具有良好的体内活性前景。有研究以此为基础，对其合成路线进行了优化和改进，(见中国专利申请，公开号CN1861596)。并且发展起来一种合成胍基取代脒基的新型凝血酶抑制剂的方法，经过体内活性筛选，部分化合物具有较好的活性。(见中国专利申请申请号200710046223.1)。
发明内容
本发明的目的旨在提供一种含苯并2-氨基咪唑骨架的抑制剂类化合物。
本发明的进一步目的旨在提供上述抑制剂类化合物的制备方法。本方法以构建1，2，5-三取代苯并2-氨基咪唑新骨架为中心的新型凝血酶目的，通过体内筛活性数据选为指导，提供一种具有新骨架的非肽类的杂环化合物。
本发明的更进一步目的旨在提供该类化合物的抗凝血酶生成的用途。
本发明所述的含苯并2-氨基咪唑骨架的抑制剂类化合物，核心骨架C-2位用氨基取代了原有核心骨架中的氨甲基，具有如下结构式
其中R1部分为吡啶、对氟苯基、嘧啶基-C5H4N，p-F-C5H4，2，6-C6H3N2；也可为其它取代的苯基、吡啶、嘧啶的取代基，R2为脒基、胍基-C(＝NH)NH2，-NHC(＝NH)-NH2。
本发明所述的抑制剂类化合物含有1，2，5-三取代苯并2-氨基咪唑新核心骨架，并以体内活性筛选为指导，优化了R1和R2不同取代基对时对活性的影响。优选出了对凝血酶的产生具有明显的抑制作用的化合物。
本发明的具体合成路线如下，在下文的陈述实施例中，中间体通式是根据结构式中的编号，用阿拉伯数字表示，X1；X2表示N或C，R1表示取代基；R2表示CN、NO2。
本发明的优选化合物是具有下述结构I，II，III，IV，V，VI的化合物
上述反应中，步骤1化合物1与化合物2在一种醇类溶剂中反应2-20小时后经过浓缩，得到具有化合物3结构的混合物，不需要分离纯化。所说的醇类溶剂是指甲醇、乙醇、树丁醇、正辛醇，特别是甲醇和乙醇。
步骤2具有化合物3结构的上述混合物和一种缩合剂在一种溶剂反应5-30小时后，纯化得到具有化合物4结构的化合物(R2＝CN、NO2)。所说的一种溶剂是指N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜和四氢呋喃，特别是N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜；所说的一种缩合剂是指DCC、EDCI、CDI和碘甲烷，特别是碘甲烷和EDCI。
步骤3化合物4(R＝CN)在一种有机溶剂中与一种气体反应1-2天后再与另一种气体反应1-3天，经过浓缩硅胶柱层析后得到脒基化合物5。所说的一种有机溶剂特别指N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、四氢呋喃、甲醇、乙醇；特别是乙醇和甲醇；所说的一种气体是指氯化氢；所说的另一种气体是指氨气。
步骤4化合物4(R＝NO2)一种醇类溶剂或醚类溶剂中，在金属催化剂的催化下，与一种还原性气体反应5-20小时，经过过滤、浓缩后得到化合物6。所说的醇是指C1～C3的醇，特别是甲醇、乙醇和叔丁醇；所说的醚是指脂环醚，特别是四氢呋喃；所说的金属催化剂特别是指钯炭和瑞尼镍；所说的还原性气体特别是指氢气。
步骤5化合物6溶于一种有机溶剂中，加入一种有机碱，再加入甲硫基甲脒9，随后加入一种无机盐。连续搅拌1～10h，经过滤，萃取，浓缩硅胶柱层析后得到化合物7。这里所说的一种有机溶剂指甲醇，乙醇，二甲亚砜，N，N-二甲基甲酰胺，环丁砜，二氯甲烷，三氯甲烷，四氯化碳等，特别是N，N-二甲基甲酰胺或二甲亚砜。所说的有机碱指二甲胺，三乙胺，异丙胺，N，N-二异丙基乙胺，叔丁胺，正丁胺等，特别是N，N-二异丙基乙胺或三乙胺。这里所说的一种无机盐指高价金属氯化物，包括氯化铁，氯化汞，氯化钙，氯化铜等，特别是氯化汞。
步骤6化合物7溶于一种醇溶液，加催化剂，通入氢气，连续反应3～10h，经过滤，浓缩即得到胍基化合物8。所说的醇溶液是甲醇，乙醇，叔丁醇，正己醇等，特别是甲醇或乙醇；所说的催化剂是指金属催化剂，包括钯，钴，铁，锌等，或者指这些金属催化剂的固载物或合金，包括氢氧化钯碳，钯碳，瑞尼镍，铁镍合金，铁锌合金等，特别是钯碳或氢氧化钯碳。
步骤7化合物4或化合物8溶于一种醇与水的混合液中，加入无机碱，搅拌2～20h，加水稀释，酸化即有沉淀析出，过滤即得化合物I～VI。这里所说的醇特别是指甲醇或乙醇。所说的无机碱指氢氧化钾，氢氧化钠或氢氧化锂。
上述合成I～VI的最初原料1按照现有技术(中国发明专利CN1861596)制备
根据文献(Synthesis2004，1，37-42)方法制备胍基原料9
本发明提供了抑制剂类化合物，进一步构建了一种含有1，2，5-三取代苯并2-氨基咪唑新核心骨架凝血酶抑制剂，并对部分活性位点进行了修饰。所述的合成方法步骤操作分离简单，所用的试剂均为常用试剂，路线较短，各步骤产率较高。所得目标化合物经过活性测试，具有抑制凝血酶产生的效果。
具体实施例方式 实施例1 当X1＝N；X2＝C；R1＝H(吡啶)时 合成3-({2-[(4-氰基-苯亚胺基)-1甲基-苯并咪唑-5-羰基]}-(吡啶-2-亚胺)-丙酸乙酯(4R2＝CN) 将化合物1(4.0g，11.68mmol)溶于60mL无水甲醇中，加入化合物2(2.24g，14.0mmol)，室温搅拌6小时后浓缩，再加入80毫升DMF和EDCI(2.77g，14.5mmol)，相同温度下反应30小时，用水稀释，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，并用板和食盐水洗三次，干燥浓缩后硅胶柱纯化得到白色固体化合物，收率为38％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.42(d，J＝5.1Hz，1H)，7.64(d，J＝8.4Hz，2H)，7.48(d，J＝8.4Hz，2H)，7.39-7.72(m，1H)，7.27(s，1H)，7.10(m，1H)，6.94(dd，J＝1.7，8.3Hz，1H)，6.74(d，J＝7.8Hz，1H)，6.61(d，J＝7.8Hz，1H)，4.43(t，J＝6.9Hz 2H)，4.10(m，2H)，3.28(s，3H)，2.82(m，2H)，1.23(t，J＝7.2Hz，2H)ppm； ESI-MS(M/z)469.4(M+H+) 合成3-([2-(4-脒基-苯亚胺基)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基])-(吡啶-2-亚胺)-丙酸乙酯(5) 将化合物4(R＝CN)(2.0g，4.27mmol)溶于100mL无水乙醇中，室温通入氯化氢气体反应2天后浓缩，残余物中加入800mL的无水甲醇，通入氨气反应3天后浓缩，并经过硅胶柱纯化得到白色固体1.62g，收率为78％。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.30(brs，1H)，9.10(brs，1H)，8.39(d，J＝4.8Hz，1H)，8.10(d，J＝9.0Hz，2H)，7.87(d，J＝8.7Hz，2H)，7.58-7.51(m，1H)，7.33(s，1H)，7.22(m，1H)，7.11(m，1H)，7.00(m，1H)，6.87(m，1H)，4.21(t，J＝6.9Hz，2H)，3.97(m，2H)，3.76(s，3H)，2.67(m，2H)，1.12(t，J＝7.2Hz，3H)ppm； ESI-MS(M/z)508.4(M+Na+) 合成3-({2-[(4-氨基-苯亚胺)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基]}-吡啶-2-亚胺)-丙酸乙酯(6) 将化合物4(R＝NO2)(5.0g，10.25mmol)溶于100mL无水乙醇中，加10％Pd/C0.6g，20℃～60℃下通氢气反应20小时，滤出固体，滤液浓缩，得白色固体6(4.47g，95.0％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.39(d，J＝4.8Hz，1H)，7.56-7.49(m，1H)，7.36(d，J＝7.8Hz，2H)，7.13(s，1H)，7.12-7.05(m，2H)，6.93-6.89(m，1H)，6.83(d，J＝8.1Hz，1H)，6.55(m，2H)，4.21(m，2H)，3.97(m，2H)，3.57(s，3H)，2.66(m，2H)，1.12(t，J＝7.2Hz，3H)ppm； ESI-MS(M/z)481.3(M+Na+) 合成3-({2-(-4-(2，3-二苄氧基酰亚胺)甲基亚胺-苯亚胺)]-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基})-吡啶-2-亚胺)-丙酸乙酯(7) 将化合物6(1.5g，3.27mmol)，甲硫基甲咪9(1.17g，3.27mmol)与三乙胺(5.0mmol)溶于50mL的DMF中搅拌1小时后加入三氯化铁(5mmol)后连续搅拌25小时，用水稀释，乙酸乙酯萃取浓缩后硅胶柱纯化得到白色固体7(2.36g，94％). 1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.47(brs，1H)，9.97(brs，1H)，9.05(brs，1H)，8.40(d，J＝5.1Hz，1H)，7.96(s，IH)，7.45(m，2H)，7.56-7.31(m，12H)，7.27(s，1H)，7.15(d，J＝8.1Hz，1H)，7.10(m，1H)，6.98(m，1H)，6.86(m，1H)，5.27(s，2H)，5.05(s，2H)，4.23(m，2H)，3.98(m，2H)，3.65(s，3H)，2.69(m，2H)，1.13(t，J＝7.2Hz，3H)ppm； ESI-MS(M/z)769.4(M+H+) 合成3-([2-(4-呱基-苯亚胺)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基])-吡啶-2-亚胺)-丙酸乙酯(8) 将化合物7(2.0g，2.60mmol)溶于60mL无水乙醇中，加入催化量的钯碳，20-60℃搅拌15小时，过滤浓缩，得到化合物8，收率为93％。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.40(d，J＝4.8Hz，1H)，7.73(m，2H)，7.57-7.52(m，1H)，7.21(s，1H)，7.15-7.09(m，2H)，6.98-6.94(m，2H)，6.86(m，1H)，4.23(m，2H)，3.98(m，2H)，3.64(s，3H)，2.68(m，2H)，1.12(t，J＝7.2Hz，3H)ppm； ESI-MS(M/z)501.5(M+H+). 合成化合物IV 将化合物8(3.0mmol)溶于30mL无水乙醇和15mL水中，加入氢氧化钠(4.71mmol)，室温下搅拌8h。加水稀释，以适量乙酸中和后，静置，有沉淀析出，滤去溶液，固体用水，无水乙醇，无水乙醚淋洗，即得到白色固体IV，收率为79％。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6+CF3COOH)δ9.89(brs，1H)，8.38(d，J＝4.8Hz，1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.59(m，1H)，7.53-7.45(m，3H)，7.30-7.24(m，4H)，7.16-7.12(m，1H)，7.08(m，1H)，6.99(m，m，1H)，6.99(m，1H)，4.17(m，1H)，3.69(s，3H)，2.62(m，2H)ppm； ESI-MS(M/z)473.3(M+H+). 合成化合物III 将化合物5(7.0mmol)溶于80mL无水乙醇和40mL水中，加入氢氧化锂(21.0mmol)，室温下搅拌18h。加水稀释，以适量乙酸中和后，静置，有沉淀析出，滤去溶液，固体用水，无水乙醇，无水乙醚淋洗，即得到白色固体III收率为87％。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6+CF3COOH)δ8.37(d，J＝5.1Hz，1H)，8.09(d，J＝8.4Hz，1H)，7.83(m，2H)，7.60-7.57(m，1H)，7.33(s，1H)，7.19(m，1H)，7.13-7.09(m，1H)，7.03-6.96(m，2H)，4.12(m，2H)，3.77(s，3H)，2.34(m，2H)ppm. ESI-MS(M/z)458.3(M+H+). 实施例2 当X1＝X2＝C；R1＝F(4-氟苯基)时 合成3-([2-(4-硝基-苯亚胺基)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基]}-(嘧啶-2-亚胺)-丙酸乙酯(4R2＝NO2) 将化合物1(2.4mmol)溶于15mL无水甲醇中，加入化合物2(4.48g，28.0mmol)，室温搅拌8小时后浓缩，再加入200毫升DMF和MeI(30.0mmol)，相同温度下反应28小时，用水稀释，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，并用板和食盐水洗三次，干燥浓缩后硅胶柱纯化得到白色固体化合物，收率为84％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.61(d，J＝9.0Hz，2H)，7.49(d，J＝8.7Hz，2H)，7.20(s，1H)，7.08-7.04(m，1H)，6.93-6.88(m，3H)，6.63(d，J＝8.4Hz，1H)，4.24(m，2H)，4.11(m，2H)，3.27(s，3H)，2.72(m，2H)，1.24(t，J＝7.2Hz，3H)ppm； ESI-MS(M/z)486.4(M+H+) 合成3-([2-(4-脒基-苯亚胺基)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基])-(4-氟苯基-2-亚胺)-丙酸乙酯(5)的方法与合成3-([2-(4-咪基-苯亚胺基)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基])-(吡啶-2-亚胺)-丙酸乙酯的方法一致 1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.09(d，J＝8.1Hz，2H)，7.87(d，J＝8.4Hz，2H)，7.34(s，1H)，7.37-7.19(m，3H)，7.12(m，2H)，7.07-7.02(m，1H)，4.08(m，2H)，4.00(m，2H)，3.74(s，3H)，2.61(m，2H)，1.15(t，J＝7.2Hz，3H)ppm； ESI-MS(M/z)503.4(M+H+) 合成化合物II 将化合物5(1.0mmol)溶于20mL无水乙醇和10mL水中，加入氢氧化钠(2.5mmol)，室温下搅拌9h。加水稀释，以适量乙酸中和后，静置，有沉淀析出，滤去溶液，固体用水，无水乙醇，无水乙醚淋洗，即得到白色固体II收率为84％。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6+CF3COOH)δ8.03(d，J＝9.0Hz，1H)，7.90-7.85(m，2H)，7.82(d，J＝9.0Hz，1H)，7.34(d，J＝4.2Hz，，1H)，7.29-7.23(m，2H)，7.20-7.16(m，1H)，7.12-7.02(m，3H)，4.01(m，2H)，3.69(m，3H)，2.45(m，2H)ppm；19F NMR(300MHz，DMSO-d6+CF3COOH)δ-116.282ppm； ESI-MS(M/z)475.3(M+H+). 实施例3 当X1＝X2＝N；R1＝H(嘧啶)时 合成3-([2-(4-氰基-苯亚胺基)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基]}-(嘧啶-2-亚胺)-丙酸乙酯(4R2＝NO2) 将化合物1(2.5mmol)溶于15mL无水甲醇中，加入化合物2(3.0mmol)，室温搅拌12小时后浓缩，再加入22毫升DMF和ECCI(3.5mmol)、HOBt((2.0mmol)，相同温度下反应18小时，用水稀释，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，并用板和食盐水洗三次，干燥浓缩后硅胶柱纯化得到白色固体化合物，收率为32％。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.84(brs，1H)，8.53(d，J＝4.8Hz，2H)，8.25(d，J＝9.0Hz，2H)，8.07(d，J＝9.0Hz，2H)，7.37(s，1H)，7.30(d，J＝8.40Hz，1H)，7.16-7.10(m，2H)，4.33(m，2H)，3.99(m，2H)，3.75(s，3H)，2.78(m，2H)，1.13(t，J＝7.2Hz，3H)ppm； ESI-MS(M/z)512.3(M+Na+) 合成3-([2-(4-氨基-苯亚胺基)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基]}-(嘧啶-2-亚胺)-丙酸乙酯(6)与合成3-({2-[(4-氨基-苯亚胺)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基]}-(吡啶-2-亚胺)-丙酸乙酯的方法一致； 合成3-({2-(-4-(2，3-二苄氧基酰亚胺)甲基亚胺-苯亚胺)]-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基})-(嘧啶-2-亚胺)-丙酸乙酯(7)与合成3-({2-(-4-(2，3-二苄氧基酰亚胺)甲基亚胺-苯亚胺)]-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基})-(吡啶-2-亚胺)-丙酸乙酯的方法一致； 合成3-([2-(4-胍基-苯亚胺)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基])-(嘧啶-2-亚胺)-丙酸乙酯(8)与合成3-([2-(4-胍基-苯亚胺)-1-甲基-苯并咪唑-5-羰基])-(吡啶-2-亚胺)-丙酸乙酯的方法一致； 合成VI 将化合物8(6.0mmol)溶于60mL无水乙醇和30mL水中，加入氢氧化锂(9.0mmol)，室温下搅拌15h。加水稀释，以适量乙酸中和后，静置，有沉淀析出，滤去溶液，固体用水，无水乙醇，无水乙醚淋洗，即得到白色固体VI(87％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6+CF3COOH)δ9.10(brs，1H)，8.49(d，J＝4.8Hz，1H)，7.92(brs，4H)，7.83(d，J＝7.8Hz，1H)，7.23-7.04(m，6H)，4.23(m，2H)，3.69(s，3H)，2.40(m，2H)ppm. ESI-MS(M/z)4769.4(M+Na+). 实施例4 受试品化合物为实施例中化合物V。该样品中加入适量DMSO，用生理盐水将其浓度分别调整为1*10-6mol/l，其中DMSO的浓度为0.1％。
取300-350g的雄性SD大鼠，以10％水和氯醛(1ml/300g)麻醉，腹主动脉取血约10ml，3.8％枸橼酸钠91抗凝全血，离心(3000rpm，10min)，取贫血小板血浆(PPP)3-4ml。每次取0.1ml PPP放入尖底玻璃小试管中，测定管加0.1ml受试品，对照管加0.1ml相应溶酶，置37℃水浴中预温2min。然后分别加入10U/ml的凝血酶溶液0.1ml，加完后立即混匀记时，观察并记录血浆凝固现象和所需时间，此方法重复数次。
与正常对照组血浆凝固时间(20.6±0.9秒)相比，该化合物加样组有极显著性差异，结果分别为1*E-6(39.2±2.1)。初步活性测试表明该化合物具有非常显著的体外抗凝血酶活性。
实施例5 受试品化合物为实施例中化合物VI中固体粉末。
活性测试方法如实施例4 与正常对照组血浆凝固时间(30.0±1.7秒)相比，该化合物加样组血浆凝固时间1*E-6(33.7±1.4**)，初步活性测试表明该化合物具有显著的体外抗凝血酶活性。
实施例6 受试品化合物为实施例中化合物III中固体粉末。
活性测试方法如实施例4 与正常对照组血浆凝固时间(30.0±1.7秒)相比，该化合物加样组血浆凝固时间1*E-6(38.1±4.4**)，初步活性测试表明该化合物具有显著的体外抗凝血酶活性。
权利要求
1、一种含有苯并2-氨基咪唑骨架的抑制剂类化合物，其特征在于具有如下结构式
其中R1部分为吡啶、对氟苯基、嘧啶基-C5H4N，p-F-C5H4，2，6-C6H3N2；或为苯基、吡啶、嘧啶的取代基，R2为脒基、胍基-C(＝NH)NH2，-NHC(＝NH)-NH2。
2、一种制备含有苯并2-氨基咪唑骨架的抑制剂类化合物的方法，其特征在于，按下述路线合成，
其中R1部分为吡啶、对氟苯基、嘧啶基-C5H4N，p-F-C5H4，2，6-C6H3N2；或为苯基、吡啶、嘧啶的取代基，R2为脒基、胍基-C(＝NH)NH2，-NHC(＝NH)-NH2；所述的合成包括如下步骤
步骤1化合物1与化合物2在一种醇类溶剂中反应2-20小时后经过浓缩，得具有化合物3结构的混合物，不需要分离纯化；
步骤2具有化合物3结构的上述混合物和一种缩合剂在一种溶剂反应5-30小时后，纯化得具有化合物4结构的化合物，其中R2＝CN、NO2；
步骤3R＝CN的化合物4在一种有机溶剂中与一种气体反应1-2天后与另一种气体反应1-3天，再经过浓缩硅胶柱层析后得脒基化合物5；
步骤4R＝NO2的化合物4在一种醇类溶剂或醚类溶剂中，在金属催化剂的催化下，与一种还原性气体反应5-20小时后，经过滤、浓缩后得化合物6；
步骤5化合物6溶于一种有机溶剂中，加入一种有机碱，再加入甲硫基甲脒9后，加入一种无机盐，搅拌1～10h，经过滤，萃取，浓缩硅胶柱层析后得化合物7；
步骤6化合物7溶于一种醇溶液，加催化剂，通入氢气，反应3～10h，经过滤，浓缩得呱基化合物8；
步骤7化合物4或化合物8溶于一种醇与水的混合液中，加入无机碱，搅拌2～20h，加水稀释，酸化，沉淀析出，过滤得化合物I～VI。
3、按权利要求1或2的含有苯并2-氨基咪唑骨架的抑制剂类化合物，其特征在于所述的化合物是具有下述结构I，II，III，IV，V，VI的化合物
4、按权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1中的醇类溶剂选自甲醇、乙醇、叔丁醇或正辛醇。
5、按权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中的一种溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜或四氢呋喃。
6、按权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中的一种缩合剂选自DCC、EDCI、CDI或碘甲烷。
7、按照权利6所述的制备方法，所说的缩合剂是碘甲烷或EDC。
8、按权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3中的一种有机溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、四氢呋喃、甲醇或乙醇；所述的一种气体是氯化氢；所述的另一种气体是氨气。
9、按权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤4中的醇选自甲醇、乙醇或叔丁醇；所述的醚是四氢呋喃；所述的金属催化剂是钯碳或瑞尼镍；所述的还原性气体是氢气。
10、按权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤5中的一种有机溶剂选自甲醇，乙醇，二甲亚砜，N，N-二甲基甲酰胺，环丁砜，二氯甲烷，三氯甲烷或四氯化碳；所述的有机碱选自二甲胺，三乙胺，异丙胺，N，N-二异丙基乙胺，叔丁胺或正丁胺；所述的一种无机盐是高价金属氯化物，选自氯化铁，氯化汞，氯化钙或氯化铜。
11、按照权利10所述的制备方法，其中所述的一种无机盐是氯化汞。
12、按权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤6中的醇溶液选自甲醇，乙醇，叔丁醇或正己醇；所述的催化剂是金属催化剂。
13、按权利要求12所述的制备方法，其特征在于，所述金属催化剂选自钯，钴，铁或锌或所述金属催化剂的固载物或合金。
14、按权利要求13所述的制备方法，其特征在于，所述金属催化剂的固载物或合金选自氢氧化钯碳，钯碳，瑞尼镍，铁镍合金或铁锌合金。
15、按照权利12所述的制备方法，其特征在于，所述的金属催化剂是氢氧化钯碳或钯碳。
16、按权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤7中的醇是甲醇或乙醇；所述的无机碱是氢氧化钾，氢氧化钠或氢氧化锂。
17、按照权利16所述的制备方法，其特征在于，所述的无机碱是氢氧化锂。
18、权利要求1所述的含有苯并2-氨基咪唑骨架的抑制剂类化合物在制备凝血酶抑制剂中的用途。
全文摘要
本发明属化学合成领域，涉及含苯并2-氨基咪唑骨架的抑制剂类化合物及其制备方法和应用。所述的抑制剂类化合物含有1，2，5-三取代苯并2-氨基咪唑新核心骨架。本发明并以体内活性筛选为指导，优化了不同取代基对时对活性的影响，优选出了对凝血酶的产生具有明显的抑制作用的化合物。本发明所述的合成方法步骤操作分离简单，所用的试剂均为常用试剂，路线较短，各步骤产率较高。所得目标化合物经过活性测试，具有抑制凝血酶产生的效果。
文档编号A61K31/4184GK101417997SQ200810202929
公开日2009年4月29日 申请日期2008年11月18日 优先权日2008年11月18日
发明者魏邦国, 马景毅, 林国强, 朱海波, 凯 渠 申请人:复旦大学, 中国医学科学院药物研究所