专利名称：新化合物、含该化合物的药物组合物以及该化合物的应用方法
本申请是申请号为03818556.3、申请日为2003年7月9日、具有相同发明名称的中国专利申请的分案申请。
背景技术：
脂肪酸合酶 在细胞的生理学中，脂肪酸具有三个主要作用。首先，它们是生物膜的构件。其次，脂肪酸衍生物起激素和胞内信使的作用。第三，对本发明特别重要的，脂肪酸是燃料分子，其可以作为三酰甘油酯储存在脂肪组织，其亦称为中性脂肪。
在脂肪酸合成路径中涉及四种主要酶，它们是脂肪酸合酶(FAS)、炔基CoA羧基酶(ACC)、苹果酸酶和柠檬酸裂解酶。首要的酶，FAS，催化前体丙二酰基-CoA和炔基-CoA的NADPH-依赖性缩合，生成脂肪酸。NADPH是一种还原剂，在FAS反应周期中的两处通常起主要电子供体的作用。其它三种酶(即，ACC、苹果酸酶和柠檬酸裂解酶)产生必要的前体。其它酶，例如产生NADPH的酶，也涉及脂肪酸的合成。
FAS具有一个酶学专门委员会(E.C.)号码2.3.1.85，又名脂肪酸合成酶、脂肪酸连接酶，它的系统名酰基-CoA丙二酰基-CoA C-酰基转移酶(脱羧基、氧酰基-和烯酰基-还原和硫代酸酯-水解)。在FAS催化合成脂肪酸中，存在7种不同的酶或不同的催化区炔基转酰酶、丙二酰转酰酶、β-酮脂酰合成酶(缩合酶)、β-酮脂酰还原酶、β-羟酰脱水酶、烯酰还原酶和硫酯酶。(Wakil，S.J.，Biochemistry，284523-4530，1989)。所有这7种酶共同形成FAS。
虽然FAS催化合成脂肪酸在低等生物例如细菌与在高等生物例如分枝杆菌、酵母和人中相似，但是还是存在一些重要的区别。在细菌中，七种酶反应是通过七种单独的非结合多肽进行的。将此分类为II型FAS。相反，在分枝杆菌、酵母和人中的酶反应通过多功能多肽进行。例如，酵母具有一种由两种单独的多肽组成的络合物，而在分枝杆菌和人中，所有七种反应都是通过单一的多肽进行。将此分类为I型FAS。
FAS抑制剂 已经表明，许多化合物抑制脂肪酸合酶(FAS)。FAS抑制剂可以通过化合物抑制纯化FAS的酶活性的能力进行确认。通过测定结合到脂肪酸中的放射性标记前体(即，炔基-CoA或丙二酰基-CoA)，或者通过分光光度法测定NADPH的氧化，可以测定FAS活性。(Dils等人，Methods Enzymol.，3574-83)。
表1，在下阐述，列出若干FAS抑制剂。
在脂肪酸合成路径的四种酶当中，FAS是优选的抑制靶标，因为FAS唯一在脂肪酸合成路径内起作用，而其它三种酶涉及到其它细胞功能。因此，抑制其它三种酶中的一种更可能影响正常细胞。在由FAS进行的7种酶催化步骤当中，由缩合酶(即，β-酮脂酰合成酶)和烯酰还原酶催化的步骤是减少或停止脂肪酸合成的抑制剂的最常见候选。依据结构和功能很好地对FAS络合物的缩合酶进行表征。缩合酶的活性位点包含一种关键的半胱氨酸硫醇，其是抗血脂药例如抑制剂浅蓝菌素的靶标。
缩合酶的优选抑制剂包括各种化学化合物，包括烷基化剂、氧化剂和能够进行二硫化物交换的试剂。酶的结合袋优选长链，E，E，二烯烃。
首要的是，含侧链二烯烃和一种对硫醇盐阴离子表现出反应的基团的试剂可能是一种好的缩合酶抑制剂。浅蓝菌素[(2S，3R)-2，3-环氧-4-氧代-7，10十二二烯酰基酰胺]是一个例子
浅蓝菌素与脂肪酸合酶的缩合酶的活性部位中关键的半胱氨酸硫醇基团共价结合，使这种关键酶催化步骤失活(Funabashi等人J.Biochem.，105751-755，1989)。虽然已经指明浅蓝菌素具有其它活性，但是这些或者存在于微生物中，这些微生物可能不是人细胞的相关模型(例如，真菌中胆固醇合成的抑制，Omura(1976)，Bacteriol.Rev.，40681-697；或病毒中减少的RNA合成，Perez等人(1991)，FEBS，280129-133)，在基本上更高的药物浓度下出现(在5mg/ml时抑制病毒性HIV蛋白酶，Moelling等人(1990)，FEBS，261373-377)或可以是抑制内源性脂肪酸合成的直接结果(B淋巴细胞和巨噬细胞中的抗原加工的抑制，Falo等人(1987)，J.Immunol.，1393918-3923)。某些数据表明浅蓝菌素没有特定抑制蛋白质的肉豆蔻酰化(Simon等人J.Biol.Chem.，2673922-3931，1992)。
更多一些FAS抑制剂公开在美国专利申请号08/096，908以及其1994年1月24日申请的CIP中，其内容在此引入作为参考。包括脂肪酸合酶、柠檬酸裂解酶、CoA羧化酶和苹果酸酶的抑制剂。
Tomoda及同事(Tomoda等人Biochim.Biophys.Act 921595-5981987；Omura等人J.Antibiotics 391211-12181986)描述了三氮菌素C(有时称为WS-1228A)，一种天然存在的酰基辅酶A合成酶抑制剂，其是Streptomyces sp.SK-1894的一种产物。三氮菌素C的化学结构是1-羟基-3-(E，E，E-2′，4′，7′-undecatrienylidine)三氮烯。在8.7μM时，三氮菌素C引起大鼠肝酰基辅酶A合成酶50％的抑制；一种有关的化合物，三氮菌素A，通过一种与长链脂肪酸竞争的机理抑制酰辅酶A合成酶。酰基辅酶A合成酶的抑制对动物细胞来说是毒性的。Tomoda等人(Tomoda等人，J.Biol.Chem.2664214-4219，1991)教导了在1.0μM时，三氮菌素C引起Raji细胞中的生长抑制，以及还表明三氮菌素C抑制Vero细胞和Hela细胞的生长。此外，tomoda等人教导了酰基辅酶A合成酶在动物细胞中是重要的，抑制该酶具有致死作用。
在美国专利号5,981,575(其内容在此引入作为参考)中所示的一族化合物(γ-取代的-α-亚甲基-β-羧基-γ-丁内酯)抑制脂肪酸的合成，抑制肿瘤细胞的生长以及引起体重减轻。在治疗用途上，与天然产物浅蓝菌素相比，575专利中公开的化合物具有一些优点[1]它们不含有浅蓝菌素的高活性环氧基团，[2]它们在水溶液中是稳定的并且是可溶的，[3]它们可以通过两步合成反应制备，因此可以容易地大量制备，以及[4]它们容易被氚化成高比活性，以便进行生化分析和药理学分析。这族化合物的合成，其是脂肪酸合酶抑制剂，描述在‘575专利中，也描述了它们用作治疗表达FAS的肿瘤细胞的手段，以及它们用作减少体重的手段。‘575专利还公开了任何脂肪酸合酶抑制剂全身地减少脂肪细胞物质(脂肪细胞数量或大小)的应用，作为减少体重的方法。
在小鼠和人中，脂肪酸合成的主要部位是肝脏(参见Roncari，Can.J.Biochem.，52221-230，1974；Triscari等人，1985，Metabolism，34580-7；Barakat等人，1991，Metabolism，40280-5)，泌乳的乳腺(参见Thompson等人，Pediatr.Res.，19139-143，1985)和脂肪组织(Goldrick等人，1974，Clin.Sci.Mol.Med.，46469-79)。
脂肪酸合成抑制剂作为抗微生物剂 最初从cephalosporium caerulens的培养肉汤中分离得到的浅蓝菌素作为潜在的抗真菌抗生素。浅蓝菌素的化学结构是(2R，3S)-环氧-4-氧代-7，10-反，反-十二烷酸酰胺。现已证明，它的作用机理是通过不可逆结合，抑制β-酮脂酰基-ACP合酶，是脂肪酸的生物合成所需的所述的缩合酶。现已将浅蓝菌素分类为抗真菌剂，主要是抗念珠菌属(candida)和Saccharomyces sp.。此外，表明其抗某些细菌、放线菌和分枝杆菌的一些体外活性，但是还没有发现抗结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)活性。没有对脂肪酸合成抑制剂和特别是浅蓝菌素抗原生动物例如鼠弓形体(Toxoplasma gondii)或其它感染性真核病原体例如卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)、兰伯贾弟虫(Giardia lamblia)、plasmodium sp.、阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)、隐孢子虫属(Cryptosporidium)、锥虫属(Trypanosoma)、利氏曼虫属(Leishmania)和血吸虫属(Schistosoma)和裂体吸虫的活性进行评价。
对治疗特别敏感的感染性疾病是这样的疾病，其在感染动物的可及外表面造成损伤。可及外表面包括可以通过非侵入性方法(没有割破或穿透皮肤)达到的所有表面，包括皮肤表面本身、粘膜例如覆盖鼻腔、口腔、胃肠道或尿道表面的那些、以及肺面例如肺泡囊。易感疾病包括(1)皮真菌病或癣，尤其是由小孢子菌属(Microsporum)、发癣菌属(Trichophyton)、表皮癣菌属(Epidermophyton)或粘膜皮肤念珠菌(Mucoculaneous candidiasis)引起的；(2)mucotic角膜炎，尤其是由曲霉菌属(Aspergillus)、镰刀菌属(Fusarium)或念株菌属引起的；(3)阿米巴角膜炎，尤其是由棘阿米巴属(Acanthamoeba)引起的；(4)胃肠道疾病，尤其是由兰伯贾第虫、内阿米巴属(Entamoeba)、隐孢子虫属或念株菌属(在无免疫应答的动物中最常见)；(5)泌尿生殖器感染，尤其是由白色念株菌(Candida albicans)或阴道毛滴虫引起的；以及(6)肺病，尤其是由结核分枝杆菌、曲霉属或卡氏肺囊虫引起的。对用脂肪酸合成抑制剂治疗敏感的感染生物包括结核分枝杆菌，尤其是抗多种药物的菌株，以及原生动物例如弓形体属(Toxoplasma)。
抑制脂肪酸合成的任何化合物可以用于抑制微生物细胞生长。但是，给予患者的化合物必须是对患者和目标微生物细胞具有不同的毒性。因此，选择这样的抑制剂是有益的，其仅仅或主要影响靶标微生物细胞。
依赖于它们自己内源性合成脂肪酸的真核微生物细胞将表达I型FAS。这可以通过以下两个事实证明即FAS抑制剂是生长抑制性的，以及外部加入脂肪酸可以保护正常的患者细胞而不是这些微生物细胞免受FAS抑制剂作用。因此，防止细胞合成脂肪酸的药剂可以用来治疗感染。在真核生物中，使用底物炔基CoA、丙二酰CoA和NADPH，由I型FAS合成脂肪酸。因此，其它可以将底物送入这种途径的酶也可以对脂肪酸合成的速率产生影响，因此在依赖内源性合成脂肪酸的微生物中是重要的。抑制任何这些酶的表达或活性将影响依赖于内源性合成脂肪酸的微生物细胞的生长。
在各种生物中，I型FAS的产物不同。例如，在真菌S.cerevisiae中，产物主要是与辅酶-A酯化的棕榈酸酯和硬脂酸酯(sterate)。在耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)中，产物是碳长度在16到24之间的饱和脂肪酸辅酶A酯。这些脂质往往被进一步加工，以满足细胞对各种脂质组分的需要。
预期对下游中脂肪酸加工或使用的关键步骤的抑制可以抑制细胞功能，不管是依赖内源性脂肪酸的细胞还是使用由外部供给脂肪酸的细胞，因此，这些下游步骤的抑制剂对依赖内源性脂肪酸的微生物细胞并不具有足够地选择性。但是，现已发现，当给予这些微生物I型脂肪酸合成抑制剂时，可以使它们对通过的下游脂肪酸加工和/或使用抑制剂的抑制更敏感。由于这种协同作用，脂肪酸合成抑制剂与在脂质生物合成和/或使用中的一种或多种下游步骤的抑制剂一起给药，将选择性地对那些依赖内源性合成脂肪酸的微生物细胞产生影响。优选的组合包括一种FAS抑制剂和炔基CoA羧化酶，或者FAS和MAS抑制剂。
当确定哺乳动物被表达I型FAS的生物的细胞感染时，或者如果在患者的生物流体中发现FAS，那么所述的哺乳动物或患者可以通过给予一种脂肪酸合成抑制剂进行治疗(专利号5,614,551)。
抑制神经肽-Y从而降低食欲并刺激体重减轻的描述在国际专利申请No.PCT/US01/05316中，其内容在此引入作为参考。但是该申请没有描述或公开任何在本申请中公开的化合物。
刺激肉碱棕榈酰转移酶-1(CPT-1)以刺激体重减轻描述在美国专利申请序列No.60/354,480中，其内容在此引入作为参考。该申请也没有描述或公开任何在在此公开的化合物。
使用FAS抑制剂抑制癌细胞的生长描述在美国专利No.5,759,837中，其内容在此引入作为参考。该申请没有描述或公开任何在在此公开的化合物。
使用FAS抑制剂抑制癌细胞的生长描述在美国专利No.5,759,837中，其内容在此引入作为参考。但美国专利No.5,759,837没有描述或公开任何在在此公开的化合物。
发明概述 现已发现新类型化合物，其具有各种在治疗上有价值的性质，例如FAS-抑制、NPY-抑制、CPT-1刺激、引起重量减轻的能力以及抗癌和抗微生物性质。
本发明的另一目的是，通过给予一种含药物稀释剂和式I、II、III或IV的化合物的药物组合物，提供一种引起动物和人中重量减轻的方法。
本发明的另一目的是，通过给予人或动物一种含药物稀释剂和式I、II、III或IV的化合物的药物组合物，提供一种刺激CPT-1活性的方法。
本发明的另一目的是，通过给予一种含药物稀释剂和式I、II、III或IV的化合物的药物组合物，提供一种抑制动物或人中神经肽Y合成的方法。
本发明的另一目的是，通过给予一种含药物稀释剂和式I、II、III或IV的化合物的药物组合物，提供一种抑制动物或人中脂肪酸合酶活性的方法。
本发明的另一目的是，通过给予一种含药物稀释剂和式I、II、III或IV的化合物的药物组合物，提供一种治疗动物和人中癌症的方法。
本发明的还有另一目的是，通过给予一种含药物稀释剂和式I、II、III或IV的化合物的药物组合物，提供一种预防动物和人中癌细胞生长的方法。
本发明的还有另一目的是，通过给予一种含药物稀释剂和式I、II、III或IV的化合物的药物组合物，提供一种抑制侵入性微生物细胞生长的方法。
附图的简要说明
图1表示制备硫乳霉素的合成方案。
图2表示制备本发明某些化合物的合成方案。
图3表示制备本发明某些化合物的合成方案。
图4表示制备本发明某些化合物的合成方案。
图5表示制备本发明某些化合物的合成方案。
图6表示制备本发明某些化合物的合成方案。
图7表示制备本发明的一个化合物的合成方案。
图8表示制备本发明某些化合物的合成方案。
图9表示制备本发明某些化合物的两种合成方案。
图10表示制备本发明某些化合物的合成方案。
图11表示本发明某些化合物重量减轻的体内试验结果。
图12表示本发明的一种化合物抗癌活性的体内试验结果。
发明的详细说明 本发明的化合物可以通过常规方法进行制备。一些化合物的合成描述在实施例中。所述化合物可用于治疗肥胖症、癌症或由微生物引起(microbially-based)的感染。
本发明的一种实施方案是具有以下通式的化合物
其中 R1＝H R2＝-OH、-OR5、-OCH2C(O)R5、-OCH2C(O)NHR5、-OC(O)R5、-OC(O)OR5、-OC(O)NHNH-R5或-OC(O)NR5R6，其中R5是H、C1-C20烷基、环烷基、链烯基、芳基、芳烷基或烷芳基，以及其中R5可以任选含有卤原子； R3和R4，彼此相同或不同，是C1-C20烷基、环烷基、链烯基、芳基、芳烷基或烷芳基； 条件是当R2是-OH、-OCH3或-OC(O)CF3以及R3是-CH3时，那么R4不是-CH2CH2OH、-CH2-(C6H5)或-CH＝CH-CH3， 以及进一步的条件是当R3是-CH2-(C6H5)时，那么R4不是-CH3或-CH2CH3。
(应该理解，当适用时，上述化合物的酮互变异构形式也包括在式I中) 在一种优选实施方案中，R5是C1-C10烷基、环烷基、链烯基、芳基、芳烷基或烷芳基。
在另一种优选实施方案中，R3是-H或-CH3。
在另一种优选实施方案中，R4是n-C6-C8烷基。
本发明的另一种实施方案是式II的化合物
其中 R6＝C2-C20烷基、环烷基、链烯基、炔基、芳基、芳烷基、烷芳基、-CHR10OR11、-CO(O)R10、-C(O)NR10R11、-CH2C(O)R10或-CH2C(O)NHR10，其中R10和R11每个独立地是H、C1-C10烷基、环烷基、链烯基、芳基、芳烷基或烷芳基，但是R6不是二-、三-或四-烷基取代的苯基， R7＝-OH、-OR12、-OCH2C(O)R12、-OCH2C(O)NHR12、-OC(O)R12、-OC(O)OR12、-OC(O)NHNH-R12或-OC(O)NR12R13，其中R12和R13每个独立地是H、C1-C20烷基、环烷基、链烯基、芳基、芳烷基或烷芳基，以及其中R12和R13可以任选含有卤原子； R8和R9，彼此相同或不同，是C1-C20烷基、环烷基、链烯基、芳基、芳烷基或烷芳基， 条件如下 当R6是乙基时，如果R8和R9不相同，那么R8或R9不是乙基、-CH2COOH、-CH2C(O)NH2、-CH2-(C6H5)，但是R8和R9可以相同，即使R6是乙基，以及 当R6是苯基以及R7是-OH时，R8和R9不能同时是-CH3和-丙烯基，以及 当R6是苯基时，R8和R9不能同时是-CH3或-CH2-(C6H5)。
在一种优选实施方案中，R10是C1-C10烷基、环烷基、链烯基、芳基、芳烷基或烷芳基。
在另一种优选实施方案中，R8是-H或-CH3。
在另一种优选实施方案中，R9是n-C6-C8烷基。
本发明的另一种实施方案包括式III的化合物
其中 R14＝-C(O)R18，其中R18是H、C1-C10烷基、环烷基、链烯基、芳基、芳烷基或烷芳基，任选含有卤原子， R15＝-OH、-OR19、-OCH2C(O)R19、-OCH2C(O)NHR19、-OC(O)R19、-OC(O)OR19、-OC(O)NHNH-R19或-OC(O)NR19R20，其中R19和R20每个独立地是H、C1-C20烷基、环烷基、链烯基、芳基、芳烷基或烷芳基，以及其中R19和R20每个可以任选含有卤原子； R16和R17，彼此相同或不同，是C1-C20烷基、环烷基、链烯基、芳基、芳烷基或烷芳基， 条件如下 -当R14是-C(O)CH3以及R16和R17不相同时，那么R16或R17不是香叶基、p-氟苄基、肉桂基、法呢基、甲基或-CH2-(C6H5)，以及 -当R14是-C(O)C6H5时，那么R16或R17都不是甲基。
本发明的另一种实施方案是一种药物组合物，包含药物稀释剂和式I、II、III或IV的化合物
其中 R21＝H、C1-C20烷基、环烷基、链烯基、芳基、芳烷基或烷芳基、-CH2OR25、-C(O)R25、-CO(O)R25、-C(O)NR25R26、-CH2C(O)R25或-CH2C(O)NHR25，其中R25和R26每个独立地是H、C1-C10烷基、环烷基、链烯基、芳基、芳烷基或烷芳基， R22＝-OH、-OR27、-OCH2C(O)R27、-OCH2C(O)NHR27、-OC(O)R27、-OC(O)OR27、-OC(O)NHNH-R27或-OC(O)NR27R28，其中R27和R28每个独立地是H、C1-C20烷基、环烷基、链烯基、芳基、芳烷基或烷芳基，以及其中R27和R28每个可以任选含有卤原子； R23和R24，彼此相同或不同，是C1-C20烷基、环烷基、链烯基、芳基、芳烷基或烷芳基。
本发明的组合物可以以单位剂型的形式给予人和其它动物，例如片剂、胶囊、丸剂、散剂、颗粒剂、无菌肠胃外溶液或悬浮液、口服溶液或悬浮液、含合适量所述化合物的水包油和油包水乳剂、栓剂以及流体悬浮液或溶液。当在本说明书中使用时，术语″药物稀释剂″和″药物载体″具有相同的含义。对于口服给药，可以制备固体或流体单位剂型。对于固体组合物例如片剂的制备，所述化合物可以与常规组分例如滑石粉、硬脂酸镁、磷酸二钙、硅酸铝镁、硫酸钙、淀粉、乳糖、阿拉伯胶、甲基纤维素和作为药物稀释剂或载体的功能相似的材料。如下制备胶囊所述化合物与一种惰性药物稀释剂混合，接着将所述的混合物填充到一个合适大小的硬明胶胶囊中。如下制备软明胶胶囊用机器将化合物与一种可接受的植物油、轻质液状石蜡或其它惰性油的浆液进行包囊。
可以制备流体单位剂型或口服给药例如糖浆剂、酏剂和悬浮液。所述的剂型可与糖、芳香调味剂和防腐剂一起溶于含水赋形剂中，形成一种糖浆剂。借助于悬浮剂例如阿拉伯胶、黄蓍胶、甲基纤维素等等，可以用一种含水赋形剂制备悬浮液。
可以使用所述的化合物和一种无菌赋形剂制备用于肠胃外给药的流体单位剂型。在制备溶液中，可以将所述化合物溶于注射用水中，过滤灭菌，然后填充到合适的瓶或安瓿中并密封。佐剂例如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂可以溶于赋形剂中。填充到瓶中后，可以将组合物冷冻并在真空中除去水。然后，可以称重冷冻干燥粉末，在使用前重构。
预见的本发明化合物临床治疗适应症包括(1)由侵入性微生物例如葡萄球菌属(staphylococci)和肠道球菌属(enterococci)引起的感染；(2)在细胞过度表达脂肪酸合酶的许多组织中出现的癌症，以及(3)由于摄入过量卡路里引起的肥胖症。治疗的剂量和持续时间取决于各种因素，包括(1)患者的年龄、体重和器官功能(例如肝脏和肾功能)；(2)所治疗疾病过程的性质和程度，以及任何现有显著的并存病和服用的伴随药物，以及(3)与药物有关的参数例如产生治愈所需的给药途径、给药频率和持续时间、以及药物的治疗指数。通常，为了达到在靶标位置约1μg/ml-10μg/ml的有效浓度的目的，选择剂量以使血清水平达到1ng/ml-100ng/ml。
实施例 本发明将通过下列实施例进行说明，但是本发明并不受这些实施例的限制 按照如下所述合成了本发明的一系列化合物。某些化合物的生物学活性如下测定对每个化合物测试[1]纯化人FAS的抑制，[2]整个细胞中脂肪酸合成活性的抑制以及[3]对培养的MCF-7人乳腺癌细胞的细胞毒性，已知该细胞具有高水平的FAS和脂肪酸合成活性，使用结晶紫和XTT试验。选择低细胞毒性水平的化合物，然后在Balb/C小鼠中进行体重减轻测试。此外，在Balb/C小鼠中测试来自表现出显著体重减轻以及低水平细胞毒性组的代表性化合物对脂肪酸氧化和肉碱棕榈酰转移酶-1(CPT-1)活性的影响，以及通过Northern分析对下丘脑NPY表达的影响。还测试了一些化合物抗革兰氏阳性和/或阴性菌的活性。
化合物的化学合成
(2S，5R)-2-叔丁基-5-甲基-1，3-氧硫杂环戊烷(oxathiolan)-4-酮(1)。1向(S)-硫代乳酸1(4.0g，37.7mmol)在戊烷(24mL)中的溶液中加入三甲基炔基醛(4.5mL，41.5mmol)和三氟乙酸(TFA)(48μL)。使用迪安-斯达克榻分水器，将溶液在回流下加热20小时。冷却后，除去溶剂，得到1和2的顺∶反混合物(2.5∶1)(6.4g，99％)。重结晶(戊烷/Et2O(8∶1)-78℃)，得到纯的1[α]D24＝-38(c 0.4，CHCl3)。1HNMR(300MHz，CDCl3)顺式异构体δ0.99(s，9H)；1.53(d，J＝7Hz，3H)；3.94(q，J＝7Hz，1H)；5.17(s，1H)。外消旋的1同样从(±)-硫代乳酸中制备。
一般方法A.(2S，5R)-2-(叔丁基)-5-(1-羟基-2-甲基-2-丁烯基)-5-甲基-1，3-氧硫杂环戊烷-4-酮(3)。在-78℃下，向二异丙胺(0.6mL，4.6mmol)在THF(8.0mL)中的混合物中加入正丁基锂(3.3mL，1.4M，在正己烷中)，所得溶液在0℃搅拌30分钟，然后冷却至-78℃。然后，在-78℃下，通过套管滴加在THF中的1(800mg，4.6mmol)，所得溶液在-78℃下搅拌30分钟。然后，在-78℃下，通过套管加入在THF(1.4mL)中的反式2-甲基-2-丁烯醛(0.4mL，4.6mmol)。在-78℃下搅拌1.5小时后，加入1N的HCl(25mL)，溶液用Et2O(3 x 30mL)萃取。合并的有机物进行干燥(MgSO4)，过滤，然后蒸发。快速色谱(10％的EtOAc/己烷，rf＝0.1)，得到3(955mg，81％)，是1.6∶1的非对映体的混合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(大多数的非对映体)0.99(s，9H)，1.40(s，3H)，1.63(d，J＝6.7Hz，3H)，1.69(m，3H)，4.36(s，1H)，5.25(s，1H)，5.60-5.65(m，1H)；(少量的非对映体)0.98(s，9H)，1.59(s，3H)，1.63(d，J＝6.7Hz，3H)，1.72(m，3H)，4.25(s，1H)，5.07(s，1H)，5.60-5.64(m，1H)13C NMR(75MHz，CDCl3)δ(大多数的非对映体)12.5，13.2，24.3，24.8，60.7，81.8，87.9，126.3，133.8，178.3；IR(ATR)3466，1743cm-1。C13H22O3S的分析计算值C，60.4；H，8.58；实测值C，60.4；H，8.60。
(±)-(2-(叔丁基)-5-(1-羟基-2-辛烯基)-5-甲基-1，3-氧硫杂环戊烷-4-酮(4)。按照一般方法A，由(±)1(800mg，4.59)和2-反辛烯醛(0.58mL，5.1mmol)，经快速色谱法(10％ EtOAc/己烷)后，获得4(1.1g，81％)，是1.2∶1的非对映体混合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)大多数的非对映体δ0.85(t，J＝7.2Hz，3H)，0.97(bs，9H)，1.18-1.35(m，6H)，1.56(s，3H)，2.00-2.08(m，2H)，2.38(d，J＝5Hz，1H)，4.15-4.19(m，1H)，5.13(s，1H)，5.45-5.59(dd，J＝7，14Hz，1H)，5.72-5.77(m，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.7，22.3，24.7，28.5，31.3，32.1，35.2，60.6，78.8，87.4，127.2，136.5，175.7.1H NMR(300MHz，CDCl3)少量的非对映体1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝7.2Hz，3H)，0.97(s，9H)，1.18-1.35(m，6H)，1.40(s，3H)，2.00-2.07(m，2H)，2.31(d，J＝5Hz，1H)，4.25-4.30(m，1H)，5.27(s，1H)，5.45-5.59(dd，J＝7，14Hz，1H)，5.79-5.83(m，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.7，22.3，23.9，24.8，28.5，31.2，32.1，35.3，61.1，78.3，87.8，127.2，137.2，177.0.IR(NaCl)2959，1765cm-1.C16H28O3S的分析计算值C，63.9；H，9.39；实测值C，63.9；H，9.41.
(±)-2-(叔丁基)-5-(1-羟基-2-己烯基)-5-甲基-1，3-氧硫杂环戊烷-4-酮(5)。按照一般方法A，由(±)1(800mg，4.59)和2-反己烯醛(0.58mL，5.1mmol)，经快速色谱法(10％的EtOAc/己烷)后，获得5(813mg，65％)，是2.4∶1的非对映体混合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ0.87(t，J＝7.3Hz，3H)，0.99(s，9H)，1.38-1.45(m，2H)，1.41(s，3H)，2.02(q，J＝7Hz，2H)，4.26-4.31(m，1H)，5.27(s，1H)，5.45-5.63(m，1H)，5.74-5.83(m，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.6，21.6，24.1，24.9，35.2，37.2，61.2，78.5，87.9，127.3，137.3，179.1.IR(NaCl)29601765cm-1. 分析计算值C14H24O3SC，61.7；H，8.88；实测值C，61.74；H，8.89.
(±)-2-(叔丁基)-5-(1-羟基-2-甲基-2-戊烯基)-5-甲基-1，3-氧硫杂环戊烷-4-酮(6)。按照一般方法A，由(±)1(800mg，4.59mmol)和2-甲基-2-戊烯醛(0.58mL，5.0mmol)，经快速色谱法(10％的EtOAc/己烷)后，获得6(884mg，71％)，是1.8∶1的非对映体混合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.93-0.99(m，12H)，1.40(s，3H)，1.68(s，3H)，2.01-2.06(m 2H)，4.33(d，J＝6.9Hz，1H)，5.24(s，1H)，5.48-5.54(m，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ12.6，13.8，20.9，21.1，24.8，35.4，60.6，81.8，87.9，132.6，133.9，178.3.IR(NaCl)2961，1767cm-1. 分析计算值C14H24O3SC，61.7；H，8.88；实测值C，61.6；H，8.90.
一般方法B.(2S，5R)-2-(叔丁基)-5-(2-甲基-丁-1，3-二烯基)-5-甲基-1，3-氧硫杂环戊烷-4-酮(7)。向冷却至0℃的3(3.23g，12.5mmol)在Cl(CH2)2Cl(115mL)中的溶液中加入NEt3(4.2ml，30mmol)和2，4-二硝基苄基亚磺酰氯(6.6g，28.2mmol)。溶液温热至室温，持续30分钟，或者直到TLC(10％ EtOAc/己烷，rf＝.55大多数rf＝.48少量)表明非对映的亚磺酰酯(sulfenate esters)的完全生成为止。然后，混合物于90℃回流4小时，或者通过TLC表明亚磺酰酯的转化完成为止。冷却至0℃后，然后加入戊烷(50mL)，将此混合物通过硅藻土过滤，蒸发。快速色谱法(2％的EtOAc/己烷，rf＝0.4)，得到纯的7(2.3g，75％)。 [α]D24＝+237(c 1.0，CHCl3).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.98(s，9H)，1.72(s，3H)，1.86(s，3H)，5.06(d，J＝10.7Hz，1H)，5.18(s，1H)，5.24(d，J＝17.3Hz，1H)，5.70(s，1H)，6.24-6.33(dd，J＝10.7，17.3Hz，1H)；13C NMR(300MHz，CDCl3)δ12.5，25.1，26.6，34.9，53.7，87.4，113.7，132.6，137.8，140.9，176.3； 分析计算值G13H20O2SC，64.9；H，8.38.实测值C，63.8；H，8.28.
(±)-2-(叔丁基)-5-(辛-1，3-二烯基)-5-甲基-1，3-氧硫杂环戊烷-4-酮(8)。按照一般方法B，由(±)4(306mg，1.00mmol)，经快速色谱法(2％的EtOAc/己烷)后，获得8(212mg，75％，4∶1反∶顺)。1H NMR(300MHz，CDCl3)反式异构体δ0.84-0.89(m，3H)，1.01(s，9H)，1.22-1.38(m，4H)，1.61(s，3H)，2.04-2.11(m，2H)，5.03(s，1H)，5.58(d，J＝15Hz，1H)，5.64-5.78(m，1H)，0.96-6.05(m，1H)，6.19(dd，J＝10.1，15.1Hz，1H).13C NMR(75MHz，CDCl3)反式异构体δ13.6，22.0，22.5，25.2，31.2，32.1，34.6，55.9，87.0，128.5，129.6，130.2，137.2，174.7.IR(NaCl)2959，1772cm-1；HRMS(EI)m/z计算值C16H26O2S(M+)282.1653，观察值282.1681.
(±)-2-(叔丁基)-5-(己-1，3-二烯基)-5-甲基-1，3-氧硫杂环戊烷-4-酮(9)。按照一般方法B，由(±)5(690mg，2.53mmol)，经快速色谱法(2％的EtOAc/己烷)后，获得9(461mg，72％，4∶1反∶顺)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.95-1.01(m，12H)，1.61(s，3H)，2.07-2.12(m，2H)，5.05(s，1H)，5.58(d，J＝15Hz，1H)，5.81(dt，J＝6，15Hz，1H)，6.00-6.05(m，1H)，6.15-6.24(dd，J＝10，15.2Hz，1H)；13C(75MHz，CDCl3)δ13.3，24.8，25.3，25.7，34.5，56.1，87.2，127.4，129.4，130.0，138.9，175.1.IR(NaCl)2966，1771cm-1.HRMS(ES)m/z计算值C14H22O2SNa+(M+Na+)277.1232，观察值277.1237.
(±)-2-(叔丁基)-5-(2-甲基-戊-1，3-二烯基)-5-甲基-1，3-氧硫杂环戊烷-4-酮(10)。按照一般方法B，由(±)6(500mg，2.51mmol)，经快速色谱法(2％的EtOAc/己烷)后，获得10(342mg，73％，14∶1反∶顺)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.00(s，9H)，1.70(s，3H)，1.75(d，J＝6.6Hz，3H)，1.85(s，3H)，5.18(s，1H)，5.57(s，1H)，5.75(dq，J＝6.6，16Hz，1H)，5.97(d，J＝16Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)d 13.0，18.0，25.2，27.4，34.8，53.8，87.4，125.4，129.3，135.5，137.8，176.3.IR(NaCl)2961，1770cm-1.HRMS(EI)m/z计算值C14H22O2S(M+)254.1341，观察值254.1309.
一般方法C。2-(R)-2，4-二甲基-2-硫代丙酰基-己-3，5-二烯酸乙酯(12)。将碳酸铯(332mg，1.0mmol)直接加入到7(250mg，1.0mmol)在EtOH(3.9mL)中的溶液中。20分钟后，将此混合物倒入到NH4Cl(饱和)/1N的HCl(15mL，3∶1)的混合物中，然后用Et2O(3 x 20mL)萃取。合并的有机物进行干燥(MgSO4)，过滤，蒸发，得到粗的11。向11中加入CH2Cl2(7.5mL)，接着将溶液冷却至0℃。加入NEt3(0.14mL，1.0mmol)和丙酰氯(.09mL，1.0mmol)，接着在0℃搅拌所述溶液。40分钟后，加入NH4Cl(饱和)(20mL)，接着将此混合物用CH2Cl2(3 x15mL)萃取。合并的有机物进行干燥(MgSO4)，过滤，蒸发。快速色谱法(5％的EtOAc/己烷，rf＝0.4)，得到纯的12(261mg，72％)。
[α]D23＝+4.2(c 0.9，CHCl3)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.11(t，J＝7.4Hz，3H)，1.23(t，J＝7.0Hz，3H)，1.83(s，3H)，1.85(s，3H)，2.48(q，J＝7.5Hz，2H)，4.18(q，J＝6.9Hz，2H)，5.02(d，J＝10.7Hz，1H)，5.18(d，J＝17.3Hz，1H)，5.73(s，1H)，6.24-6.34(dd，J＝10.7，17.3Hz,1H)；13C NMR(300MHz，CDCl3)δ9.43，12.9，13.9，26.1，36.5，55.2，61.9，113.1，131.4，138.2，141.4，172.1，198.9.IR(NaCl)2981，1735，1694cm-1.HRMS(EI)m/z计算值C13H20O3S(M+)256.1133观察值256.1127.
(±)-2-硫代炔基-2-甲基-癸-3，5-二烯酸乙酯(13)。按照一般方法C，由8(200mg，0.71mmol)和炔基氯(55μL，0.78mmol)，经快速色谱法(5％的EtOAc/己烷)后，获得13(119g，59％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.84-0.89(m，3H)，1.23(t，J＝7.1Hz，3H)，1.28-1.38(m，4H)，1.71(s，3H)，2.01-2.08(m，2H)，2.23(s，3H)，4.18(q，J＝7.1Hz，2H)，5.66-5.76(m，2H)，5.89-6.03(m，1H)，6.20(dd，J＝10.3，15.3Hz，1H).；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.8，13.9，22.2，22.8，29.9，31.2，32.3，56.1，61.9，128.4，129.2，132.2，137.1，171.6，194.6.IR(NaCl)2930，1737，1694cm-1.HRMS(ES)m/z .计算值C15H24O3SNa+(M+Na+)307.1338观察值307.1339.
(±)-2-硫代炔基-2-甲基-辛-3，5-二烯酸乙酯(14)。按照一般方法C，由9(353mg，1.39mmol)和炔基氯(98mL，1.39mmol)，经快速色谱法(5％的EtOAc/己烷)后，获得14(142g，40％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.83(t，J＝7.3Hz，3H)，1.24(t，J＝7.1Hz，3H)，1.72(s，3H)，2.03-2.17(m，2H)，2.25(s，3H)，4.17(q，J＝7.1Hz，2H)，5.72-5.81(m，2H) 5.95-6.04(dd，J＝10，15Hz，1H)，6.18-6.27(dd，J＝10，15Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.2，13.9，22.8，25.6，30.2，56.1，61.9，128.2，128.4，132.1，138.5，171.6，194.8.IR(NaCl)2929，1736，1693cm-1；HRMS(ES)m/z计算值C13H20O3SNa+(M+Na+)279.1025观察值279.1032.
(±)-2-硫代炔基-2，4-二甲基-庚-3，5-二烯酸乙酯(15)。按照一般方法C，由10(369mg，1.46mmol)和炔基氯(103μL，1.46mmol)，经快速色谱法(5％的EtOAc/己烷)后，获得15(271mg，77％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.26(t，J＝7.1Hz，3H)，1.74(d，J＝6.6Hz，3H)，1.81(s，3H)，1.85(s，3H)，2.25(s，3H)，4.17(q，J＝7.1Hz，2H)，5.56(s，1H)，5.65-5.73(dq，J＝6.6，16Hz，1H)，5.99(d，J＝16Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.8，14.1，18.2，26.2，30.5，55.6，62.0，125.2，128.3，135.7，138.5，172.2，194.8.IR(NaCl)2926，1737，1694cm-1；HRMS(EI)m/z计算值C13H20O3S(M+)256.1133观察值256.1118.
(±)-2-硫代炔基-2，4-二甲基-己-3，5-二烯酸乙酯(16)。按照一般方法C，由(±)7(380mg，1.56mmol)和炔基氯(110μL，1.56mmol)，经快速色谱法(5％的EtOAc/己烷)后，获得16(230mg，61％)。 1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.25(t，J＝7.1Hz，3H)，1.84(s，3H)，1.87(s，3H)，2.24(s，3H)，4.21(q，J＝7.1Hz，2H)，5.03(d，J＝10.6Hz，1H)，5.21(d，J＝17.3Hz，1H)，5.74(s，1H)，6.26-6.35(dd，J＝10.6，17.3Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ12.9，13.9，25.9，30.1，55.8，62.0，113.3，131.3，138.3，141.3，182.3，194.6.IR(NaCl)2982，1735，1692cm-1.
一般方法D.5-(R)-4-羟基-3，5-二甲基-5-(2-甲基-丁-1，3-二烯基)-5-H-噻吩-2-酮(17)(硫乳霉素)。在-78℃下，向在THF(18.5mL)中的12(315mg，1.23mmol)中加入LiHMDS(3.1mL，3.1mmol，1.0M，在THF中)，将所述溶液缓慢温热至-5℃。然后，将溶液倒入到1N的HCl(25mL)中，用EtOAc(3 x 15mL)萃取。合并的有机物进行干燥(MgSO4)，过滤，蒸发。将此粗混合物倒入到NaHCO3(饱和，15mL)中，用Et2O(3 x 10mL)萃取。然后，用1N的HCl将水层酸化至pH 3(pH试纸)，用Et2O(3 x 10mL)萃取，接着用EtOAc(2 x 10mL)萃取。合并的有机物进行干燥(MgSO4)，过滤，蒸发，得到纯的17。(182mg，70％，96％ee)。用己烷/丙酮(3∶1)重结晶，得到旋光富集的17。
[α]D24＝+174(c 0.6，MeOH)，mp 119.5-121℃(lit[α]D20+176(c 1.0，MeOH)，mp 120℃)2.1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.72(s，3H)，1.76(s，3H)，1.91(s，3H)，5.05(d，J＝10.7Hz，1H)，5.23(d，J＝17.3Hz，1H)，5.58(s，1H)，6.23-6.33(dd，J＝10.7，17.3Hz，1H)；13C NMR(300MHz，CDCl3)δ7.60，12.0，29.8，55.3，110.6，113.9，129.1，140.3，140.7，179.2，196.7.IR(NaCl)3422，1607cm-1.分析计算值C11H14O2SC，62.8；H，6.71；实测值C，62.1，6.71.
(±)-4-羟基-5-甲基-5-辛-1，3-二烯基-5-H-噻吩-2-酮(18)。按照一般方法D，由13(62mg，0.22mmol)得到18(21mg，41％)。
1HNMR(300MHz，CDCl3)(酮式互变体)δ0.88(t，J＝6.9Hz，3H)，1.19-1.41(m，4H)，1.75(s，3H) 2.03-2.19(m，2H)，3.22(d，J＝21Hz，1H)，3.51(d，J＝21Hz，1H)，5.67(d，J＝15Hz，1H)，5.80(dt，J＝7，17Hz，1H)，6.02(dd，J＝10，15Hz，1H)，6.37(dd，J＝10，15Hz，1H).1H NMR(300MHz，MeOD)烯醇式互变体δ0.97-1.03(m，3H)，1.36-1.53(m，4H)，1.87(s，3H)，2.15-2.22(m，2H)，5.78(d，J＝15Hz，1H)，5.82-5.90(m，1H)，6.10-6.19(m，1H)，6.38(dd，J＝10.3，15.4Hz，1H)；13C(75MHz，MeOD)烯醇式互变体δ14.4，23.3，25.2，32.6，33.4，60.9，102.1(m)，130.7，131.7，132，7，137.5，188.9，196.9.IR(NaCl)2927，1588cm-1；HRMS(ES) 计算值C13H18O2SNa+(M+Na+)261.0911；观察值261.0912.
(±)-4-羟基-5-甲基-5-己-1，3-二烯基-5-H-噻吩-2-酮(19)。按照一般方法D，由14(364mg，0.46mmol)得到19(180mg，60％)。
1H(300MHz，CDCl3，以2.3∶1的酮式互变体∶烯醇式互变体的混合物存在)酮式互变体δ1.00(t，J＝7.4Hz，3H)；1.76(s，3H)；2.09-2.16(m，2H)；3.21(d，J＝21Hz，1H)；3.52(d，J＝21Hz，1H)；5.70(d，J＝15Hz，1H)；5.86(dt，J＝15Hz，6Hz，1H)，6.02(dd，J＝10，15Hz，1H)，6.38(dd，J＝15，10Hz，1H)；1H NMR(300MHz，MeOD)烯醇式互变体δ1.09(t，J＝7.4Hz，3H)，1.87(s，3H)，2.14-2.29(m，2H)，5.78(d，J＝15Hz，1H)，5.87(dt，J＝15，6.57Hz，1H)，6.09-6.18(m，1H)，6.38(dd，J＝10.2，15Hz，1H)；13C NMR(75MHz，MeOD)烯醇式互变体δ14.1，25.2，26.9，61.0，101(m)，129.7，131.7，132.7，138.9，188.9，197.1.IR(NaCl)2965，1592cm-1；HRMS(ES)m/z计算值C11H14O2SNa+(M+Na+)233.0607，观察值233.0626.
(±)-4-羟基-5-甲基-5-(2-甲基-戊-1，3-二烯基)-5-H-噻吩-2-酮(20)。按照一般方法D，由15(226mg，0.9mmol)得到20(95mg，49％)。 1H NMR(300MHz，CDl3)(酮式互变体)δ1.75(s，3H)，1.77(d，J＝3.2Hz，3H)，1.84(s，3H)，3.42(d，J＝1.5Hz，2H)，5.43(d，J＝21Hz，1H)，5.66(bs，1H)，5.78(dd，J＝6，22Hz，1H)，6.04(d，J＝15Hz，1H)；1H NMR(300MHz，MeOD)
δ1.80-1.85(m，6H)，1.90(s，3H)，5.59(s，1H)，5.80-5.95(m，1H)，6.17(d，J＝15Hz，1H)；13C NMR(75MHz，MeOD)(烯醇式互变体)δ13.4，18.4，30.7，59.2，101.2(m)126.2，128.4，136.9，140.6，190.2，197.6.IR(NaCl)2929，1593cm-1；HRMS(ES)m/z计算值C11H14O2SNa+(M+Na+)233.0607观察值233.0597.
(±)-4-羟基-5-甲基-5(2-甲基-丁-1，3-二烯基)-5-H-噻吩-2-酮(21)。按照一般方法D，由16(181mg，0.75mmol)得到21(66mg，45％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)(酮式互变体)δ1.78(s，3H)，1.86(s，3H)，3.43(d，J＝5.6Hz，2H)，5.12(d，J＝10.6Hz，1H)，5.27(d，J＝17.3Hz，1H)，5.83(s，1H)，6.27-6.37(dd，J＝10.6，17.3Hz，1H).1H NMR(300MHz，MeOD)
δ1.79(s，3H)，1.84(s，3H)，5.04(d，J＝10.7Hz，1H)，5.25(d，J＝17.3Hz，1H)，5.66(s，1H)，6.36(dd，J＝10.7，17.3Hz，1H)；13C NMR(75MHz，MeOD)δ12.6，30.4，59.0，102(m)，116.9，131.4，140.6，142.3，189.9，197.3.HRMS(EI)m/z计算值C10H12O2S+(M+)196.0552观察值196.0552.
(±)-5-苄基-4-羟基-5-甲基-5-H-噻吩-2-酮(22)。按照一般方法D，由31(1.4mg，5.0mmol)得到22(500mg，45％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.71(s，3H)，2.89(ab q，J＝22Hz，2H)，3.17(ab q，J＝14Hz，2H)，7.26(m，5H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)d 26.2，46.6，48.5，67.9，127.7，128.6，130.6，134.9，195.3，207.3.
一般方法E.(±)-2-叔丁基-5-甲基-5-辛基-[1，3]-氧硫杂环戊烷-4-酮(23)。在-78℃下，向LiHMDS(6.2mL，6.20mmol，1M，在THF中)在THF(9.7mL)中的混合物中，通过套管滴加在THF(9.60mL)中的(±)-1(1.00g，5.75mmol)，然后将所得溶液在-78℃下搅拌30分钟。然后，在-78℃下通过套管加入在THF(4mL)中的三氟甲磺酸辛酯(1.63g，6.20mmol)。在-78℃下搅拌2小时后，加入1N的HCl(10mL)，所述溶液用Et2O(3 x 15mL)萃取。合并的有机物进行干燥(MgSO4)，过滤，蒸发。快速色谱法(2％的EtOAc/己烷)，得到纯的23，是可分离非对映体的2∶1-6∶1的混合物(1.33g，81％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6.5Hz，3H)，0.99(s，9H)，1.24-1.26(m，12H)，1.54(s，3H)，1.72-1.84(m，2H)，5.13(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.9，22.6，24.9，25.1，25.9，29.2，29.3，29.5，31.8，35.2，41.2，55.3，86.5，177.7.IR(NaCl)3443，2929，1829，1769cm-1； 分析计算值C16H30O2SC，67.0；H，10.6；实测值C，66.3；H，10.5.HRMS(EI)m/z计算值C16H30O2S+(M+)286.1967观察值286.1969.
(±)-2-叔丁基-5-甲基-5-己基-[1，3]-氧硫杂环戊烷-4-酮(24)。由(±)-1(500mg，2.87mL)和三氟甲磺酸己酯(738mg，2.87mmol)，按照一般方法E，获得24(557mg，75％)，产物是可分离非对映体的2∶1-6∶1的混合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.87(t，J＝6.5Hz，3H)，0.99(s，9H)，1.24-1.29(m，8H)，1.54(s，3H)，1.72-1.80(m，2H)，5.13(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.9，22.5，24.9，24.9，25.1，25.9，29.1，31.6，41.2，55.3，86.7，177.8.IR(NaCl)分析计算值C14H26O2SC，65.1；H，10.1；实测值C，64.5；H，10.1.HRMS(EI)m/z计算值C14H26O2S+(M+)258.1654观察值286.1653..
一般方法F.(±)-2-炔基硫烷基-2-甲基-癸酸乙酯(26)。向在EtOH(14.1mL)中的23(650mg，2.27mmol)中加入NaOEt(2.1M)(2.16mL，4.54mmol)(刚刚从在EtOH(4.0mL)中的金属Na(200mg，8.3mmol)制备)，然后将所述溶液在室温下进行搅拌。2小时后，将所述溶液倒入到NH4Cl(饱和)/1N HCl(25mL，3∶1)中，然后将这种混合物用Et2O(3x 20mL)萃取。然后，合并的有机物用H2O(3 x 25mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，蒸发，得到粗的25。在0℃下，向溶于CH2Cl2(26mL)中的25中加入NEt3(0.5mL，3.49mmol)和炔基氯(0.3mL，3.49mmol)。在0℃下40分钟后，加入NH4Cl(饱和)(30mL)，溶液用CH2Cl2萃取。合并的有机物进行干燥(MgSO4)，过滤，蒸发。快速色谱法(5％的EtOAc/己烷)，得到纯的26(542mg，79％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.87(t，J＝6.9Hz，3H)；1.22-1.27(m，15H)，1.61(s，3H)，1.75-1.84(m，2H)，2.26(s，3H)，4.18(q，J＝7.1Hz，2H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.9，14.1，22.6，23.4，24.4，29.1，29.2，29.6，30.3，31.8，38.3，55.8，61.5，173.1，195.8.IR(NaCl)3430，1868，1693，1644cm-1；分析计算值C15H28O3SC，62.5；H，9.78；实测值C，62.6；H，9.83.
(±)-2-炔基硫烷基-2-甲基-辛酸乙酯(28)。由24(940mg，3.63mmol)和炔基氯(0.3mL，3.63mmol)按照一般方法F，经快速色谱法(5％的EtOAc/己烷)后，获得28(727mg，77％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)d0.86(t，J＝6.9Hz，3H)，1.22-1.27(m，11H)，1.61(s，3H)，1.75-1.79(m，2H)，2.25(s，3H)，4.17(q，J＝7Hz，2H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.9，14.1，22.4，23.4，24.4，29.3，30.3，31.5，38.4，55.7，61.5173.0，194.7.IR(NaCl)3449，1736，1694cm-1；分析计算值C13H24O3SC，59.9；H，9.29；实测值C，60.6；H，9.44.
(±)-2-甲基2-丙酰基硫烷基-癸酸乙酯(30)。由23(613mg，2.14mmol)和丙酰氯(0.19mL，2.14mmol)，按照一般方法F，经快速色谱法(5％的EtOAc/己烷)后，获得30(484mg，75％)。 1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.84(t，J＝6.9Hz，3H)，1.10(t，J＝7.5Hz，3H)，1.19-1.24(m，15H)，1.58(s，3H)，1.72-1.77(m，2H)，2.48(q，J＝7.5Hz，2H)，4.17(q，J＝7Hz，2H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ9.45，14.1，14.1，22.6，23.5，24.5，29.1，29.3，29.7，31.8，36.9，38.5，55.5，61.4，173.2，199.2.分析计算值C16H30O3SC，63.5；H，10.0；实测值C，63.7；H，10.0.
(±)-2-炔基硫烷基-2-甲基-3-苯基-癸酸乙酯(31)。由5-苄基-2-叔丁基-5-甲基-[1，3]氧硫杂环戊烷-4-酮1(1.2g，4.7mmol)按照一般方法F，经快速色谱法(5％的EtOAc/己烷)后，获得31(954mg，76％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.19(t，J＝7Hz，3H)，1.55(s，3H)，2.26(s，3H)，3.13(q，J＝13Hz，2H)，4.13(q，J＝7Hz，2H)，7.1(m，2H) 7.2(m，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.0，23.1，30.3，43.6，56.3，61.7，127.2，128.1，130.7，135.4，172.8，194.8.
一般方法G.(±)-4-羟基-5-甲基-5-辛基-5-H-噻吩-2-酮(32)。在-78℃下，向在甲苯(27mL)中的26(500mg，1.7mmol)中加入LiHMDS(4.3mL，4.3mmol，1.0M，在THF中)，将所述溶液缓慢温热至-5℃。然后，将溶液倒入到1N的HCl(40mL)中，用EtOAc(3 x 25mL)萃取。合并的有机物进行干燥(MgSO4)，过滤，蒸发。快速色谱法(20％的EtOAc/2％的CH3CO2H/己烷)，得到32(308mg，73％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)(酮式互变体)δ0.86(t，J＝6Hz，3H)，1.19-1.24(m，10H)，1.48-1.53(m，2H)，1.65(s，3H)，1.77-1.85(m，1H)，1.94-2.01(m，1H)，3.36(s，2H)；1H NMR(300MHz，MeOD)
0.87-0.89(m，3H)，1.29(m，10H)，3.29(s，3H)，1.81-1.87(m，2H)；13C NMR(75MHz，MeOD)
δ14.7，23.8，26.4，27.1，30.5，30.6，30.8，33.2，39.8，61.3，103.1(m)，189.8，197.8.(NaCl)3422，1593cm-1； 分析计算值C13H22O2SC，64.4；H，9.15；实测值C，64.3；H，9.10.
(±)-4-羟基-5-甲基-5-己基-5-H-噻吩-2-酮(33)。由28(715mg，2.75mmol)按照一般方法G，经快速色谱法(20％的EtOAc/2％的CH3CO2H/己烷)后，获得33(402mg，69％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(酮式互变体)0.86(t，J＝7Hz，3H)，1.27(bs，8H)，1.68(s，3H)，1.94-2.26(m，2H)，3.35(s，2H).1H NMR(300MHz，MeOD)
δ0.89(t，J＝6.5Hz，3H)，1.21-1.36(m，7H)，1.46-1.54(m，1H)，1.64(s，3H)，1.80-1.90(m，2H)；13C NMR(75MHz，MeOD)δ14.6，23.8，26.3，27.1，30.5，32.9，39.8，61.3，103.5(m)，189.8，197.8.分析计算值C11H18O2SC，61.6；H，8.47；实测值C，61.7；H，8.67.
(±)-4-羟基-3，5-二甲基-5-辛基-5-H-噻吩-2-酮(34)。由30(469mg，1.55mmol)和NaHMDS(3.87mL，3.87mmol，1.0M，在THF中)，按照一般方法G，获得34(397mg，70％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)
δ0.86(t，J＝6.8Hz，3H)，1.23(s，11H)，1.30-1.45(m，1H)，1.59(s，3H)，1.74(s，3H)，1.84-1.88(m，2H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ7.48，14.0，22.6，25.2，25.9，29.2，29.4，29.6，31.8，38.5，58.2，110.5，180.9，198.0.IR(NaCl)2927，1601cm-1
一般方法H.(±)-4-甲氧基-5-甲基-5-辛基-5-H-噻吩-2-酮(35)。向冷却至-40℃的在DMF(1.1mL)中的32(70mg，0.27mmol)中加入NaH(14mg，0.35mmol，60％，在矿物油中)，允许所述溶液温热并在0℃搅拌30分钟。然后，直接加入硫酸二甲酯(50μl，0.55mmol)，允许混合物温热，并在室温下搅拌2.5小时。加入NH4Cl(饱和/1NHCl(3∶1，10mL)，所述溶液用Et2O(3 x 10mL)萃取。合并的有机物用H2O(3 x 15mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，蒸发。经快速色谱法(15％的EtOAc/己烷)，得到纯的35(59mg，80％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝7Hz，3H)；1.07-1.18(m，1H)，1.23(s，10H)，1.43-1.49(m，1H)，1.61(s，3H)，1.74-1.81(m，2H)，3.81(s，3H)，5.29(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.0，22.6，25.1，26.4，29.1，29.3，29.5，31.8.38.8，59.3，59.4，101.3，187.3，193.8.分析计算值C14H24O2SC，65.6；H，9.50；实测值C，65.8；H，9.50.
(±)-4-甲氧基-5-甲基-5-己基-5-H-噻吩-2-酮(36)。由33(40.3mg，0.19mmol)和硫酸二甲酯(35μL，0.37mmol)，按照一般方H，经快速色谱法(15％的EtOAc/己烷)后，获得36(25mg，58％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6.7Hz，3H)，1.08-1.13(m，1H)，1.24(s，6H)，1.35-1.39(m，1H)，1.61(s，3H)，1.75-1.82(m，2H)，3.81(s，3H)，5.30(s，1H)；13C NMR(75Mz，CDCl3)δ14.0，22.5，25.1，26.4，29.2，31.5，38.9，59.4，59.4，101.3，187.3，193.8.
(±)-4-甲氧基-3，5-二甲基-5-辛基-5-H-噻吩-2-酮(37)。由34(40mg，0.16mmol)、KH(27mg，0.20mmol，30％，在矿物油中)和硫酸二甲酯(30μL，0.31mmol)，按照一般方法H，获得37(30mg，71％)。 1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝7Hz，3H)，1.06-1.09(m，1H)，1.24(s，10H)，1.41-1.48(m，1H)，1.55(s，3H)，1.71-1.79(m，2H)，1.98(s，3H)，4.09(s，3H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ9.59，14.1，22.6，25.2，26.5，29.2，29.4，29.6，31.8，38.9，58.7，59.8，111.3，180.2，195.7.IR(NaCl)2927，1676，1631，1582cm-1. 分析计算值C15H26O2SC，66.6；H，9.69；实测值C，66.5；H，9.67.
(±)-5-苄基-4-甲氧基-5-甲基-5-H-噻吩-2-酮(38)。由22(50mg，0.23mmol)和硫酸二甲酯(44μL，0.45mmol)，按照一般方法H，获得38(38mg，74％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.65(s，3H)，3.1(q，J＝7Hz，2H)，3.84(s，3H)，5.19(s，1H)，7.21(m，5H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ26.0，45.0，59.3，59.9，101.9，127.2，128.0，130.4，135.9，186.5，192.9.
(±)-5-甲基-5-辛基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸乙酯(39)。由32(39mg，0.16mmol)和溴乙酸乙酯(36μL，0.32mmol)，按照一般方法H，经快速色谱法(15％的EtOAc/己烷)后，获得39(39mg，73％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6Hz，3H)，1.24(s，11H)，1.29(t，J＝7Hz，3H)，1.47-1.48(m，1H)，1.68(s，3H) 1.85-1.88(m，2H)，4.25(q，J＝7Hz，2H)，4.54(s，2H)，5.20(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.1，14.1，22.6，25.1，26.4，29.2，29.3，29.5，31.8，38.8，59.7，61.9，67.9，102.3166.2，185.3，193.4.IR(NaCl)2928，1762，1682，1612cm-1. 分析计算值C17H28O4SC，62.2；H，8.59实测值C，62.2；H，8.67.
(±)-5-甲基-5-己基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸乙酯(40)。由33(20mg，0.09mmol)和溴乙酸乙酯(20μL，0.2mmol)，按照一般方法H，经快速色谱法(15％的EtOAc/己烷)后，获得40(18mg，67％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)d 0.86(t，J＝6.8Hz，3H)，1.24-1.27(m，7H)，1.32(t，J＝7Hz，3H)，1.47-1.48(m，1H)，1.68(s，3H)，1.84-1.88(m，2H)；4.25(q，J＝7Hz，2H)，4.54(s，2H)，5.21(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.1，14.1，22.5，25.1，26.4，29.2，31.6，38.9，59.7，61.9，68.0，102.3，166.2，1853，193.3.IR(NaCl)2932，1762，1682，1612cm-1. 分析计算值C15H24O4SC，59.9；H，8.05实测值C，59.9；H，8.08.
(±)-4-(4-氯-丁氧基)-5-甲基-5-辛基-5H-噻吩-2-酮(41)。由32(47mg，0.18mmol)和3-碘代-1-氯丁烷(40μL，0.36mmol)，按照一般方法H，经快速色谱法(20％的EtOAc/己烷)后，获得41(46mg，85％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝7Hz，3H)，1.07-1.27(m，1H)，1.24(s，10H)1.48-1.51(m，1H)，1.62(s，3H)，1.75-1.82(m，2H)，1.89-1.98(m，4H)，3.59(t，J＝5.9Hz，2H)，3.95-3.98(m，2H)，5.28(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.1，22.6，25.1，26.0，26.5，29.0，29.2，29.3，29.5，29.7，31.8，44.1，59.6，71.7，101.6，186.1，193.8.分析计算值C17H29ClO2SC，61.3，H，8.78，实测值C，61.9；H，9.01.
(±)-4-(4-氯-丁氧基)-5-甲基-5-己基-5H-噻吩-2-酮(42)。由33(36mg，0.17mmol)和3-碘代-1-氯丁烷(40μL，0.34mmol)，按照一般方法H，经快速色谱法(20％的EtOAc/己烷)后，获得42(32mg，75％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝5.1Hz，3H)，1.09-1.14(m，1H)，1.25(s，6H)，1.44-1.53(m，1H)，1.63(s，3H)，1.77-1.85(m，2H)，1.90-2.00(m，4H)，3.59(t，J＝4.5Hz，2H)，3.95-3.99(m，2H)，5.28(s，1H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.7，22.3，25.1，26.1，26.4，29.1，29.1，31.5，39.0，43.9，59.5，71.6，101.5，185.9，192.9.IR(NaCl)2927，1683，1607cm-1. 分析计算值C15H25ClO2SC，59.1；H，8.27；实测值C，59.3；H，8.39.
(±)-4-烯丙氧基-5-甲基-5-辛基-5H-噻吩-2-酮(43)。由32(31mg，0.12mmol)和烯丙基溴(21μL，0.25mmol)，按照一般方法H，获得43和44的3∶1的混合物(26mg，74％)，其可以使用快速色谱法(15％的EtOAc/己烷)进行分离和提纯。O-烷基化的产物43。 1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6.3Hz，3H)，1.12-1.17(m，1H)，1.24(s，10H)，1.45-1.49(m，1H)，1.64(s，3H)，1.77-1.84(m，2H)，4.47(d，J＝5.6Hz，2H)，5.29(s，1H)，5.31(d，J＝11Hz，1H)，5.39(d，J＝17Hz，1H)，5.90-5.99(ddd，J＝5.6，11，17Hz，1H)；13CNMR(75MHz，CDCl3)δ14.1，22.6，25.1，26.5，29.2，29.3，29.5，31.8，38.9，59.7，72.8，102.0，119.5，130.8，185.8，193.8.IR(NaCl)3441，1681，1609cm-1. 分析计算值C16H26O2SC，68.0，H，9.20，实测值C，68.1；H，9.34.(44)C-烷基化的产物1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6.5Hz，3H)，1.25(m，12H)，1.54(s，3H)，1.79-1.84(m，2H)，2.43-2.47(m，2H)，5.05-5.11(m，2H)，5.57-5.69(1H).
(±)-4-烯丙氧基-5-甲基-5-己基-5H-噻吩-2-酮(45)。由33(270mg，1.3mmol)和烯丙基溴(0.2mL，2.52mmol)，按照一般方法H，获得45和46的2.3∶1的混合物(205mg，58％)，其可以使用快速色谱法(15％的EtOAc/己烷)进行分离和提纯。
1H NMR(300MHz，CDCl3)(45)(0-烷基化)δ0.84(t，J＝7Hz，3H)，1.09-1.17(m，1H)，1.23(s，6H)，1.40-1.51(m，1H)，1.62(s，3H)，1.73-1.83(m，2H)，4.46(d，J＝5.6Hz，2H)，5.33(d，J＝10Hz，1H)，5.38(d，J＝17Hz，1H)，5.28(s，1H)，5.87-5.98(ddd，J＝5.6，10，17Hz，1H)；13C NMR(75Mz，CDCl3)δ14.0，22.5，25.1，26.5，29.2，31.6，38.9，59.7，72.8，101.9，119.6，130.7，185.8，193.9. 分析计算值C14H22O2SC，66.10；H，8.72；实测值C，66.04；H，8.72.(46)(C-烷基化)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝7Hz，3H)，1.24(bs，8H)，1.54(s，3H)，1.81-1.84(m，2H)，2.42-2.48(m，2H)，5.05-5.10(m，2H)，5.56-5.67(m，1H).
(±)-4-烯丙氧基-3，5-二甲基-5-辛基-5H-噻吩-2-酮(47)。(±)-烯丙基-3，5-二甲基-5-辛基-噻吩-2，4-二酮(48)。由34(70mg，0.27mmol)和烯丙基溴(47μL，0.55mmol)，按照一般方法H，获得47和48的2.3∶1的混合物(C-烷基化数据没有给出)(67mg，82％)，其可以使用快速色谱法(20％的EtOAc/己烷)进行分离和提纯。
(47).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝7Hz，3H)，1.06-1.48(m，12H)，1.58(s，3H)，1.71-1.82(m，2H)，1.94(s，3H)，4.80-4.82(m，2H)，5.28-5.46(m，2H)，5.89-5.03(m，1H)；13CNMR(75MHz，CDCl3)δ9.65，14.0，22.6，25.2，26.6，29.2，29.3，29.6，31.8，39.2，57.5，72.5，118.2.119.5，132.6，179.4，193.8.IR(NaCl)2855.1676.1628.1580cm-1.(48).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝7Hz，3H)，1.16-1.47(m，15H)，1.57(s，3H)，1.74-1.96(m，2H)，2.42-2.46(m，2H)，.5.04-5.10(m，2H)，5.53-5.67(m，1H).
(±)-5-甲基-5-4-丙-2-炔基氧基-5H-噻吩-2-酮(49)。由33(45mg，0.21mmol)和炔丙基溴(37μl，0.21mmol)，按照一般方法H，获得49(21mg，40％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)d 0.86(t，J＝7Hz，3H)，1.11-1.20(m，1H)，1.24(s，6H)，1.41-1.49(m，1H)，1.63(s，3H)，1.76-1.86(m，2H)，2.59(t，J＝2.5Hz，1H)，4.62(d，J＝3.7Hz，1H)，4.63(d，J＝3.7Hz，1H)，5.43(s，1H).
(±)-5-甲基-5-辛基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸叔丁酯(50)。由32(60mg，0.25mmol)和溴乙酸叔丁酯(73μL，0.49mmol)，按照一般方法H，经快速色谱法(15％的EtOAc/己烷)后，获得50(62mg，70％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝7Hz，3H)，1.24(s，12H)，1.49(s，9H)，1.68(s，3H)，1.83-1.86(m，2H)，4.43(s，2H)，5.19(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.0，22.6，25.2，26.3，28.1，29.2，29.3，29.5，31.8，38.9，59.7，68.5，83.4，102.1，165.2，185.5，193.4.分析计算值C19H32O4SC，64.0；H，9.05；实测值C，64.1；H，9.08.
(±)-5-甲基-5-己基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸叔丁酯(51)。由33(169mg，0.79mmol)和溴乙酸叔丁酯(0.23mL，1.58mmol)，按照一般方法H，经快速色谱法(15％的EtOAc/己烷)，获得51(206mg，80％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.82(t，J＝6.8Hz，3H)，1.21(s，8H)，1.47(s，9H)，1.64(s，3H)，1.78-1.83(m，2H)，4.41(s，2H)，5.15(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.0，22.5，25.1，26.3，28.0，29.1，31.5，38.9，59.6，68.4，83.4，102.1，165.2，185.5，193.4.
(±)-5-苯基-5-甲基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸叔丁酯(52)。由22(150mg，0.68mmol)和溴乙酸叔丁酯(0.20mL，1.36mmol)，按照一般方法H，经快速色谱法(20％的EtOAc/己烷)，获得52(159mg，74％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.49(s，9H)，1.69(s，3H)，3.17(s，2H)，4.44(q，J＝8Hz，2H)，5.13(s，1H)，7.24(m，5H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ25.8，28.1，45.0，60.1，68.4，83.6，102.6，127.2，128.1，130.5，135.9，165.3，184.9，192.8.
一般方法I.(±)-5-甲基-5-辛基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸(53)。向溶于CH2Cl2(1.4mL)中的50(65mg，0.18mmol)中加入三氟乙酸(TFA)(0.7mL)，然后将所述溶液在室温下搅拌4小时。蒸发溶剂，粗物料进行色谱分离(20％的EtOAc/2％的CH3CO2H/己烷)，得到纯的53(48mg，89％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6.9Hz，3H)，1.24(s，11H)，1.47-1.48(m，1H)，1.68(s，3H)，1.84-1.88(m，2H)，4.62(s，2H)，5.31(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.1，22.6，25.1，26.1，29.2，29.3，29.5，31.8，38.9，60.1，67.7，102.4，169.8，185.8，195.4.IR(NaCl)3442，1645cm-1；分析计算值C15H24O4SC，59.9；H，8.05；实测值C，60.0；H，8.09.
(±)-5-甲基-5-己基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸(54)。由51(177mg，0.54mmol)和三氟乙酸(TFA)(2.61mL)，按照一般方法I，经快速色谱法(20％的EtOAc/2％的CH3CO2H/己烷)后，获得54(144mg，98％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝6.8Hz，3H)，1.24(s，7H)，1.44-1.47(m，1H)，1.68(s，3H)，1.84-1.91(m，2H)，4.62(s，2H)，5.33(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.1，22.6，25.1，26.1，29.2，31.6，38.9，60.3，67.7，102.4，169.8，185.9，196.1.
(±)-5-苯基-5-甲基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸(55)。由52(117mg，0.35mmol)和三氟乙酸(TFA)(1.4mL)，按照一般方法I，经快速色谱法(30％的EtOAc/2％的CH3CO2H/己烷)后，获得55(68mg，70％)。
1H NMR(300MHz，MeOD)δ1.63(s，3H)，3.11(dd，J＝6.8Hz，13.6Hz，2H)，4.59(s，2H)，5.21(s，1H)，7.1(m，5H)；13C NMR(75MHz，MeOD)δ26.7，45.7，61.9，67.1，103.9，128.3，129.1，131.8，137.5，169.3，187.3，195.8.
(±)-N-烯丙基-(5-甲基-5-辛基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酰胺(41)。向冷却的53(64mg，0.21mmol)在CH2Cl2(1.1mL)中的溶液(0℃)中加入1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)(49mg，0.25mmol)、DMAP(3mg，0.02mmol)和烯丙胺(18μL，0.25mmol)，然后将混合物温热至室温并搅拌12小时。将所述溶液倒入到1N的HCl/(饱和)(1∶3)溶液中，并用Et2O(3 x 10mL)萃取。合并的有机物进行干燥(MgSO4)，过滤，蒸发，得到粗的56。快速色谱法(50％的EtOAc/己烷)，得到纯的56(50mg，66％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝7Hz，3H)，1.12-1.22(m，1H)，1.24(s，10H)，1.41-1.51(m，1H)，1.68(s，3H)，1.82-1.87(m，2H)，3.98(app t，J＝6Hz，2H)，4.50(s，2H)，5.20(d，J＝10Hz，1H)，5.22(d，J＝17.3Hz，1H)，5.35(s，1H)，5.80-5.90(ddd，J＝6，10，17Hz，1H)，6.19(bs，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.0，22.6，25.3，26.5，29.2，29.4，29.5，31.8，39.1，41.6，59.3，70.3，103.4，117.2，133.2，165.3，183.9，192.8.分析计算值C18H29NO3SC，63.7；H，8.61；实测值C，63.4；H，8.67.
一般方法J.(±)-(5-甲基-5-己基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-炔基-甲基氨基乙酸酯(57)。向54(42.4mg，0.15mmol)在CH3CN(0.86mL)的溶液中加入三(2-氧代-3-噁唑啉基)氧化膦3(91mg，0.20mmol)、甲基氨基乙酸酯盐酸盐(19.7mg，0.16mmol)和NEt3(43μL，0.31mmol)，接着将溶液在室温下搅拌20分钟。将混合物倒入到NH4Cl(饱和)/1N HCl(10mL)的溶液中，并用Et2O(3 x 10mL)萃取。合并的有机物干燥(MgSO4)，过滤，蒸发，色谱分离(40-50％的EtOAc/己烷)，得到纯的57(43mg，80％)。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝6.8Hz，3H)，1.23-1.26(m，7H)，1.49-1.55(m，1H)，1.65(s，3H)，1.84-1.90(m，2H)，3.79(s，3H)，4.11(d，J＝5Hz，1H)，4.12(d，J＝5Hz，1H)，4.47(s，2H)，5.36(s，1H)，6.76(bs，1H).
(±)-(5-甲基-5-己基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-炔基氨基乙酸酯(58)。向冷却至0℃的溶于THF/H2O(0.5mL，3∶1)中的57(22mg，0.06mmol)中加入LiOH(3mg，0.07mmol)，接着将此溶液搅拌45分钟。然后，将所述混合物倒入到HCl(10mL，1N)的溶液中，并用Et2O(3 x10mL)萃取。合并的有机物进行干燥(MgSO4)，过滤，蒸发，得到粗的58。快速色谱法(50％的EtOAc/2％的CH3CO2H/己烷)，得到纯的58(19mg，86％)。 1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝6.7Hz，3H)，1.25(s，7H)，1.48-1.52(m，2H)，1.68(s，3H)，2.08-2.10(m，2H)，4.05(s，2H)，4.56(s，2H)，5.41(s，1H).
(±)N-(4-溴丁基)-(5-甲基-5-己基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酰胺(59)。向54(61mg，0.22mmol)和1-氨基丙醇氢溴酸盐(50mg，0.23mmol)中，按照一般方法J，经快速色谱法(50％的EtOAc/己烷)，得到59(65mg，74％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6.9Hz，3H)，1.12-1.15(m，1H)，1.23-1.28(s，6H)，1.46-1.53(m，1H)，1.69(s，3H)，1.82-1.88(m，2H)，2.14(quint.J＝6Hz，2H)，3.42(m，2H)，3.54(q，J＝6.3Hz，2H)，4.43(s，2H)，5.35(s，1H)6.45(bs，1H).
(±)N-烯丙基-(5-苯基-5-甲基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酰胺(60)。向55(72mg，0.26mmol)和烯丙胺(21μL，0.28mmol)中，按照一般方法J，经快速色谱法(梯度10-50％的EtOAc/己烷)后，得到60(39mg，47％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.73(s，3H)，3.17(s，2H)，3.93(m，2H)，4.41(s，2H)，5.22(m，2H)，5.24(s，1H)，5.80(m，1H)，5.83(s，1H)，7.24(m，5H)13C NMR(75MHz，CDCl3)δ26.0，41.6，45.4，59.7，70.3，103.9，117.1，127.5，128.3，130.2，133.3，135.6，165.3，183.4，192.0.
一般方法K.(±)-4-碳酸乙酯-5-甲基-5-辛基-5H-噻吩-2-酮(61)。向冷却至-78℃的32(95mg，0.39mmol)在THF(1.8mL)中的溶液中加入LiHMDS(0.58mL，0.58mmol，1M，在THF中)，所述溶液在-78℃下搅拌30分钟。然后，加入氯甲酸乙酯(60μL，0.62mmol)，混合物转入到冰浴中，然后缓慢温热至室温。在室温下1小时后，将所述混合物倒入到HCl(1N)/NH4Cl(饱和)(10mL)的溶液中，并用Et2O(3x 10mL)萃取。合并的有机物干燥(MgSO4)，过滤，蒸发，色谱分离(20％的EtOAc/己烷)，得到纯的61(111mg，91％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝6.9Hz，3H)，1.12-1.17(m，11H)，1.38(t，J＝7Hz，3H)，1.42-1.50(m，1H)，1.67(s，3H)，1.82(d，J＝9Hz，1H)，1.85(d，J＝9Hz，1H)，4.33(q，J＝7Hz，2H)，6.38(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.0，14.0，22.6，25.2，25.8，29.1，29.2，20.4，31.8，38.4，60.1，66.0，112.8，150.2，175.6，193.9.IR(NaCl)2928，1782，1690，1625cm-1. 分析计算值C16H26O4SC，61.1；H，8.33；实测值C，61.5；H，8.32.
(±)-4-碳酸甲酯-5-甲基-5-辛基-5H-噻吩-2-酮(62)。由32(73mg，0.30mmol)和氯甲酸甲酯(37μL，0.48mmol)，按照一般方法K，经快速色谱法(20％的EtOAc/己烷)后，获得62(63mg，70％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝7Hz，3H)，1.15-1.21(m，1H)，1.22(s，10H)，1.41-1.51(m，1H)，1.66(s，3H)，1.81(d，J＝9Hz，1H)，1.83(d，J＝9Hz，1H)，3.92(s，3H)，6.39(s，1H)；13CNMR(75MHz，CDCl3)δ14.1，22.6，25.2，25.9，29.2，29.3，29.4，31.8，38.4，56.2，60.2，112.9，150.9，175.5，194.1.IR(NaCl)3382，1626，1560，1542cm-1. 分析计算值C15H24O4SC，59.9；H，8.05；实测值C，60.3；H，8.10.
(±)-4-碳酸烯丙酯-5-甲基-5-辛基-5H-噻吩-2-酮(63)。由32(51.5mg，0.21mmol)和氯甲酸烯丙酯(33μL，0.32mmol)，按照一般方法K，经快速色谱法(15％的EtOAc/己烷)后，获得63(46.3mg，67％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝7，3H)，1.16-1.23(bs，10H)，1.41-1.51(m，2H)，1.67(s，3H)，1.81-1.87(m，2H)，4.74(app dt，J＝6，1.3Hz，2H)，5.37(app dq，J＝10.3，1.02Hz，1H)，5.44(appdq，J＝15.9，1.02Hz，1H)，5.90-6.0(m，1H)，6.39(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)14.0，22.6，25.2，25.8，29.1，29.2，29.4，31.8，38.4，60.1，70.2，112.9，120.6，130.23，150.0，175.5，193.7.IR(NaCl)2927，1782，1691，1606cm-1.分析计算值C17H26O4SC，62.5；H，8.03；实测值C，62.6；H，8.07.
(±)-4-丙酰基5-甲基-5-辛基-5H-噻吩-2-酮(64)。由32(40mg，0.17mmol)和丙酰氯(20μL，0.22mmol)，按照一般方法K，经快速色谱法(15％的EtOAc/己烷)后，获得64(23.1mg，47％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝7Hz，3H)，1.12-1.25(m，13H)，1.42-1.49(m，2H)，1.64(s，3H)，1.78-1.84(m，2H)，2.57(q，J＝7.5Hz，2H)，6.39(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ8.71，14.0，22.6，25.1，25.9，27.9，29.1，29.3，29.5，31.8，38.6，60.4，113.8，169.1，177.0，179.9.IR(NaCl)2928，1787，1688cm-1；分析计算值C16H26O3SC，64.4；H，8.78；实测值C，64.3；H，8.89.
(±)-4-碳酸乙酯-5-苯基-5-甲基-5H-噻吩-2-酮(65)。由22(50mg，0.23mmol)和氯甲酸乙酯(35μL，0.36mmol)，按照一般方法K，获得65(67mg，88％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.31(t，J＝7Hz，3H)，1.69(s，3H)，3.15(s，2H)，4.36(q，J＝7Hz，2H)，6.33(s，1H)，7.18-7.27(m，5H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.1，25.3，44.6，60.6，66.2，113.2，127.4，128.2，130.3，135.4，150.1，175.1，193.
4-羟基-3-(1-羟乙基)-5-甲基-5-辛基-5-H-噻吩-2-酮。(66，67)。向溶于己烷的32(247mg，1.02mmol)中加入三乙胺(0.23mL，1.68mmol)和三甲基甲硅烷基氯(0.21mL，1.64mmol)，将所述溶液在室温下搅拌4h。混合物通过硅藻土过滤，蒸发，得到5-甲基-5-辛基-4-三甲基硅烷氧基-5-H-噻吩-2-酮。在-78℃下，向TiCl4(0.7mL，0.7mmol)在CH2Cl2(1.95mL)中的溶液中加入乙醛(54μL，0.97mmol)，然后将这种溶液在-78℃下搅拌5分钟。然后，将溶于CH2Cl2(0.4mL)的5-甲基-5-辛基-4-三甲基硅烷氧基-5-H-噻吩-2-酮通过导管导入到TiCl4/乙醛溶液中，得到一种亮橙色。将此混合物温热，并在0℃下搅拌20分钟。将所述混合物倒入到NH4Cl(饱和)(15mL)中，并用CH2Cl2(3 x 15mL)进行萃取。合并有机物，干燥(MgSO4)，过滤，蒸发。快速色谱法(10％的EtOAc/己烷)，得到纯的66(34mg)和67(24mg)(50％)。(66) 1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6.9Hz，3H)，1.05-1.08(m，1H)，1.24(bs，11H)，1.49(d，J＝6.5Hz，3H，旋转异构体)1.55(d，J＝5.2Hz，3H，旋转异构体)，1.62(s，3H)，1.78-1.82(m，2H)，4.68(q，J＝6.5Hz，1H，旋转异构体)，5.04(q，J＝5.2Hz，1H，旋转异构体).HRMS(ES)m/z 计算值C16H28O3SNa+(M+CH2+Na+)323.1660观察值323.1660.(67)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝6.9Hz，3H)，1.24(bs，12H)，1.47(d，J＝6.6Hz，3H,旋转异构体)，1.54(d，J＝5.4Hz，3H，旋转异构体)，1.59(s，3H)，1.76-1.82(m，2H)，4.65(q，J＝6.3Hz，1H)，5.06(q，J＝5.4Hz，1H).HR(ES)m/z 计算值C16H28O3SNa+(M+CH2+Na+)323.1660观察值323.1660.
一般方法L.3-炔基-4-羟基-5-甲基-5-辛基-5H-噻吩-2-酮。(68)。在0℃下，向在CH2Cl2(1.9mL)中的32(94mg，0.38mmol)中加入NEt3(58μL，0.42mmol)、二甲基氨基吡啶(DMAP)(19mg，0.15mmol)和乙酸酐(43μL，0.47mmol)。所述溶液在0℃搅拌15分钟，然后进行温热，并在室温下搅拌2-14h，或者直到TLC表明反应完成为止。将所述混合物倒入到NH4Cl(饱和)/HCl(1N)(3∶1，8mL)中，并用CH2Cl2(3 x 10mL)萃取。合并有机物，干燥(MgSO4)，过滤，蒸发，得到粗的68。快速色谱法30％的EtOAc/2％的AcOH/己烷，(rf＝0.44)，得到纯的68(83mg，78％)。 1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.84(m，3H)，1.22(bs，10H)，1.48(m，2H),1.65(s，3H)，1.77-1.92(m，2H)，2.55(s，3H).13C NMR (75MHz，CDCl3)δ13.9，22.6，23.8，25.1，26.3，29.1，29.2，29.5，31.7，39.4，59.7，109.7，190.5，195.5，204.9.HRMS (EI)m/z计算值C15H24O3S+(M+)284.1441观察值284.1414.
4-羟基-5-甲基-5-辛基-3-(2，2，2-三氟-炔基)-5H-噻吩-2-酮。(69)。由32(90mg，0.37mmol)、三氟醋酐(114μL，0.81mmol)、二甲基氨基吡啶(DMAP)(18mg，0.15mmol)和NEt3(108μL，0.77mmol)，按照一般方法L，经快速色谱法(40％的己烷/10％的THF/2％的AcOH/EtOAc)后，获得69(107mg，86％)。
1H NMR(300MHz，MeOD)d 0.85(t，J＝6.9Hz，3H)，1.09(m，1H)，1.21(bs，11H)，1.38(s，3H)，1.51-1.60(m，1H)，1.65-1.71(m，1H).HRMS(EI)m/z计算值C15H21F3O3S+(M+)338.1158观察值338.1171.
4-羟基-5-甲基-5-辛基-2-氧代-2，5-二氢-噻吩-3-羧酸甲酯(70)。由32(91mg，0.37mmol)、氯甲酸甲酯(63μL，0.81mmol)、二甲基氨基吡啶(DMAP)(23mg，0.18mmol)和NEt3(108μL，0.77mmol)，按照一般方法L，经快速色谱法(30％的EtOAc/2％的AcOH/己烷-10％的THF/2％的AcOH/EtOAc)后，获得70(66mg，59％，79％基于回收的原料)。
1HNMR(300MHz，MeOD)δ0.86(t，J＝6.9Hz，3H)，1.20(bs，12H)，1.35(s，3H)，1.55(m，1H)，1.71-1.75(m，1H)，3.59(s，3H)；13C NMR(75MHz，MeOD)δ13.3，21.8，24.4，27.0，28.5，28.6，29.0，30.2，31.0，50.4，58.3，124.6，168.1，187.7，196.7.HRMS(EI)m/z计算值C15H24O4S+(M+)300.1389观察值300.1375.
异丙基-氨基甲酸2-甲基-2-辛基-5-氧代-2，5-二氢-噻吩-3-基酯(71)。向溶于己烷的32(46mg，0.19mmol)中加入三乙胺(43μL，0.31mmol)和三甲基甲硅烷基氯(36μL，0.29mmol)，将所述溶液在室温下搅拌4h。混合物通过硅藻土过滤，蒸发，得到5-甲基-5-辛基-4-三甲基硅烷氧基-5-H-噻吩-2-酮，其再溶解在CH2Cl2(0.4mL)中。向此混合物中加入异氰酸异丙酯(19.2mL，0.19mmol)，所述溶液在室温下搅拌2小时。加入NH4Cl(饱和)(5ml)，接着将所述混合物用CH2Cl2(3x 10mL)萃取。合并有机物，干燥(MgSO4)，过滤，蒸发，得到粗的71。快速色谱法(20％的EtOAc/2％的AcOH/己烷)，得到纯的71(35mg，60％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝7.0Hz，3H)，1.14-1.24(m，17H)，1.45(m，1H)，1.63(s，3H)，1.76-1.79(m，2H)，3.81-3.88(m，1H)，5.16(d，J＝7Hz，1H)，6.33(s，1H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ13.9，20.4，22.5，22.8，25.1，25.9，29.1，29.3，29.5，31.8，38.7，44.0，60.2，111.6，149.7，176.2，194.5.
一般方法M.(±)-(5-甲基-5-辛基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸-N′-(2-糠)-酰肼(72)。向53(100mg，0.33mmol)在CH2Cl2(1.61mL)中的冷却溶液(0℃)中加入1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)(128mg，0.43mmol)、DMAP(6.0mg，0.05mmol)和2-糠酰肼(54mg，0.43mmol)。将此混合物在0℃下搅拌30分钟，然后温热至室温并搅拌12h。将所述溶液倒入到NH4Cl(10mL，饱和)中，并用CH2Cl2(3 x 10mL)萃取。合并的有机物进行干燥(Na2SO4)，过滤，蒸发，得到粗的72。快速色谱法(10％的EtOAc/己烷)，得到纯的72(91mg，68％)。 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.84(t，J＝6.6Hz，3H)，1.21(m，11H)，1.43-1.47(m，1H)，1.66(s，3H)，1.81-1.86(m，2H)，4.64(s，2H)，5.42(s，1H)，6.47(dd，J＝1.6，3.6Hz，1H)，7.16(d，J＝4Hz，1H)，7.45(m，1H)，9.32(d，J＝4Hz，1H)，9.44(d，J＝4Hz，1H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.0，22.6，25.3，26.0，29.2，29.3，29.5，31.7，38.8，59.7，69.1，103.0，112.3，116.5，145.1，145.4，156.4，164.2，184.8，193.9.
(±)-(5-甲基-5-辛基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸-N′-乙酰基酰肼(73)。由53(100mg，0.33mmol)和乙酸酰肼(26.8mg，0.36mmol)，按照一般方法M，经快速色谱法(2％的AcOH/EtOAc)，获得73(70.4mg，60％)。 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.85(t，J＝7.2Hz，3H)，1.23(m，11H)，1.48-1.52(m，1H)，1.67(s，3H)，1.84-1.86(m，2H)，2.07(s，3H)，4.64(s，2H)，5.42(s，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.1，20.6，22.6，25.2，26.0，29.2，29.3，29.5，31.8，38.8，59.8，68.9，102.9，163.1，168.1，184.9，194.2.
(±)-(5-甲基-5-辛基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酸-N′-(4-氯-苯基)-酰肼(74)。由53(100mg，0.33mmol)和4-氯苯肼盐酸盐(76.8mg，0.43mmol)，按照一般方法M，经快速色谱法(50％的EtOAc/己烷)，获得74(74mg，53％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6Hz，3H)，1.24(m，11H)，1.46-1.54(m，1H)，1.71(s，3H)，1.82-1.90(m，2H)，4.57(s，2H)，5.39(s，1H)，6.75(d，J＝8.8Hz，2H)，7.18(d，J＝8.8Hz，2H)，7.38(s，1H)，8.09(s，1H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.1，22.6，25.3，26.1，29.2，29.3，29.5，31.8，38.8，59.7，69.7，103.2，114.7，126.4，145.8，129.2，165.9，184.3，193.5.IR(NaCl)2957，1695，1658，1609cm-1.
(±)-N-烯丙基-N-甲基-(5-甲基-5-辛基-2-氧代-噻吩-4-基氧基)-乙酰胺(75)。由53(83mg，0.28mmol)和N-甲基，N-allyalmine(29μL，0.30mmol)，按照一般方法M，经快速色谱法(40％的EtOAc/己烷)，获得75(51mg，52％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.83(t，J＝6.9Hz，3H)，1.22(m，11H)，1.43-1.47(m，1H)，1.67(s，3H)，1.82-1.86(m，2H)，旋转异构体12.91(s，3H)，旋转异构体22.95(s，3H)，旋转异构体13.84(d，J＝4.8.Hz，2H)，旋转异构体23.98(d，J＝6Hz，2H)，旋转异构体14.62(s，2H)，旋转异构体24.65(s，2H)，5.12-5.28(m，2H)，旋转异构体15.18(s，1H)，旋转异构体25.25(s，1H)，5.65-5.81(m，1H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.0，22.5，25.1，26.2，29.1，29.3，29.4，31.7，33.4(旋转异构体233.9)，38.8，50.2(旋转异构体251.0)，59.7，69.0(旋转异构体269.3)，102.3，117.4(旋转异构体2118.2)，131.6(旋转异构体2131.8)，164.5(旋转异构体2164.9)，185.5(旋转异构体2185.6)，193.4.
(±)-4-苄氧基-3，5-二甲基-5-辛基-5-H-噻吩-2-酮(76)。由32(50mg，0.21mmol)和苄基溴(37mL，0.31mmol)，按照一般方法H，经快速色谱法(15％的EtOAc/己烷)，获得76(49mg，75％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.86(t，J＝6.9Hz，3H)，1.24(m，11H)，1.41-1.48(m，1H)，1.66(s，3H)，1.79-1.86(m，2H)，4.98(s，2H)，5.39(s，1H)，7.31-7.42(m，5H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ14.1，22.6，25.0，26.4，29.1，29.3，29.4，31.8，38.8，59.7，74.0，102.2，127.6，128.8，128.8，134.3，185.8，194.1.IR(NaCl)2928，1681，1610cm-1. 参考文献 1.Strijtveen，B.；Kellogg，R.M.Tetrahedron.1987，43，5039-5054。
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3.Kunieda，T.；Nagamatsu，T.；Higuchi，T.；Hirobe，M.Tetrahedron Lett.1988，29，2203-2206。
生物和生化方法 从ZR-75-1人乳腺癌细胞中提纯FAS 人FAS从培养的ZR-75-1人乳腺癌细胞中提纯，该细胞从美国典型培养物保藏中心获得。该方法改编自Linn等人1981和Kuhajda等人1994的方法，使用低渗性裂解、连续性聚乙二醇(PEG)沉淀以及阴离子交换色谱。ZR-75-1细胞在37℃下用5％的CO2在含10％胎牛血清、青霉素和链霉素的RPMI培养基中进行培养。
将10个T150瓶的汇合细胞用1.5ml裂解缓冲液(20mM Tris-HCl，pH 7.5，1mM EDTA，0.1mM苯甲磺酰氟(PMSF)，0.1％ Igepal CA-630)溶解，在冰上匀浆20次的dounce裂解。在4℃下，将裂解产物在JA-20离心机转子(Beckman)中以20,000rpm离心30分钟，上清液用裂解缓冲液加至42ml。将50％的PEG 8000在裂解缓冲液中的溶液缓慢地加入到上清液上，使其最终浓度为7.5％。在4℃摇动60分钟后，溶液在4℃下在JA-20离心机转子(Beckman)中以15,000rpm离心30分钟。然后，将固体PEG 8000加入到上清液中，使其最终浓度为15％。重复如上所述的摇动和离心后，粒状沉淀在4℃下在10ml缓冲液A(20mMK2HPO4，pH 7.4)中再悬浮过夜。0.45μM过滤后，将蛋白质溶液应用于Mono Q5/5阴离子交换柱(Pharmacia)。柱子用缓冲液A以1ml/分钟洗脱15分钟，接着结合材料以在60分钟内升至1M KCl的线性60-ml梯度溶液洗脱。FAS(MW-270kD)通常在0.25M KCl洗脱在三个0.5ml级份中，这些级份使用4-15％的带有考马斯(Bio-Rad)G250着色剂(Bio-Rad)的SDS-PAGE进行确定。FAS蛋白浓度使用考马斯加蛋白测定试剂(Pierce)根据厂商的指示使用BSA作为标准进行测定。此方法制得基本上纯的FAS(＞95％)的制备物，根据Coomassie-染色凝胶进行判断。
FAS酶活性的测定以及化合物IC50的测定 通过在OD340处，在96孔板中，使用分光光度法监测NADPH的丙二酰基-CoA依赖性氧化(Dils等人和Arslanian等人，1975)，来测定FAS活性。每个孔中含有2μg纯化FAS、100mM K2HPO4、pH 6.5、1mM二硫苏糖醇(Sigma)和187.5μM β-NADPH(Sigma)。以2、1和0.5mg/ml在DMSO中制备抑制剂的储备液，当每孔中加入1μL储备液时，最终浓度为20、10和5μg/ml。对于每一个实验，使用浅蓝菌素(Sigma)作为阳性对照，以及DMSO对照、抑制剂和空白(没有FAS酶)所有都是一式两份。
在Molecular Devices SpectraMax Plus分光光度计上进行测定。将含FAS、缓冲液、抑制剂和对照物的平板放在加热至37℃的分光光度计中。使用动力学方案，使含100μl 100mM的K2HPO4，pH 6.5的孔为空白，一式两份，平板在OD340处以10秒间隔读数5分钟，以测定任何NADPH的丙二酰基-CoA非依赖性氧化。将平板从分光光度计上移去，除空白外，每个孔中加入丙二酰基-CoA(67.4μM，每孔的最终浓度)和炔基-CoA(61.8μM，每孔的最终浓度)。使用动力学方案，如同上述对平板进行再次读数，以测定丙二酰基-CoA依赖性NADPH氧化。丙二酰基-CoA依赖性NADPH氧化和非丙二酰基-CoA依赖性NADPH氧化之间的ΔOD340的差异是特定的FAS活性。由于FAS制剂的纯度，非丙二酰基-CoA依赖性NADPH氧化是可忽视的。
化合物抗FAS的IC50通过对每个所测抑制剂浓度的ΔOD340进行绘图，进行线性回归并计算最佳拟合线，r2值和95％的置信区间来测定。化合物产生50％FAS抑制的浓度是IC50。对于每一化合物浓度，由SOFTmax PRO软件(Molecular Devices)，描绘ΔOD340对时间图。使用Prism 3.0版(Graph Pad软件)计算线性回归、最佳拟合线，r2和95％置信区间的计算。
结晶紫细胞生长试验 结晶紫试验测定细胞生长而不是细胞毒性。此试验使用在96孔板中的结晶紫染色的固定细胞，随后进行溶解并在分光光度计上测定OD490。OD490相应于所测的每单位时间的细胞生长。细胞用目的化合物或载体对照进行处理，计算每个化合物的IC50。
为了测定特定化合物抗癌细胞的细胞毒性，将5 x 104 MCF-7人乳腺癌细胞(从美国典型培养物保藏中心获得)平铺在24孔板中，每个孔中含带有10％胎牛血清、青霉素和链霉素的DMEM培养基。在37℃和5％CO2下过夜培养后，将溶于DMSO中的测试化合物以50、40、30、20和10μg/ml的浓度一式三份加入到孔中，加入量为1μl。如果需要的话，测试其它的浓度。将1μl DMSO加入到一式三份孔中，是载体对照。使用C75以10和5μg/ml一式三份作为阳性对照。
孵育72小时后，每个孔中的细胞用0.5ml结晶紫染色剂(0.5％在25％甲醇中)染色。10分钟后，冲洗孔，风干，然后振动下用0.5ml10％的十二烷基硫酸钠溶解2小时。从每个孔中转移100μl到96孔板后，平板在OD490处在Molecular Devices SpectraMax Plus分光光度计上进行读数，使用SOFTmax Pro软件(Molecular Devices)计算平均OD490值，使用Prism 3.02版(Graph Pad软件，San Diego)通过线性回归分析确定IC50值。
XTT细胞毒性试验 XTT试验是[51Cr]释放细胞毒性试验的非放射性替代。XTT是一种四唑盐，其唯一由代谢活性的活细胞还原成甲
染料。XTT的还原通过分光光度法以OD490-OD650进行测定。
为了测定特定化合物抗癌细胞的细胞毒性，将9 x 103 MCF-7人乳腺癌细胞(从美国典型培养物保藏中心获得)，平铺在96孔板中，每个孔中含带有10％胎牛血清、胰岛素、青霉素和链霉素的DMEM培养基。在37℃和5％CO2下过夜培养后，将1μl体积溶于DMSO中的测试化合物以下列浓度加入到孔中80、40、20、10、5、2.5、1.25和0.625μg/m l，一式三份。如果需要的话，测试其它浓度。将1μl DMSO加入到一式三份孔中，是载体对照。使用C75以40、20、10、15、12.5、10和5μg/ml一式三份作为阳性对照。孵育72小时后，按照厂商的指示(细胞增殖试剂盒II(XTT)Roche)，将细胞与XTT试剂一起培养4小时。在OD490和OD650处在Molecular Devices SpectraMax Plus分光光度计上对平板读数。三个含XTT试剂而没有细胞的孔用作板空白。XTT数据以OD490-OD650的方式报道。使用SOFTmax Pro软件(MolecularDynamics)计算平均值和平均值的标准偏差。
化合物的IC50被定义为与对照相比，引起OD490-OD650 50％减少的药物浓度。对于每一化合物浓度，由SOFTmax PRO软件(MolecularDevices)计算OD490-OD650。通过线性回归将以对照百分比表示的FAS活性对药物浓度绘图，计算IC50。使用Prism 3.0版(Graph Pad软件)测定线性回归、最佳拟合线、r2和95％置信区间。
掺入到总脂质中的[14C]乙酸的测定和化合物IC50的测定 本试验测定[14C]乙酸向总脂质中的掺入，并且是体外脂肪酸合成路径活性的尺度。用它来测量体外脂肪酸合成的抑制。
将如上所述培养的MCF-7人乳腺癌细胞，以每孔5 x 104细胞平铺在24孔板中。过夜孵育后，将溶解在DMSO中的测试化合物以5、10和20μg/ml一式三份加入，如有必要使用更低的测试浓度。对于载体对照，将DMSO加入到一式三份孔中。使用C75以5和10μg/ml一式三份作为阳性对照。孵育4小时后，每个孔中加入0.25μCi的[14C]乙酸(10μl体积)。
再孵育2小时后，从孔中吸出培养基，向每个孔中加入800μL的氯仿∶甲醇(2∶1)和700μL的4mM的MgCl2。将每个孔中的内含物转到1.5Eppendorf管中，在高速Eppendorf微量离心机5415D中全速旋转2分钟。除去含水层(上部)后，向每个管中加入另外700μL的氯仿∶甲醇(2∶1)和500μl的4mM的MgCl2，然后如上所述离心1分钟。用巴斯德吸管除去水层并弃去。向每个管中再加入另外400μL的氯仿∶甲醇(2∶1)和200μl的4mM的MgCl2，然后，离心，弃去水层。将底层(有机)相转移到闪烁瓶中，在40℃和N2气下干燥。一旦干燥，加入3ml的闪烁剂(APB#NBC5104)，对瓶进行14C计数。贝克曼闪烁计数器计算一式三份的平均cpm值。
化合物的IC50被定义为与对照组相比，引起[14C]乙酸向脂质中掺入减少50％的药物浓度。通过对每个所测试的抑制剂浓度的平均cpm绘图，进行线性回归并计算最佳拟合线、r2值和95％的置信区间，来测定该值。对于每个化合物浓度，通过贝克曼闪烁计数器(型号LS6500)计算平均cpm值。使用Prism 3.0版(Graph Pad软件)计算线性回归、最佳拟合线r2和95％置信区间的求解。
肉碱棕榈酰转移酶-1(CPT-1)试验 CPT-1催化长链脂肪酸从酰基-CoA向酰基-肉碱的ATP依赖性转移，丙二酰基-CoA抑制该转移。由于CPT-1活性需要线粒体膜，因此酶活性在可通透细胞或线粒体中进行测定。本试验使用可通透细胞测定[甲基-14C]L-肉碱向有机可溶性酰基-肉碱衍生物的转移。
将MCF-7细胞以106细胞平铺在24孔板中的含10％胎牛血清的DMEM中，对照、药物和丙二酰基-CoA一式三份。开始试验前两小时，以标明的浓度加入药物，这些浓度由在DMSO中的浓度为10mg/ml的储备液配制得到，载体对照由不含药物的DMSO组成。由于丙二酰基-CoA不能进入完整细胞，它仅仅加入到没有与药物进行预孵育的细胞的试验缓冲液中。在37℃孵育过夜后，除去培养基，用700μl试验缓冲液代替，其中所述的试验缓冲液由下面组成50mM咪唑、70mMKCl、80mM蔗糖、1mM EGTA、2mM MgCl2、1mM DTT、1mM KCN、1mM ATP、0.1％无脂肪酸的牛血清清蛋白、70μM棕榈酰基-CoA、0.25μCi[甲基-14C]L-肉碱、40μg洋地黄皂苷，具有DMSO载体对照、或20μM丙二酰基-CoA。在试验缓冲液中的药物的浓度和DMSO与在2小时预孵育中使用的相同。在37℃孵育6分钟后，通过加入500μl冰冷的4M高氯酸停止反应。然后，采集细胞，以13,000xg离心5分钟。粒状沉淀用500μl冰冷的2mM高氯酸洗涤，并再次离心。所得粒状沉淀再悬浮在800μL dH2O中，用150μl丁醇萃取。丁醇相通过液体闪烁法进行计数，并代表酰肉碱衍生物。
新FAS抑制剂的体重减轻筛选 使用Balb/C小鼠(Jackson实验室)进行初始体重减轻筛选。将动物养在温度和12小时白天/黑夜循环的房间中，给予小鼠食物和水，自由进食。每个测试化合物和载体对照使用三只小鼠，每个实验一式三份。在实验中，将每个测试化合物的小鼠分开放养，三只小鼠共用一个笼。将化合物以10mg/ml的浓度稀释在DMSO中，小鼠通过腹膜内注射给予60mg/kg在约100μl DMSO中的剂量或者仅仅给予载体。多天观察小鼠，并对小鼠进行称重；用Excel(微软公司)计算平均重量和标准误差。继续实验，直到所治疗的动物的体重达到治疗前的体重为止。
选择化合物在代谢笼中放养的动物中进行测试。动物的剂量与筛选实验相同，三只动物放养在一只代谢茏中。每日测定动物的体重、水和食物的消耗量、以及尿和粪便的产生。化合物21和44的测试结果表示在图10中。
抗微生物性质 使用肉汤微稀释试验来评价化合物的抗微生物活性。化合物以二倍系列稀释进行测定，抑制可见生长的浓度(OD600为对照的10％)被定义为MIC。测试的微生物包括金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)(ATCC#29213)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)(ATCC#29212)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)(ATCC#27853)和大肠杆菌(Escherichia coli)(ATCC#25922)。试验在两种生长培养基中进行，培养基分别为米勒欣顿肉汤(Mueller Hinton Broth)和胰酶解酪蛋白大豆肉汤(Trypticase Soy Broth)。
血液(Tsoy/5％的绵羊血)琼脂平板从维持在含10％甘油的T大豆肉汤中的冰冻贮备液中接种，然后在37℃孵育过夜。将菌落悬浮在灭菌肉汤中，以便浊度与0.5麦克法兰标准的浊度相当。将接种物以1∶10稀释在灭菌肉汤中(米勒欣顿或胰酶解酪蛋白大豆)，在96孔板的每个孔中分配195u l。向孔中加入5ul体积下列浓度的溶于DMSO中的测试化合物25、12.5、6.25、3.125、1.56和0.78ug/ml一式两份。如果需要的话，测试其它浓度。加入一式两份孔的5ul DMSO是载体对照。在每次测试中包括阳性对照化合物--万古霉素(粪肠杆菌和金黄色葡萄球菌)和托普霉素(大肠杆菌和绿脓杆菌)的系列稀释。
在37℃孵育24小时后，平板在OD600处在Molecular DevicesSpectraMax Plus分光光度计上进行读数。使用SOFTmax Pro软件(Molecular Devices)计算平均OD600值，使用Prism 3.02版(Graph Pad软件，圣迭戈)通过线性回归分析确定MIC值。MIC被定义为产生相当于10％的载体对照读数的OD600读数所需的化合物浓度。
抗肿瘤活性的体内试验 本实验的结果表示在图11中。使用人结肠癌细胞系，HCT-116在nu/nu雌性小鼠(Harlan)中的皮下侧面异种移植来研究化合物36在体内的抗肿瘤作用。所有动物试验遵守规定的动物护理指南。将107HCT-116细胞(～0.1ml压紧细胞)从补充有10％FBS的DMEM中的培养物中异种移植到10只无胸腺小鼠中。接种约4天后，当可测量的肿瘤形成时，开始处理。化合物36(10mg/kg)稀释成20μl DMSO中，并通过腹膜内注射i.p.处理。5只动物在图11中箭头所示的天腹膜内注射接受JMM-II-265，以及5只动物接受DMSO对照。在所示天测量肿瘤。误差线代表平均标准误差。
生物试验的结果
权利要求
1.下式的化合物
其中
R1是H
R2是-OC(O)NR5R6，其中R5和R6各自独立地是H、C1-C20烷基、环烷基、链烯基、炔基、芳基、芳烷基或烷芳基，以及其中R5和R6各自可以任选含有卤原子；
R3是C1-C10烷基；以及
R4是C1-C20烷基、环烷基、链烯基、炔基、芳基、芳烷基或烷芳基。
2.根据权利要求1的化合物，其中R5是H、C1-C10烷基、环烷基、链烯基、炔基、芳基、芳烷基或烷芳基。
3.根据权利要求2的化合物，其中R5是H或C1-C10烷基。
4.根据权利要求1的化合物，其中R4是C1-C10烷基、环烷基、链烯基、炔基、芳基、芳烷基或烷芳基。
5.根据权利要求4的化合物，其中R4是C1-C10烷基。
6.根据权利要求1的化合物，其中R3是-CH3。
7.根据权利要求1的化合物，其中R5是-nC6-C8烷基。
8.根据权利要求1的化合物，其中所述的化合物是
9.药物组合物，其包含药物稀释剂和下式IV的化合物
其中
R21是H、-CH-(OH)-CH3或-C(O)R29，其中R29是-CH3、-CF3或-OCH3；
R22是-OH、-OR27、-OCH2C(O)R27、-OCH2C(O)NHR27、-OC(O)R27、-OC(O)OR27、-OC(O)NHNH-R27或-OC(O)NR27R28，其中R27和R28各自独立地是H、C1-C20烷基、环烷基、链烯基、炔基、芳基、芳烷基或烷芳基，以及其中R27和R28各自可以任选含有卤原子；
R23是C1-C10烷基；以及
R24是C1-C20烷基、环烷基、链烯基、炔基、芳基、芳烷基或烷芳基。
10.根据权利要求9的药物组合物，其中所述化合物选自下组化合物
11.药物组合物，其包含药物稀释剂和如下结构的化合物
12.药物组合物，其包含药物稀释剂和式I的化合物。
13.化合物在制备用于诱导体重减轻的药物中的用途，其中所述化合物具有式IV。
14.根据权利要求13的用途，其中所述药物用于对人给药。
15.根据权利要求13的用途，其中所述药物用于对动物给药。
16.根据权利要求14的用途，其中所述化合物选自下组化合物
17.根据权利要求15的用途，其中所述化合物选自下组化合物
18.化合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中所述化合物具有式IV。
19.根据权利要求18的用途，其中所述药物用于对人给药。
20.根据权利要求18的用途，其中所述药物用于对动物给药。
21.根据权利要求19的用途，其中所述化合物选自下组化合物
22.根据权利要求20的用途，其中所述化合物选自下组化合物
23.化合物在制备用于刺激CPT-1的药物中的用途，其中所述化合物具有式IV。
24.根据权利要求23的用途，其中所述药物用于对人给药。
25.根据权利要求23的用途，其中所述药物用于对动物给药。
26.根据权利要求24的用途，其中所述化合物是
27.根据权利要求25的用途，其中所述化合物是
28.化合物在制备用于抑制神经肽-Y的药物中的用途，其中所述化合物具有式IV。
29.根据权利要求28的用途，其中所述药物用于对人给药。
30.根据权利要求28的用途，其中所述药物用于对动物给药。
31.化合物在制备用于抑制脂肪酸合酶活性的药物中的用途，其中所述化合物具有式IV。
32.根据权利要求31的用途，其中所述药物用于对人给药。
33.根据权利要求31的用途，其中所述药物用于对动物给药。
34.化合物在制备用于抑制人或动物中侵入性微生物细胞生长的药物中的用途，其中所述化合物具有式IV。
35.根据权利要求34的用途，其中所述药物用于对人给药。
36.根据权利要求34的用途，其中所述药物用于对动物给药。
37.根据权利要求35的用途，其中所述化合物选自下组化合物
38.根据权利要求36的用途，其中所述化合物选自下组化合物
全文摘要
本发明涉及新化合物、含该化合物的药物组合物以及该化合物的应用方法。所述新化合物例如为式IV的化合物，式中各变量的含义如说明书中所定义。本发明的化合物及其组合物可用于治疗癌症、引起体重减轻、治疗由微生物引起的感染、抑制神经肽-Y和/或脂肪酸合酶以及刺激CPT-1。
文档编号A61P43/00GK101602756SQ200910203849
公开日2009年12月16日 申请日期2003年7月9日 优先权日2002年7月9日
发明者F·P·库哈杰达, S·M·麦德格哈尔奇, J·M·麦科法登, J·图帕里, C·A·唐森德 申请人:法斯根公司, 约翰斯霍普金斯大学