专利名称：抗cxcr4抗体的制作方法
抗CXCR4抗体 本发明涉及针对CXCR4的单克隆抗体及它们在治疗由CXCR4和SDF-I介导的 发病机理的疾病中的用途。CXCR4, 一种趋化因子受体，是G蛋白偶联的7次跨膜受体。和其他趋化因 子受体类似，CXCR4通过介导白细胞的定向迁移和活化在免疫和炎症反应中发挥重要 作用。CXCR4在多种肿瘤细胞系和组织中表达或过表达，包括乳腺、前列腺、肺、卵 巢、结肠、胰腺、肾和脑，以及非何杰金氏淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病。唯一已知的 CXCR4配体是基质细胞衍生因子1(SDF-1，或CXCL12)。CXCR4和SDF-1的相互作用 在包括肿瘤生长、侵害、血管发生和转移的多个肿瘤发生期发挥重要作用。由于CXCR4涉及多种严重的疾病，目前已经将CXCR4作为治疗靶标研究。 例如，AMD3100，一种bicyclamCXCR4拮抗剂，可用于多种骨髓瘤和非何杰金氏淋 巴瘤的患者。CTCE9908，一种肽CXCR4拮抗剂，目前在用于癌症的临床试验Ib/ II 期。此外，在现有技术中(WO 06/089141、US07/0059308 和 Carnec 等人[Carnec X，QuanL, Olson W, Hazan U, DragicT. (2005) Anti_CXCR4 Monoclonal Antibodies Recognizing OverlappingEpitopes Differ Significantly in Their Ability To Inhibit Entry ofHuman Immunodeficiency Viras Type LJournal of Virology.Feb.2005 1930—1933]))公开了 革巴向 CXCR4的抗体。尽管有多种在研发中的靶向CXCR4的药剂，仍然需要另外的靶向CXCR4的药 齐U。本发明的抗体是治疗上有效的CXCR4拮抗剂，具有多种期望的性质。本发明的抗 体提高了化学和物理稳定性，和可溶性。本发明提供了以高亲和力结合人CXCR4并抑制 人CXCR4结合SDF-I的CXCR4抗体。高效力允许在治疗方案中使用低剂量。此外， 这些抗体干扰SDF-I与CXCR4的相互作用，因此降低肿瘤发生，包括肿瘤生长、侵害、 血管发生和转移。此外，本发明的抗体诱导肿瘤细胞的凋亡。本发明包括结合人CXCR4的人源改造抗体或其结合片段，其a.抑制人SDF-I α (SEQ ID NO 33)禾Π CXCR4的结合，在如此处描述的人 CXCR4/125I-SDF-1 α结合抑制试验中，对人CXCR4的IC5tl在IOnM和0.05ηΜ之间；b.抑制表面具有CXCR4的细胞的迁移，在如此处描述的趋化性试验中，IC5tl在 30nM 和 0.3nM 之间。c.在如此处描述的表面等离子体共振(BIAcore)试验中展示了在15nM和0.05nM
之间Kd的亲和力。本发明优选的提供了结合人CXCR4的人源改造抗体或其结合片段，其抑制人 SDF-I α (SEQ ID NO 33)禾Π CXCR4 的结合，在如此处描述的人 CXCR4/125I_SDF_1 α 结合抑制试验中，对人CXCR4的IC5tl在0.5ηΜ和0.05ηΜ之间。本发明优选的提供了结合人CXCR4的人源改造抗体或其结合片段，其抑制表面 具有CXCR4的细胞的迁移，在如此处描述的趋化性试验中，IC5tl在3.0ηΜ和0.3ηΜ之 间。本发明优选的提供了结合人CXCR4的人源改造抗体或其结合片段，其在如此处描述的表面等离子体共振(BIAcore)试验中展示了在LOnM和0.05nM之间Kd的亲和力。本发明优选的提供了结合人CXCR4的人源改造抗体或其结合片段，其在此处描 述的肿瘤异种移植模型中当以lmg/kg施用时通过阻止肿瘤生长展示了抗肿瘤发生活性。 本发明优选的提供了结合人CXCR4的人源改造抗体或其结合片段，其在此处描 述的凋亡试验中当以2 μ g/mL和lOyg/mL之间(的剂量)施用时诱导了肿瘤细胞的凋 亡。本发明包括人源改造抗体或其结合片段，其包含轻链和重链，轻链包含轻链可 变区，轻链可变区包含框架区、具有SEQ ID NO: 8的氨基酸序列的CDRLl、具有SEQ ID NO 9的氨基酸序列的CDRL2，和具有SEQ ID NO 10的氨基酸序列的CDRL3， 重链包含重链可变区，重链可变区包含框架区、具有SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的 CDRHl、具有SEQ ID NO 3的氨基酸序列的CDRH3和具有选自SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 5、SEQ IDNO 6 和 SEQ ID NO 7 的氨基酸序列的 CDRH2， 其中所述抗体结合人CXCR4。此外，本发明包括结合人CXCR4的抗体，其中轻链包含SEQ ID NO: 16的氨 基酸序列，重链包含选自 SEQ ID NO 11、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 13、SEQ ID
NO 14和SEQ ID NO 15的氨基酸序列。此外，本发明包括结合人CXCR4的抗体，其中轻链包含SEQ ID NO 22的氨 基酸序列，重链包含选自 SEQ ID NO 17、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 19、SEQ ID NO 20和SEQ ID NO 21的氨基酸序列。本发明还包括结合人CXCR4的抗体，其中抗体选自包含SEQ IDNO 17和SEQ ID NO 22 的抗体、包含 SEQ ID NO: 18 和 SEQ ID NO: 22 的抗体、包含 SEQ ID NO 19和SEQ ID NO 22的抗体、包含SEQ ID NO 20和SEQ ID NO 22的抗体和包含 SEQ ID NO 21 和 SEQ ID NO 22 的抗体。如此处定义的本发明抗体其特征在于，在如此处描述的人CXCR4/125I-SDF_1 α 结合抑制试验中具有IOnM或更低的IC5(1。本发明优选的抗体具有对人CXCR4的5.0ηΜ 或更低的结合亲和力。本发明最优选的抗体具有对人CXCR4的0.5ηΜ或更低的结合亲 和力。更优选的，本发明的抗体在如此处描述的人CXCR4/125I-SDF_la结合抑制试验中 具有对人CXCR4在IOnM和0.05nM之间的IC5(1。更优选的，本发明的抗体在如此处描 述的人CXCR4/125I-SDF_1 α结合抑制试验中具有对人CXCR4在0.5ηΜ和0.05ηΜ之间的 IC50O如此处定义的本发明抗体其特征在于，在如此处描述的趋化性试验中具有30ηΜ 或更低的IC5(I。本发明优选的抗体在趋化性试验中具有15nM或更低的IC5(I。本发明更 优选的抗体在趋化性试验中具有3.0nM或更低的IC5(I。更优选的，本发明抗体在如此处 描述的趋化性试验中具有30nM和0.3nM之间的IC5(1。更优选的，本发明抗体在如此处 描述的趋化性试验中具有3nM和0.3nM之间的IC5(1。如此处定义的本发明抗体其特征在于，在通过如此处描述的表面等离子体共振 (BIAcore)评估抗体结合活性的试验中具有15nM或更低的KD。本发明更优选的抗体 在BIAcore试验中具有IOnM或更低的KD。本发明最优选的抗体在BIAcore试验中具 有Ι.ΟηΜ或更低的KD。更优选的，本发明的抗体在如此处描述的BlAcore试验中具有15nM和0.05nM之间的KD。更优选的，本发明的抗体在如此处描述的BIAcore试验中具 有Ι.ΟηΜ和0.05nM之间的KD。如此处定义的本发明抗体其特征在于，在如此处描述的使用NOD/SCID小鼠和 人非何杰金氏淋巴瘤Namalwa细胞的肿瘤异种移植模型中，当以10mg/kg施用时通过阻 止肿瘤生长而具有抗肿瘤发生活性。本发明更优选的抗体当以lOmg/kg施用时通过阻止 肿瘤生长而具有抗肿瘤发生活性。如此处定义的本发明抗体其特征在于，在如此处描述的凋亡试验中诱导肿瘤细 胞的凋亡。本发明更优选的抗体在以2 μ g/mL和10 μ g/mL之间(的剂量)施用时，在 包括Namalwa和CEM细胞的多种肿瘤细胞中诱导了核碎裂和半胱天冬氨酸酶3 (caspase 3)的活化，此二者是凋亡的标志。本发明包括药物组合物，包含如此处描述的抗体和一种或多种可药用的载体、 稀释剂或赋形剂的组合。此外，本发明包括用于治疗包括肿瘤生长、侵害、血管发生或 转移的肿瘤发生的药物组合物，其包含如此处各式描述的抗体和一种或多种可药用的载 体、稀释剂或赋形剂的组合。此外，本发明包括药物组合物，用于治疗选自乳腺癌、 胰腺癌、黑色素瘤、前列腺癌、肾癌、神经母细胞瘤、非何杰金氏淋巴瘤、肺癌、卵巢 癌、结直肠癌、多发性骨髓瘤、多形性成胶质细胞瘤和白血病的癌症，所述药物组合物 包含如此处各式描述的抗体和一种或多种可药用的载体、稀释剂或赋形剂的组合。本发明包括如此处描述的抗体在制备用于治疗肿瘤发生的药物中的用途，所述 肿瘤发生包括肿瘤生长、侵害、血管发生或转移。此外，本发明包括如此处描述的抗体 在制备用于治疗癌症的药物中的用途，所述癌症选自乳腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、前列 腺癌、肾癌、神经母细胞瘤、非何杰金氏淋巴瘤、肺癌、卵巢癌、结直肠癌、多发性骨 髓瘤、多形性成胶质细胞瘤和白血病。本发明包括治疗包括肿瘤生长、侵害、血管发生或转移的肿瘤发生的方法，包 含对需要的患者施用如此处描述的抗体。此外，本发明包括治疗癌症的方法，所述癌 症选自乳腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、前列腺癌、肾癌、神经母细胞瘤、非何杰金氏淋巴 瘤、肺癌、卵巢癌、结直肠癌、多发性骨髓瘤、多形性成胶质细胞瘤和白血病，方法包 含对需要的患者施用如此处描述的抗体。“抗体”的一般结构是本领域熟知的。IgG型的抗体有4条氨基酸链(2条“重” 链和2条“轻”链)，通过链内和链间的二硫键交联。当在某些生物系统中表达时，具有 未修饰的人Fc序列的抗体在Fc区域糖基化。抗体也可能在其他位置糖基化。抗体的亚 基结构和三维构型是本领域熟知的。每条重链由N-端重链可变区(〃 HCVR")和重链 恒定区(“HCCR”)组成。重链恒定区由用于IgG、IgD和IgA的3个结构域(CH1、 CH2和CH3)和用于IgM和IgE的4个结构域(CHI、CH2、CH3和CH4)组成。每条 轻链由轻链可变区(此处的〃 LCVR")和轻链恒定区(“LCCR”)组成。每条轻/重链的可变区配对形成抗体的结合位点。 HCVR和LCVR可进一步细 分为称为互补决定区(CDR)的高变区，其中散布更保守的区域，称为框架区(FR)。每个 HCVR和LCVR由3个CDR和4个FR组成，从N-端到C-端以下列顺序排列FRl、 CDRU FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在此处，将重链的 3 个 CDR称为"CDRHU CDRH2 和 CDRH3”，将轻链的 3 个 CDR 称为 ‘‘CDRL1、CDRL2 禾口 CDRL3”。CDR包含与抗原形成特异性 相互作用的大多数残基。氨基酸至各个结构域的分配依照熟知的常 规[例如，Kabat, “ Sequences of Proteins of Immunological Interest, " NationalInstitutes of Health, Bethesda, Md。 (1991)]。本发明的抗体可具有选自任意免疫球蛋白种类(IgA、IgD, IgG、IgM和IgE)
的重链恒定区。此外，本发明的抗体包含来自人IgG4Fc区域的Fc部分，原因是与其他 IgG亚型相比，其降低的结合补体因子的能力。抗体可来自单个拷贝或克隆，包括例如，任意真核、原核或噬菌体克隆。优选 的，本发明的抗体以均质的或基本上均质的种群存在。抗体可为完整的，包含包括Fc区 域的完整或全长恒定区，或为这样的抗体的部分或片段，只要任意的缩短形式包含抗原 结合部分并保留抗原结合能力。这样缩短的形式包括例如，包括公开的抗CXCR4抗体的 CDR或可变区的Fab片段、Fab'片段或F(ab' )2片段。此外，这样缩短的抗体形式 可为单链Fv片段，所述片段可通过用接头序列连接编码LCVR和HCVR的DNA制备。 (见，Pluckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol.113, Rosenburg and Mooreeds., Springer-Verlag，New York,页 269-315，1994)。不管片段或部分是否是特 定的，除非另外指出，如此处使用的术语“抗体”包括这样的片段或部分和单链形式。 只要蛋白质保留特异或优先结合CXCR4的能力并包括此处公开的一条或多条序列，就包 含在术语“抗体”内。本发明的抗体可使用本领域熟知的技术制备，例如重组技术、噬 菌体展示技术、合成技术或这些技术或其他本领域已知技术的组合。术语“人源改造抗体”是指抗体具有的人源框架、铰链区和恒定区与来自人基 因组序列的框架和恒定区相同或基本上相同(基本上人源)。全人框架、铰链区和恒定区 为那些人种系序列和具有自然发生的体细胞突变的序列。人源改造抗体可包含来自全人 框架、铰链或恒定区的框架、铰链或恒定区，并在其中包含一个或多个氨基酸取代、缺 失或添加。通常，人源改造抗体优选的在人中基本上没有免疫原性。可单独或组合使用多种不同的人框架序列作为本发明的人源改造抗体的基础。 优选的，本发明抗体的框架区为人源的或基本上人源的(至少95%、97%或99%人源)。 人源框架区序列可从 The Immunoglobulin Factsbook, Marie-Paule Lafranc, Gerard Lefranc 著，AcademicPress 2001，ISBNO12441351 获得。本发明人源改造抗体的框架序列作为“供体”可变框架区，可用于创造其他具 有和此处所指定的相同CDR的人源改造抗体，使用本领域已知的方法。此外，用于本发 明人源改造抗体的框架序列可与其他已知的人框架序列比较以生成其他人源改造抗体。 因此，此信息可用于另一选定的同源人框架区在这些位置的人源改造供体氨基酸残基的 “回复突变(back-mutate)”。此外，可在其它人框架中检测任意“罕见”氨基酸，从而
可在相关位置使用一致的或供体人源改造氨基酸残基。术语“抑制”意思是基本上拮抗、阻止、避免、遏制、减缓、中断、消除、终 止、降低或逆转结合CXCR4受体的生物学效应的能力。“CXCR4”或“人CXCR4”是指任意人CXCR4，以及其功能上有活性的突变 形式。示例包括但不局限于，SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO 31和SEQ IDNO 32。“患者”为哺乳动物，优选的为人。术语“治疗(treating) ”(或“treat”或“treatment”)意思是减缓、终止、降低或逆转症状、紊乱、病症或疾病的进程或严重性。 术语“预防(preventing)”(或“prevent” 或 “prevention”)意思是阻止、遏
制或抑制症状、紊乱、病症或疾病的发生或出现。可治疗和预防急性事件和慢性病症。 在急性事件中，在症状、紊乱、病症或疾病发病时施用抗体，当急性事件结束时终止， 而慢性症状紊乱、病症或疾病的治疗需要更长的期限。术语“治疗有效量”是指在对患者单独或多次施用后，提供期望的治疗或预防 的本发明抗体的量或剂量。治疗有效量可包含每单次(例如，团注)、多次或连续施用约 0.001 到 20mg/kg 的量。此发明的具体抗体包括包含SEQ ID NO: 1、2、3、8、9和10的氨基酸序 列的抗体；包含SEQ ID NO 1、4、3、8、9和10的氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO: 1、5、3、8、9和10的氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO 1、6、3、8、9和10 的氨基酸序列的抗体；包含SEQ ID NO: 1、7、3、8、9和10的氨基酸序列的抗体。所 列序列分别代表 CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRLU CDRL2 和 CDRL3。此发明的具体抗体包括包含具有SEQ IDNO 16的氨基酸序列的LCVR和具 有SEQ ID NO: 11的氨基酸序列的HCVR的抗体；具有SEQ ID NO: 16的氨基酸序列的 LCVR和具有SEQ IDNO 12的氨基酸序列的HCVR的抗体；具有SEQ ID NO 16的氨 基酸序列的LCVR和具有SEQ ID NO 13的氨基酸序列的HCVR的抗体；具有SEQ ID NO: 16的氨基酸序列的LCVR和具有SEQID NO : 14的氨基酸序列的HCVR的抗体；具 有SEQ ID NO 16的氨基酸序列的LCVR和具有SEQ ID NO 15的氨基酸序列的HCVR 的抗体。本发明包括结合和抑制CXCR4活性的5种抗体。具体来说，本发明包括包含 具有SEQ ID NO 22的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO 17的氨基酸序列的重链的 抗体；包含具有SEQ ID NO 22的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO 18的氨基酸序 列的重链的抗体；包含具有SEQ ID NO 22的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO 19 的氨基酸序列的重链的抗体；包含具有SEQ ID NO 22的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO 20的氨基酸序列的重链的抗体；包含具有SEQ ID NO 22的氨基酸序列的轻链 和具有SEQ ID NO 21的氨基酸序列的重链的抗体。优选的，本发明抗体中的所有6个CDR、HCVR、LCVR、HCVR禾Π LCVR、
整条重链、整条轻链或整条重链和整条轻链由如此处的SEQ ID NO显示的具体序列限 定，其另外的特征在于，在如此处描述的人CXCRV125I-SDF-Ia结合抑制试验中具有约 IOnM或更低的IC5tl，更优选的约5.0ηΜ或更低，最优选的0.5ηΜ或更低。更优选的， 本发明的抗体中的所有6个CDR、HCVR、LCVR、HCVR禾Π LCVR、整条重链、整条轻 链或整条重链和整条轻链由如此处的SEQ ID NO显示的具体序列限定，其另外的特征在 于，在如此处描述的人CXCR4/125I-SDF-la结合抑制试验中具有IOnM和0.05nM之间的 IC50O更优选的，本发明的抗体中的所有6个CDR、HCVR、LCVR、HCVR禾Π LCVR、整 条重链、整条轻链或整条重链和整条轻链由如此处的SEQ ID NO显示的具体序列限定， 其另外的特征在于，在如此处描述的人CXCR4/125I-SDF_1 α结合抑制试验中具有0.5ηΜ 和0.05ηΜ之间的IC5Q。更优选的，本发明的抗体中的所有6个CDR、HCVR、LCVR、HCVR禾口LCVR、整条重链、整条轻链或整条重链和整条轻链由如此处的SEQ ID NO显示的具体序 列限定，其另外的特征在于，在如此处描述的趋化性试验中具有约30nM或更低的IC5Q， 更优选的约15nM或更低，甚至更优选的3.0nM或更低。更优选的，本发明的抗体中的 所有6个CDR、HCVR、LCVR、HCVR和LCVR、整条重链、整条轻链或整条重链和整 条轻链由如此处的S EQ ID NO显示的具体序列限定，其另外的特征在于，在如此处描述 的趋化性试验中具有30nM和0.3nM之间的IC5(1。更优选的，本发明的抗体中的所有6个 CDR、HCVR、LCVR、HCVR和LCVR、整条重链、整条轻链或整条重链和整条轻链由 如此处的SEQ ID NO显示的具体序列限定，其另外的特征在于，在如此处描述的趋化性 试验中具有3.0nM和0.3nM之间的IC5(1。甚至更优选的，本发明的抗体中的所有6个CDR、HCVR、LCVR、HCVR禾口 LCVR、整条重链、整条轻链或整条重链和整条轻链由如此处的SEQ ID NO显示的具体 序列限定，其另外的特征在于，在如此处描述的通过表面等离子体共振(BIAcore)评估 抗体结合活性的试验中具有约15nM或更低的KD，更优选的约IOnM或更低，最优选的 Ι.ΟηΜ或更低。更优选的，本发明的抗体中的所有6个CDR、HCVR、LCVR、HCVR 和LCVR、整条重链、整条轻链或整条重链和整条轻链由如此处的SEQ ID NO显示的具 体序列限定，其另外的特征在于，在如此处描述的通过表面等离子体共振(BIAcore)评估 抗体结合活性的试验中具有15nM和0.05nM之间的KD。更优选的，本发明的抗体中的 所有6个CDR、HCVR、LCVR、HCVR和LCVR、整条重链、整条轻链或整条重链和整 条轻链由如此处的SEQ ID NO显示的具体序列限定，其另外的特征在于，在如此处描述 的通过表面等离子体共振(BIAcore)评估抗体结合活性的试验中具有LOnM和0.05nM之 间的KD。更优选的，本发明的抗体中的所有6个CDR、HCVR、LCVR、HCVR禾口 LCVR、整条重链、整条轻链或整条重链和整条轻链由如此处的SEQ ID NO显示的具体序 列限定，其另外的特征在于，在如此处描述的使用NOD/SCID小鼠和人非何杰金氏淋巴 瘤Namalwa细胞的肿瘤异种移植模型中，当以lOmg/kg施用时，甚至更优选的以lmg/kg
施用时，通过阻止肿瘤生长而具有抗肿瘤发生活性。最优选的，本发明的抗体中的所有6个CDR、HCVR、LCVR、HCVR禾口 LCVR、整条重链、整条轻链或整条重链和整条轻链由如此处的SEQ ID NO显示的具体序 列限定，其另外的特征在于，在如此处描述的凋亡试验中诱导肿瘤细胞的凋亡。更优选 的，本发明的抗体中的所有6个CDR、HCVR、LCVR、HCVR禾Π LCVR、整条重链、整 条轻链或整条重链和整条轻链由如此处的SEQID NO显示的具体序列限定，其另外的特 征在于，在以2 μ g/mL禾Π 10 μ g/mL之间(的剂量)施用时，在包括Namalwa和CEM细 胞的多种肿瘤细胞中诱导了核碎裂和半胱氨酸蛋白酶3的活化，此二者是凋亡的标志。
实施例可如下述制备和纯化抗体I、II、III、IV和V。使用最优预设的HC LC载 体比率或编码 HC (例如 SEQ ID NO 23、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 25、SEQ ID
NO 26或SEQ ID NO 27)和LC (例如SEQ ID NO 28) 二者的单个载体系统的用于分 泌抗体的表达系统瞬时或稳定转染合适的宿主细胞，例如HEK 293 EBNA或CHO。其中可使用许多普遍使用的技术中的任意一种纯化分泌有抗体的澄清培养基。例如，可方便 的将培养基应用于用相容的缓冲液例如磷酸盐缓冲液(pH 7.4)平衡的蛋白质A或G琼脂 糖凝胶FF柱。清洗柱以去除非特异性结合组分。洗脱结合的抗体，例如通过pH梯度 (例如0.1M磷酸钠缓冲液pH6.8至0.1M柠檬酸钠缓冲液pH2.5)。检测抗体级分，例如 通过十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，之后合并。进一步纯化是任选 的，取决于计划的用途。可使用普通技术浓缩和/或无菌过滤抗体。可溶性聚集体和多 聚体可通过普通技术包括尺寸排阻、疏水性相互作用、离子交换或羟磷灰石层析有效去 除。在这些层析步骤后的抗体纯度超过99%。产物可立刻冷冻于_70°C或可低压冻干。 这些抗体的氨基酸序列提供如下。SEQ ID NO
权利要求
1.结合人CXCR4的人源改造抗体或其结合片段，其a.抑制人SDF-Iα (SEQ ID NO 33)禾Π CXCR4的结合，在如此处描述的人 CXCR4/125I-SDF-1 α结合抑制试验中，对人CXCR4的IC5tl在IOnM和0.05ηΜ之间；b.抑制表面具有CXCR4的细胞的迁移，在如此处描述的趋化性试验中，IC5tl在30nM 和0.3nM之间。C.在如此处描述的表面等离子共振(BIAcore)试验中展示了 Kd在15nM和0.05nM之 间的亲和力。
2.权利要求1的抗体，其抑制人SDF-Iα (SEQ ID NO 33)和CXCR4的结合，对人 CXCR4 的 IC5tl 在 0.5nM 和 0.05nM 之间。
3.权利要求1或权利要求2的抗体，其抑制表面具有CXCR4的细胞的迁移，IC5tl在 3.OnM 和 0.3nM 之间。
4.权利要求1至3中任一项的抗体，其展示了Kd在Ι.ΟηΜ和0.05nM之间的亲和力。
5.权利要求1至4中任一项的抗体，其在此处描述的肿瘤异种移植模型中当以Img/ kg施用时通过阻止肿瘤生长展示了抗肿瘤发生活性。
6.权利要求1至5中任一项的抗体，其在此处描述的凋亡试验中当以2μ g/mL和 10 μ g/mL之间施用时诱导肿瘤细胞的凋亡。
7.人源改造抗体或其结合片段，包含轻链和重链，轻链包含轻链可变区，轻链可变 区包含框架区、具有SEQ ID NO 8的氨基酸序列的CDRL1、具有SEQ ID NO 9的氨 基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO: 10的氨基酸序列的CDRL3，重链包含重链可 变区，重链可变区包含框架区、具有SEQ IDNO : 1的氨基酸序列的CDRHl、具有SEQ ID NO 3的氨基酸序列的CDRH3和具有选自SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 5、SEQ ID NO 6和SEQID NO 7的氨基酸序列的CDRH2，其中抗体结合人 CXCR4。
8.权利要求7的抗体，其中轻链包含SEQID NO 16的氨基酸序列。
9.权利要求7或权利要求8的抗体，其中重链包含选自SEQID NO : 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO 14 和 SEQ ID NO 15 的氨基酸序列。
10.权利要求7至9中任一项的抗体，其中轻链包含SEQID NO 22的氨基酸序列。
11.权利要求7至10中任一项的抗体，其中重链包含选自SEQIDNO 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO 19、SEQ ID NO 20 和 SEQ ID NO 21 的氨基酸序列。
12.权利要求7至11中任一项的抗体，所述抗体选自包含SEQIDNO : 17和SEQ ID NO: 22 的抗体、包含 SEQ ID NO: 18 和 SEQ ID NO: 22 的抗体、包含 SEQ ID NO 19 和SEQ ID NO 22的抗体、包含SEQ ID NO 20和SEQ ID NO 22的抗体和包含SEQ ID NO 21 和 SEQ ID NO 22 的抗体。
13.权利要求7至12中任一项的抗体，所述抗体包含2条SEQID NO 22的轻链和 2条SEQ ID NO: 17的重链。
14.药物组合物，包含权利要求1至13中任一项的抗体和一种或多种可药用的载体、 稀释剂或赋形剂的组合。
15.权利要求1至13中任一项的抗体在治疗中的用途。
16.权利要求1至13中任一项的抗体在治疗肿瘤发生中的用途，所述肿瘤发生包括肿瘤生长、侵害、血管发生或转移。
17.权利要求1至13中任一项的抗体在制备用于治疗肿瘤发生的药物中的用途，所述 肿瘤发生包括肿瘤生长、侵害、血管发生或转移。
18.治疗包括肿瘤生长、侵害、血管发生或转移的肿瘤发生的方法，包含对需要的患 者施用治疗有效量的权利要求1至13中任一项的抗体。
19.权利要求1至13中任一项的抗体在治疗癌症中的用途，所述癌症选自乳腺癌、 胰腺癌、黑色素瘤、前列腺癌、肾癌、神经母细胞瘤、非何杰金氏淋巴瘤、肺癌、卵巢 癌、结直肠癌、多发性骨髓瘤、多形性成胶质细胞瘤和白血病。
20.权利要求1至13中任一项的抗体在制备用于治疗癌症的药物中的用途，所述癌 症选自乳腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、前列腺癌、肾癌、神经母细胞瘤、非何杰金氏淋巴 瘤、肺癌、卵巢癌、结直肠癌、多发性骨髓瘤、多形性成胶质细胞瘤和白血病。
21.治疗癌症的方法，所述癌症选自乳腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、前列腺癌、肾癌、 神经母细胞瘤、非何杰金氏淋巴瘤、肺癌、卵巢癌、结直肠癌、多发性骨髓瘤、多形性 成胶质细胞瘤和白血病，方法包含对需要的患者施用治疗有效量的权利要求1至13中任 一项的抗体。
全文摘要
本发明提供了结合人CXCR4的抗体，其特征在于具有高亲和力和强中和性能。本发明的抗体对治疗肿瘤发生有效，所述肿瘤发生包括肿瘤生长、侵害、血管发生或转移。
文档编号A61P35/00GK102027015SQ200980117230
公开日2011年4月20日 申请日期2009年5月7日 优先权日2008年5月14日
发明者C·T·迪克森, D·M·马奎斯, P·E·瓦扬古, S-B·彭, V·奥邦古 申请人:伊莱利利公司