高致病性禽流感的中和分子及其制备方法

专利名称：高致病性禽流感的中和分子及其制备方法
技术领域：
本发明属于生物技术和免疫学领域；更具体地，本发明涉及高致病性禽流感的中和分子及其制备方法。
背景技术：
自1997年以来高致病性禽流感H5N1病毒已感染了约5亿只禽类，同时在亚洲、欧洲和非洲已有越来越多的人被感染。虽然，目前为止人类的感染都是由禽类传播的，但H5N1病毒经过重组和进化可能演变出来具有人传人能力的新的病毒株。这种新病毒的广泛蔓延加之人们对H5N1病毒缺少预成的免疫力将会对人类造成重大的发病率和死亡率。感染了高致病性禽流感H5N1病毒的主要表现是严重的肺炎、淋巴细胞减少、高淋巴因子血症及呼吸道的高病毒载量2_6。病毒通常可以从患者的脑脊液、粪便、痰液和血清样本中培养出来。目前对此病的治疗主要是依靠抗病毒药物，但一些H5N1病毒株可以对三环癸胺类离子通道阻滞剂药物产生耐药性7。虽然奥塞米韦等神经氨酸抑制剂对季节性流感有一定的疗效但对于H5N1病毒的效果还存在争议。动物实验表明神经氨酸抑制剂药物的疗效只有在感染前或感染后瞬间给药才能发挥疗效2，且H5N1病毒对奥塞米韦等神经氨酸抑制剂类药物也可产生耐药性8。因此寻找能有效的治疗禽流感和控制禽流感在人类中传播的方法是急需的。应用单克隆抗体和多克隆抗体的抗体疗法已有效的应用于甲肝、乙肝、狂犬病、水痘及巨细胞病毒感染等多种疾病的治疗9。婴儿通过后天的抗体免疫也可获得针对流感病毒的免疫力1CH13。从1918年西班牙流感大流行的幸存者体内所分离得到的单克隆抗体可以有效的将流感的死亡率降低50%14。输入感染过H5N1的康复病人的血浆可以有效的降低H5N1病毒感染病人的病毒载量并可以完全康复15。将免疫小鼠、雪貂、马和人获得的流感抗体打入小鼠体内可以有效的预防和治疗流感16_25。最近，Koudstaal等人发现小鼠单次注射15毫克/公斤的人单克隆抗体CR6261比感染后连续5天注射10毫克/公斤/天的奥塞米韦更能有效预防和治疗致命的H5N1和HlNl感染26。因此，应用被动免疫获得的抗体治疗高致病性禽流感H5N1病毒人类感染性疾病将是一种有效可行的方法。血凝素基因(HA)是禽流感病毒基因组中变异最大的基因。从HA的序列方面看，自2000来有10个H5HA的分支在不同的物种中出现27。其中分支2又可分为5亚分支。亚分支2. 3又可分为2. 3. 1,2. 3. 2,2. 3. 3和2. 3. 4四个亚亚分支28。目前为止感染人类的高致病性禽流感H5N1病毒分为O、1、2和7分支，在中国比较流行的感染人的高致病性禽流感H5N1病毒属于2. 3. 4亚亚分支27’28。此外，在东南亚和东亚感染家禽和鸟类的高致病性禽流感H5N1病毒也属于2. 3. 4亚亚分支29。研究显示，在人类H5HA至少有四种不同的抗原30。此外，流感病毒通过其遗传漂移和重组来逃逸免疫监视的特性使其一直以来是公共卫生健康的重大威胁，导致临床上常用的两类抗病毒药物对其效果都不是很理想，且有耐药株出现，因此寻找新的有效的治疗方法是急需的。
综上，鉴于禽流感的高变异性，寻找对尽可能多的禽流感变异病毒株均具有良好的中和能力的中和分子是非常必要的。

发明内容
本发明的目的在于提供高致病性禽流感的中和分子及其制备方法。
在本发明的第一方面，提供一种结合分子，其识别禽流感病毒的血球凝集素HAl，并结合于血球凝集素N端区域上的表位上，该表位包含以下位点
血球凝集素氨基酸序列第121位的Ser ;和
血球凝集素氨基酸序列第162位的Arg。
在另一优选例中，所述的表位还包含以下位点
血球凝集素氨基酸序列第117位的Ile ；
血球凝集素氨基酸序列第118位的Pro ；
血球凝集素氨基酸序列第161位的Lys ；
血球凝集素氨基酸序列第164位的Tyr ;或
血球凝集素氨基酸序列第167位的Thr。
在另一优选例中，所述的N端区域是血球凝集素氨基酸序列第51 260位氨基酸区域。
在另一优选例中，所述结合分子(例如65C6或其类似物)包含SEQID NO: 7所示的重链CDRl, SEQ ID NO:8所示的重链CDR2，SEQ ID NO:9所示的重链CDR3。
在另一优选例中，所述结合分子(例如65C6或其类似物)包含SEQID NO:10 所示的轻链CDR1, SEQ ID NO: 11所示的轻链CDR2，SEQ ID NO: 12所示的轻链CDR3。
在另一优选例中，所述结合分子(例如65C6或其类似物)包含SEQ ID N0:7所示
的重链CDR1, SEQ ID NO: 8所示的重链CDR2，SEQ ID NO: 9所示的重链CDR3 ;以及SEQ IDNO: 10所示的轻链CDRl，SEQ ID NO: 11所示的轻链CDR2，SEQ ID NO: 12所示的轻链CDR3。在另一优选例中 ，所述的结合分子(例如65C6或其类似物)包含重链可变区，该重链可变区具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述的结合分子(例如65C6或其类似物)包含轻链可变区，该轻链可变区具有SEQ ID N0:2所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述的结合分子(例如65C6或其类似物)包含重链可变区，该重链可变区具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，该轻链可变区具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述结合分子包含SEQ ID NO: 13所示的重链⑶Rl，SEQ IDNO: 14所示的重链CDR2，SEQ ID NO: 15所示的重链CDR3 ;和/或包含SEQ ID NO: 16 所示的轻链 CDRl，SEQ ID NO: 17 所示的轻链 CDR2，SEQ ID勵:18所示的轻链0 3。在另一优选例中，所述的结合分子(例如100F4或其类似物)包含重链可变区，该重链可变区具有SEQ ID N0:3所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述的结合分子(例如100F4或其类似物)包含轻链可变区，该轻链可变区具有SEQ ID N0:4所示的氨基酸序列。
在另一优选例中，所述的结合分子包含重链可变区，该重链可变区具有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，该轻链可变区具有SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述结合分子包含SEQ ID NO: 19所示的重链⑶Rl，SEQ IDNO:20所示的重链CDR2，SEQ ID NO:21所示的重链CDR3 ;和/或包含SEQ ID NO: 22 所示的轻链 CDRl，SEQ ID NO: 23 所示的轻链 CDR2，SEQ IDN0:24所示的轻链CDR3。在另一优选例中，所述的结合分子(例如3C11或其类似物)包含重链可变区，该重链可变区具有SEQ ID N0:5所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述的结合分子(例如3C11或其类似物)包含轻链可变区，该轻链可变区具有SEQ ID N0:6所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述的结合分子包含重链可变区，该重链可变区具有SEQ IDNO:5所示的氨基酸序列；以及轻链可变区，该轻链可变区具有SEQ ID N0:6所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述的结合分子是人单克隆抗体、Fab、F(ab’)、F(ab’)2、Fv、dAb、Fd、互补决定区(CDR)片段、单链抗体(scFv)、二价单链抗体、单链噬菌体抗体、双特异双链抗体、三链抗体、四链抗体；优选的，所述的结合分子是人单克隆抗体；更优选的，所述的人单克隆抗体其重链恒定区选择下组中重链类型之一的恒定区IgGl、IgG2a、IgG2b和IgG3，和其轻链恒定区选择下组轻链类型的恒定区之一 K链和λ链；更优选的，所述的人单克隆抗体其重链恒定区和轻链恒定区分别具有Genebank号ACK87036和ACK87038所示的氨基酸序列。在另一优选例中，在所述结合分子的重链或轻链中，所述的⑶Rl、⑶R2和⑶R3区
从氨基酸至羧基端依次串联排列。 在另一优选例中，所述的⑶Rl之前，⑶Rl与⑶R2之间，⑶R2与⑶R3区之间，⑶R3之后，还包括框架区；较佳地，所述的框架区的氨基酸长度为6-40个；较佳地8-35个；更佳地10-32个。在本发明的另一方面，提供一种多核苷酸，它编码前面任一所述的结合分子。在本发明的另一方面，提供一种表达载体，所述表达载体中含有编码前面任一所述的结合分子的重链的多核苷酸；和/或编码前面任一所述的结合分子的轻链的多核苷酸。在本发明的另一方面，提供一种宿主细胞，所述宿主细胞中含有所述的表达载体；或其基因组中整合有所述的多核苷酸。在另一优选例中，所述的宿主细胞是果蝇S2细胞。在本发明的另一方面，提供一种制备前面任一所述的结合分子的方法，所述方法包括培养前面所述的宿主细胞，从而表达所述的结合分子。在本发明的另一方面， 提供所述的结合分子的用途，用于制备预防、缓解或治疗禽流感病毒感染的组合物(如药物)。在另一优选例中，所述的禽流感病毒是Η5亚型的病毒。在另一优选例中，所述的禽流感病毒是Η5Ν1病毒。
在另一优选例中，所述的禽流感病毒是除H5N1的7. 2分支外的H5亚型的病毒；较佳地为除H5N1的7. 2分支外的H5N1病毒。在本发明的另一方面，提供一种药物组合物，它含有有效量的前面所述的结合分子，以及药学上可接受的载体。在另一优选例中，所述的药物组合物还含有有效量的其它抗流感药物，选自烷胺类药物或流感病毒神经氨酸酶抑制剂。在另一优选例中，所述的烷胺类药物包括金刚烷胺或金刚乙胺；或所述的流感病毒神经氨酸酶抑制剂包括奥司他韦或扎那米韦。在本发明的另一方面，提供前面任一所述的结合分子的用途，用于制备鉴定禽流感病毒的试剂或试剂盒。在本发明的另一方面，提供一种预防、缓解或治疗禽流感病毒感染的方法，所述的方法包括给予患者有效量的前面任一所述的结合分子。在本发明的另一方面，提供一种鉴定禽流感病毒的方法，所述方法包括将前面任一所述的结合分子与待检测样品接触，观察所述的结合分子与待检测样品的结合情况，若所述的结合分子与待检测样品发生结合，则该样品中存在禽流感病毒。在本发明的另一方面，提供一种抗禽流感病毒的免疫原(疫苗)，其包含有一段能与前面任一所述的结合分子结合的抗原表位。在另一优选例中，所述的抗原表位包含以下位点相对于血球凝集素的氨基酸序列第121位的Ser ;和相对于血球凝 集素的氨基酸序列第162位的Arg。在另一优选例中，所述的抗原表位还包含以下位点相对于血球凝集素的氨基酸序列第117位的Ile ；相对于血球凝集素的氨基酸序列第118位的Ρι·ο ；相对于血球凝集素的氨基酸序列第161位的Lys ；相对于血球凝集素的氨基酸序列第164位的Tyr ;或相对于血球凝集素的氨基酸序列第167位的Thr。在另一优选例中，所述的免疫原不包括全长的禽流感H5N1病毒的血球凝集素。本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。


图la、抗体表达载体的构建示意图。其中，MT-P表示MT启动子，Bip表示信号肽编码区；VL_A表示轻链λ可变区；VL-k表示轻链K可变区；VH表示重链可变区；(Χ_λ I表示轻链λ I恒定区；CL-k I表示轻链K I恒定区；CH-Y I表示重链Y I恒定区；poly-A为含有表达腺嘌呤核苷酸链的序列。图lb、SDS/PAGE电泳鉴定抗体的识别区域。图lc、不同浓度的血凝素与抗体100F4、65C6和3C11的结合和游离曲线。图2、65C6、100F4、3C11和TG15纯化抗体的台盼蓝染色结果。其中，HC表示重链的条带，LC表示轻链的条带。
图3、抗体100F4、65C6、3C11和TG15对19个所有H5N1和I个HlNl亚类的假病毒以及VSV-G包埋假病毒的中和活性测试的结果。以抗体TG15作为阴性对照。图4、来自于野生型A/Shenzhen/406H/06与其两株100F4逃逸株变体中H5HA蛋白序列的对比结果。图5a-b、HPAI H5NlA/Shenzhen/406H/06病毒接种后的14天内小鼠的体重改变和
存活率。图5c-d、HPAI H5N1 A/Cambodia/P0322095/05 病毒接种后的 14 天内小鼠的体重
改变和存活率。图 6、感染 H5N1 A/Shenzhen/406H/06 和 HPAI H5N1 A/Cambodia/P0322095/054 天后的肺部组织进行病理切片。其中，a、给予15mg/kg 65C6抗体的经H5NlA/Shenzhen/406H/06感染的小鼠肺部组织病理切片；b、给予5mg/kg 65C6抗体的经H5NlA/Shenzhen/406H/06感染的小鼠肺部组织病理切片；C、给予lmg/kg 65C6抗体的经H5NlA/Shenzhen/406H/06感染的小鼠肺部组织病理切片；d、给予 15mg/kg TG15 抗体的经 H5N1A/Cambodia/P0322095/05 感染的小鼠肺部组织病理切片； e、给予 15mg/kg 65C6 抗体的经 H5N1A/Cambodia/P0322095/05 感染的小鼠肺部组织病理切片；f、给予 5mg/kg 65C6 抗体的经 H5N1A/Cambodia/P0322095/05 感染的小鼠肺部组织病理切片；g、给予 lmg/kg 65C6 抗体的经 H5N1A/Cambodia/P0322095/05 感染的小鼠肺部组织病理切片；h、给予 15mg/kg TG15 抗体的经 H5N1A/Cambodia/P0322095/05 感染的小鼠肺部组织病理切片。图7a-b、HPAI H5NlA/Shenzhen/406H/06病毒接种后的14天内小鼠的体重改变和
存活率。图 7c-d、HPAI H5N1A/Cambodia/P0322095/05病毒接种后的14天内小鼠的体重改
变和存活率。图 8a 和 C、感染 H5NlA/Shenzhen/406H/06 和 HPAI H5N1A/Cambodia/P0322095/05感染后24小时经65C6抗体处理的小鼠组在感染4天后未出现任何明显的炎症反应。 图 8b 和 d、感染 H5NlA/Shenzhen/406H/06 和 HPAI H5N1A/Cambodia/P0322095/05感染后24小时经TG15抗体处理的小鼠在感染4天后出现明显的肺部炎症病理改变包括肺泡壁增厚、炎症细胞浸润和血管扩张充血。图9、电镜下观察到的经负染的HA和抗体65C6的复合物及其示意图。a、一个抗体与两个HA分子形成的复合体b、一个抗体与两个HA分子形成的复合体C、一个抗体与两个HA分子形成的复合体
d、一个抗体与五个HA分子形成的复合体,五个HA分子C端连接形成Rossett结构，由此推测抗体65C6是结合在HA的N端；e、两个抗体与两个HA分子形成的复合体；每个抗体的Fab段与HA分子结合时都形成固定的105度的角度。图10、涉及到中和表位的氨基酸。A、血球凝集素(HA)上23个单氨基酸的突变位点。这些单个氨基酸的突变能够使酿酒酵母表面展示的带有该单个氨基酸突变的血球凝集素的51-260个氨基酸的片段失去和抗体65C6的结合能力。而这其中有10个突变的氨基酸从血球凝集素的三维结构上看是埋在里面的，而另外13个突变的氨基酸是暴露在表面的。B、对13个单个氨基酸发生突变的HA形成的假病毒，要达到95%的中和效果所需要的抗体65C6的浓度以及相对于中和原始株抗体浓度增加的倍数。红色所示为对单克隆抗体65C6的中和更加耐受的单个氨基酸的突变。C、通过酵母展示和假病毒中和试验所鉴定出来的7个分别位于H5N1的7.1亚型的A/Beijing/01/03株的血球凝集素蛋白上117，118，121，161，162，164和167 (红色所示)
位的氨基酸。D、从血球凝集素蛋白的三维结构上来看那7个氨基酸117，118，121，161，162，164和167 (红色和蓝色所示)相互挨在一起。E、比较抗体65C6中和7.1亚类的原始株和该株的5个单个氨基酸的突变以及5
个氨基酸的联合突变的滴度。F、在假病毒中和实验中，中和5个单个氨基酸的突变和5个氨基酸的联合突变要达到80%的中和所需要的抗体65C6的浓度，以及相比之中和原始株病毒抗体浓度的增加倍数。红色标记的为对抗体65C6中和耐受的单个氨基酸突变或者多个氨基酸的联合突变。
具体实施例方式本发明人经过广泛而深入的研究，获得含有独特的CDR区的抗禽流感病毒的结合分子，所述的结合分子对于禽流感病毒具有良好的中和作用。本发明人还深入研究了其中一种结合分子在禽流感病毒血球凝集素(HA)上的结合位点，获得了所述结合分子的中和表位。在此基础上完成了本发明。结合分子本发明提供了能特异性结合禽流感病毒的结合分子。优选地，所述结合分子结合的是禽流感的H5N1病毒。本发明的结合分子呈现对于禽流感病毒良好的中和活性。本发明人应用高敏感的HA和NA假病毒筛选法及分子克隆技术，成功地从感染2. 3. 4亚亚分支H5N1病毒的恢复期病人的记忆性B细胞分离得到了三株人源的抗H5亚型禽流感病毒的单克隆抗体65C6U00F4和3C11。三株单克隆抗体都与HAl具有良好的亲和力。其中，65C6U00F4能够中和许多种(19中或更多)H5亚型的禽流感病毒，是广谱的中和性抗体；3C11能够中和4种或多于4种的H5亚型的禽流感病毒。本发明中较为优选的抗体是65C6抗体，其对几乎所有的H5N1病毒的分支均有良好的中和能力并在动物体内有良好的预 防与治疗的效果。电子显微镜及体外抗体筛选的实验结果表明，65C6抗体结合在H5HA的头部区域保守的抗原表位，且体外诱变实验表明经11代的抗体筛选并没有发现逃逸的突变株，可见65C6抗体所识别的保守中和表位位于HA的头部区域且该表位在所有的H5N1中都很难发生突变。因此，一方面，65C6抗体单独使用或与其它抗体或与小分子抑制剂联合使用在治疗H5N1各种分支引起的感染方面将有很大的潜力；另一方面，利用H5HA共同的中和表位作为免疫原有可能制备出针对所有H5N1分支的广谱抗病毒抗体。本发明的结合分子可以是完整的免疫球蛋白分子，所述结合分子可以是抗原结合片段，包括但不限于Fab、F(ab’ )、F(ab，)2、Fv、dAb、Fd、互补决定区(CDR)片段、单链抗体(scFv)、二价单链抗体、单链卩遼菌体抗体、双特异双链抗体、三链抗体、四链抗体以及至少含有足以赋予与禽流感病毒毒株的特异性抗原结合的免疫球蛋白的片段的(多)肽或其片段。本发明还提供了所述的结合分子在制备预防、缓解和/或治疗禽流感病毒感染的药物中的应用。这种感染可以在小群体中发生，但是也可以以季节流行病方式在世界范围传播，或者更严重地在全球蔓延，数百万个体处于危险之中。本发明提供了可以中和导致这种流行病以及潜在的全球性流行病的禽流感病毒毒株的感染的结合分子。本发明的结合分子可以大规模地制备和贮存，因为其提供了针对不同的流行性毒株的保护作用，且对于为将来可能发生的禽流感爆发做准备是有利的。根据本领域公知的技术，抗体的CDR区是免疫学感兴趣的蛋白质的序列。在本发明的实施方案中，每一种结合分子可包含本文揭示的二、三、四、五或者所有六个CDR区。优选地，本发明的结合分子包含本文揭示的至少两个CDR。本发明还包括所述的结合分子的“功能变体”。如果变体能与亲代结合分子(变异前的结合分子)竞争特异性结合禽流感病毒或其蛋白片段，则认为该变体分子是亲代结合分子的功能变体。换句话说，所述功能变体仍能结合禽流感病毒的HAl蛋白或其片段，且与变异前的结合分子具有相同或相似的结合特性(例如，识别的抗原决定区域的相同的)。功能变体包括但不限于一级结构序列基本相似、但是含有例如在亲代结合分子中未发现的体外或体内化学和/或生物化学修饰的衍生物。这种修饰包括乙酞化、酞化、核苷酸或者核苷酸衍生物的共价附着、脂质或者脂质衍生物的共价附着、交联、二硫键形成、糖基化、羟基化、甲基化、氧化、聚乙二醇化、蛋白酶解加工、磷酸化等。换句话说，亲代结合分子的氨基酸和/或核苷酸序列中的修饰不显著影响或改变由所述核苷酸序列编码的或者含有所述氨基酸序列的所述结合分子的结合特性，即所述结合分子仍能识别并结合其靶位。所述功能变体可以具有保守序列修饰，包括核苷酸和氨基酸取代、添加和缺失。这些修饰可以通过本领域己知的标准技术导入，例如定向诱变和随机PCR介导的诱变，并且可包含天然以及非天然核苷酸和氨基酸。保守氨基酸取代包括其中氨基酸残基由具有相似结构或者化学性质的另一氨基酸残基置换的取代。具有相似侧链的氨基酸残基的家族己经在本领域中限定。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸)、无电荷极性侧链氨基酸(例如天冬酞胺、谷氨酞胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链氨基酸(例如甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、分支侧链氨基酸(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)以及芳香侧链氨基酸(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸)。本领域技术人员明白也可以使用除了上述家族之外的其它氨基酸残基家族分类方式。另外，变体可具有非保守的氨基酸取代，例如氨基酸由具有不同结构或者化学性质的另一氨基酸残基置换。相似的小变异也可包括氨基酸缺失和/或插入。使用本领域熟知的计算机程序可以发现确定哪些氨基酸残基可以被取代、插入或者缺失而不消除免疫学活性的指导。此外，功能变体可包含氨基酸序列在氨基末端或者羧基末端或者这两端的截短体。本发明的功能变体与亲代结合分子相比可具有相同或不同的、更高或更低的结合亲和性，但是仍能结合禽流感病毒或其片段。例如，本发明的功能变体与亲代结合分子相比对于禽流感病毒H5亚型病毒的HAl或其片段可具有增加或降低的结合亲和性。在本发明范围内的功能变体与本文所述亲代结合分子具有至少大约50%至大约99%、优选至少大约60%至大约99%、更优选至少大约70%至大约99%、甚至更优选至少大约80%至大约99%、最优选至少大约90%至大约99%、特别是至少大约95%至大约99%，以及特别是至少大约97%至大约99%的氨基酸序列同源性。本领域技术人员已知的计算机算法如Gap或者Bestfit可用于最佳地排列氨基酸序列以进行对比以及明确相似或相同的氨基酸残基。功能变体可以通过使用本领域已知的普通分子生物学方法改变亲代结合分子或其一部分而获得，所述方法包括但不限于易错PCR、寡核苷酸指导的诱变、定点诱变以及重链和/或轻链改组法。因此，应理解，当使用术语(人)结合分子时，其也涵盖所述(人)结合分子的功能变体。结合分子的抗原结合特性通常由位于重链和轻链可变区的3个特定的区域来描述，称为互补决定区(complementarity determining region, CDR),所述的CDR区将可变区间隔成4个框架区域(FR)，4个FR的氨基酸序列相对比较保守，不直接参与结合反应。这些⑶R形成环状结构，通过其间的FR形成的β折叠在空间结构上相互靠近，重链上的⑶R和相应轻链上的CDR构成了结合分子的抗原结合位点。可以通过比较同类型的结合分子的氨基酸序列来确定是哪些氨基酸构成了 FR或CDR区域。较佳地，所述的取代、插入或者缺失可以发生在CDR区以外的区域，例如抗体重链或轻链的FR区上；由于FR区不参与与抗原的直接结合，该区的适当变化是可以的。
作为本发明的优选方式，所述的结合分子是单克隆抗体，其包括人源的恒定区(如人源恒定区IgH序列和IgKappa序列)。所述的抗禽流感病毒单克隆抗体的重链可变区、轻链可变区以及位于重链可变区和轻链可变区的互补决定区(CDR)均具有独特的不同于现有技术的结构，且它们是全人源的。作为本发明的优选方式，本发明包括具有所述单克隆抗体的相应氨基酸序列的单克隆抗体，具有所述单克隆抗体可变区链的单克隆抗体。本发明还包括具有含所述的互补决定区(CDR)的轻链和重链的任何抗体，以及CDR区与本发明的单克隆抗体的CDR具有90%以上(更佳地95%以上)的同源性的任何抗体。经验证，本发明的抗禽流感病毒单克隆抗体的CDR区是全新的，其针对的是一个独特的禽流感病毒HAl蛋白上的抗原表位，技术构思不同于现有的抗禽流感病毒抗体。本发明的单克隆抗体可以是全人源的，其重链、轻链可变区以及恒定区均来源于人抗体。因此，其在具有特别优异的识别和中和禽流感病毒的作用的同时，还具有免疫原性低、安全性高的特点。另一方面，本发明包括免疫缀合物，即包含本发明所述至少一个结合分子以及进一步包含至少一个其它治疗分子、治疗剂或可检测物质。适于治疗和/或预防的标记可以是毒素或者其功能部分、抗生素、酶、增强吞噬作用或者免疫刺激作用的其它结合分子。包含可检测物质的免疫缀合物可诊断性地用于例如评定对象是否已经感染禽流感病毒毒株或者作为临床实验程序的一部分监测禽流感病毒感染的发生或进展以例如确定指定治疗方案的功效。然而，它们也可以用于其它检测和/或分析和/或诊断目的。可检测的部分/物质包括但不限于酶、辅基、荧光材料、发光材料，生物发光材料、放射性材料、正电子发射金属以及非放射性顺磁性金属离子。为了检测和/或分析和/或诊断目的用于标记单克隆抗体的标记依赖于使用的特定检测/分析/诊断技术和/或方法例如免疫组织化学染色(组织)样品、流式细胞计量术、激光扫描细胞计量术检测、荧光免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、生物测定(例如吞噬作用测定)、蛋白质印迹应用等。对于本领域已知的检测/分析/诊断技术和/或方法合适的标记为本领域技术人员所熟知。本发明的结合分子可以与一或多个抗原缀合/附着。优选地，这些抗原是由给予了结合分子-抗原缀合物的对象的免疫系统识别的抗原。所述抗原可以彼此相同，但也可以是不同的。使附着抗原和结合分子的缀合方法为本领域所熟知，包括但不限于使用交联剂。除了通过直接或间接(例如通过接头)缀合而化学产生免疫缀合物之外，所述免疫缀合物可以作为融合蛋白而产生，所述融合蛋白包含本发明的结合分子及合适的治疗分子、治疗剂或可检测物质。融合蛋白可以通过本领域已知方法产生，例如通过构建核酸分子以及随后表达所述核酸分子而重组产生，所述核酸分子包含符合读框的编码结合分子的核苷酸序列以及编码合适标记的 核苷酸序列。本发明另一方面提供了编码本发明的至少一种结合分子、其功能变体或者免疫缀合物的核酸分子。这种核酸分子可以用作中间物以进行克隆。在一个优选的实施方案中，所述核酸分子是分离或纯化的。DNA分子的序列可以用常规技术，或利用杂交瘤技术获得。本领域技术人员可以理解，这些核酸分子的变体也是本发明的一部分。核酸分子的变体是这样的核酸序列，通过使用标准遗传密码可以将其直接翻译以提供与从亲代核酸分子中翻译的序列相同的氨基酸序列。一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。目前，已经可以完全通过化学合成来得到编码本发明的结合分子(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中已知的各种现有的DNA分子(或如载体)和细胞中。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明的结合分子的序列中。本发明还涉及包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体。这些载体可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。优选的，本发明的载体是例如含病毒启动子的质粒表达载体，且在所述表达载体中分别插入了抗禽流感病毒结合分子重链可变区(VH)与恒定区的IgH (来自人源IgH的恒定区)融合序列和轻链可变区VL与人体Ig kappa(来自人源Ig kappa的恒定区)融合序列。宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有细菌细胞如大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙门氏菌；真菌细胞如酵母；植物细胞；昆虫细胞如果蝇S2或Sf9 ;动物细胞如CH0、C0S7、NS0或Bowes黑素瘤细胞等。特别适用于本发明的宿主细胞是真核宿主细胞，如果蝇S2细胞。用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获，用CaCl2法处理，所用的步骤在本领域众所周知。另一种方法是使用MgCl2。如果需要，转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物，可选用如下的DNA转染方法磷酸钙共沉淀法，或常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。获得的转化子可以用常规方法培养，表达本发明的结合分子。根据所用的宿主细胞，培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超声处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。本发明的结合分子也可以在转基因非人哺乳动物如兔、山羊或者牛中产生，并且分泌进例如其乳中。中和表位

本发明人的深入研究发现，本发明的一种中和分子(65C6)能够识别一个位于HA上远膜区的球形末端上保守的中和表位，该抗体可以很好地中H5N1病毒。因此，可以设计基于抗体65C6的表位的免疫原,从而诱导出可以中和各种(亚)型的H5N1病毒的免疫反应。所述的免疫原较好地包含以下抗原表位相对于血球凝集素的氨基酸序列第121位的Ser ;和相对于血球凝集素的氨基酸序列第162位的Arg，上述表位是与所述结合分子结合的表位。所述的免疫原更好地还包含以下抗原表位相对于血球凝集素的氨基酸序列第117位的Ile ;相对于血球凝集素的氨基酸序列第118位的Pio ;相对于血球凝集素的氨基酸序列第161位的Lys ;相对于血球凝集素的氨基酸序列第164位的Tyr ;或相对于血球凝集素的氨基酸序列第167位的Thr。基于上述所示的表位可设计出合适的免疫原，以诱导产生一些新的广谱中和性结合分子(如抗体)。所述的免疫原的设计可以参照本领域已知的一些技术，其原则是将上述的中和性表位暴露于其空间结构的表面上。药物组合物本发明的结合分子可用于制备抑制禽流感病毒的组合物。基于本发明的新发现，还提供了一种可抑制禽流感病毒或禽流感病毒感染相关疾病的组合物，其包含有效量的本发明所述的结合分子；以及药学上可接受的载体。本文所用的术语“药学上可接受的”是指当分子本体和组合物适当地给予动物或人时，它们不会产生不利的、过敏的或其它不良反应。本文所用的“药学上可接受的载体”应当与本发明的结合分子相容，即能与其共混而不会在通常情况下大幅度降低组合物的效果O可作为药学上可接受的载体或其组分的一些物质的具体例子是糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和土豆淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素；西黄蓍胶粉末；麦芽；明胶；滑石；固体润滑剂，如硬脂酸和硬脂酸镁；硫酸钙；植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油；多元醇，如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；海藻酸；乳化剂，如Tween ;润湿剂，如月桂基硫酸钠；着色剂；调味剂；压片剂、稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无热原水；等渗盐溶液；和磷酸盐缓冲液等。本发明的组合物可根据需要制成各种剂型，并可由医师根据患者种类、年龄、体重和大致疾病状况、给药方式等因素确定对病人有益的剂量进行施用。给药方式例如可以采用注射或其它治疗方式。本发明的结合分子可以以未分离的或者分离的形式使用。此外，本发明的结合分子可以单独应用或者于包含至少一种本发明的结合分子(或其变体或片段)的混合物中应用。换句话说，所述结合分子可以组合应用，例如作为包含两或更多种本发明的结合分子、其变体或片段的药物组合物。例如，具有不同但互补活性的结合分子可以组合在一个治疗方案中以达到希望的预防、治疗或诊断作用，但是或者也可以将具有相同活性的结合分子组合在一个治疗方案中以达到希望的预防、治疗或诊断作用。任选地，所述混合物进一步包含至少一种其它治疗剂。所述药物组合物可包含两或多个对于禽流感病毒具有中和活性的结合分子。在一个实施方案中，当组合应用时，所述结合分子呈现协同中和活性。换句话说，所述组合物包含至少两种具有中和活性的结合分子，特征在于所述结合分子在中和禽流感病毒中起协同作用。如本文所用，术语“协同”是指当组合应用时，结合分子的组合作用高于单独应用时的加合作用。所述协同作用的结合分子可以结合禽流感病毒的相同或不同片段上的不同结构。计算协同作用的方式是通过组合指数计算。组合指数(Cl)的概念己经由Chou andTalalay(1984)描述。所述组合物也可包含具有中和活性的一种结合分子以及一种非中和性禽流感病毒特异性结合分子。所述非中和性及中和性禽流感病毒特异性结合分子在中和禽流感病毒H5亚型中也可以协同作用。本发明的结合分子或药物组合在用于人体之前可以在合适的动物模型系统中检测。这种动物模型系统包括但不限于小鼠、雪貂(ferret)和猴。本发明的结合分子还可与其它抗流感病毒的药物联合用药，所述的抗流感药物例如但不限于烷胺类药物(金刚烷胺和金刚乙胺)；2)流感病毒神经氨酸酶抑制剂(奥司他韦和扎那米韦)。因此本发明还提供了包含本发明的结合分子以及上述抗流感药物的药物组合物。可以调整给药方案以提供最佳的所需应答(例如治疗应答)。合适的剂量范围可例如是O. 01-500mg/kg体重,优选O. l_50mg/kg体重。此外,例如可以给予一次推注、随时间给予多次分开剂量或者根据治疗情况的紧急性而可以按比例降低或增加剂量。本发明的分子和组合物优选是无菌的。使得这些分子和组合物无菌的方法为本领域所熟知。用于诊断、预防和/或治疗的其它分子可以以与本发明的结合分子相似的给药方案给予。如果单独给予其它分子，则可以在给予本发明的一或多种人结合分子或药物组合物之前、同时或者之后给予患者。对于人患者的精确给药方案通常在临床实验期间挑选出。检测试剂和试剂盒本发明的结合分子可用于制备检测流感病毒的试剂或试剂盒。如本文所用，术语“待检测样品”或“待测样品”涵盖了多种样品类型，包括生物学来源的血液及其它体液样品，实体组织样品如活检组织样品或者组织培养物，或者衍生自其中的细胞或者其后代。该术语还包括在获得后已经通过任何方式处理的样品，例如用试剂处理、溶解、或者富集某些成分如蛋白质或者多核苷酸。该术语涵盖了得自任何物种的各种临床样品，也包括培养的细胞、细胞上清和细胞溶解产物。以所述的结合分子为基础，可制备方便、快速且准确地检测禽流感病毒(如H5N1)的试剂盒。因此，本发明提供了一种用于检测样品中是否存在禽流感病毒的检测试剂盒，该试剂盒中含有本发明的结合分子。在获得了本发明提供的结合分子后，可以方便地制备出用于特异性检测禽流感病毒的检测试剂盒。作为本发明的一种检测方式，采用间接ELISA法，将待测的抗原包被于固相载体上，利用本发明的结合分子进行检测。 作为本发明的一种优选方式，所述的结合分子是抗体，可根据双抗夹心法的原理来检测。双抗夹心法常规的做法是将一抗(如本发明的单克隆抗体)固定于载体，然后使一抗与抗原反应，洗涤后再与二抗反应(所述的二抗携带可检测信号，或可与携带可检测信号的物质结合)，最后进行化学发光或酶联显色反应检测信号。双抗夹心法特别适用于具有两个或两个以上表位的抗原的检测。为了在检测时更方便，所述试剂盒中除了含有本发明的结合分子以外，还可以包含其它检测试剂或辅助试剂，所述的辅助试剂例如是ELISA试剂盒中常规使用的一些试剂，这些试剂的特性以及它们的配制方法均是本领域技术人员所熟知的，如显色剂、标记物、二抗、抗抗体、增敏剂等。本领域人员应理解，各种变化形式的检测试剂盒均是包含在本发明中的，只要在其中利用了本发明的结合分子作为识别禽流感病毒的试剂。此外，在所述试剂盒中还可包含使用说明书，用于说明其中装载的试剂的使用方法。在获得了本发明提供的结合分子和/或试剂盒后，可以利用多种免疫学相关方法来检测样品中HA蛋白或其含量，从而得知待测样品的供体是否感染禽流感病毒，这些方法均被包含在本发明中。较佳地，所述的方法是以非疾病诊断为目的的。作为一种优选方式，本发明提供一种体外(非诊断或治疗性地)检测禽流感病毒的方法，包括以下步骤(al)将待测样品包被于固相载体；(a2)将本发明的结合分子加样于(al)的固相载体，从而使待测样品中的禽流感病毒与结合分子结合，形成带有“禽流感病毒-本发明的结合分子” 二元复合物的固相载体；(a3)将特异性结合本发明的结合分子的检测物加样于(a2)的固相载体，形成带有“禽流感病毒-本发明的结合分子-检测物”三元复合物的固相载体；所述的检测物上携带一标记物；(a4)检测三元复合物中的标记物，确定待检测样品中禽流感病毒的存在与否以或存在的量。按照上述方法，只要设置已知浓度的抗原对照，制作浓度标准曲线，通过比照浓度标准曲线就可以得出待测样品中的流感病毒含量。下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如J.萨姆布鲁克等编著，分子克隆实验指南，科学出版社，2002中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。除非另行·定义，·文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。1.方法材料人H5N1 病例该深圳病人于2006年6月被诊断出感染了高致病性H5N1禽流感病毒，通过输入感染过高致病性H5N1禽流感病毒的康复期病人血浆，该病人被治愈了。血液样品在该病人康复6个月后采集，通过Ficoll密度梯度离心，分离出外周血单核细胞。血浆和外周血单核细胞样品于_80°C储存31。动物实验小鼠为6-8 周雌性 BALB/c 小鼠购自 Charles River Laboratories(L’ Arbresle, France)饲养在负压,微生物隔离装置中，空气通过HEPA过滤装置过滤。12小时光照和12小时黑暗周期。攻毒实验在柬埔寨巴斯德研究所生物安全3级实验室中进行。小鼠在接种前通过腹腔注射75mg/kg的戊巴比妥钠先麻醉小鼠。细胞系培养病毒包装细胞系293FT (购自InvitiOgen)的培养液为完全DMEM培养液[高糖，10%胎牛血清，2mM L-谷氨酸，I mM丙酮酸钠，青霉素(100U/ml))和链霉素(100 μ g/ml) ；Invitrogen Life Technologies]含有 O. 5mg/ml of G418。MDCK 细胞(购自美国组织培养公司)的培养液为完全DMEM培养液，果蝇S2细胞(Invitrogen)的培养液为完全SFM含有10%(v/v)FBS，50U/ml青霉素，50 μ g/ml链霉素和2mM L-谷氨酸]，S2细胞培养温度为 28。。。病毒高致病性H5N1 病毒 A/Shenzhen/406H/06 和 A/Cambodia/P0322095/05 分别获自深圳东湖医院、柬埔寨巴斯德研究所。病毒在MDCK细胞中繁殖，含有病毒的上清最后分装后储存于_80°C 32。半数组织感染剂量的计算通过系列稀释病毒，并感染MDCK细胞，通过Reed andMuench公式计算出半数组织感染剂量33。半数致死量的计算每组5只老鼠鼻腔滴注50ul的10倍系列稀释的病毒，观察14天，体重下降超过35%的老鼠被安乐死。最后通过Reed and Muench公式计算出半数致死量。所有高致病性H5N1禽流感病毒相关实验都在生物安全3级实验室中完成。HA/NA假病毒的制备H5病毒包括10个分枝以及5个分枝2的亚分枝，其中分枝O、1、2. 1、2. 2、2. 3和7分离自人，其余分离自禽类。构建密码子优化的H5病毒和HlHA及flag标签的NlNA的方法以及生产流感HA/NA假病毒的方法参考以前发表的文章中的描述34’35VSV-G包埋假病毒=VSV-G病毒包膜蛋白所包埋的假病毒，其包埋方法请参照Vaccine 27:6777-6790(2009)文章所述的方法。用于包装HA和NA假病毒所用的HA基因的原始病毒株来源及其AccessionNumber见表I。HA是通过常规的合成方法获得的。表I
权利要求
1.一种结合分子，其识别禽流感病毒的血球凝集素HAl，并结合于血球凝集素N端区域上的表位上，该表位包含以下位点 血球凝集素氨基酸序列第121位的Ser ;和 血球凝集素氨基酸序列第162位的Arg。
2.如权利要求1所述的结合分子，其特征在于，所述的表位还包含以下位点 血球凝集素氨基酸序列第117位的Ile ； 血球凝集素氨基酸序列第118位的Pro ； 血球凝集素氨基酸序列第161位的Lys ； 血球凝集素氨基酸序列第164位的Tyr ;或 血球凝集素氨基酸序列第167位的Thr。
3.如权利要求1所述的结合分子，其特征在于，所述结合分子包含SEQID N0:7所示的重链CDRl，SEQ ID NO:8所示的重链CDR2，SEQ ID NO:9所示的重链CDR3。
4.如权利要求1所述的结合分子，其特征在于，所述结合分子包含SEQID NO: 10所示的轻链CDR1, SEQ ID NO: 11所示的轻链CDR2，SEQ ID NO: 12所示的轻链CDR3。
5.如权利要求1所述的结合分子，其特征在于，所述结合分子包含SEQID N0:7所示的重链CDR1, SEQ ID NO: 8所示的重链CDR2，SEQ ID NO: 9所示的重链CDR3 ;以及SEQ IDNO: 10所示的轻链CDR1，SEQ ID NO: 11所示的轻链CDR2，SEQ ID NO: 12所示的轻链CDR3。
6.如权利要求1所述的结合分子，其特征在于，所述的结合分子包含重链可变区，该重链可变区具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
7.如权利要求1所述的结合分子，其特征在于，所述的结合分子包含轻链可变区，该轻链可变区具有SEQ ID N0:2所示的氨基酸序列。
8.如权利要求1所述的结合分子，其特征在于，所述的结合分子包含 重链可变区，该重链可变区具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；以及 轻链可变区，该轻链可变区具有SEQ ID N0:2所示的氨基酸序列。
9.如权利要求1所述的结合分子，其特征在于，所述结合分子包含SEQID NO: 13所示的重链CDR1，SEQ ID NO: 14所示的重链CDR2，SEQ ID NO: 15所示的重链CDR3 ;和/或 包含SEQ ID勵16所示的轻链0 1，SEQ ID NO: 17所示的轻链CDR2，SEQ ID NO: 18所示的轻链⑶R3。
10.如权利要求9所述的结合分子，其特征在于，所述的结合分子包含重链可变区，该重链可变区具有SEQ ID N0:3所示的氨基酸序列。
11.如权利要求9所述的结合分子，其特征在于，所述的结合分子包含轻链可变区，该轻链可变区具有SEQ ID N0:4所示的氨基酸序列。
12.如权利要求9所述的结合分子，其特征在于，所述的结合分子包含 重链可变区，该重链可变区具有SEQ ID N0:3所示的氨基酸序列；以及 轻链可变区，该轻链可变区具有SEQ ID N0:4所示的氨基酸序列。
13.如权利要求1所述的结合分子，其特征在于，所述结合分子包含SEQID N0:19所示的重链CDRl, SEQ ID NO: 20所示的重链CDR2，SEQ ID NO: 21所示的重链CDR3 ;和/或 包含 SEQ ID N0:22 所示的轻链 CDR1，SEQ ID NO:23 所示的轻链 CDR2，SEQ ID NO:24所示的轻链⑶R3。
14.如权利要求13所述的结合分子，其特征在于，所述的结合分子包含重链可变区，该重链可变区具有SEQ ID N0:5所示的氨基酸序列。
15.如权利要求13所述的结合分子，其特征在于，所述的结合分子包含轻链可变区，该轻链可变区具有SEQ ID N0:6所示的氨基酸序列。
16.如权利要求13所述的结合分子，其特征在于，所述的结合分子包含 重链可变区，该重链可变区具有SEQ ID NO: 5所示的氨基酸序列；以及 轻链可变区，该轻链可变区具有SEQ ID N0:6所示的氨基酸序列。
17.如权利要求1-16任一所述的结合分子，其特征在于，所述的结合分子是人单克隆抗体、Fab、F(ab’ )、F(ab’)2、Fv、dAb、Fd、互补决定区片段、单链抗体、二价单链抗体、单链噬菌体抗体、双特异双链抗体、三链抗体、四链抗体； 优选的，所述的结合分子是人单克隆抗体； 更优选的，所述的人单克隆抗体其重链恒定区选择下组中重链类型之一的恒定区IgGl, IgG2a、IgG2b和IgG3，和其轻链恒定区选择下组轻链类型的恒定区之一 κ链和λ链； 更优选的，所述的人单克隆抗体其重链恒定区和轻链恒定区分别具有Genebank号ACK87036和ACK87038所示的氨基酸序列。
18.—种多核苷酸,其特征在于,它编码权利要求1-17任一所述的结合分子。
19.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体中含有 编码权利要求3-17任一所述的结合分子的重链的多核苷酸；和/或 编码权利要求3-17任一所述的结合分子的轻链的多核苷酸。
20.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞中含有权利要求19所述的表达载体；或其基因组中整合有权利要求18所述的多核苷酸。
21.如权利要求20所述的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞是果蝇S2细胞。
22.权利要求1-17任一所述的结合分子的用途，用于制备预防、缓解或治疗禽流感病毒感染的组合物。
23.如权利要求22所述的用途，其特征在于，所述的禽流感病毒是Η5亚型的病毒。
24.如权利要求23所述的用途，其特征在于，所述的禽流感病毒是Η5Ν1病毒。
25.一种药物组合物，其特征在于，它含有有效量的权利要求1-17任一所述的合分子，以及药学上可接受的载体。
26.如权利要求25所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物还含有有效量的其它抗流感药物，选自烷胺类药物或流感病毒神经氨酸酶抑制剂。
27.如权利要求26所述的药物，其特征在于，所述的烷胺类药物包括金刚烷胺或金刚乙胺；或 所述的流感病毒神经氨酸酶抑制剂包括奥司他韦或扎那米韦。
28.权利要求1-17任一所述的结合分子的用途，用于制备鉴定禽流感病毒的试剂或试剂盒。
29.一种预防、缓解或治疗禽流感病毒感染的方法，其特征在于，所述的方法包括给予患者有效量的权利要求1-17任一所述的结合分子。
30.一种鉴定禽流感病毒的方法，所述方法包括将权利要求1-17任一所述的结合分子与待检测样品接触，观察所述的结合分子与待检测样品的结合情况，若所述的结合分子与待检测样品发生结合，则该样品中存在禽流感病毒。
31.一种抗禽流感病毒的免疫原，其包含有一段能与权利要求1-17任一所述的结合分子结合的抗原表位。
32.如权利要求31所述的免疫原，其特征在于，所述的抗原表位包含 相对于血球凝集素的氨基酸序列第121位的Ser ;和 相对于血球凝集素的氨基酸序列第162位的Arg。
33.如权利要求32所述的免疫原，其特征在于，所述的抗原表位还包含 相对于血球凝集素的氨基酸序列第117位的Ile ； 相对于血球凝集素的氨基酸序列第118位的Ρι·ο ； 相对于血球凝集素的氨基酸序列第161位的Lys ； 相对于血球凝集素的氨基酸序列第164位的Tyr ;或 相对于血球凝集素的氨基酸序列第167位的Thr。
全文摘要
本发明涉及高致病性禽流感的中和分子及其制备方法。公开了新的抗禽流感病毒的中和分子，所述的中和分子对于禽流感病毒具有良好的中和作用；还公开了所述结合分子在禽流感病毒血球凝集素上的结合位点。
文档编号A61K39/42GK103030693SQ201210376959
公开日2013年4月10日 申请日期2012年9月28日 优先权日2011年9月30日
发明者周保罗, 胡红星, 周伯平 申请人:中国科学院上海巴斯德研究所, 深圳市第三人民医院