结直肠癌抗原肽与热休克蛋白的复合物及其应用的制作方法

结直肠癌抗原肽与热休克蛋白的复合物及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一类与热休克蛋白结合的结直肠癌抗原，包括结直肠癌特异性抗原MU5AC、RNF43和T0MM34来源的肽段。本发明同时还提供了抗原与热休克蛋白gp96和HSP78的复合物及其制备方法，复合物包括gp96和HSP78与抗原多肽以非共价键结合的复合体，和二者以共价键连接形成的融合蛋白。这种复合物可用于制备治疗结直肠癌的治疗性疫苗。
【专利说明】结直肠癌抗原肽与热休克蛋白的复合物及其应用

【技术领域】
[0001] 本发明属于生物【技术领域】，特别涉及结直肠癌抗原多肽与热休克蛋白gp96和 HSP78的复合物以及它们的用途。

【背景技术】
[0002] 热休克蛋白（Heat Shock Protein, HSP)是一类高度保守、广泛存在于原核及 真核生物中的蛋白质，在热休克、葡萄糖缺乏、细菌和病毒感染等应激状态下会表达升 高。gp96是热休克蛋白HSP90家族中的重要成员，主要定位于内质网腔（Endoplasmic Reticulum)，能够阻止蛋白质聚集，协助蛋白质折叠、伸展、组装和转运，抑制错折叠蛋白质 的分泌。gp96在正常组织和肿瘤中均有广泛表达。gp96分子除了具备分子伴侣的功能， gp96分子还具有多肽结合的能力，能结合细胞中5-25个氨基酸的多肽序列。热休克蛋白 hsp78是细胞质中hsp70家族中的成员，分子量约78kDa。HSP78分子也能够和细胞中各种 短肽结合。
[0003] 近年来的研究发现，组织提取的gp96、HSP78蛋白具有很强免疫原性，能够有效的 激起组织特异性的免疫反应。同时也发现这种抗原性由这些HSP结合的短肽所决定。HSP 将结合的短肽呈递给I类MHC分子，激活特异性的效应和记忆T细胞，引发长期的细胞免疫 反应。gp96还可以活化树突细胞（DC)促进MHC I类和MHC II类分子以及共刺激因子的表 达，从而提商免疫反应。
[0004] 结直肠癌是最常见恶性肿瘤之一，近年来国内外发病率逐年上升。根据2012年最 新发表的肿瘤登记年报，结直肠癌年发病率达到29. 4/105,居常见肿瘤的第3位。尽管确诊 时709Γ80%的患者可以进行根治性手术切除，但总体的5年生存率仍只有509Γ60%。约2/3 接受过根治手术的患者会发生复发或远处转移，85%的复发转移发生在术后2年半之内，这 些复发转移的发生可能与确诊时已存在微转移灶有关，而目前的检查手段还无法发现这种 微转移。这些综合原因导致结直肠癌年死亡率超过14/10 5,危害严重。
[0005] 临床试验已证实，术后辅助化疗可显著降低疾病复发率并使生存期明显延长。但 由于化疗不可能杀灭体内全部癌细胞，癌症是否复发最终取决于机体自身的自稳功能和免 疫功能，同时大肠癌细胞对化疗药物的敏感性差。因此化疗给机体带来的毒副作用、对机体 免疫功能的打击远比化疗杀灭部分癌细胞给机体带来的益处要大得多。
[0006] 临床试验已证实，术后辅助化疗可显著降低疾病复发率并使生存期明显延长，但 II期结肠癌的术后辅助化疗仍存在许多争议，通常建议对存在高危因素的患者进行术后辅 助化疗。
[0007] 另一方面，分子靶向药物联合化疗的疗效仍不明确，但却显示毒性增加，且靶向药 物联合化疗费用昂贵。因此，如何个体化治疗显得益为重要。
[0008] 国外对29名肝转移的直肠癌患者进行gp96免疫治疗结果显示，手术2年后患者 总生存率OS和无病生存率DFS分别为79%和32%，有显著改进；同时没有观察到明显的毒 副作用，为今后的研究奠定了基础。
[0009] 然而作为消化系统中严重的恶性肿瘤，结直肠癌从总体上仍然不能治愈。新的化 疗药物、靶向药物的进展缓慢。即便目前最具希望的自体gp96免疫治疗由于需要的足够大 的肿瘤组织来制备疫苗，同时自体疫苗制备的一次性，影响了该方法的疗效和受众。
[0010] 目前已证实gp96和HSP78分子能结合泡状口炎病毒抗原区肽、鼠H-2Kb限制的卵 清蛋白抗原表位肽、La限制的白血病抗原肽、乙肝病毒抗原肽等抗原多肽。但目前为止未 见从结直肠癌患者肿瘤组织中分离鉴定与HSP结合的抗原多肽。


【发明内容】

[0011] 因此，本发明要解决的技术问题是筛选结直肠癌特异性的肽段。克服肿瘤细胞免 疫编辑导致的低免疫原性，能够在结直肠癌患者或者健康个体中诱导产生特异性细胞毒性 T淋巴细胞（杀伤性T细胞，CTL)，而且CTL具有强大的抗结直肠癌作用，对正常细胞及组 织无破坏作用。
[0012] 本发明的一个目的是提供一种与gp96和HSP78结合的结直肠癌抗原的复合物。 所述的结直肠癌抗原可以分别是结直肠癌肿瘤抗原MU5AC蛋白上第466-474位的氨基酸 序列，其序列可以是SLDGAQTVV，或其变异序列；结直肠癌抗原可以分别是结直肠癌肿瘤抗 原MU5AC蛋白上第721-729位的氨基酸序列，其序列可以是FLDDTGKCV，或其变异序列；结 直肠癌抗原可以分别是结直肠癌肿瘤抗原MU5AC蛋白上第305-314位的氨基酸序列，其序 列可以是KMYATIPEL，或其变异序列，结直肠癌抗原可以分别是结直肠癌肿瘤抗原RNF43蛋 白上第631-639位的氨基酸序列，其序列可以是SICPSTSSL，或其变异序列，结直肠癌抗原 可以分别是结直肠癌肿瘤抗原RNF43蛋白上第201-209位的氨基酸序列，其序列可以是 ILMTVVGTI，或其变异序列，结直肠癌抗原可以分别是结直肠癌肿瘤抗原T0MM34蛋白上第 30-38位的氨基酸序列，其序列可以是ALYGRALRV，或其变异序列，结直肠癌抗原可以分别 是结直肠癌肿瘤抗原T0MM34蛋白上第77-85位的氨基酸序列，其序列可以是ALALVPFSI，或 其变异序列。
[0013] 本发明的复合物既包括热休克蛋白以非共价键与多肽结合，又包括热休克蛋白以 共价键与多肽结合。本发明提供了制备本发明的如上所述抗原多肽与热休克蛋白gp96和 HSP78的复合物的方法。
[0014] 本发明所诉的表位肽可以单独或以热休克蛋白复合物形式在HLA-A2转基因小鼠 中诱导形成特异性的CTL。
[0015] 本发明所诉的表位肽可以在体外单独或以热休克蛋白复合物形式刺激HLA-A2阳 性结直肠癌患者PBMC分泌IFN- γ，且这种作用在自体gp96复合物免疫后显著增强。
[0016] 本发明所诉的表位肽可以单独或以热休克蛋白复合物形式提高HLA-A2阳性结直 肠癌患者特异性T细胞反应。
[0017] 本发明所述的特异性CTL的诱导可以被Treg细胞的抑制剂增强。
[0018] 首次从五例结直肠癌肿瘤组织中与热休克蛋白gp96结合的多肽中分离出一特 异9肽，经氨基酸序列分析为"SLDGAQTVV"，经查询发现该序列位于结直肠癌特异性抗原 MU5AC的466-474位，人工合成该序列并与体外表达的gp96蛋白组装，体外合成gp96-9肽 复合物，将9肽与gp96-9肽复合物免疫HLA-A2转基因小鼠，均能刺激小鼠产生特异性细胞 毒性T细胞（CTL)，且调节性T细胞抑制剂的预处理可以增强gp96-9肽复合物的免疫效果 2倍以上。实验结果表明gp96-9肽复合物可开发成为一种新型结直肠癌的治疗性药物。
[0019] 附图简要说明 图1.小鼠（BALB/Chla-A2+)的特异性CTL反应。以gp96-9肽复合物按0、1、3周的周期 免疫小鼠，最后一次免疫3天后检测特异性细胞裂解率。效应细胞CTL对特异性靶细胞的 裂解百分率以4小时标准51Cr释放法测定，效应细胞与靶细胞之比分别是10、25、50和100， 图中裂解率为10只小鼠的平均值。
[0020] 图2 PC-9荷瘤裸鼠肿瘤生长曲线。裸鼠皮下接种人结直肠癌细胞HCT-116,荷瘤 7天后转输不同来源的小鼠脾脏淋巴细胞。肽段1组（n=20)的接受经过gp96-肽段1复合 物免疫的BALB/c (HLA-A2+)小鼠的脾脏淋巴细胞；无关肽组（n=20)接受经过gp96-无关肽 (HBcAg82-90)复合物免疫的BALB/c(HLA-A2 +)小鼠的脾脏淋巴细胞。
[0021] 图3结直肠癌患者免疫自体肿瘤gp96复合物后9肽特异性T细胞的变化。以 IFN- γ的ELISP0T方法检测患者外周血中9肽特异性T细胞。无关肽HBcAg82_9(l肽为阴性 对照。
[0022]

【具体实施方式】： 下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。下列实施例中未注明具 体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。
[0023] 实施例1.从结直肠组织中纯化gp96蛋白 将五份结直肠癌组织和一份正常肠组织匀浆后离心，用30%/70%饱和度（NH4)2SO 3沉 淀，沉淀溶解后采用ConA Sepharose (GE公司）进行亲和层析，用8%的α -甲基葡萄糖苷 洗脱结合的蛋白，糖苷洗脱液以Hitrap-Q (GE公司）进行阴离子层析，经过这三步纯化获 得>95%纯度的gp96蛋白。gp96蛋白用gp96/grp94单克隆抗体（Santa Cruz公司）进行 Western鉴定。其纯度用SDS-PAGE、银染和反相HPLC鉴定。
[0024] 实施例2.从gp96蛋白释放非共价结合的多肽 将纯化的gp96蛋白加入三氟乙酸（TFA)使其终浓度达到0. 2% (pH约2. 0)，然后用超 滤法（分子截留为30kDa，Millipore公司）分离多肽，将多肽混合物进行MALDI-T0F质谱 (ABI 4700)分析，多肽分子量大多在600-1100 Da之间。
[0025] 实施例3.反相HPLC分析多肽 多肽混合物冻干后溶于溶液A (0.065% TFA，2%乙腈)，上样于反相C18层析柱 (S印hasilp印tideC18;5um粒度；4·6 X 250 mm，GE公司），从0至65%溶液B(0·05% TFA，100%乙腈）进行梯度洗脱，流速为I mL/min，用214nm波长检测。比较肿瘤组织和正 常组织HPLC图谱，发现一个五份结直肠癌组织共有而正常肠组织中没有的肽峰。
[0026] 实施例4.多肽微量测序与序列分析 收集该特异肽峰用MALDI-T0F质谱（PE公司Voyager-DE系统）鉴定其纯度，只发现分 子量为889 Da的单一峰。对该肽微量测序（Procise 491.蛋白测序仪，ABI公司），其氨基 酸序列为"SLDGAQTVV"，5份肿瘤组织得到的序列一致。将该序列在网上蛋白数据库（NCBI) 查询，发现它位于MU5AC蛋白的466-474位。
[0027] 实施例5. gp96蛋白与人工合成的多肽体外快速组装 人工合成9肽"SLDGAQTVV"（委托吉尔生化有限公司合成），将gp96蛋白与多肽进行 体外组装，体外结合反应体系： 2.7 mmol/L KC1,1.47 mmol/L KH2PO4,8. I mmol/L Na2HPO4,138mmol/L NaCl, 10%(V/ V)甘油，3. 0 mmol/L 9肽，0. 421 mmol/L gp96蛋白，60°C反应10分钟，超滤法（分子截留 30 kDa，Millipore公司）去除未结合的多肽。
[0028] 实施例6表达结直肠癌抗原肽1和热休克蛋白gp96的融合蛋白 本实例提供了结直肠癌抗原肽I (SLDGAQTVV)与热休克蛋白gp96以共价键形成的融 合蛋白的方法。我们人工合成对应于该肽的核酸序列（AGT TTA GAT GGT GCT CAA ACT GTT GTT)，引入限制性酶切位点Bgl II将该9肽的核酸序列与gp96基因5'端用T4连接酶 连接，连接产物的5'和3'端引入2个限制性酶切位点EcoR I和Xho I，连接到表达载体 pPICZ a A中在毕赤酵母中分泌表达，表达产物是gp96与该9肽的融合蛋白。
[0029] 实施例7.免疫小鼠 选用生长8-10周的HLA-A2转基因的BALB/c小鼠（HLA-A2+)用于本实验。
[0030] 免疫方式采用将样品溶于IOOuL的PBS中颈背皮下注射。皮下注射操作相对简单， 要求免疫剂量适中，故采用该种免疫方式。同时在每次免疫前1天腹腔注射0.4 mg的环磷 酰胺。低剂量环磷酰胺可以抑制在gp96免疫中起抑制作用的Treg细胞从而能增强免疫效 果。
[0031] gp96蛋白-9肽复合物的最适免疫剂量为0. I nmol。
[0032] 免疫时间为0、1、3周进行三次的强化免疫，优于免疫一次或二次的效果。
[0033] 因此采用皮下注射免疫，将9肽溶于缓冲液（90% PBS 10% DMSO 0. 1% TFA) gp96-9肽复合物溶于PBS中，注射前剧烈振荡1分钟，每只小鼠免疫剂量9肽分别为0. 2 nmol，2 nmol和20 nmol，将肽与弗氏佐剂乳化后免疫小鼠。gp96-9肽复合物免疫剂量分 别是0. 01 nmol, 0. 05 nmol, 0. 10 nmol和0. 50 nmol,米用颈背皮下注射，第一次免疫1周 后进行第二次免疫，2周后加强免疫，3天后进行细胞毒性分析。每一处理使用10只小鼠。
[0034] 实施例8.细胞毒性（CTL)分析 小鼠加强免疫3天后，从每只小鼠收获得约3 X IO7脾细胞悬于含有10 mM HEPES缓冲 液，抗生素和10% (V/V) FCS培养液中，于培养瓶中与经幅射（4500 Rad)的T2细胞（3:1) 和lug/mL肽在完全培养基中37°C培养。6天后收集脾细胞进行4小时标准51Cr释放实验 (具体方法见Kuhrober, A, et al. 1997. Internationallmmunology, 9(8):1203-1212) 测定细胞毒性活性。简而言之，靶细胞用10ug/mL目标肽或者无关肽于37°C致敏30分钟后 加入不同数量的效应细胞，反应体系为100 uL的完全培养基。37°C共培养4小时后收集上 清测定特异裂解率。
[0035] 从51Cr释放实验可以看出gp96_9肽复合物可刺激小鼠产生特异性细胞毒性T细 胞，每只小鼠免疫〇. I nmol (约IOug)的gp96-9肽复合物即能诱发机体产生强烈的细胞免 疫反应，细胞毒性测定靶细胞的裂解率在40%以上，通过注射环磷酰胺的预处理可以明显 的提高gp96-9肽复合物的免疫效果，且这种细胞毒效应是表位肽特异性的（图1)。实验结 果表明gp96-9肽复合物可开发成为一种新型结直肠癌的治疗药物。
[0036] 实施例9.细胞转输体内抑瘤实验 用HLA-A2阳性人结直肠癌细胞HCT-116皮下注射裸鼠。7天后转输从gp96-结直肠 癌抗原9肽1复合物免疫HLA-A2转基因小鼠获得的脾脏淋巴细胞（n=20)、gp96-无关肽复 合物免疫小鼠淋巴细胞（n=20)，每周转输一次，共3周。检测肿瘤大小可以发现只有转输 gp96-肺癌抗原9肽1复合物免疫小鼠的淋巴细胞可明显抑制结直肠癌细胞的生长（图2)。
[0037] 实施例10结直肠癌患者免疫自体gp96复合物治疗肿瘤 该研究中入组的gp96免疫治疗的III、IV期结直肠癌患者术后接受gp96治疗及医生常 规治疗(放化疗)。一周为一个疗程，每个疗程注射一次。试验组在术后8周内在常规治疗 的基础上开始自体gp96免疫治疗。
[0038] 操作流程 η选取计划行手术的III、IV期的结直肠癌患者； η获得患者自愿签署的"知情同意书"以及"手术同意书"； η行术前全面检查以明确根治性手术可行性； η手术切取肿瘤组织； 1将组织存放于无菌管中； 1存有肿瘤组织的无菌管在〇°C条件下于2个小时内送至GMP制备车间。
[0039] η鉴定肿瘤组织质量，确认可以提取足量的热休克蛋白gp96_多肽复合物； 热休克蛋白gp96_多肽复合物提取及检测； gp96治疗及常规治疗； 热休克蛋白gp96-多肽复合物皮下注射流程： 第1次注射前3天内需检查血常规、血生化及心电图。
[0040] 注射预处理：每次gp96注射前1-3天给患者静脉注射环磷酰胺。
[0041] 由研究护士进行gp96蛋白注射，根据既往国外研究资料制定剂量，加入生理盐水 混匀后上臂及大腿左右皮下注射，每周1次。
[0042] 第1、2次免疫蛋白注射后，需留院观察24小时，后几次注射后需观察1小时，无不 良反应后方可离开。
[0043] 第2次及第8次注射后3天内需检查血常规、血生化及心电图。
[0044] 免疫治疗前及免疫结束后,采集IOml患者血液,进行免疫学指标的测定。
[0045] 若患者治疗期间疾病复发，由研究者详实记录患者疾病复发情况，并按照临床诊 疗规范给予相应治疗； 随访； 术后2年内每3月访视1次，2年后每6月访视1次，直至患者疾病复发或死亡，具体访 视内容如下： ①2年内每3个月复查1次： a)第3、9、15、21月复查内容： 肿瘤标志物（CEA、CA19-9、AFP); 腹、盆腔B超； 胸部X线。
[0046] b)第 6、12、18、24 月复查内容： 肿瘤标志物（CEA、CA19-9、AFP); 胸、腹、盆腔增强CT; 结肠镜。
[0047] ②2年后每6个月复查1次，复查内容： 肿瘤标志物（CEA、CA19-9、AFP); 胸、腹、盆腔增强CT ; 结肠镜。
[0048] 若患者随访期间疾病复发，由研究者详实记录患者疾病复发情况，并按照临床诊 疗规范(如NCCN指南等）给予相应治疗。
[0049] 实施例11 ELISP0T法检测特异性T细胞 ELISP0T检测结直肠癌患者PBMC中表位特异性CTL。按照ELISP0T试剂盒的说明书操 作.先用含10%胎牛血清的PRMI 1640培养基封闭ELISP0T预包被板一小时，临用前倒掉 封闭液，加入IOOuL含3 X 105的人的PBMCX直接用新鲜的PBMC或者将PBMC体外扩增培 养7天).实验组中加入10ug/mL的肽1、阳性对照加入4ug/mL的PHA进行刺激，阴性对照 加入无关肽。在细胞培养箱内培养26-36小时后，检测特异性斑点的形成，并进行统计分 析。我们选取HLA-A2阳性的结直肠癌患者作为研究组，选取HLA-A2阴性患者作为对照组， 通过ELISP0T方法检测患者新鲜血液中表位特异性CTL，特异性CTL的频率通过计数斑点 数量来确定。在3例经自体gp96复合物免疫的HLA-A2阳性结直肠癌患者中均检测到高频 率的RTDE⑶NRV特异性CTL，且比免疫前有显著的提高，同时并没有检测到无关肽HBcAg 82_9Q (阴性对照）特异性T细胞，说明ELISP0T结果是表位特异的（图2)。
[0050] 实施例12其它gp96-多肽复合物的免疫活性测定 除上述抗原9肽之外，我们又选取其它6个结直肠癌抗原多肽与gp96体外组装并测 定其免疫活性，这4个抗原多肽分别是I) MU5AC抗原多肽"FLDDTGKCV"，2 ) MU5AC抗原多肽 "KMYATIPEL"，3) RNF43 抗原多肽"SICPSTSSL"，4) RNF43 抗原多肽 "ILMTWGTI"，5) T0MM34 抗原多肽"ALYGRALRV"，6) T0MM34 抗原多肽"ALALVPFSI"。
[0051] 分别人工合成这6种多肽，采用实施例5中所述的反应体系在体外与gp96结合， 这6种多肽与gp96均有较高的亲和力，通过测定结合反应平衡常数K，6种肽与gp96结合 反应中K值均在4以上。采用实施例7中所述的方法用上述6种结直肠癌抗原多肽与gp96 形成的复合物，和上述gp96与6种结直肠癌抗原多肽的融合蛋白分别免疫小鼠，并采用实 施例7中所述的方法分别对这6种复合物进行CTL分析，从 51Cr释放实验可以看出这4种 结直肠癌抗原多肽与gp96形成的复合物均可刺激HLA-A2转基因小鼠产生特异性细胞毒性 T细胞，6种多肽与gp96形成的复合物的免疫活性比单独多肽高100-200倍，且通过Treg 细胞抑制剂预处理可以进一步提高免疫效果。每只小鼠免疫剂量为0.1 nmol (约IOug)时 即能诱发机体产生强烈的细胞免疫反应，通过对这6种多肽与gp96形成的复合物的细胞毒 性测定发现靶细胞的裂解率在40%-65%之间。
[0052] 以上实验结果表明gp96与结直肠癌抗原多肽体外组装合成的复合物可开发成为 一种新型结直肠癌的治疗或预防药物。由于实验条件所限本发明专利不可能对每一种结直 肠癌抗原多肽进行体外组装及免疫活性测定，但我们通过选取7种有代表性的肿瘤抗原作 研究对象，在体外与gp96结合并进行免疫活性测定，大量实验表明gp96与这些抗原多肽形 成的复合物均能刺激小鼠产生强烈的免疫反应，可开发成为一种新型治疗疫苗。因此，除上 述7种抗原多肽之外，其它任何结直肠癌抗原多肽与gp96结合作为新型疫苗也应当在本发 明的保护范围之内。
[0053] 实施例13. HSP78-多肽免疫原性测定 将HSP78与7种多肽体外组装形成的复合物，反应体系同gp96 (见实施例5)，将体外 合成的复合物和HSP78与5种多肽的融合蛋白（见实施例6)免疫小鼠。小鼠免疫方式、免 疫剂量以及免疫程序同gp96(见实施例7)细胞毒性（CTL)分析方法同gp96 (见实施例 8)。从51Cr释放实验可以看出HSP78-9肽复合物可刺激小鼠产生特异性细胞毒性T细胞， HSP78-9肽复合物的免疫原性为单独9肽的150倍以上，每只小鼠免疫0. I nmol (约IOug) 即能诱发机体产生强烈的细胞免疫反应，细胞毒性测定靶细胞的裂解率在50%以上。实验 表明HSP78-9肽复合物可开发成为一种新型结直肠癌的治疗药物。
【权利要求】
1. 一种与热休克蛋白结合的表位肽SLDGAQTVV，其特征在于，其氨基酸序列如序列表 中 SEQ ID NO. 1 所示。
2. -种与热休克蛋白结合的表位肽FLDDTGKCV，其特征在于，其氨基酸序列如序列表 中 SEQ ID NO. 2 所示。
3. -种与热休克蛋白结合的表位肽KMYATIPEL，其特征在于，其氨基酸序列如序列表 中 SEQ ID NO. 3 所示。
4. 一种与热休克蛋白结合的表位肽SICPSTSSL，其特征在于，其氨基酸序列如序列表 中 SEQ ID NO. 4 所示。
5. -种与热休克蛋白结合的表位肽ILMTVVGTI，其特征在于，其氨基酸序列如序列表 中 SEQ ID NO. 5 所示。
6. -种与热休克蛋白结合的表位肽ALYGRALRV，其特征在于，其氨基酸序列如序列表 中 SEQ ID NO. 6 所示。
7. -种与热休克蛋白结合的表位肽ALALVPFSI，其特征在于，其氨基酸序列如序列表 中 SEQ ID NO. 7 所示。
8. 如权利要求1-7任一项所述的表位肽与gp96或HSP78的共价或非共价连接的复合 物。
9. 如权利要求1-7任一项所述的表位肽在体外单独或与热休克蛋白形成如权利要求8 所述的复合物单独或共同免疫人体诱导生成杀伤性T细胞中的用途。
10. 如权利要9所述的免疫诱导杀伤性T细胞在预防或治疗结直肠癌中的用途。
【文档编号】A61K38/16GK104211772SQ201310693197
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2013年12月18日 优先权日:2013年12月18日
【发明者】黄锡坚, 张小俊 申请人:深圳市康尔诺生物技术有限公司