Lps疫苗的制作方法
【专利摘要】提供了一种禽用疫苗组合物，其包含作为活性成分的含有源自革兰氏阴性菌的O-抗原的结构，其中所述结构范围内不含有全细胞，及产生所述疫苗组合物的方法。在本发明中，使用含有来自革兰氏阴性菌的O-抗原(例如脂多糖)的结构作为抗原用于疫苗。因此，与传统全细胞疫苗相比，接种反应的发生可以减少并且注射溶液的量也可以减少，并且可以制备多混合疫苗。
【专利说明】LPS疫苗
【技术领域】
[0001] 本发明提供可用于预防由革兰氏阴性菌例如沙门氏菌和大肠杆菌佐cWi)引起 的传染性疾病的新的疫苗。特别地，本发明涉及使用作为保护性抗原的源自革兰氏阴性菌 的含0-抗原（例如脂多糖）的结构免疫非人动物，特别是禽类的方法。
【背景技术】
[0002] 细菌在用革兰氏染色法进行测试的时候具有不同的染料亲和性，这取决于细胞壁 的不同组成，且细菌基于它们染料亲和力的差异被分为两种主要的群体，革兰氏阴性和革 兰氏阳性细菌。在革兰氏阴性菌的情况下，细胞壁由外膜和外膜内侧的肽聚糖层组成。外 膜由磷脂，脂多糖（LPS)，脂蛋白和膜蛋白组成。外膜的单位膜结构由磷脂和脂多糖组成。 发现脂多糖在膜的外层，而磷脂在其内层。脂多糖由高分子量的脂质，称为脂质A，和与其 结合的多糖组成。脂质A构成外膜的外层，而脂多糖从外膜向外延伸。外部部分和邻近脂 质A部分的糖的种类互不相同。外部部分被称为0-侧链多糖（0-抗原），而内部部分被称 为核心多糖。由〇-抗原组成的糖主要是己糖和戊糖，并且由3-5种这些多糖组成的基本结 构重复出现。在核心多糖中，除了这些糖外，还存在对于各个细菌来说独特的糖如辛糖，例 如酮脱氧辛酸，和庚糖。脂质A是对各个细菌来说独特的脂质，其包含糖，即两分子的葡萄 糖胺，其相互以β-1，6-结合，和与所述糖结合的磷酸和脂肪酸。脂质A与核心多糖在糖的 6'_位置结合。
[0003] 存在许多种革兰氏阴性菌。沙门氏菌属和埃希氏菌属 (&cAe_ricAia)，属于肠杆菌科（feieroAacieriaceae),以及嗜血杆菌属 属于巴氏杆菌科ieareWaceae)也都包括在革兰氏阴性菌中。
[0004] 沙门氏菌属，具有周身鞭毛的第二大杆菌，根据0-抗原的类型被分为多组，且进 一步根据H-抗原的类型进行细分，导致超过2000种血清型。沙门氏菌的宿主范围非常广 泛，已知多种哺乳动物包括人和禽类被沙门氏菌感染或携带沙门氏菌。当鸡被感染时，沙门 氏菌可以在小鸡中引起败血症。然而，在成年鸡中，鸡携带者因无症状而避免被捕杀，且其 结果是源自于被沙门氏菌污染的鸡的鸡肉和鸡蛋被发售，通过由此制造的食品而导致人食 物中毒。
[0005] 沙门氏菌引起的食物中毒在摄入被污染食物之后的12-48小时的潜伏期之后发 生。潜伏期依赖于细菌的摄入量，患者的状况和年龄可能不同。症状主要是急性肠胃炎，且 主要症状是，腹泻，腹部疼痛，呕吐和发热。因此，鸡的沙门氏菌疫苗不仅仅是预防鸡发生疾 病，而且还是用于公共卫生的重要疫苗。
[0006] 在传统的针对沙门氏菌的疫苗中，是包含灭活沙门氏菌细胞的全细胞疫苗。然而， 全细胞疫苗可能引起副作用，这是因为它包含不具有抗原性的部分。在成群饲养的鸡中，考 虑到疫苗接种的人力节约，强烈需要可以通过单次注射预防多种疾病的多价疫苗。而且，多 价疫苗可以有助于减少鸡的压力，因为它减少了注射的次数。但是，虽然多价疫苗具有这样 的便利性，它容易在注射部位引起接种反应，特别是当它包含细菌如沙门氏菌时。
[0007] 在这种情况下，已进行了针对沙门氏菌的组分疫苗的研究，其中研究了脂多糖 (0-抗原）的应用。例如，有报道由源自鼠伤寒沙门氏菌皿riw?)的 〇-抗原与载体蛋白结合的缀合物施用给小鼠，以证实其效力（非专利参考文献1)。还有报 道源自伤寒沙门氏菌7>#i)的脂多糖施用给小鼠以证实其效力（专利参考 文献1)。除沙门氏菌外，有报道源自泰国伯克氏菌或类鼻 疽伯克氏菌你 MeWiZoffiaWei)的脂多糖施用给小鼠以证实其效力（专利参考 文献2,非专利参考文献2)。
[0008] 但是，在用于活体的药物中脂多糖的污染被谨慎地避免，因为脂多糖在临床上 可能引起多种高致死的疾病，例如败血性休克，弥散性血管内凝血（DIC)和多器官衰竭 (MOF)，而且甚至是在痕量的情况下也可能成为发热的病因（非专利参考文献3)。在实践 中，据报道在施用脂多糖之后72小时内，超过90%的小鼠死亡（专利参考文献3)。在这种 情况下，通常不会提出使用脂多糖本身作为疫苗抗原的想法。
[0009] 专利参考文献 专利参考文献I: W02004/052394 专利参考文献2: W02010/082020 专利参考文献3:日本专利
【发明者】坂元隆一, 坂口正士 申请人:一般财团法人化学及血清疗法研究所