因子11表达的调节的制作方法
【专利摘要】此处披露了用于在需要的个体中降低因子11以及治疗或预防血栓栓塞性并发症的反义化合物和方法。可以通过将靶向因子11的反义化合物给药而改善的疾病状况的例子包括血栓形成、栓塞以及血栓栓塞，比如如深静脉血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中风。靶向因子11的反义化合物也可以用作防止个体血栓形成及栓塞风险的预防性治疗。
【专利说明】因子11表达的调节
[0001]本申请是申请号为200980150276.5 (PCT/US2009/060922)，申请日为 2009 年 10 月
15日的中国发明专利申请“因子11表达的调节”的分案申请。
[0002]交叉引用相关申请
[0003]本申请根据35U.S.C§ 119(e)主张2008年10月15日递交的美国临时专利申请第61/105，772号以及2009年4月30日递交的美国临时专利申请第61/174，461号的优先权。每一项上述申请在此被作为参考并且其全部内容被并入本申请。
[0004]序列表
[0005]本申请与电子格式的序列表一起被递交。提供的序列表是2009年10月15日生成的名称为20091015_B10L0107W0SEQ.txt，大小为92Kb的文件。电子格式的序列表中的信息在此被作为参考，并且其全部内容被并入本申请。
发明领域
[0006]本发明的实施例提供了降低动物中因子11的mRNA和蛋白的表达的方法、化合物以及组合物。这些方法、化合物以及组合物可用于治疗、防止或改善血栓栓塞性并发症。
【背景技术】
[0007]循环系统需要防止失血的机制，以及对抗不当血管内栓塞的机制。通常，凝血包括以可溶性纤维蛋白原转化为不溶性纤维蛋白凝胶为终点的级联反应。级联反应的步骤涉及非活性酶原向活性酶的转化。然后活性酶再催化级联反应的下一步骤。
[0008]凝血级联反应
[0009]凝血级联反应可能通过两条支路启动，作为初始通路的组织因子通路(也称为“外源性通路”)，以及接触激活通路(也称为“内源性通路”)。
[0010]组织因子通路由细胞表面受体组织因子(TF，也被称为因子III)启动，后者由血管外细胞(周边细胞、心肌细胞、平滑肌细胞和角质细胞)组成型表达，并且由血管单核细胞和内皮细胞在炎症细胞因子或内毒素的诱导下表达(Drake et al.,Am JPatholl989，134:1087-1097)。TF是凝结因子Vila (—种丝氨酸蛋白酶)的高亲和力细胞受体。缺少TF时，VIIa具有非常低的催化活性，与TF的结合对于通过变构机制赋予VIIa功能是必要的(Drake et al., Am J Patholl989, 134:1087-1097)。TF-VIIa 复合物将因子X激活为Xa。Xa再与辅因子因子Va结合为凝血酶原酶复合物，后者再将凝血酶原(也被称为因子II或因子2)激活为凝血酶(也被称为因子IIa或因子2a)。凝血酶激活血小板，将纤维蛋白原转化为纤 维蛋白，通过激活因子XIII促进纤维蛋白交联，然后在TF暴露于血管外细胞的位点形成稳定的栓塞。此外，凝血酶通过激活因子V和VIII来增强凝血级联反应。
[0011]接触激活通路由因子XII向XIIa的活化所引起。因子XIIa将XI转化为XIa，而XIa将IX转化为IXa。IXa与辅因子VIIIa结合，将X转化为Xa。当因子Xa与因子Va结合而将凝血酶原(因子II)转化为凝血酶(因子IIa)时，两条通路在这一点汇合。
[0012]凝血抑制。[0013]至少有三种机制控制凝血级联反应，即活化蛋白C、抗凝血酶和组织因子通路抑制剂的作用。活化蛋白C是一种能降解辅因子Va和VIIIa的丝氨酸蛋白酶。蛋白C由凝血酶和血栓调节蛋白一起激活，行使功能需要辅酶蛋白S。抗凝血酶是一种能抑制凝血酶、Xa、Xlla、XIa和IXa等丝氨酸蛋白酶的丝氨酸蛋白酶抑制剂(丝氨酸蛋白酶抑制剂)。组织因子通路抑制剂抑制Xa和TF-VIIa复合物的作用(Schwartz AL et al., Trends CardiovascMed.1997;7:234 - 239.)。
[0014]疾病
[0015]血栓形成是血栓的病理学发展，当血凝块迁移至个体的另一部分并且干扰器官功能时，栓塞出现。血栓栓塞可能导致如深静脉血栓、肺栓塞、心肌梗塞和中风等状况。很明显，血栓栓塞是发病的一个主要原因，其每年影响超过两百万个美国人(Adcocket al.American Journal of Clinical Pathology.1997; 108:434-49)。尽管大部分血栓形成的病例是因为例如手术、癌症以及不动等后天的外在问题，一些病例则是因为遗传易感性，比如抗磷脂综合症和常染色体显性遗传，因子V Leiden (Bertina RM etal.Naturel994;369:64-67.)。
[0016]治疗。
[0017]最常用抗凝剂华法林、肝素以及低分子量肝素(LMWH)都有显著的缺点。
[0018]华法林通常用于治疗患有心房颤动的病人。药物与包括因子I1、VI1、IX和X等维生素K依赖的凝结因子相互作用。抗凝剂蛋白C和S也被华法林所抑制。华法林与包括如胺碘酮等心房颤动治疗药物的其他药物相互作用的事实使华法林的药物治疗进一步变得复杂。因为华法林的治疗难以预测，为了检测任何异常出血迹象，必须对病人小心监测。
[0019]肝素通过激活对凝血酶和因子X都抑制的抗凝血酶来作用(Bjork I, LindahlU.Mol Cell Biochem.198248:161-182.)。肝素治疗可能引起免疫反应，这使血管中血小板聚集而导致血栓形成。这种副作用被称为肝素诱导的血小板减少症(HIT)，需要对病人监测。肝素的延长治疗也可能导致骨质疏松症。LMWH也可以抑制因子2，但程度弱于未分级肝素(UFH)。LMWH与HIT发展有关。
[0020]因此，现有的抗凝血药缺少可预测性和特异性，所以需要小心监测病人以防止如出血并发症等不良副作用。目前没有仅针对内源性或外源性通路的抗凝剂。
【发明内容】
[0021]此处提供了调节因子11的mRNA和蛋白的表达的方法、化合物以及组合物。在一些实施例中，因子11特异性抑制剂调节因子11的mRNA和蛋白的表达。在一些实施例中，因子11特异性抑制剂是核酸、蛋白或小分子。
[0022]在一些实施例中，调节作用在细胞或组织中发生。在一些实施例中，细胞或组织在动物中。在一些实施例中，所述动物是人。在一些实施例中，因子11的mRNA水平被降低。在一些实施例中，因子11的蛋白水平被降低。这种降低可以时间依赖的方式或剂量依赖的方式发生。
[0023]本申请也提供了用于防止、治疗和改善疾病、紊乱和状况的方法、化合物以及组合物。在一些实施例中，这些疾病、紊乱和状况是血栓栓塞性并发症。这种血栓栓塞性并发症包括各类血栓形成、栓塞和血栓栓塞。在一些实施例中，这些血栓栓塞性并发症包括深静脉血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中风。
[0024]这些疾病、紊乱和状况通常具有一个或多个危险因素、原因或结果。血栓栓塞性并发症发展的某些危险因素和原因包括不动、手术(尤其是矫形手术)、恶性肿瘤、怀孕、高龄、使用口服避孕药、心房颤动、先前的血栓栓塞性并发症、慢性炎症疾病和遗传或后天的凝血紊乱。血栓栓塞性并发症发展相关的某些结果包括通过受影响血管的血流降低、组织坏死以及死亡。
[0025]在一些实施例中，治疗方法包括将因子11特异性抑制剂给药于需要的个体。
[0026]发明的详细说明
[0027]在此声明，前面的一般说明和后面的详细说明都仅仅是示例性和说明性的，不限制本发明，这是可以理解的。此处，单数的使用包括复数，除非另有特别指明。如此处所用，使用“或”意味着“和/或”，除非另有特别指明。而且，使用术语“包括”以及如“包括”和“被包括”等其他形式，不是限制性的。如“元素”或“组分”等术语涵盖包括一个单元的元素和组分，也涵盖包括一个以上单元的元素和组分，除非另有特别指明。
[0028]此处所用的分段标题仅用于组织的目的，不应被解释为限制所描述的主题。本申请中引用的所有文件或文件部分，包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍和论文，其在此被套论的部分被作为参考，并且其全部内容被并入本申请。
[0029]定义
[0030]除非提供特别定义，此处描述的分析化学、合成有机化学和医药化学的相关术语以及其流程和技术是那些本领域所熟知和通用的。在化学合成和化学分析中可使用标准技术。本公开中准许引用的所有专利、申请、已发表的申请和其他出版物、从如国家生物技术信息中心(NCBI)等数据库中`获得的GENBANK登录号和相关序列信息以及其他数据，其在此被套论的部分被作为参考，并且这些部分的全部内容被并入本申请。
[0031]除非另行指出，下列术语具有下列含义:
[0032]“2’ -O-甲氧乙基”(也表示为2’ -MOE和2’ -O(CH2)2_0CH3)指的是呋喃环的2’位置的O-甲氧-乙基修饰。2’ -O-甲氧乙基修饰的糖是修饰糖。
[0033]“2’ -O-甲氧乙基核苷酸”是指包含2’ -O-甲氧乙基修饰糖基的核苷酸。
[0034]“5-甲基胞嘧啶”是指5’位置连有甲基修饰的胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶是修饰的核
昔喊基。
[0035]“活性药剂”是指当给个体给药时能够提供治疗益处的药物组合物中的物质。例如，在一些实施例中，针对因子11的反义寡核苷酸是一种活性药剂。
[0036]“活性靶区”或“靶区”是指一个或多个活性反义化合物针对的区域。“活性反义化合物”是指能降低目标核酸水平或蛋白质水平的反义化合物。
[0037]“随附给药”是指两种试剂以它们的药理学效果在病人体内同时都显现的任何方式共同给药。随附给药不需要在单一药物组合物中、相同剂型中或以相同给药途径将两种试剂给药。两种试剂的效果不需要同时显现。效果只需要在一段时间重叠，不需要共同延伸。
[0038]“给药”是指将一种药剂提供给个体，包括但不限于医学专业人员的给药以及自我给药。
[0039]“改善”是指与疾病、紊乱或状况关联的至少一种指标、迹象或症状的减轻。指标的严重程度可以通过本领域普通技术人员已知的主观或客观的测定来确定。
[0040]“动物”是指人或非人动物，包括但不限于小鼠、大鼠、兔、狗、猫、猪和非人灵长类，包括但不限于猴和黑猩猩。
[0041]“解毒化合物”指的是能降低任何反义介导活性的强度或持续时间的化合物。
[0042]“解毒寡核苷酸”是指包括与反义化合物互补且能与之杂交的寡核苷酸的解毒化合物。
[0043]“解毒蛋白”是指包括肽的解毒化合物。
[0044]“抗体”指的是以通过某种方式与抗原特异性反应为特征的分子，其中抗体和抗原各自根据对方来定义。抗体可能是指完整的抗体分子或其中任何片段或区域，如重链、轻链、Fab区段以及Fe区段。
[0045]“反义活性”是指反义化合物与目标核酸相杂交所引起的任何可检测或可测量的活性。在一些实施例中，反义活性是目标核酸或该目标核酸编码的蛋白质的量或表达的减少。
[0046]“反义化合物”是指能够通过氢键与目标核酸相杂交的寡聚化合物。
[0047]“反义抑制”是指在与目标核酸互补的反义化合物存在时，与没有反义化合物时的目标核酸水平或目标蛋白水平相比，目标核酸水平或目标蛋白水平降低。
[0048]“反义寡核苷酸”是指具有能与目标核酸的相应区域或片段杂交的核苷碱基序列的单链寡核苷酸。
[0049]“双环糖”是指通过两个非偕式环原子桥接而修饰的呋喃环。双环糖是一种修饰的糖。
[0050]“双环核酸”或“BNA”指的是一种核苷或核苷酸，其中核苷或核苷酸的呋喃糖部分包括一个连接呋喃糖环上两个碳原子的桥键，从而形成一个双环系统。
[0051]“帽结构”或“末端帽部分”是指包含在反义化合物任一末端的化学修饰。
[0052]“化学独特区域”指的是反义化合物中在某些方面在化学上不同于相同反义化合物的另一区域的区域。例如，具有2’ -O-甲氧乙基核苷酸的区域在化学上不同于含有无2’ -O-甲氧乙基修饰的核苷酸的区域。
[0053]“嵌合型反义化合物”是指具有至少两个化学独特区域的反义化合物。
[0054]“共同给药”是指将两种或多种药剂给药于一个个体。两种或多种药剂可以在单一药物组合物中，也可能在分开的药物组合物中。两种或多种药剂中的每一种可以通过相同或不同的给药途径给药。共同给药涵盖平行或顺序给药。
[0055]“凝结因子”是指凝血级联反应中的因子1、I1、II1、IV、V、VI1、VII1、IX、X、X1、XI1、XIII或TAFI中的任一个。“凝结因子核酸”是指编码凝结因子的任意核酸。例如，在一些实施例中，凝结因子核酸非限制地包括编码凝结因子的DNA序列(包括含内含子和外显子的基因组DNA)、由编码凝结因子的DNA转录的RNA序列以及编码凝结因子的mRNA序列。“凝结因子mRNA”是指编码凝结因子蛋白的mRNA。
[0056]“互补性”是指第一核酸与第二核酸的核苷碱基间的配对能力。
[0057]“相邻核苷碱基”是指彼此直接相邻的核苷碱基。
[0058]“稀释剂”是指组合物中无药理学活性，但药学必需或需要的成分。例如，在注射的组合物中的稀释剂可能是液体，比 如盐溶液。[0059]“剂量”是指在单一给药中或规定时间期间内提供的药剂的规定量。在一些实施例中，一个剂量可能通过一份、两份或多份丸药、片剂或注射剂来给药。例如，在一些需要皮下给药的实施例中，所需剂量需要通过一次注射不容易容纳的体积，因此，可以使用两次或多次注射以达到所需剂量。在一些实施例中，药剂是通过在延长的时间期间或连续输液来给药的。剂量可以按小时、日、周或月来规定。
[0060]“有效量”是指在需要药剂的个体中足以实现所需生理学结果的活性药剂量。根据待处理个体的健康与生理状况、处理个体的分类群、组合物的剂型、个体医疗状况的评估以及其他有关因素，个体间的有效量可能有变化。
[0061]“因子11核酸”、“因子XI核酸”、“F11核酸”或“F XI核酸”是指编码因子11的任意核酸。例如，在一些实施例中，因子11核酸包括编码因子11的DNA序列、由编码因子11的DNA转录的RNA序列(包括含内含子和外显子的基因组DNA)以及编码因子11的mRNA序列。“因子IImRNA”是指编码因子11蛋白的mRNA。
[0062]“因子11特异性抑制剂”指的是能在分子水平上特异性抑制因子11的mRNA和/或因子11蛋白的表达的任何试剂。例如，因子11特异性抑制剂包括能够抑制因子11的mRNA和/或因子11蛋白的表达的核酸(包括反义化合物)、肽、抗体、小分子以及其他试剂。在一些实施例中，通过特异性调节因子11的mRNA表达和/或因子11蛋白的表达，因子11特异性抑制剂可能影响凝血级联反应中的其他组分，包括下游组分。类似地，在一些实施例中，因子11特异性抑制剂可能影响动物中其他分子过程。
[0063]“因子11特异性抑制剂解毒剂”是指能降低因子11特异性抑制剂效果的化合物。在一些实施例中，因子11特异性抑制剂解毒剂挑选自:因子11肽；因子11解毒剂寡核苷酸，包括与因子11反义化合物互补的因子11解毒化合物；以及影响内源性或外源性凝结通路的任何化合物或蛋白。
[0064]“完全互补”或“ 100%互补”`是指第一核酸的每个核苷碱基在第二核酸中具有一个互补的核苷碱基。在一些实施例中，第一核酸是反义化合物，目标核酸是第二核酸。
[0065]“Gapmer”是指一种嵌合型反义化合物,其中，具有多个支持RNase H裂解的核苷的内部区段位于具有一个或多个核苷的外部区段之间，其中，组成内部区段的核苷化学上不同于组成外部区段的核苷。内部区段可被称为“间隙区段”，外部区段可被称为“侧翼区段”。
[0066]“间隙扩大的”是指在具有一到六个核苷的5’和3’侧翼区段之间并且与其直接相邻处具有12或更多个连续的2’ -脱氧核糖核苷的嵌合型反义化合物。
[0067]“杂交”是指互补的核酸分子的退火。在一些实施例中，互补的核酸分子包括反义化合物和目标核酸。
[0068]“找出具有血栓栓塞性并发症风险的动物”是指找出已经诊断具有血栓栓塞性并发症的动物，或找出具有发展血栓栓塞性并发症倾向性的动物。具有发展血栓栓塞性并发症倾向性的个体包括那些具有一种或多种血栓栓塞性并发症危险因素的个体，这些因素包括不动、手术(尤其是矫形手术)、恶性肿瘤、怀孕、高龄、使用口服避孕药和遗传或后天的凝血紊乱。这种识别可能通过包括评价个体病史和标准的临床测试或评估的任何方法来完成。
[0069]“直接相邻”是指在直接相邻的元素之间没有任何干扰元素。
[0070]“个体”是指被挑选用于处理或治疗的人或非人动物。[0071]“核苷内连接”指的是核苷间的化学连接。
[0072]“连接的核苷”是指连接在一起的相邻核苷。
[0073]“错配”或“非互补核苷碱基”指的是当第一核酸的核苷碱基不能与第二或目标核酸的相应核苷碱基配对时的情形。
[0074]“修饰的核苷内连接”指的是天然存在的核苷内连接(也就是磷酸二酯键核苷内键)的替换或任意改变。
[0075]“修饰核苷碱基”指的是除了腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶或尿嘧啶之外的任何核苷碱基。“未修饰的核苷碱基”是指嘌呤碱基腺嘌呤(A)和鸟嘌呤(G)，以及嘧啶碱基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)。
[0076]“修饰核苷酸”是指独立具有修饰糖基、修饰核苷内连接或修饰核苷碱基的核苷酸。“修饰核苷”是指独立具有修饰糖基或修饰核苷碱基的核苷。
[0077]“修饰寡核苷酸”是指包含修饰核苷内连接、修饰糖或修饰核苷碱基的寡核苷酸。
[0078]“修饰糖”指的是从天然糖的替换或改变。
[0079]“结构域”是指反义化合物中化学独特区域的模式。
[0080]“天然存在的核苷内连接”是指3’至5’磷酸二酯键连接。
[0081]“天然糖基”是指在DNA (2’ -H)或RNA (2’ -0H)中发现的糖。
[0082]“核酸”指的是 由单体核苷酸组成的分子。核酸包括核糖核酸(RNA)、脱氧核糖核酸(DNA)、单链核酸、双链核酸、小干扰核糖核酸(siRNA)以及微RNA (miRNA)。
[0083]“核昔喊基”是指能与另一核酸的喊基配对的杂环基团。
[0084]“核苷碱基序列”是指不依赖于任何糖、连接或核苷碱基修饰的连续核苷碱基的顺序。
[0085]“核苷”是指连接于糖的核苷碱基。
[0086]“模拟核苷”包括用于替代寡聚化合物的一个或多个位点上的糖或糖和碱基且未必是连接的那些结构，例如具有吗啉基、环己烯基、环己基、四氢吡喃基、如非呋喃糖单元的双环或三环模拟糖的模拟核苷。模拟核苷包括用于替代寡聚化合物的一个或多个位点上的核苷和连接的那些结构，例如肽核酸或吗啉(通过-N (H)-C (=0)-0-或其他非磷酸二酯键连接而连接的吗啉)。糖替代物与稍广义术语模拟核苷有重叠，但仅仅倾向于用于表示糖单元(呋喃糖环)的替代。此处提供的四氢吡喃环是糖替代物例子的展示，其中，呋喃糖基团被四氢吡喃环系统所替代。
[0087]“核苷酸”是指具有与核苷的糖部分共价连接的磷酸基团的核苷。
[0088]“寡聚化合物”或“寡聚物”是指能与核酸分子的至少一个区段杂交的连接的单体亚单位的聚合物。
[0089]“寡核苷酸”是连接核苷的聚合物，其中，这些核苷的每一可以是修饰或未修饰，并且彼此独立的。
[0090]“肠胃外给药”是指通过注射或输液给药。肠胃外给药包括皮下给药、静脉给药、肌肉给药、动脉给药、腹腔内给药或颅内给药，比如鞘内给药或脑室内给药。
[0091]“肽”是指以酰胺键连接至少两个氨基酸形成的分子。肽指多肽和蛋白质。
[0092]“药物组合物”是指适于个体给药的物质的混合物。例如，药物组合物可以包含一种或多种活性药剂和无菌水溶液。[0093]“药用可接受盐”是指生理学和药学可接受的反义化合物的盐，也就是保留本体寡核苷酸的需要生物活性，但不另外赋予不需要的毒性效果的盐。
[0094]“磷硫酰连接”是指核苷间的连接，其中，一个非桥接氧原子被硫原子替代而修饰磷酸二酯键。磷硫酰连接(P=S)是修饰的核苷内连接。
[0095]“部分”是指核酸中确定数量的连续(也就是连接的)核苷碱基。在一些实施例中，部分是指目标核酸中确定数量的连续核苷碱基。在一些实施例中，部分是反义化合物中确定数量的连续核苷碱基。
[0096]“防止”指的是延迟或预防疾病、紊乱或状况的发生或发展几分钟到无限的时间期间。防止也指降低疾病、紊乱或状况发展的风险。
[0097]“前体药物”是指以在身体或细胞内由其中的内源酶或其他化学品或条件的作用而转化为活性形式的非活化形式制备的治疗剂。
[0098]“副作用”是指由治疗所引起的除了预期效果之外的生理反应。在一些实施例中，副作用包括注射部位反应、肝功能测试异常、肾功能异常、肝脏毒性、肾脏毒性、中枢神经系统异常、肌肉疾病以及不适。例如，血清中提高的转氨酶水平可能表明肝脏毒性或肝功能异常。例如，增高的胆红素可能表明肝脏毒性或肝功能异常。
[0099]“单链寡核苷酸”是指没有与互补链杂交的寡核苷酸。
[0100]“可特异性杂交的”指的是反义化合物在反义寡核苷酸和目标核酸间具有足以诱导期望效果的互补度，而在期望特异性结合的条件下，也就是在体内化验和治疗处理时的生理条件下，表现出对非目标核酸最低影响或无影响。
[0101]“靶向”或“被靶`向”是指设计和选择与目标核酸特异性杂交并诱导预期效果的反义化合物的过程。
[0102]“目标核酸”、“目标RNA”和“目标RNA转录本”都指的是能被反义化合物靶向的核酸。
[0103]“目标区段”是指反义化合物靶向的目标核酸的核苷酸的序列。“5’靶向位点”指的是目标区段的最5’端核苷酸。“3’靶向位点”指的是目标区段的最3’端的核苷酸。
[0104]“治疗有效量”是指为个体提供治疗益处的药剂的量。
[0105]“血栓栓塞性并发症”是指涉及血栓引起的栓塞的任何疾病、紊乱或状况。这些疾病、紊乱或状况的示例包括各类血栓形成、栓塞和血栓栓塞。在一些实施例中，这些疾病、紊乱或状况包括深静脉血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中风。
[0106]“处理”指的是将药物组合物进行给药以影响疾病、紊乱或状况的改变或改善。
[0107]“未修饰核苷酸”是指由天然存在的核苷碱基、糖基和核苷内连接所组成的核苷酸。在一些实施例中，未修饰核苷酸是RNA核苷酸(也就是β -D-核糖核苷)或DNA核苷酸(也就是β _D_脱氧核糖核苷)。
[0108]一些实施例
[0109]本发明的实施例提供了降低因子11的mRNA和蛋白的表达的方法、化合物以及组合物。
[0110]本发明的实施例提供了用于治疗、防止或改善需要治疗的个体中与因子11相关的疾病、紊乱和状况的方法、化合物以及组合物。也构思了用于治疗、防止或改善与因子11相关的疾病、紊乱和状况的药剂制备的方法和化合物。与因子11相关的疾病、紊乱和状况包括血栓栓塞性并发症，如血栓形成、栓塞、血栓栓塞、深静脉血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中风。
[0111]本发明的实施例提供了用于治疗、防止或改善因子11相关疾病的因子11特异性抑制剂。在一些实施例中，因子11特异性抑制剂是能够抑制因子11的mRNA和/或因子11蛋白的表达的核酸(包括反义化合物)、肽、抗体、小分子以及其他试剂。
[0112]在本发明的一些实施例中，因子11特异性抑制剂是肽或蛋白，比如但不限于J Clin Investl982，69:844-852中所述的alphal蛋白酶抑制剂、抗凝血酶II1、Cl抑制剂和alpha2纤溶酶抑制剂；Thromb Resl987, 48:145-151中所述的alphal抗胰蛋白酶(alphalAT) ；USPPN2008/021998 和 Bloodl998, 92:4198-206 中所述的因子11 肽抑制剂；Thromb Res2001, 104:451-465 中所述的 MAP4-RGKWC ；Proc Natl AcadSci2004, 101:3939-44 中所述的 beta2GPI ；Eur J Biocheml999, 262:915-923 中所述的香菇蛋白酶抑制剂J Biol Chem2004，279:29485-29492中所述的连接蛋白酶2/beta淀粉样蛋白前体Kunitz结构域抑制剂(APPI)和抗凝血酶(AT);以及J BiolChem2005, 280:23523-30 中所述的抑肽酶。
[0113]在本发明的一些实施例中，因子11特异性抑制剂是抗体，如，但不限于Bloodl988, 72:1748-54 中所述的 Winston_Salem(IgG3kappa)和 Baltimore(IgGlkappa);JBiol Cheml985, 260:10714-719 中所述的 5F4、3C1 和 IFl ；Throm Haemostl990, 63:417-23中所述的单克隆抗体 J Thromb Haem2006, 4:1496-1501 中所述的 X1-5108 ；ThrombResl986, 42:225-34中所述的单克隆抗体4_1 ;以及USPN6，566，140中例子19中所述的abcixmab 抗体。
[0114]在本发明的一些实施例中，因子11特异性抑制剂是小分子，比如，但不限于二丙烯基氟磷酸盐(DFP) ;USPPN2004/0180855中例子1_7中所述的小分子抑制剂；以及J BiolChem2005, 280:23523-30中所述的对氨基苄脒(pAB)。
[0115]本发明的实施例提供了因子11特异性抑制剂，如此处所述，可用于治疗、防止或改善血栓栓塞性并发症，如血栓形成、栓塞、血栓栓塞、深静脉血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中风。
[0116]本发明的实施例提供了如此处所述的因子11特异性抑制剂在用于治疗、防止或改善血栓栓塞性并发症，如血栓形成、栓塞、血栓栓塞、深静脉血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中风的药剂生产中的使用。
[0117]本发明的实施例提供了此处所述的因子11特异性抑制剂与此处所述的其他试剂或治疗方法相结合的疗法中的应用，这些疗法用于治疗、防止或改善此处所述的血栓栓塞性并发症。试剂或治疗方法可以共同给药或随附给药。
[0118]本发明的实施例提供了此处所述的因子11特异性抑制剂在药剂生产中的应用，该药剂与此处所述的其他试剂或治疗方法相结合的疗法用于治疗、防止或改善此处所述的血栓栓塞性并发症的药剂生产。试剂或治疗方法可以共同给药或随附给药。
[0119]本发明的实施例提供了此处所述的因子11特异性抑制剂在用于治疗、防止或改善此处所述的病人体内血栓栓塞性并发症的药剂生产中的应用，该病人后续被给药其他试剂或疗法。
[0120]本发明的实 施例提供了用于治疗、防止或改善此处所述的血栓栓塞性并发症的试剂盒，其中试剂盒包括:
[0121](i)此处所述的因子11特异性抑制剂；以及作为选择
[0122](ii)此处所述的其他试剂或治疗方法。
[0123]本发明的试剂盒可以进一步包括用试剂盒以此处所述的组合治疗方法来治疗、防止或改善此处所述的血栓栓塞性并发症的说明书。
[0124]本发明的实施例提供了靶向因子11核酸的反义化合物。在一些实施例中，因子11核酸是下列发布序列中的任一个:GENBANK登录号NM_000128.3 (以SEQ ID NO:1并入本申请)，GENBANK 登录号 ΝΤ_022792.17，从 19598000 至 19624000 截断(以 SEQ ID NO: 2 并入本申请)，GENBANK 登录号 NM_028066.1 (以 SEQ ID NO:6 并入本申请)，外显子 1_15，GENBANK登录号 NW_001118167.1 (以 SEQ ID NO:274 并入本申请)。
[0125]在一些实施例中，本发明提供了包含修饰寡核苷酸的化合物。在一些实施例中，本发明的化合物包括由12至30个连接核苷组成的修饰寡核苷酸。
[0126]在一些实施例中，本发明的化合物可以包括含有与SEQ ID NO:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列的修饰寡核苷酸。在一些实施例中，本发明的化合物可以包括含有与SEQ ID NO:1的等长部分至少100%互补的核苷碱基序列的修饰寡核苷酸。
[0127]在一些实施例中，本发明提供了包括含有与SEQ ID NO:1的第656位至第676位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列的修饰寡核苷酸的化合物。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ ID NO:1的第656位至第676位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所`述修饰寡核苷酸可以包含与SEQID NO:1的相同长度部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO:1的相同长度部分100%互补的核苷碱基序列。当在H印G2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3所述)。
[0128]在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸含有与SEQ ID NO:1的第665位至第687位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQID NO:1的第665位至第687位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ IDNO:1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在HepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少50%的抑制(例如，如例3所述)。
[0129]在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO:1的第675位至第704位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQID NO:1的第675位至第704位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ IDNO:1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在HepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少50%的抑制(例如，如例3所述)。
[0130]在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO:1的第677位至第704位核苷碱基至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ IDNO:1的第677位至第704位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ IDNO:1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在HepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少60%的抑制(例如，如例3所述)。
[0131]在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO:1的第678位至第697位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQID NO:1的第678位至第697位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ IDNO:1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在HepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少70%的抑制(例如，如例3所述)。
[0132]在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO:1的第680位至第703位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQID NO:1的第680位至第703位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ IDNO:1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在HepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3和例30所述)。
[0133]在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO:1的第683位至第702位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQID NO:1的第683位至第702位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ IDNO:1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在HepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少90%的抑制(例如，如例3所述)。
[0134]在一些实施 例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO:1的第738位至第759位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQID NO:1的第738位至第759位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ IDNO:1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在HepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3和例30所述)。
[0135]在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO:1的第738位至第760位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQ IDNO:1的第738位至第760位核苷碱基的等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ IDNO:1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在HepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少60%的抑制(例如，如例3所述)。
[0136]在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO:1的第738位至第762位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQID NO:1的第738位至第762位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ IDNO:1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在HepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少45%的抑制(例如，如例3所述)。
[0137]在一些实施例中，本发明提供 了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO:1的第1018位至第1042位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQID NO:1的第1018位至第1042位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ IDNO:1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在HepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3所述)。
[0138]在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO:1的第1062位至第1089位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQID NO:1的第1062位至第1089位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ IDNO:1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在HepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少70%的抑制(例如，如例3所述)。
[0139]在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO:1的第1062位至第1090位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQID NO:1的第1062位至第1090位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ IDNO:1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在HepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少60%的抑制(例如，如例3所述)。
[0140]在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO:1的第1062位至第1091位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQID NO:1的第1062位至第1091位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ IDNO:1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在HepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少20%的抑制(例如，如例3所述)。
[0141]在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO:1的第1275位至第1301位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQID NO:1的第1062位至第1091位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ IDNO:1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在HepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3所述)。
[0142]在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO:1的第1276位至第1301位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可能包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQID NO:1的第1062位至第1091位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO:1`的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ IDNO:1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在HepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例30所述)。
[0143]在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO:1的第1284位至第1308位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQID NO:1的第1062位至第1091位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ IDNO:1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在HepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3所述)。
[0144]在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO:1的第1291位至第1317位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20个与SEQID NO:1的第1062位至第1091位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ IDNO:1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在HepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3所述)。
[0145]在一些实施例中，本发明提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸包括与SEQ ID NO:1的第1275位至第1318位核苷碱基的至少部分互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含至少8、至少10、至少12、至少14、至少16、至少18或20与SEQ IDNO:1的第1275位至第1318位核苷碱基等长部分互补的连续核苷碱基。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ ID NO:1的等长部分至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%互补的核苷碱基序列。所述修饰寡核苷酸可以包含与SEQ IDNO:1的等长部分100%互补的核苷碱基序列。当在HepG2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少70%的抑制(例如，如例3所述)。
[0146]本发明的实施例提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸由12至30个连接核苷组成并且具有核苷碱基序列，该核苷碱基序列包括选自SEQ ID NO: 15至241中列举的核苷碱基序列的至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18个或20个连续核苷碱基。
[0147]本发明的实施例提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸由12至30个连接核苷组成并且具有核苷碱基序列，该核苷碱基序列包括选自SEQ ID NO: 15至269中列举的核苷碱基序列的至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18个或20个连续核苷碱基。
[0148]本发明的实施例提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸由12至30个连接核苷组成并且具有核苷碱基序列，该核苷碱基序列包括选自SEQ ID NO:242至269中列举的核苷碱基序列的至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18个或20个连续核苷碱基。
[0149]在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个或至少18个选自以下的核苷碱基序列的核苷碱基:ISIS Nos22、31、32、34、36至38、40、41、43、51至53、55、56、59、60、64、66、71、73、75、96、98至103、105至109、113至117、119、124、127、129、171、172、174、176、178、179、181 至 197,199 至 211 和 213 至 232。在一些实施例中，修饰寡核苷酸包含选自以下的核苷碱基序列:ISISNos22、31、32、34、36至38、40、41、43、51 至 53、55、56、59、60、64、66、71、73、75、96、98 至 103,105 至 109,113 至 117、119、124、127、129、171、172、174、176、178、179、181 至 197,199 至 211 和 213 至 232。在一些实施例中，修饰寡核苷酸由选自以下的核苷碱基序列所组成:SEQ ID N0s22、31、32、34、36 至 38、40、41、43、51 至 53、55、56、59、60、64、66、71、73、75、96、98 至 103,105 至 109,113至 117、119、124、127、129、171、172、174、176、178、179、181 至 197、199 至 211 和 213 至 232。当在H印G2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少70%的抑制(例如，如例3所述)。
[0150]在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个或至少18个选自以下的核苷碱基序列的核苷碱基:ISIS Nos22、31、34、37、40、43、51 至 53、60、98、100 至 102、105 至 109、114、115、119、171、174、176、179、181、186、188 至193、195、196、199至210和213至232。在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括选自以下的核苷碱基序列:SEQ ID N0s22、31、34、37、40、43、51 至 53、60、98、100 至 102,105 至 109,114,115、119、171、174、176、179、181、186、188 至 193、195、196、199 至 210 和 213 至 232。在一些实施例中，修饰寡核苷酸由选自以下的核苷碱基序列所组成:SEQ ID N0s22、31、34、37、40、43、51 至 53、60、98、100 至 102、105 至 109、114、115、119、171、174、176、179、181、186、188 至193、195、196、199至210和213至232。当在H印G2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例3所述)。
[0151]在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个或至少18个选自以下的核苷碱基序列的核苷碱基:ISIS Nos31、37、100、105、179.190至 193、196、202 至 207、209、210、214 至 219,221 至 224、226、227、229 和 231。在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括选自以下的核苷碱基序列:SEQ ID N0s31、37、100、105、
179.190至 193、196、202 至 207、209、210、214 至 219,221 至 224、226、227、229 和 231。在一些实施例中，修饰寡核苷酸由选自以下的核苷碱基序列所组成:SEQ ID N0s31、37、100、105、179、190 至 193、196、202 至 207、209、210、214 至 219,221至 224、226、227、229和 231。当在H印G2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少90%的抑制(例如，如例3所述)。
[0152]在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个或至少18个选自以下的核苷碱基序列的核苷碱基:SEQ ID N0s34、52、53、114、115,190至213、232、242至260以及262至266。在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括选自以下的核苷碱基序列:SEQ ID N0s34、52、53、114、115、190、213 至 232,242 至 260 以及 262至266。在一些实施例中，修饰寡核苷酸由选自以下的核苷碱基序列所组成:SEQ ID N0s34、52、53、114、115、190、213 至 232,242 至 260 和 262 至 266。当在 H印G2 细胞中，用 RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少70%的抑制(例如，如例30所述)。
[0153]在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个或至少18个选自以下的核苷碱基序列的核苷碱基:SEQ ID N0s34、52、53、114、115,190,213 至 216,218 至 226,243 至 246、248、249、252 至 259,264 和 265。在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括选自以下的核苷碱基序列:SEQ ID N0s34、52、53、114、115、190、213至216,218至226,243至246、248、249、252至259、264和265。在一些实施例中，修饰寡核苷酸由选自以下的核苷碱基序列所组成:SEQ ID N0s34、52、53、114、115、190、213至216、218 至 226,243 至 246、248、249、252 至 259、264 和 265。当在 H印G2 细胞中，用 RT-PCR 分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少80%的抑制(例如，如例30所述)。
[0154]在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个或至少18个选自以下的核苷碱基序列的核苷碱基:SEQ ID N0s34、190、215、222、223、226、246和254。在一些实施例中，修饰寡核苷酸包括选自以下的核苷碱基序列:SEQ IDN0s34、190、215、222、223、226、246和254。在一些实施例中，修饰寡核苷酸由选自以下的核苷碱基序列所组成:SEQ ID N0s34、190、215、222、223、226、246和254。当在H印G2细胞中，用RT-PCR分析方法测定，所述修饰寡核苷酸可以实现人mRNA水平至少90%的抑制(例如，如示例30所述)。[0155]在一些实施例中，化合物由单链修饰寡核苷酸所组成。
[0156]在一些实施例中，修饰寡核苷酸由20个连接核苷所组成。
[0157]在一些实施例中，修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2,SEQID N0:6或SEQ ID NO:274的核苷碱基序列100%互补。
[0158]在一些实施例中，化合物具有至少一个修饰的核苷内连接。在一些实施例中，核苷内连接是硫代磷酸核苷内连接。
[0159]在一些实施例中，化合物具有至少一个包含修饰糖的核苷。在一些实施例中，至少一个修饰糖是双环糖。在一些实施例中，至少一个修饰糖包含2’ -O-甲氧乙基。
[0160]本发明的实施例提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸由12至30个连接核苷组成并且具有核苷碱基序列，该核苷碱基序列包括选自SEQ ID NO: 15-24KSEQID NO: 15-269或SEQ ID NO:242-269中所列举的核苷碱基序列的至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18个或20个连续核苷碱基，其中，至少一个核苷包含修饰糖。
[0161 ] 在一些实施例中，所述至少一个修饰糖是双环糖。
[0162]在一些实施例中，所述至少一个双环糖包含4’ -(CH2)n-0_2’桥联，其中η为I或2。
[0163]在一些实 施例中，所述至少一个双环糖包含4’ -CH(CH3)-0_2’桥联。
[0164]在一些实施例中，所述至少一个修饰糖包含2’ -O-甲氧乙基基团。
[0165]本发明的实施例提供了包括修饰寡核苷酸的化合物，该修饰寡核苷酸由12至30个连接核苷组成并且具有核苷碱基序列，该核苷碱基序列包括选自SEQ ID NO: 15-24KSEQID NO: 15-269或SEQ ID NO:242-269中所列举的核苷碱基序列的至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18个或20个连续核苷碱基，包含至少一个四氢吡喃修饰核苷，其中，四氢吡喃环取代了呋喃糖环。
[0166]在一些实施例中，所述至少一个四氢吡喃修饰核苷具有如下结构:
[0167]
【权利要求】
1.一种化合物，包含由12至30个连接的核苷组成的靶向因子11核酸的修饰寡核苷酸，其中，所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与因子11核酸的等长部分至少90%互补。
2.如权利要求1所述的化合物，其中，所述修饰寡核苷酸包含的核苷碱基序列包含与: (i)SEQ ID NO:1 的核苷碱基 675-704， (ii)SEQID NO:1 的核苷碱基 1062-1090， (iii)SEQID NO:1 的核苷碱基 656-676， (iv)SEQ ID NO:1 的核苷碱基 665-687， (v)SEQID NO:1的核苷碱基738-762，或者 (vi)SEQID NO:1 的核苷碱基 1018-1042 的等长部分互补的至少8个连续核苷碱基部分。
3.如权利要求1所述的化合物，其中，所述因子11核酸是SEQID ΝΟ:1或者SEQ IDNO:2的人因子11核酸。
4.如权利要求1所述的化合物，其中，所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列与SEQIDNO:1或者SEQ ID NO: 2至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%互补。
5.如权利要求1所述的化合物，其中，所述修饰寡核苷酸包含与SEQID NO:1或者SEQID NO:2等长部分互补的至少8个连续核苷碱基部分。
6.如权利要求1所述的化合物，其中，所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列包含SEQIDNOs: 15至269中任一序列的至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18个、或20个连续核苷碱基。
7.如权利要求6所述的化合物，其中， (i)所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列包含SEQID N0:20、22、25、27、28、29、.30、.31、.32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、47、48、49、51、52、53、55、.56、57、58、59、.60、61、62、63、64、65、66、67、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、85、86、.93、96、97、98、.99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、I10、II1、I12、I13、I14、115、I16、I17、I18、I19、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、131、132、137、138、139、.140、141、.142、144、149、150、151、152、153、154、155、156、158、159、160、161、162、164、.166、168、171、.172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、..188、189、190、.191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、.206、.207、208、209、..210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、.226、227、228、..229、230、231、232、233、234、238、241、242、243、244、245、246、247、248、.249、.250、251、252、.253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266 或 267 的至少 .8 个、至少.10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18个或20个连续核苷碱基； (ii)所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列包含SEQID N0:22、27、28、29、30、31、32、.33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、47、48、51、52、53、55、56、57、58、59、.60、61、62、63、.64、66、71、72、73、74、75、76、77、78、79、85、96、98、99、100、101、102、103、.104、105、106、107、108、109、110、111、113、114、115、116、117、118、119、120、.122、123、124、125、126、127、128、129、131、132、137、138、139、140、141、142、.149、150、152、153、154、156、160、162、171、172、173、174、175、176、177、178、.179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、 194、.195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、.211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、.230、231、232、233、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、.257、258、259、260、261、262、263、264、265、266 或 267 的至少 8 个、至少 10 个、至少 12 个、至少14个、至少16个、至少18个或20个连续核苷碱基； (iii)所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列包含SEQID NO:22、27、29、30、31、32、33、34、.35、36、37、38、39、40、41、43、51、52、53、55、56、57、59、60、61、62、64、66、71、73、74、75、78、..96、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、113、114、115、116、117、118、119、.122、124、125、126、127、129、131、141、142、154、156、171、172、173、174、175、176、178、179、.180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、.199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、213、214、215、216、217、218、.219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、242、243、244、245、.246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、.265,266或267的至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18个或20个连续核苷碱基； (iv)所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列包含SEQID N0:22、31、32、34、36、37、38、40、.41、43、51、52、53、55、56、59、60、64、66、71、73、75、96、98、99、100、101、102、103、105、106、.107、108、109、I13、I14、I15、I16、I17、I19、124、127、129、171、172、174、176、178、179、181、.182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、199、200、201、.202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、213、214、215、216、217、218、219、220、221、.222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、242、243、244、245、246、247、248、.249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266 或 267的至少8个、至 少10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18个或20个连续核苷碱基; (V)所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列包含SEQ ID N0:22、31、34、37、40、43、51、52、.53、60、98、100、101、102、105、106、107、108、109、114、115、119、171、174、176、179、181、186、.188、189、190、191、192、193、195、196、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、.210、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、.231、232、233、243、244、245、246、248、249、252、253、254、255、256、257、258、259、261、264或.265的至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18个或20个连续核苷喊基; (vi)所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列包含SEQ ID N0:31、34、37、40、52、53、100、.102、105、107、109、114、115、179、190、191、192、193、196、202、203、204、205、206、207、209、.210、214、215、216、217、218、219、221、222、223、224、226、227、229、231、246 或 254 的至少 8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18个或20个连续核苷碱基的核苷碱基序列。
8.如权利要求1所述的化合物，其中， (i)所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列包含SEQ ID N0:32、102、186、187、188、189、.190、191、192、193或194的至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少.18个或20个连续核苷碱基；(ii)所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列包含SEQID N0:43、109、204、205、206、207、.208,209,210或211的至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18个或20个连续核苷碱基的核苷碱基序列； (iii)所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列包含SEQID NO:31或171的至少8个、至少.10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18个或20个连续核苷碱基； (iv)所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列包含SEQID NO: 100、178、179或180的至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18个或20个连续核苷碱基； (V)所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列包含SEQ ID NO:34、195、196、197、198或199的至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18个或20个连续核苷碱基；或者 (vi)所述修饰寡核苷酸的核苷碱基序列包含SEQ ID N0:40、107、200、201、202或203的至少8个、至少10个、至少12个、至少14个、至少16个、至少18个或20个连续核苷碱基。
9.如权利要求1所述的化合物，其中，所述修饰寡核苷酸由15-30、18-24、19-22或20个连接的核苷组成。
10.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物由单链修饰寡核苷酸组成。
11.如权利要求1所述的化合物，其中，至少一个核苷内连接是修饰核苷内连接。
12.如权利要求11所述的化合物，其中，每一核苷内连接是磷硫酰核苷内连接。
13.如权利要求1所述的化合物，其中，至少一个核苷包含修饰糖。
14.如权利要求13所述的化合物，其中，至少一个修饰糖是双环糖。
15.如权利要求14所述的化合物，其中，所述至少一个双环糖的每一个包含4’-(CH2)n_0_2’桥联，其中η为I或2。
16.如权利要求14所述的化合物，其中，所述至少一个双环糖的每一个包含4’ -CH (CH3)-0-2’ 桥联。
17.如权利要求13所述的化合物，其中，至少一个修饰糖包含2’-O-甲氧乙基基团。
18.如权利要求1所述的化合物，其包含至少一个四氢吡喃修饰的核苷，其中，四氢吡喃环取代了呋喃环。
19.如权利要求18所述的化合物，其中，所述至少一个四氢吡喃修饰的核苷的每一个具有如下结构:
20.如权利要求1所述的化合物，其中，至少一个核苷包含修饰的核苷碱基。
21.如权利要求20所述的化合物，其中，所述修饰核苷碱基是5-甲基胞嘧啶。
22.如权利要求1所述的化合物，其中，所述修饰寡核苷酸包含: 由连接的脱氧核苷组成的间隙区段； 由连接的核苷组成的5’侧翼区段；由连接的核苷组成的3’侧翼区段； 其中，所述间隙区段直接相邻于且位于所述5’侧翼区段和所述3’侧翼区段之间，其中，每一侧翼区段的每个核苷包含修饰糖。
23.如权利要求22所述的化合物，其中，所述修饰寡核苷酸包含: 由10个连接的脱氧核糖核苷组成的间隙区段； 由5个连接的核苷组成的5’侧翼区段； 由5个连接的核苷组成的3’侧翼区段； 其中，所述间隙区段直接相邻于且位于所述5’侧翼区段和所述3’侧翼区段之间，其中，每一侧翼区段的每个核苷包含2’-0_甲氧乙基糖；其中，每一个核苷内连接是磷硫酰连接。
24.如权利要求1所述的化合物，其中，所述修饰寡核苷酸由20个连接的核苷组成。
25.如权利要求23所述的化合物，其中，所述每一胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
26.一种组合物，包括如权利要求1-25任一项所述的化合物或其盐以及药用可接受的载体或稀释剂。
27.如权利要求1-25任一项所述的化合物，用于治疗。
28.如权利要求27所述的化合物，用于治疗或预防动物的血栓栓塞性并发症，其中，所述血栓并发症选自深静脉血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中风。
29.如权利要求27所述的化合物，用于治疗动物体内的凝血紊乱。
30.如权利要求1-25任一项所述的化合物或如权利要求26所述的组合物用于制备预防或治疗动物的血栓栓塞性并发症的药物的用途，其包括向有需要的动物施予所述化合物，其中，所述血栓栓塞性并发症选自深静脉血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和中风。
31.如权利要求1-25任一项所述的化合物或如权利要求26所述的组合物用于制备预防或治疗动物凝血紊乱的药物的用途，其包括向有需要动物的动物施予所述化合物。
32.如权利要求1-25任一项所述的化合物或如权利要求26所述的组合物用于制备抑制动物表达因子11的药物的用途，所述用途包括向所述动物施予所述化合物。
33.如权利要求26-32任一项所述的化合物、组合物、或者用途，其中，所述动物为人。
34.如权利要求1-25任一项所述的化合物或如权利要求26所述的组合物，用于通过与选自阿司匹林、氯吡格雷、双嘧达莫、肝素、来匹卢定、噻氯匹定、华法林、阿哌沙班、利伐沙班和依诺肝素钠组成的任意组共同给药以治疗血栓栓塞并发症。
35.如权利要求1-25任一项所述的用途或如权利要求26所述的组合物用于制备通过与选自阿司匹林、氯吡格雷、双嘧达莫、肝素、来匹卢定、噻氯匹定、华法林、阿哌沙班、利伐沙班和依诺肝素钠组成的任意组共同给药以治疗血栓栓塞并发症的药物的用途。
36.如权利要求1-25任一项所述的化合物或如权利要求26所述的组合物，其中，所述化合物或组合物是用于与选自阿司匹林、氯吡格雷、双嘧达莫、肝素、来匹卢定、噻氯匹定、华法林、阿哌沙班、利伐沙班、依诺肝素钠和因子Xa抑制剂的任意组共同给药或者随附给药。
37.如权利要求1-25任一项所述的化合物或如权利要求26所述的组合物，其中，所述化合物或组合物是用于与抗血小板治疗药物共同给药。
38.如权利要求37所述的化合物或组 合物，其中，所述抗血小板治疗药物选自ADP受体抑制剂、NSAID、磷酸二酯酶抑制剂、糖蛋白IIB/IIIA抑制剂或腺苷重摄取抑制剂或其组口 O
39.如权利要求38所述的化合物或组合物，其中，所述NSAID是阿司匹林、萘普生或二者的组合。
40.如权利 要求38所述的化合物或组合物，其中，所述ADP受体/P2Y12抑制剂是噻吩吡啶。
【文档编号】A61P7/02GK103820450SQ201410025372
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2009年10月15日 优先权日:2008年10月15日
【发明者】S·M·弗赖尔, B·P·莫尼亚, 张宏, 赵臣广, J·R·克罗斯比, A·M·斯夫科夫斯基 申请人:Isis制药公司