本发明属于含放射性物质的放射药物制品技术领域，具体地涉及一种葡萄糖代谢显像试剂盒。
背景技术：
18F-FDG是目前临床应用最多的正电子显像剂，已大量用于：1、神经系统疾病的诊断:癫痫、脑肿瘤、痴呆和帕金森病等：2、探测心肌缺血，测定心肌存活：3、肿瘤的诊断、分期、疗效监测和预后判断；4、脑功能研究[Basu S.et al.Ann.NY.Acad.Sci.2011.1228(1).1-18；Almuhaideb A.et al.Ann.Saudi.Med.2011.31(1).3-13；Vallabhajosula S.et al.Semin.Nucl.Med.2011.41(4).246-264]。恶性肿瘤细胞的异常增殖需要葡萄糖的过度利用[Warburg O.Science.1956.123(3191).309-314.]，葡萄糖代谢旺盛的部位也即是潜在的肿瘤病灶。因此，葡萄糖代谢显像的临床意义重大。
18F-FDG的临床应用需要配备非常昂贵的正电子发射计算机断层扫描仪(PET-CT)和医用加速器，仅在国内大型医院进行临床使用，诊断费用高，而且18F的半衰期较短(T1/2＝109.7min),仍无法在临床进行普及和推广。
放射性核素99mTc有着良好的核性质，半衰期T1/2为6h，发射能量为140keV的γ射线，非常适合SPECT显像，价格低廉和通过钼锝发生器非常方便地制得，是理想的用于疾病和肿瘤诊断显像的放射性核素，在国内医院核医学广泛使用。国内外研究机构近十多年集中研究和开发新型的制备方便、价格低廉和显像效果好的99mTc-葡萄糖代谢显像试剂盒。
早期报道的以99mTc直接标记葡萄糖衍生物例如5-硫代葡萄糖[Ozker K.et al.Nucl.Med.Commun.1999.20.1055-1058.]与葡萄糖的体内行为不一样，不能被转运蛋白识别；随后进行的以含N2S2的配体[Yang D J.et al.Radiology.2003.226.465-473.]或以二乙基三胺五乙酸的配体[Chen Y.et al.Appl.Radiat.Isot.2006.64.342-347.]与葡萄糖分子偶联后和99mTc进行标记的化合物无法被细胞内的已糖激酶磷酸化，很快被排出细胞；Bayly等人[Bayly S R.et al.Bioconjugate.Chem.2004.15.923-926.]利用Tc(CO)3标记了一个含有酚基和仲胺的糖衍生物，但是该配合物稳定性不好；Ferreira等人[Ferreira C L.et al.Bioconjugate.Chem.2006.17.1321-1329]制备了五种二齿配体，并进行了Tc(CO)3标记研究，发现稳定性有了较大的提高，但是这些配合物不能抑制己糖激酶、也不能被磷酸化；Schibli等人[Dumas C.et al.Bioconjugate.Chem.2005.16.421-428；Dumas C.et al.J.Org.Chem.2003.68.512-518；Schibli R.et al.Bioconjugate.Chem.2005.16.105-112]考察了一些三齿配体与Tc(CO)3形成的配合物，这些配合物与Glut-1葡萄糖转运体无关；Mikata等[Mikata Y.et al.Inorg.Chem.2004.43.4778-4780.Storr T.et al.Inorg.Chem.2005.44.2698-2705；Storr T.et al.Dalton Trans.2005.654-655.]制备 的糖衍生物配体包含两个吡啶胺和一个叔胺，可以更好地与Tc(CO)3形成稳定的配合物，但是这些配合物既不能被细胞摄取，也不能被己糖激酶磷酸化。这些99mTc标记葡萄糖代谢显像剂都是体积庞大的配合物，这种体积庞大的放射性核素及有机配体对葡萄糖基团有很大影响，也是造成其生物评价效果不佳的主要原因。
无铜点击化学，即环辛炔与叠氮的[3+2]环加成反应，具有反应速度快、无副反应发生等优点[Sletten E.M.et al.Accounts.Chem.Res.2011.44.666-676；Science,2008,320,664-667]。
但目前尚未有利用无铜点击化学应用于99mTc标记的葡萄糖代谢显像剂的报道。
技术实现要素：
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种明显改善显像质量的葡萄糖代谢显像试剂盒。
本发明的技术方案概述如下：
一种葡萄糖代谢显像试剂盒，包括A组试剂、B组试剂和C剂；
所述A组试剂用下述原料制成：2,3,4,6-四-O-乙酰-1-(1＇-叠氮乙酰胺)-β-D-葡萄糖[N3-DG-2，见结构式(I)]5.0-50.0重量份，尿素20-200重量份；
所述B组试剂用下述原料制成：二苯并环辛炔-单胺单酰胺二硫醇[ADIBO-MAMA，见结构式(II)]0.5-5.0重量份，葡庚糖0.5-5.0重量份，氯化亚锡二水合物0.001-0.2重量份，尿素20-200重量份；
所述C试剂为：99mTcO4-溶液，放射性活度为3.7×107Bq-3.7×109Bq。
优选的：A组试剂用下述原料制成：2,3,4,6-四-O-乙酰-1-(1＇-叠氮乙酰胺)-β-D-葡萄糖30.0重量份，尿素20重量份；
优选的：B组试剂用下述原料制成：二苯并环辛炔-单胺单酰胺二硫醇1.0重量份，葡庚糖2.0重量份，氯化亚锡二水合物0.005重量份，尿素20重量份。
A组试剂用下述方法制成：将2,3,4,6-四-O-乙酰-1-(1＇-叠氮乙酰胺)-β-D-葡萄糖5.0-50.0 重量份，尿素20-200重量份溶于1000-10000重量份水中；用0.22微米无菌过滤膜过滤上述溶液，以1.0-2.0mL/瓶分装到西林瓶中；冷冻干燥24-48小时，充入氮气，压盖取出。
B组试剂用下述方法制成：
(1)将二苯并环辛炔-单胺单酰胺二硫醇0.5-5.0重量份，葡庚糖0.5-5.0重量份，尿素20-200重量份溶于100-1000重量份水中，得溶液一；
(2)将氯化亚锡二水合物0.001-0.2重量份，溶于100-1000重量份0.01-1.0M HCl水溶液中得溶液二；
(3)将溶液二加入到溶液一中，混合，调节pH＝5-7，加水至1000-10000重量份得溶液三；将溶液三用0.22微米无菌过滤膜过滤，以1.0-2.0mL/瓶分装到西林瓶中，冷冻干燥24-48小时，充入氮气，压盖取出。
C试剂用下述方法制成：将放射性活度为3.7×107Bq-3.7×109Bq99mTcO4-淋洗液，用无菌生理盐水将其稀释至3-5mL。
本发明的优点：
实验结果表明，本发明的葡萄糖代谢显像试剂盒具有较高的肿瘤/血液比和肿瘤/肌肉比，更具有作为葡萄糖代谢显像剂的潜力。
附图说明
图1为试验例1中放射性-高效液相色谱仪测定所得色谱图(图中纵坐标均为放射性活度，单位：cpm；横坐标均为时间，单位：min)。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
一种葡萄糖代谢显像试剂盒，包括A组试剂、B组试剂和C试剂；
所述A组试剂用下述原料制成：2,3,4,6-四-O-乙酰-1-(1＇-叠氮乙酰胺)-β-D-葡萄糖30.0重量份，尿素20.0重量份；
所述B组试剂用下述原料制成：二苯并环辛炔-单胺单酰胺二硫醇1.0重量份，葡庚糖2.0重量份，尿素20重量份，氯化亚锡二水合物0.005重量份；
所述C试剂为：99mTcO4-溶液，放射性活度为3.7×108Bq。
实施例2
一种葡萄糖代谢显像试剂盒，包括A组试剂、B组试剂和C试剂；
所述A组试剂用下述原料制成：2,3,4,6-四-O-乙酰-1-(1＇-叠氮乙酰胺)-β-D-葡萄糖5.0重量份，尿素20重量份；
所述B组试剂用下述原料制成：二苯并环辛炔-单胺单酰胺二硫醇0.5重量份，葡庚糖0.5重量份，尿素20重量份，氯化亚锡二水合物0.001重量份；
所述C试剂为：99mTcO4-溶液，放射性活度为3.7×107Bq。
实施例3
一种葡萄糖代谢显像试剂盒，包括A组试剂、B组试剂和C试剂；
所述A组试剂用下述原料制成：2,3,4,6-四-O-乙酰-1-(1＇-叠氮乙酰胺)-β-D-葡萄糖50.0重量份，尿素200重量份；
所述B组试剂用下述原料制成：二苯并环辛炔-单胺单酰胺二硫醇5.0重量份，葡庚糖5.0重量份，尿素200重量份，氯化亚锡二水合物0.2重量份；
所述C试剂为：99mTcO4-溶液，放射性活度为3.7×109Bq。
实施例4
一种葡萄糖代谢显像试剂盒，包括A组试剂、B组试剂和C试剂；
A组试剂用下述方法制成：将2,3,4,6-四-O-乙酰-1-(1＇-叠氮乙酰胺)-β-D-葡萄糖30.0重量份，尿素20重量份溶于5000重量份水中；用0.22微米无菌过滤膜过滤，以1.5mL/瓶分装到西林瓶中；冷冻干燥36小时，充入氮气，压盖取出。
B组试剂用下述方法制成：
(1)将二苯并环辛炔-单胺单酰胺二硫醇1.0重量份，葡庚糖2.0重量份，尿素20重量份溶于500重量份水中，得溶液一；
(2)将氯化亚锡二水合物0.005重量份，溶于500重量份0.1M HCl水溶液中得溶液二；
(3)将溶液二加入到溶液一中，混合，调节pH＝6，加水至5000重量份得溶液三；将溶液三用0.22微米无菌过滤膜过滤，以1.5mL/瓶分装到西林瓶中，冷冻干燥36小时，充入氮气，压盖取出。
C试剂用下述方法制成:将符合质量标准的3.7×108Bq99mTcO4-淋洗液，用无菌生理盐水将其稀释至4mL。
实施例5
一种葡萄糖代谢显像试剂盒，包括A组试剂、B组试剂和C试剂；
A组试剂用下述方法制成：将2,3,4,6-四-O-乙酰-1-(1＇-叠氮乙酰胺)-β-D-葡萄糖5.0重量份，尿素20重量份溶于1000重量份水中；用0.22微米无菌过滤膜过滤，以1.0mL/瓶分装到西林瓶中；冷冻干燥24小时，充入氮气，压盖取出。
B组试剂用下述方法制成：
(1)将二苯并环辛炔-单胺单酰胺二硫醇0.5重量份，葡庚糖0.5重量份，尿素20重量份溶于100重量份水中，得溶液一；
(2)将氯化亚锡二水合物0.001重量份，溶于100重量份0.01M HCl水溶液中得溶液二；
(3)将溶液二加入到溶液一中，混合，调节pH＝7，加水至1000重量份得溶液三；将溶液三用0.22微米无菌过滤膜过滤，以1.0mL/瓶分装到西林瓶中，冷冻干燥24小时，充入氮气，压盖取出。
C试剂用下述方法制成:将3.7×109Bq99mTcO4-淋洗液，用无菌生理盐水将其稀释至3mL。
实施例6
一种葡萄糖代谢显像试剂盒，包括A组试剂、B组试剂和C试剂；
A组试剂用下述方法制成：将2,3,4,6-四-O-乙酰-1-叠氮-β-D-葡萄糖50.0重量份，尿素200重量份溶于10000重量份水中；用0.22微米无菌过滤膜过滤，以2.0mL/瓶分装到西林瓶中；冷 冻干燥48小时，充入氮气，压盖取出。
B组试剂用下述方法制成：
(1)将二苯并环辛炔-单胺单酰胺二硫醇5.0重量份，葡庚糖5.0重量份，尿素200重量份溶于1000重量份水中，得溶液一；
(2)将氯化亚锡二水合物0.2重量份，溶于1000重量份1.0M HCl水溶液中得溶液二；
(3)将溶液二加入到溶液一中，混合，调节pH＝5，加水至10000重量份得溶液三；将溶液三用0.22微米无菌过滤膜过滤，以2.0mL/瓶分装到西林瓶中，冷冻干燥48小时，充入氮气，压盖取出。
C试剂用下述方法制成:将3.7×109Bq99mTcO4-淋洗液，用无菌生理盐水将其稀释至5mL。
试验例1
本试验例是用放射性-高效液相色谱仪测定实施例5中C试剂标记B组试剂中的二苯并环辛炔-单胺单酰胺二硫醇所得到Tc-99m标记二苯并环辛炔-单胺单酰胺二硫醇(99mTc-ADIBO-MAMA)的标记率。其计算公式如下：
测定条件：放射性-高效液相色谱仪分析采用Agilent HC-C18柱(4.6×150mm，size 5μm)、Waters 2487双波长紫外-可见光谱仪(Waters 600E series)和放射计量检测器(Packard 500TR series)系统完成。A溶剂相为0.1M醋酸铵水溶液，B溶剂相为乙腈。淋洗梯度为：0-2min 90％A；2-5min 90％-30％A；5-35min 30％-0A；35-37min 0-90％A，流速为1.0mL/min。
测量方法：
用微量进样器取3-4MBq的C试剂进样，按照上述测定条件进行分析，获得HPLC图1中的(a)；
用微量进样器取3-4MBq99mTc-GH溶液，按照上述测定条件进行分析，获得99mTc-GH的HPLC图1中的(b)；
99mTc-GH溶液溶液的制备：
(1)将葡庚糖0.5重量份溶于100重量份水中，得溶液一＇；
(2)将氯化亚锡二水合物0.001重量份，溶于100重量份0.01M HCl水溶液中得溶液二＇；
(3)将溶液二＇加入到溶液一＇中，混合，调节pH＝7，加水至1000重量份得溶液三＇；将溶液三用0.22微米无菌过滤膜过滤，得滤液；
(4)取1mL(3)中所得滤液加入到C试剂中，振荡后，静止10min。
用微量进样器取1-2MBq99mTc-ADIBO-MAMA溶液，按照上述测定条件进行分析，获得标记物的HPLC，见图1中的(c)。
99mTc-ADIBO-MAMA溶液溶液的制备：将C试剂加入到一瓶B组试剂中，振荡混匀，100℃水浴中加热反应5min。
从图1中可以看出：99mTcO4-的保留时间为3.3min，99mTc-GH的保留时间为1.9min，而标记产物99mTc-ADIBO-MAMA保留时间为7.7min，可以实现很好的分离；从(c)中并没有发现原料99mTcO4-和中间产物99mTc-GH的色谱峰，说明反应完全，标记率接近100％.
试验例2
先向荷S180肿瘤小鼠体内注射实施例5中A组试剂(含N3-DG-2)，再将实施例5中C试剂标记B组试剂得到Tc-99m标记二苯并环辛炔-单胺单酰胺二硫醇(99mTc-ADIBO-MAMA)注射荷S180肿瘤小鼠体内，测定二者在荷S180肿瘤小鼠体内的生物分布。
小鼠肉瘤S180模型可以通过在雄性昆明小鼠(北京市海淀区兴隆实验动物养殖厂，20-22g)的左前腿腋下皮下注射新鲜S180细胞液(南京科佰生物科技有限公司；细胞株：CCRF S-180II，小鼠肌肉；浓度为107～108/mL)建立；7～10天后，肿瘤长到直径约10～15mm，可用于实验。
挑选肿瘤状况良好的40只荷瘤小鼠，实验组20只，分为四组，分别对应1h、2h、4h和8h组，每组5只，对照组20只，分为四组，分别对应1h、2h、4h和8h组，每组5只。实验组小鼠在实验前禁食16h以上，提前2小时尾静脉注射0.1mL A组试剂(含N3-DG-2)溶液(使用时用5mL医用生理盐水溶解1瓶A组试剂)，然后尾静脉注射0.1mL 5×104Bq99mTc-ADIBO-MAMA的标记产物(3mL试剂C溶解1瓶B组试剂，振荡混匀，在100℃条件下加热反应5min)；对照组，实验前实验小鼠禁食16h以上，尾静脉注射0.1mL 5×104Bq99mTc-ADIBO-MAMA的标记产物(3mL试剂C溶解1瓶B组试剂，振荡混匀，在100℃条件下加热反应5min)；
在注射后的不同时间点取对应组别的小鼠将其眼眶取血，然后断颈处死，取出脑、肌肉、骨头、肿瘤、心、胃、肠、肾、脾、肺、肝，用水冲洗干净，排除内容物并拭干后称重，用自动伽马计数器分别测其放射性强度，计算各个器官的摄取量(％ID/g，同组内结果取平均值，以平均值±标准差表示)，同时计算各个时间点的瘤血比和瘤肉比，实验结果见表1。
表1对照组与实验组在荷S180肿瘤小鼠体内的生物分布，
实验时以对照组作为对照(以平均值±标准差表示)
由表1的数据可知：实验组的肝摄取较高，由于脂溶性大的化合物主要通过肝胆进行代谢；心、肺、胃和肌肉在开始有少量摄取，但很快清除，脑中则几乎无摄取；实验组随着时间的延长，瘤血比和瘤肉比均呈现逐渐上升的趋势。和对照组相比，实验组被肝脏中摄取明显少很多，而且实验组在肝脏中的清除比对照组快；实验组在心、胃、脾、肺、肾等器官中的清除明显快于对照组；实验组的肿瘤/血液及肿瘤/肌肉比要比对照组大。
由此可见葡萄糖代谢显像试剂盒的显像效果较好，具有作为葡萄糖代谢显像剂的潜力。
实验证明，实施例4、实施例6的检测结果与实施例5相似。