1.一种双特异性四价抗体,所述双特异性四价抗体包含:
两条IgGl重链;
两条κ轻链;以及
两个单链Fv(scFv)结构域;
其中所述两条IgGl重链和κ轻链形成对EGFR家族的第一成员具有结合特异性的IgG部分;
其中所述两个scFv结构域对EGFR家族的第二成员具有结合特异性,且每个scFv结构域通过具有(gly-gly-gly-gly-ser)n的氨基酸序列的连接体连接到所述IgGl重链中任一个的C-端,以提供IgGl-连接体连接,其中n是至少1的整数;以及
其中每个单链Fv结构域具有N端-重链可变区-接头-轻链可变区-C端或N-端-轻链可变区-接头-重链可变区-C-端的结构顺序,其中所述接头由(gly-gly-gly-gly-ser)m的氨基酸序列组成,其中m是至少3的整数。
2.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中n是1至10的整数。
3.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中m是3、4、5、或6。
4.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述IgGl重链中至少一个是人源化或人IgGl重链。
5.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述两个IgGl重链是人源化或人IgGl重链。
6.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述κ轻链中至少一个是人源化或人κ轻链。
7.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中两条κ轻链均是人源化或人κ轻链。
8.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述EGFR家族的所 述第一或所述第二成员包含HER3、EGFR、其片段或衍生物。
9.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述EGFR家族的所述第一或所述第二成员独立地选自由HER3、EGFR、其片段或衍生物组成的组。
10.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述IgG部分具有对HER3的结合特异性。
11.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述单链Fv结构域具有对EGFR的结合特异性。
12.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述IgG部分具有对HER3的结合特异性并且所述单链Fv结构域同时具有对EGFR的结合特异性。
13.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述IgG部分具有对EGFR的结合特异性。
14.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述单链结构域具有对HER3的结合特异性。
15.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述IgG部分具有对EGFR的结合特异性并且所述单链Fv结构域同时具有对HER3的结合特异性。
16.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述IgGl重链中至少一个的所述C端缺失一个氨基酸残基。
17.根据权利要求16所述的双特异性四价抗体,其中所述氨基酸残基是赖氨酸。
18.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述IgGl-连接体连接能抵抗蛋白酶活性。
19.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述IgGl重链中至少一个包含在CH3结构域中的两个突变,其中所述两个突变回复成人CH3结构域中的通用残基。
20.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述IgGl重链中至少一个包含含有SEQ ID NO 7、15、23、31、39、47和127的氨基酸序列。
21.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述IgGl重链、连接体和单链Fv结构域具有包含SEQ ID NO 56、66、76、86、98、108、118和136的氨基酸序列。
22.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述κ轻链中至少一个包含含有SEQ ID NO 3、11、19、27、35、43、51、61、71、81、92、103、113、123和131的氨基酸序列。
23.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中轻链可变区中至少一个包含含有SEQ ID NO 4、12、20、28、36、44、52、62、72、82、93、104、114、124和132的氨基酸序列。
24.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中重链可变区中至少一个包含含有SEQ ID NO 8、16、24、32、40、48、57、67、77、87、99、109、119、128和137的氨基酸序列。
25.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述IgG部分具有对HER3的结合特异性,并且所述单链Fv结构域具有对EGFR的结合特异性;
其中所述IgGl重链、连接体和单链Fv结构域具有SEQ ID NO 56的氨基酸序列,并且所述κ轻链具有SEQ ID NO 51的氨基酸序列。
26.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述IgG部分具有对HER3的结合特异性,并且所述单链Fv结构域具有对EGFR的结合特异性;
其中所述IgGl重链、连接体和单链Fv结构域具有SEQ ID NO 76的氨基酸序列,并且所述κ轻链具有SEQ ID NO 71的氨基酸序列。
27.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述IgG部分具有对HER3的结合特异性,并且所述单链Fv结构域具有对EGFR的结合特异性;
其中所述IgGl重链、连接体和单链Fv结构域具有SEQ ID NO 108的氨基酸序列,并且所述κ轻链具有SEQ ID NO 103的氨基酸序列。
28.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述IgG部分具有对EGFR的结合特异性,并且所述单链Fv结构域具有对HER3的结合特异性;
其中所述IgGl重链、连接体和单链Fv结构域具有SEQ ID NO 66的氨基酸序列,并且所述κ轻链具有SEQ ID NO 61的氨基酸序列。
29.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述IgG部分具有对EGFR的结合特异性,并且所述单链Fv结构域具有对HER3的结合特异性;
其中所述IgGl重链、连接体和单链Fv结构域具有SEQ ID NO 86的氨基酸序列,并且所述κ轻链具有SEQ ID NO 81的氨基酸序列。
30.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述IgG部分具有对EGFR的结合特异性,并且所述单链Fv结构域具有对HER3的结合特异性;
其中所述IgGl重链、连接体和单链Fv结构域具有SEQ ID NO 98的氨基酸序列,并且所述κ轻链具有SEQ ID NO 92的氨基酸序列。
31.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述IgG部分具有对EGFR的结合特异性,并且所述单链Fv结构域具有对HER3的结合特异性;
其中所述IgGl重链、连接体和单链Fv结构域具有SEQ ID NO 118的氨基酸序列,并且所述κ轻链具有SEQ ID NO 113的氨基酸序列。
32.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述IgG部分具有对EGFR的结合特异性,并且所述单链Fv结构域具有对HER3的结合特异性;
其中所述IgGl重链、连接体和单链Fv结构域具有SEQ ID NO 136的氨 基酸序列,并且所述κ轻链具有SEQ ID NO 131的氨基酸序列。
33.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述抗体抑制癌细胞生长。
34.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述抗体以小于50nM的解离常数(Kd)结合至EGRF和HER3。
35.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体,其中所述抗体同时以小于50nM的解离常数(Kd)结合至EGRF并以小于50nM的解离常数(Kd)结合至HER3。
36.一种根据权利要求1所述的双特异性四价抗体的IgGl重链,其包含选自SEQ ID NO 7、15、23、31、39、47和127的氨基酸序列。
37.一种根据权利要求1所述的双特异性四价抗体的κ轻链,其包含选自SEQ ID NO 3、11、19、27、35、43、51、61、71、81、92、103、113、123和131的氨基酸序列。
38.一种根据权利要求1所述的双特异性四价抗体的轻链可变区,其包含选自SEQ ID NO 4、12、20、28、36、44、52、62、72、82、93、104、114、124和132的氨基酸序列。
39.一种根据权利要求1所述的双特异性四价抗体的重链可变区,其包含选自SEQ ID NO 8、16、24、32、40、48、57、67、77、87、99、109、119、128和137的氨基酸序列。
40.一种编码根据权利要求1所述的抗体、根据权利要求36所述的IgGl重链、根据权利要求37所述的κ轻链、根据权利要求38所述的轻链可变区或根据权利要求39所述的重链可变区的分离的核酸。
41.一种表达载体,其包含根据权利要求40所述的分离的核酸。
42.根据权利要求41所述的表达载体,其中所述载体可在细胞中表达。
43.一种宿主细胞,其包含根据权利要求40所述的核酸。
44.一种宿主细胞,其包含根据权利要求43所述的表达载体。
45.根据权利要求44所述的宿主细胞,其中所述宿主细胞是原核细胞或真核细胞。
46.一种产生抗体的方法,其包含培养根据权利要求43-45中任一项所述的宿主细胞,从而产生所述抗体。
47.一种包含根据权利要求1所述的抗体和细胞毒性剂的免疫偶联物。
48.一种包含根据权利要求1所述的双特异性四价抗体和药学上可接受的载剂的药物组合物。
49.根据权利要求48所述的药物组合物,其进一步包含放射性同位素、放射性核素、毒素、治疗剂、化学治疗剂或其组合。
50.一种药物组合物,其包含根据权利要求47所述的免疫偶联物和药学上可接受的载剂。
51.一种治疗癌症受试者的方法,其包含将有效量的根据权利要求1所述的双特异性四价抗体施用给所述受试者。
52.根据权利要求51所述的方法,其中所述癌症包含表达EGFR家族中至少两个成员的细胞。
53.根据权利要求51所述的方法,其中所述癌症包含乳腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、头颈癌、黑素瘤、卵巢癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、神经胶质瘤、食管癌、鼻咽癌、肛门癌、直肠癌、胃癌、膀胱癌、子宫颈癌和脑癌。
54.根据权利要求51所述的方法,其进一步包含共施用有效量的治疗剂。
55.根据权利要求54所述的方法,其中所述治疗剂包含抗体、化学治疗剂、酶或其组合。
56.根据权利要求54所述的方法,其中所述治疗剂包含抗雌激素剂、受体酪氨酸抑制剂或其组合。
57.根据权利要求54所述的方法,其中所述治疗剂包含卡培他滨、顺铂、曲妥单抗、氟维司群、他莫昔芬、来曲唑、依西美坦、阿那曲唑、氨鲁米特、睾内酯、伏氯唑、福美司坦、法罗唑、来曲唑、埃罗替尼、拉法替尼、达沙替尼、吉非替尼、伊马替尼、帕唑帕尼、拉帕替尼、苏尼替尼、尼洛替尼、索拉非尼、纳米微粒白蛋白结合型紫杉醇、其衍生物或组合。
58.根据权利要求54所述的方法,其中所述治疗剂包含检查点抑制剂。
59.根据权利要求54所述的方法,其中所述治疗剂包含PDl、PDLl、CTLA4、4-lBB、OX40、GITR、TIM3、LAG3、TIGIT、CD40、CD27、HVEM、BTLA、VISTA、B7H4、其衍生物或组合。
60.根据权利要求51所述的方法,其中所述受试者是人。
61.一种抑制受试者的HER受体的生物活性的方法,其包含将有效量的根据权利要求1所述的抗体施用给所述受试者以抑制HER受体的生物活性。
62.一种包含有效量的根据权利要求1所述的双特异性四价抗体的溶液,其中所述溶液是受试者的血浆。