发明背景
因子xia是参与血液凝固调节的血浆丝氨酸蛋白酶。虽然血液凝固是调节有机体内稳态的必要和重要的部分，但异常凝血也可能具有有害作用。例如，血栓形成是在血管或心腔内形成或存在血块。这种血块可以滞留在血管中，从而阻断循环并诱导心脏病发作或中风。血栓栓塞病症是工业化世界中死亡和残疾的最大原因。
血液凝固是控制哺乳动物生存所必需的血流的过程。在血管损伤后开始凝固过程及随后的伤口愈合发生后的凝块溶解，并且可以分为四个阶段。第一阶段，血管收缩或血管紧缩，可导致损伤区域的失血量减少。在下一阶段，凝血酶导致血小板活化，血小板粘附到血管壁损伤部位并形成血小板聚集体。在第三阶段，凝块配合物的形成导致凝血酶大量形成，其通过裂解两个小肽将可溶性纤维蛋白原转化为纤维蛋白。在第四阶段，伤口愈合后，通过内源性纤维蛋白溶解系统的关键酶纤维蛋白溶酶的作用溶解血栓。
两种可替换的途径可以导致纤维蛋白凝块的形成，即内在途径和外在途径。这些途径由不同的机制启动，但在后期阶段，它们汇聚得到共同的最终的凝血级联路径。在这个最终的凝血路径中，凝血因子x被活化。活化的因子x负责从在血液中循环的无活性前体凝血酶原形成凝血酶。在没有伤口的血管壁异常的底部上形成血栓是内在途径的结果。作为对组织损伤或伤害作出反应的纤维蛋白凝块形成是外在途径的结果。两种途径都包含相对大量的蛋白质，其被称为凝血因子。内在途径需要凝血因子v、viii、ix、x、xi和xii以及前激肽释放酶、高分子量激肽原、钙离子和来自血小板的磷脂。因子xia的活化是凝固活化的两个途径之间的中心交叉点。因子xia在血液凝固中具有重要作用。
当血液暴露于人工表面(例如，在血液透析期间、“体外循环”心血管手术、血管移植物、细菌性败血症)、细胞表面上、细胞受体、细胞碎片、dna、rna和细胞外基质时，凝血开始。该过程也被称为接触活化。因子xii的表面吸收导致因子xii分子的构象变化，从而促进对蛋白水解活性因子xii分子(因子25xiia和因子xiif)的活化。因子xiia(或xiif)具有许多靶蛋白，包括血浆前激肽释放酶和因子xi。活性血浆激肽释放酶进一步活化因子xii，导致接触活化的扩大。或者，丝氨酸蛋白酶脯氨酰羧肽酶可以活化在细胞和基质表面上形成的多蛋白配合物中与高分子量激肽原配合的血浆激肽释放酶(shariat-madar等人，blood，108:192-199(2006))。接触活化是部分地负责调节血栓形成和炎症的表面介导的过程，并且至少部分地由纤维蛋白溶解、补体、激肽原/激肽和其他体液和细胞途径介导(综述，coleman，r.，“contactactivationpathway”，hemostasisandthrombosis，pp.103-122，lippincottwilliams&wilkins(2001)；schmaier，a.h.，“contactactivation”，thrombosisandhemorrhage，pp.105-128(1998))。接触活化系统对5种血栓栓塞性疾病的生物相关性由因子xii缺陷小鼠的表型支持。更具体地，在几种血栓形成模型以及中风模型中保护因子xii缺陷小鼠免于血栓性血管闭塞，并且xii缺陷小鼠的表型与xi缺陷小鼠相同(renne等人，jexp.med.，202:271-281(2005)；kleinschmitz等人，jexp.med.，203:513-518(2006))。因子xi是因子xiia的下游，与xii和xi缺陷小鼠的相同表型相结合的事实表明接触活化系统可在体内xi因子活化中起主要作用。血浆激肽释放酶是胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶的酶原并且存在于血浆中。基因结构类似于因子xi的基因结构。总的来说，血浆激肽释放酶的氨基酸序列与因子xi具有58%的同源性。通过因子xiia在内部i389-r390键处的蛋白水解活化产生重链(371个氨基酸)和轻链(248个氨基酸)。血浆激肽释放酶的活性位点包含在轻链中。血浆激肽释放酶的轻链与15种蛋白酶抑制剂反应，包括α2巨球蛋白和cl抑制剂。有趣的是，在高分子量激肽原(hmwk)存在下，肝素显著加速抗凝血酶iii对血浆激肽释放酶的抑制。在血液中，大多数血浆激肽释放酶与hmwk配合循环。血浆激肽释放酶裂解hmwk以释放缓激肽。缓激肽释放导致血管通透性和血管扩张的增加(综述，coleman，r.，“contactactivationpathway”，hemostasisandthrombosis，pp.103-122，lippincottwilliams&wilkins(2001)；schmaiera.h.，“contactactivation”，thrombosisandhemorrhage，pp.105-128(1998))。
因子xia抑制剂化合物描述于wo2013022814、wo2013022814、wo2013022818、wo2013055984、wo2013056034、wo2013056060、wo2013118805、wo2013093484、wo2002042273、wo2002037937、wo2002060894、wo2003015715、wo2004002405、us20040180855、wo2004080971、wo2004094372、us20050228000、us20050282805、wo2005123680、us20090036438、us20120088758、us20060074103、wo2006062972、wo2006076246、us20060154915、us20090062287、us20060183771、wo2007070818、wo2007070816、wo2007070826、wo2008076805、wo2008157162、wo2009114677、wo2011100402和wo2011100401中
发明概述
本发明涉及式i化合物：
或其药学上可接受的盐。式i化合物是选择性因子xia抑制剂或因子xia和血浆激肽释放酶的双重抑制剂，因此可用于治疗、抑制或改善可受益于因子xia或血浆激肽释放酶抑制的一种或多种疾病状态，包括血栓形成、栓塞、高凝状态或纤维化变化。本发明化合物可以进一步与其它治疗有效的试剂组合使用，包括但不限于可用于治疗血栓形成、栓塞、高凝状态或纤维化变化的其它药物。本发明还涉及制备式i化合物的方法和包含式i化合物的药物组合物。
发明详述
本发明涉及式i的化合物或其药学上可接受的盐：
其中x是-(c=o)nh-或–nh(c=o)-；
r1是芳基、杂芳基或c3-6环烷基，其中所述芳基、杂芳基和环烷基任选被1至3个独立地选自卤素、硝基、氰基、氧代、r4、or4、(c=o)r4、(c=o)or4、nr4r5、nh(c=o)r4、nh(c=o)or4、c3-6环烷基和任选被r4取代的杂芳基的取代基取代；
r2是氢、羟基、卤素或c1-6烷基，其中所述烷基任选被1或2个独立地选自卤素、or4或c3-6环烷基的取代基取代；
r3是芳基、杂芳基或c3-10环烷基，其中所述芳基、杂芳基和环烷基任选被1至3个独立地选自卤素、硝基、氰基、氧代、r4、or4、(c=o)r4、(c=o)or4、nr4r5、nh(c=o)r4、nh(c=o)or4和杂芳基的取代基取代；
r4是氢或c1-6烷基，其任选被1至3个独立地选自卤素和羟基的基团取代；
r5是氢或c1-6烷基，其任选被1至3个独立地选自卤素和羟基的基团取代；
rx是氢、羟基或卤素；
rz是氢、羟基、甲氧基或卤素；
本发明的一个实施方案涉及式ia的化合物或其药学上可接受的盐：
其中r1是苯基，其任选被1至3个独立地选自卤素或任选被r4取代的杂芳基的取代基取代；
r2是氢、羟基、卤素或c1-6烷基，其中所述烷基任选被1或2个独立地选自卤素、or4或c3-6环烷基的取代基取代；
r3是苯基或c3-10环烷基，其中所述苯基和环烷基任选被1至3个独立地选自卤素、氰基、氧代、r4、or4、(c=o)r4、(c=o)or4和nh(c=o)r4的取代基取代；
r4是氢或c1-6烷基，其任选被1至3个独立地选自卤素和羟基的基团取代，
r5是氢或c1-6烷基，其任选被1至3个独立地选自卤素和羟基的基团取代，
rx是氢、羟基或卤素；
rz是氢、羟基、甲氧基或卤素。
本发明还涉及式ii的化合物或其药学上可接受的盐：
其中r1是芳基、杂芳基或c3-6环烷基，其中所述芳基、杂芳基和环烷基任选被1至3个独立地选自卤素、硝基、氰基、氧代、r4、or4、(c=o)r4、(c=o)or4、nr4r5、nh(c=o)r4、nh(c=o)or4、c3-6环烷基和任选被r4取代的杂芳基的取代基取代；
r2是氢、羟基、卤素或c1-6烷基，其中所述烷基任选被1或2个独立地选自卤素、or4或c3-6环烷基的取代基取代；
r3是芳基、杂芳基或c3-10环烷基，其中所述芳基、杂芳基和环烷基任选被1至3个独立地选自卤素、硝基、氰基、氧代、r4、or4、(c=o)r4、(c=o)or4、nr4r5、nh(c=o)r4、nh(c=o)or4和杂芳基的取代基取代；
r4是氢或c1-6烷基，其任选被1至3个独立地选自卤素和羟基的基团取代；
r5是氢或c1-6烷基，其任选被1至3个独立地选自卤素和羟基的基团取代；
rx是氢、羟基或卤素；
rz是氢、羟基、甲氧基或卤素。
本发明还涉及式i的化合物或其药学上可接受的盐：
其中x是-(c=o)nh-或–nh(c=o)-；
r1是芳基、杂芳基或c3-6环烷基，其中所述芳基、杂芳基和环烷基任选被1至3个独立地选自卤素、硝基、氰基、氧代、r4、or4、(c=o)r4、(c=o)or4、nr4r5、nh(c=o)r4、nh(c=o)or4、c3-6环烷基和任选被r4取代的杂芳基的取代基取代；
r2是氢、羟基或卤素；
r3是芳基、杂芳基或c3-10环烷基，其中所述芳基、杂芳基和环烷基任选被1至3个独立地选自卤素、硝基、氰基、氧代、r4、or4、(c=o)r4、(c=o)or4、nr4r5、nh(c=o)r4、nh(c=o)or4和杂芳基的取代基取代；
r4是氢或c1-6烷基，其任选被1至3个独立地选自卤素和羟基的基团取代；
r5是氢或c1-6烷基，其任选被1至3个独立地选自卤素和羟基的基团取代；
rx是氢、羟基或卤素；
rz是氢、羟基、甲氧基或卤素。
在本发明的一个实施方案中，r1是任选被2或3个独立地选自卤素和杂芳基的取代基取代的苯基。在一类实施方案中，r1是任选被卤素和四唑基取代的苯基。在另一类实施方案中，r1是任选被三个卤素取代的苯基。
在本发明的一个实施方案中，r2是氢。在本发明的另一实施方案中，r2是羟基。在本发明的另一实施方案中，r2是ch2-环丙基。
在本发明的一个实施方案中，r3是任选被1至3个独立地选自(c=o)or4和nh(c=o)r4的取代基取代的芳基。在一类实施方案中，r3是任选被(c=o)or4取代的芳基。在一类实施方案中，r3是任选被nh(c=o)r4取代的芳基。在本发明的一个亚类中，r3是任选被1至3个独立地选自(c=o)or4和nh(c=o)r4的取代基取代的苯基。在该实施方案的一个亚类中，r3是任选被(c=o)or4取代的苯基。在该实施方案的一个亚类中，r3是任选被nh(c=o)r4取代的苯基。在本发明的另一实施方案中，r3是任选被1至3个独立地选自卤素和(c=o)or4的取代基取代的c3-10环烷基。在一类实施方案中，r3是任选被(c=o)or4取代的双环[2.2.2]辛基。在本发明的另一实施方案中，r3是杂芳基。在一类实施方案中，r3是吡啶基、吡咯基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、三唑基、噻二唑基、二噻唑基、噁二唑基或四唑基。
在本发明的一个实施方案中，rx是氢。在本发明的另一实施方案中，rx是羟基。在本发明的另一实施方案中，rx是卤素。在本发明的一类实施方案中，rx是氟。
除非另有说明，否则提及上述优选类别和子类意味着包括特定和优选基团的所有组合。
本发明的具体实施方案包括但不限于本文中鉴定为实施例1至20的化合物或其药学上可接受的盐。
本发明范围内还包括包含上述式i、式ia或式ii或化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。本发明还意图涵盖包含药学上可接受的载体和本申请中具体公开的任何化合物的药物组合物。本发明的这些和其它方面将从本文包含的教导中显而易见。
本发明还包括在哺乳动物中抑制血小板损失、抑制血小板聚集体形成、抑制纤维蛋白形成、抑制血栓形成、抑制栓子形成和治疗炎性病症的组合物，其包含在药学上可接受的载体中的本发明化合物。这些组合物可任选包括抗凝剂、抗血小板剂和溶栓剂。可以将组合物加入到血液、血液制品或哺乳动物器官中，以便实现所需的抑制。
本发明还包括用于预防或治疗哺乳动物的不稳定型心绞痛、难治性心绞痛、心肌梗死、短暂性脑缺血发作、心房颤动、血栓性中风、栓塞性中风、深静脉血栓形成、弥散性血管内凝血、纤维蛋白的眼部积聚、以及再通血管的再闭塞或再狭窄的组合物，其包含在药学上可接受的载体中的本发明化合物。这些组合物可任选包括抗凝剂、抗血小板剂和溶栓剂。
本发明还包括通过将本发明化合物共价或非共价连接到表面来降低哺乳动物表面的血栓形成的方法。
本发明化合物为因子xia抑制剂，并且可具有例如预防冠状动脉疾病的治疗价值。所述化合物为选择性因子xia抑制剂或因子xia和血浆激肽释放酶的双重抑制剂。
要理解的是，如本文所用，提到结构式i、式ia和式ii的化合物意在也包括药学上可接受的盐以及在用作游离化合物或其药学上可接受的盐的前体或用于其它合成操作时药学上不可接受的盐。
本发明化合物可以以药学上可接受的盐的形式施用。术语“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的无毒碱或酸制备的盐，包括无机或有机碱和无机或有机酸。包括在术语“药学上可接受的盐”中的碱性化合物的盐是指本发明化合物的无毒盐，其通常通过游离碱与合适的有机或无机酸反应制备。本发明的碱性化合物的代表性盐包括但不限于以下：乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、藻酸盐、aspirate、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、右旋樟脑磺酸盐(camsylate)、碳酸盐、氯化物、克拉维酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二乙基乙酸盐、二葡萄糖酸盐、二盐酸盐、十二烷基硫酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐、丙酸酯月桂硫酸盐(estolate)、乙磺酸盐(esylate)、乙烷磺酸盐(ethanesulfonate)、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐(gluceptate)、葡庚糖酸盐(glucoheptanoate)、葡糖酸盐、谷氨酸盐、甘油磷酸盐、对羟乙酰氨基苯胂酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、己基间苯二酚盐、海巴明盐(hydrabamine)、氢溴酸盐、盐酸盐、2-羟基乙磺酸盐、羟基萘甲酸盐、碘化物、异烟酸盐、异硫代硫酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基溴化物、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、甲磺酸盐、粘酸盐、2-萘磺酸盐、萘磺酸盐(napsylate)、烟酸盐、硝酸盐、n-甲基葡糖胺铵盐、油酸盐、草酸盐、扑酸盐(双羟萘酸盐)、棕榈酸盐、泛酸盐、果胶酸盐(pectinate)、过硫酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、庚二酸盐、苯丙酸盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、硫酸盐、次乙酸盐、琥珀酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、三乙基碘化物、三氟乙酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。此外，当本发明化合物携带酸性部分时，其合适的药学上可接受的盐包括但不限于衍生自无机碱的盐，包括铝、铵、钙、铜、铁、亚铁、锂、镁、锰、亚锰、钾、钠、锌等。特别优选的是铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。衍生自药学上可接受的有机无毒碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺、环胺、二环己基胺和碱性离子交换树脂，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、n,n-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙胺、乙二胺、n-乙基吗啉、n-乙基哌啶、葡糖胺(glucamine)、葡萄糖胺(glucosamine)、组氨酸、海巴明、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。还包括碱性含氮基团，其可被诸如以下的试剂季铵化：低级烷基卤化物如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯如二甲酯、二乙酯、二丁酯；和硫酸二戊基酯；长链卤化物如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基卤化物如苄基和苯乙基溴化物等。
这些盐可以通过已知的方法获得，例如，通过将本发明化合物与等量的含有所需的酸、碱等的溶液混合，然后通过过滤盐或蒸馏出溶剂来收集所需的盐。本发明化合物及其盐可以与溶剂如水、乙醇或甘油形成溶剂合物。本发明化合物可以形成酸加成盐并根据侧链的取代基的类型同时与碱形成盐。
如果式i、式ia或式ii的化合物在分子中同时含有酸性和碱性基团，本发明除所提到的盐形式外还包括内盐或内铵盐（两性离子）。
本发明包括式i、式ia和式ii的化合物的所有立体异构形式。除非指明具体立体化学，本发明意在包括这些化合物的所有这样的异构形式。式i、式ia和式ii的化合物中存在的不对称中心可以都彼此独立地具有(r)构型或(s)构型。当与手性碳的键在本发明的结构式中表示为直线时，应理解手性碳的(r)和(s)构型以及因此两种对映异构体及其混合物都包含在该式中。类似地，当记载化合物名称而没有手性碳的手性命名时，应理解，手性碳的(r)和(s)构型以及因此单个对映异构体及其混合物都被该名称包括。在获得这些立体异构体或混合物的实施例中可以鉴定特定立体异构体或其混合物的制备，但这决不限制所有立体异构体及其混合物包括在本发明的范围内。
本发明包括所有可能的对映异构体和非对映异构体以及两种或更多种立体异构体的混合物，例如所有比例的对映异构体和/或非对映异构体的混合物。因此，本发明的主题是左旋和右旋对映体形式的对映异构体纯形式、外消旋体形式和所有比例的两种对映异构体混合物的形式的对映异构体。在顺式/反式异构的情况下，本发明包括顺式和反式两种形式以及这些形式的所有比例的混合物。如果需要的话，可以通过常规方法，例如通过色谱或结晶分离混合物，通过使用立体化学均匀的原料用于合成或通过立体选择性合成来进行单独的立体异构体的制备。任选地，可以在分离立体异构体之前进行衍生化。立体异构体混合物的分离可以在合成式i、式ia或式ii化合物期间的中间步骤中进行，或者可以在最终的外消旋产物上进行。绝对立体化学可以通过结晶产物或结晶中间体的x射线晶体学确定，如果需要的话，其用含有已知构型的立体中心的试剂衍生化。当本发明化合物能够互变异构时，所有单独的互变异构体及其混合物都包括在本发明的范围内。除非指明此类外消旋物、对映异构体、非对映异构体或互变异构体的特定异构体、盐、溶剂合物（包括水合物）或溶剂化盐，本发明包括所有这些异构体，以及这些外消旋体、对映异构体、非对映异构体和互变异构体及其混合物的盐、溶剂合物(包括水合物)和溶剂化盐。
在本发明化合物中，原子可以显示出它们的天然同位素丰度，或者可以将一个或多个原子人工富集在具有相同原子序数，但原子量或质量数不同于自然界中主要发现的原子量或质量数的特定同位素中。本发明意在包括具体和一般描述的化合物的所有合适的同位素变体。例如，氢(h)的不同同位素形式包括氕(1h)和氘(2h)。氕是自然界中发现的主要的氢同位素。氘的富集可提供某些治疗优点，例如增加体内半衰期或降低剂量需要，或可提供可用作表征生物样品的标准的化合物。可以不用过度实验，通过本领域技术人员熟知的常规技术，或通过与本文的一般方法方案和实施例中描述的方法类似的方法，使用合适的同位素富集的试剂和/或中间体来制备同位素富集的化合物。
当任何变量(例如r4等)在任何成分中出现多于一次时，其在每次出现时的定义独立于其它每次出现时的定义。此外，取代基和变量的组合是允许的，只要这种组合产生稳定的化合物。从取代基画到环系中的线表示所示的键可以连接到任何可取代的环原子。如果环系统是双环的，则意味着该键连接至双环部分的任一环上的任何合适的原子。
应理解，本领域普通技术人员可以将一个或多个硅(si)原子并入本发明化合物中以代替一个或多个碳原子，以提供化学稳定的化合物，并且其可以容易地通过本领域已知的技术由容易获得的原料合成。当比较类似的c元素和si元素键时，碳和硅的共价半径不同导致键距离和空间排列的差异。当与碳相比时，这些差异导致含硅化合物的尺寸和形状的微小变化。本领域普通技术人员将理解，大小和形状差异可导致效力、溶解性、脱靶活性缺乏、包装性质等的微小或显著变化。(diass，j.o.等人，organometallics(2006)5:1188-1198；showell，g.a.等人，bioorganic&medicinalchemistryletters(2006)16:2555-2558)。
应理解，本领域普通技术人员可以选择本发明化合物上的取代基和取代模式，以提供化学稳定的并且可以容易地通过本领域已知的技术以及下述那些方法由容易获得的原料合成的化合物。如果取代基本身被多于一个基团取代，应理解这些多个基团可以在相同的碳或不同的碳上，只要得到稳定的结构。短语(被一个或多个取代基)“任选取代的”应理解为是指所述基团未被取代或可以被一个或多个取代基取代。
此外，本发明化合物可以以无定形形式和/或一种或多种结晶形式存在，并且因此式i、式ia和式ii化合物的所有无定形和结晶形式及其混合物旨在包括在本发明的范围内。此外，本发明的一些化合物可与水形成溶剂合物(即水合物)或与普通有机溶剂形成溶剂合物。本发明化合物的这种溶剂合物和水合物，特别是药学上可接受的溶剂合物和水合物，以及未溶剂化和无水形式，同样包括在本发明的范围内。
提及本发明化合物作为具体式或实施方案(例如式i、式ia或式ii)或本文描述或要求保护的任何其它通用结构式或具体化合物的那些化合物，旨在涵盖落入所述式或实施方案范围内的具体的一个或多个化合物，包括其盐，特别是药学上可接受的盐，这些化合物的溶剂合物及其溶剂化盐形式，其中这些形式是可能的，除非另有说明。
此外，在本发明化合物中存在羧酸(-cooh)或醇基的情况下，可以使用羧酸衍生物的药学上可接受的酯，例如甲基、乙基或新戊酰氧基甲基酯，或醇的酰基衍生物，例如o-乙酰基、o-新戊酰基、o-苯甲酰基和o-氨基酰基。包括本领域已知的用于改变用作缓释或前药制剂的溶解性或水解特性的那些酯和酰基。
导致体内转化为本发明范围内的化合物的本发明化合物的任何药学上可接受的前药修饰也在本发明的范围内。例如，酯可以任选通过可用的羧酸基团的酯化或通过在化合物中可用的羟基上形成酯来制备。类似地，可以制备不稳定的酰胺。可以制备本发明化合物的药学上可接受的酯或酰胺以作为前药起作用，其可以水解回到酸(或-coo-，取决于发生转化时的流体或组织的ph)或羟基形式，特别是在体内，并因此包括在本发明的范围内。药学上可接受的前药修饰的实例包括但不限于-c1-6烷基酯和用苯基酯取代的-c1-6烷基。
因此，本文描述和要求保护的通用结构式、实施方案和具体化合物内的化合物包括其盐、所有可能的立体异构体和互变异构体、物理形式(例如，无定形和结晶形式)、溶剂合物和水合物形式以及这些形式的任何组合，以及其盐、其前药形式和其前药形式的盐，其中这些形式是可能的，除非另有指出。
除非本文另有指出，否则术语“烷基”旨在包括具有指定数目碳原子的支链和直链饱和脂族烃基。在整个说明书中使用烷基的常用缩写，例如，甲基可以由包括“me”或ch3的常规缩写或作为末端基团的延伸键的符号例如
具有等同含义。c1-4烷基包括正、异、仲和叔丁基，正和异丙基，乙基和甲基。如果没有指定数目，1-4个碳原子意图用于直链或支链烷基。
除非本文另有指出，“烷醇”旨在包括具有指定数目碳原子的脂肪醇，例如甲醇、乙醇、丙醇等，其中-oh基团连接在任何脂族碳上，例如，丙-1-醇、丙-2-醇等。
除非另有指出，术语“环烷基”是指具有指定数目碳原子的单环或双环饱和脂族烃基。例如，“环烷基”包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、双环[2.2.2]辛基等。
除非另有指出，术语“卤素(halogen或halo)”是指氟、氯、溴或碘。
除非另有指出，本文所用的术语“杂芳基”表示在每个环中至多10个原子的稳定的单环、双环或三环，其中至少一个环是芳族的，并且至少一个环含有1至4个选自o、n和s的杂原子。在该定义范围内的杂芳基包括但不限于：苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋咱基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、咔唑基、咔啉基、噌啉基、呋喃基、吲哚啉基(indolinyl)、吲哚基、吲哚嗪基、吲唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、萘啶基、噁二唑基、噁唑基、噁唑啉、异噁唑啉、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并吡啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四唑基、四唑并吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、二氢苯并咪唑基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并噁唑基、二氢吲哚基(dihydroindolyl)、二氢喹啉基、亚甲二氧基苯、苯并噻唑基、苯并噻吩基、喹啉基、异喹啉基、噁唑基、四氢喹啉和3-氧代-3,4二氢-2n苯并[b][1,4]噻嗪。如果杂芳基含有氮原子，应理解其相应的n-氧化物也包括在该定义中。
除非另有指出，术语“芳基”旨在表示在每个环中至多12个原子的任何稳定的单环或双环碳环，其中至少一个环是芳族的。这种芳基元素的实例包括苯基、萘基、四氢萘基和茚满基。
“celite®”(fluka)硅藻土(diatomite)是硅藻土(diatomaceousearth)，并且可以被称为“硅藻土(celite)”。
除非本文另有指出，否则含有取代基变量如下面的变量“r”的结构：
其被描绘为不连接至任何一个特定双环碳原子，表示其中变量可任选连接至任何双环碳原子的结构。例如，上述结构中所示的变量r可以连接至6个双环碳原子i、ii、iii、iv、v或vi中的任一个。
除非本文另有指出，双环系统包括稠环系统，其中两个环共享两个原子，以及螺环系统，其中两个环共享一个原子。
本发明还包括充当前药和溶剂合物的式i、式ia和式ii化合物的衍生物。在施用于患者之后，前药通过正常代谢或化学过程，例如通过在血液中水解，在体内转化为式1、式ia或式ii化合物。这样的前药包括显示增强的生物利用度、组织特异性和/或细胞递送的那些，以改善式i、式ia或式ii化合物的药物吸收。这种前药的作用可以由物理化学性质如亲脂性、分子量、电荷和确定药物渗透性质的其它物理化学性质的改变引起。
由能够形成盐的式i、式ia和式ii化合物(包括其立体异构形式)制备药学上可接受的盐以本身已知的方式进行。使用碱性试剂如氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐、醇盐和氨或有机碱，例如三甲胺或三乙胺、乙醇胺、二乙醇胺或三乙醇胺、氨丁三醇或碱性氨基酸，例如赖氨酸、鸟氨酸或精氨酸，式i、式ia和式ii化合物形成稳定的碱金属、碱土金属或任选取代的铵盐。如果式i、式ia和式ii化合物具有碱性基团，也可以使用强酸制备稳定的酸加成盐。为此，无机和有机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、半硫酸、磷酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、4-溴苯磺酸、环己基氨基磺酸、三氟甲磺酸、2-羟基乙磺酸、乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、甘油磷酸、乳酸、苹果酸、己二酸、柠檬酸、富马酸、马来酸、葡糖酸、葡萄糖醛酸、棕榈酸或三氟乙酸是合适的。
本发明还涉及含有至少一种式i或式ia化合物和/或式i、式ia或式ii化合物的药学上可接受的盐和/或任选的式i、式ia或式ii化合物的立体异构形式或式i、式ia或式ii化合物的立体异构形式的药学上可接受的盐以及药学上合适的和药学上可接受的媒介物、添加剂和/或其它活性物质和助剂的药物。
抗凝治疗指示用于治疗和预防多种血栓形成病状，特别是冠状动脉和脑血管疾病。在这一领域有经验的人很容易知道需要抗凝治疗的情况。本文使用的术语“患者”是指哺乳动物，例如灵长类动物、人、羊、马、牛、猪、狗、猫、大鼠和小鼠。
因子xia或双重因子xia/血浆激肽释放酶抑制不仅可用于具有血栓形成病状的个体的抗凝治疗，而且每当需要抑制血液凝固时是有用的，例如防止储存的全血凝固和防止在用于测试或储存的其它生物样品中凝固。因此，因子xia或双重因子xia/血浆激肽释放酶抑制剂可以加入到或接触含有或疑似含有凝血酶的任何培养基，并且其中希望抑制血液凝固，例如当哺乳动物的血液与选自血管移植物、支架、矫形假体、心脏修复物和体外循环系统的材料接触时。
本发明化合物可用于治疗或预防哺乳动物的静脉血栓栓塞(例如，由分离的血栓阻塞或闭塞静脉；由分离的血栓阻塞或闭塞肺动脉)、心源性血栓栓塞(例如，由分离的血栓阻塞或闭塞心脏)、动脉血栓形成(例如，在动脉内形成血栓，其可能导致由动脉供应的组织梗塞)、动脉粥样硬化(例如，以不规则分布的脂质沉积为特征的动脉硬化)，以及用于降低与血液接触的装置凝结血液的倾向。
可以用本发明化合物治疗或预防的静脉血栓栓塞的实例包括静脉阻塞、肺动脉阻塞(肺栓塞)、深静脉血栓形成、与癌症和癌症化疗相关的血栓形成、血栓形成性疾病遗传的血栓形成如蛋白c缺乏、蛋白s缺乏、抗凝血酶iii缺乏和因子v莱顿，以及由获得性血栓形成性病症例如系统性红斑狼疮(炎性结缔组织病)引起的血栓形成。同样关于静脉血栓栓塞，本发明化合物可用于保持留置导管的通畅。
可以用本发明化合物治疗或预防的心源性血栓栓塞的实例包括血栓栓塞性中风(导致与脑血液供应受损有关的神经性痛苦的分离性血栓)、与心房颤动相关的心源性血栓栓塞(上心室肌原纤维的快速、不规律抽搐)、与假体心脏瓣膜例如机械心脏瓣膜相关的心源性血栓栓塞以及与心脏病相关的心源性血栓栓塞。
动脉血栓形成的实例包括不稳定型心绞痛(冠状动脉起源的胸部严重的收缩性疼痛)、心肌梗死(由供血不足引起的心肌细胞死亡)、缺血性心脏病(由于供血阻塞(例如通过动脉狭窄)引起的局部贫血)、经皮冠状动脉腔内成形术期间或之后的再闭塞、经皮冠状动脉腔内成形术后的再狭窄、冠状动脉旁路移植的闭塞和闭塞性脑血管疾病。同样关于动脉血栓形成，本发明化合物可用于保持动静脉插管的通畅。
动脉粥样硬化的实例包括动脉硬化。
本发明化合物还可以是激肽释放酶抑制剂，并且特别可用于治疗遗传性血管水肿。
与血液接触的装置的实例包括血管移植物、支架、矫形假体、心脏修复物和体外循环系统。
根据本发明的药物可以通过口服、吸入、直肠或经皮施用或通过皮下、关节内、腹膜内或静脉内注射施用。优选口服施用。用式i、式ia或式ii化合物和与体内血液接触的其它表面涂覆支架是可能的。
本发明还涉及制备药物的方法，其包括使用药学上合适的和药学上可接受的载体和任选的其它合适的活性物质、添加剂或助剂将至少一种式i、式ia或式ii化合物引入合适的施用形式。
合适的固体或盖仑制剂形式是例如颗粒、粉末、包衣片剂、片剂、(微)胶囊、栓剂、糖浆、果汁、悬浮液、乳剂、滴剂或可注射溶液和具有活性物质的延长释放的制剂，在所述制剂中使用常规赋形剂，例如媒介物、崩解剂、粘合剂、包衣剂、溶胀剂、助流剂或润滑剂、调味剂、甜味剂和增溶剂。可以提及的常用助剂是碳酸镁、二氧化钛、乳糖、甘露醇和其它糖、滑石、乳糖、明胶、淀粉、纤维素及其衍生物、动物和植物油如鱼肝油、向日葵、花生或芝麻油、聚乙二醇和溶剂，例如无菌水和一元醇或多元醇如甘油。
根据多种因素选择利用因子xia抑制剂或双因子xia/血浆激肽释放酶抑制剂的剂量方案，包括患者的类型、物种、年龄、体重、性别和医学状况；待治疗病状的严重程度；施用途径；患者的肾和肝功能；和所用的具体化合物或其盐。普通技术的医师或兽医可以容易地确定和开出预防、对抗或阻止病状进展所需的药物的有效量。
当用于指示效应时，因子xia抑制剂或双重因子xia/血浆激肽释放酶抑制剂的口服剂量范围为约0.01mg/kg体重/天(mg/kg/天)至约30mg/kg/天，优选0.025-7.5mg/kg/天，更优选0.1-2.5mg/kg/天，最优选0.1-0.5mg/kg/天(除非另有指出，活性成分的量以游离碱计)。例如，80kg患者将接受约0.8mg/天至2.4g/天，优选2-600mg/天，更优选8-200mg/天，最优选8-40mg/kg/天。因此，适当制备的用于每天一次施用的药物将含有0.8mg至2.4g，优选2mg至600mg，更优选8mg至200mg，最优选8mg至40mg，例如，8mg、10mg、20mg和40mg。有利地，因子xia抑制剂可以每天两次、三次或四次的分剂量施用。对于每天两次施用，适当制备的药物将含有0.4mg至4g，优选1mg至300mg，更优选4mg至100mg，最优选4mg至20mg，例如4mg、5mg、10mg和20mg。
静脉内，患者将接受足以递送0.025-7.5mg/kg/天，优选0.1-2.5mg/kg/天，更优选0.1-0.5mg/kg/天的量的活性成分。这样的量可以以许多合适的方式施用，例如，在一个延长的时间段内或每天几次施用大体积的低浓度的活性成分，在短时间段内例如每天一次施用低体积的高浓度的活性成分。通常，可以制备常规静脉内制剂，其含有约0.01-1.0mg/ml，例如0.1mg/ml、0.3mg/ml和0.6mg/ml浓度的活性成分，并以每天0.01ml/kg患者体重至10.0ml/kg患者体重，例如0.1ml/kg、0.2ml/kg、0.5ml/kg的量施用。在一个实例中，每天两次接受8ml的活性成分浓度为0.5mg/ml的静脉内制剂的80kg患者，每天接受8mg活性成分。葡萄糖醛酸、l-乳酸、乙酸、柠檬酸或在静脉内施用可接受的ph范围内具有合理缓冲能力的任何药学上可接受的酸/共轭碱可用作缓冲剂。取决于待施用的药物的溶解度，适当的缓冲液和制剂ph的选择容易由本领域普通技术人员进行。
式i、式ia和式ii化合物可以作为单一疗法和与其它治疗剂组合施用，包括抗血栓形成剂(抗凝剂和血小板聚集抑制剂)、溶栓剂(纤溶酶原激活剂)、其它纤溶酶原活性物质、降压药、血糖调节剂、降脂剂和抗心律失常药。
因子xia抑制剂或双重因子xia/血浆激肽释放酶抑制剂也可以与合适的抗凝剂共同施用，所述抗凝剂包括但不限于其它因子xia抑制剂、凝血酶抑制剂、凝血酶受体拮抗剂、因子viia抑制剂、因子xa抑制剂、因子ixa抑制剂、因子xiia抑制剂、二磷酸腺苷抗血小板剂(例如，p2y12拮抗剂)、纤维蛋白原受体拮抗剂(例如，用于治疗或预防不稳定型心绞痛或预防血管成形术后的再闭塞和再狭窄)、其它抗凝剂例如阿司匹林和溶栓剂例如纤溶酶原激活剂或链激酶以在治疗各种血管病变中实现协同作用。这样的抗凝剂包括例如阿哌沙班、达比加群、坎格雷洛、替卡格雷、沃拉帕沙、氯吡格雷、依度沙班、米泊美生、普拉格雷、利伐沙班和semuloparin。例如，患有冠状动脉疾病的患者和经受血管成形术程序的患者将受益于纤维蛋白原受体拮抗剂和凝血酶抑制剂的共同施用。因子xia抑制剂可以在血栓形成之后首先施用，并且此后施用组织纤溶酶原激活剂或其它纤溶酶原激活剂。
或者或另外，一种或多种另外的药理活性剂可以与本发明化合物组合施用。另外的一种活性剂(或多种活性剂)旨在表示在体内有活性的一种药物活性剂(或多种活性剂)，包括施用后转化为药学活性形式的前药，其不同于本发明化合物，并且还包括所述另外的活性剂的游离酸、游离碱和药学上可接受的盐，当这些形式以商业销售或另外化学上可能时。通常，任何合适的另外的一种或多种活性剂，包括但不限于抗高血压剂、另外的利尿剂、抗动脉粥样硬化剂例如脂质修饰化合物、抗糖尿病剂和/或抗肥胖剂，可以在单一剂量制剂中与本发明化合物以任何组合使用(固定剂量药物组合)，或可以以一个或多个分开的剂量制剂施用于患者，其允许同时或顺序施用活性剂(共同施用单独的活性剂)。可以使用的另外的活性剂的实例包括但不限于血管紧张素转化酶抑制剂(例如，阿拉普利、贝那普利、卡托普利、西洛普利、西拉普利、地拉普利、依那普利、依那普利拉、福辛普利、咪达普利、赖诺普利、莫维普利、培哚普利、喹那普利、雷米普利、螺普利、替莫普利或群多普利)；血管紧张素ii受体拮抗剂，也称为血管紧张素受体阻断剂或arb，其可以是游离碱、游离酸、盐或前药形式，如阿齐沙坦例如阿齐沙坦酯钾(edarbi®)、坎地沙坦例如坎地沙坦西酯(atacand®)、依普沙坦例如甲磺酸依普沙坦(tevetan®)、依贝沙坦(avapro®)、氯沙坦例如氯沙坦钾(cozaar®)、奥美沙坦例如奥美沙坦酯(benicar®)、替米沙坦(micardis®)、缬沙坦(diovan®)和与噻嗪类利尿剂如氢氯噻嗪(例如，hyzaar®、diovanhct®、atacandhct®等)组合使用的这些药物中的任一种；保钾利尿剂如盐酸阿米洛利、螺内酯、依普利酮、氨苯蝶啶，各自具有或不具有hctz；中性肽链内切酶抑制剂(例如，塞奥芬和磷酸阿米酮)；醛固酮拮抗剂；醛固酮合酶抑制剂；肾素抑制剂；enalkrein；ro42-5892；a65317；cp80794；es1005；es8891；sq34017；阿利吉仑(2(s),4(s),5(s),7(s)-n-(2-氨基甲酰基-2-甲基丙基)-5-氨基-4-羟基-2,7-二异丙基-8-[4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)-苯基]-辛酰胺半富马酸盐)spp600、spp630和spp635)；内皮素受体拮抗剂；血管扩张剂(例如硝普盐)；钙通道阻滞剂(例如，氨氯地平、硝苯地平、维拉帕米、地尔硫卓、非洛地平、戈洛帕米、尼鲁地平、尼莫地平、尼卡地平)；钾通道激活剂(例如，尼可地尔、吡那地尔、克罗卡林、米诺地尔、aprilkalim、氯普唑仑)；交感神经阻滞药(sympatholitics)、β-肾上腺素能阻滞药(例如，醋丁洛尔、阿替洛尔、倍他洛尔、比索洛尔、卡维地洛、美托洛尔、酒石酸美托洛尔、纳多洛尔、普萘洛尔、索他洛尔、噻吗洛尔)；α肾上腺素能阻断药(例如，多沙唑嗪、哌唑嗪或α甲基多巴)；中枢α肾上腺素能激动剂；外周血管扩张剂(例如肼屈嗪)；降脂剂，例如hmg-coa还原酶抑制剂，例如辛伐他汀和洛伐他汀，其以内酯前药形式作为zocor®和mevacor®销售和在施用后起抑制剂作用，以及二羟基开环酸hmg-coa还原酶抑制剂的药学上可接受的盐，如阿托伐他汀(特别是以lipitor®销售的钙盐)、罗苏伐他汀(特别是以crestor®销售的钙盐)、普伐他汀(特别是以pravachol®销售的钠盐)和氟伐他汀(特别是以lescol®销售的钠盐)；胆固醇吸收抑制剂例如依泽替米贝(zetia®)，和与任何其它降脂剂例如上述hmg-coa还原酶抑制剂，特别是与辛伐他汀(vytorin®)或与阿托伐他汀钙组合的依泽替米贝；立即释放或控释形式的烟酸，特别是与dp拮抗剂如拉罗皮兰和/或与hmg-coa还原酶抑制剂组合的烟酸；烟酸受体激动剂如阿昔莫司和阿昔呋喃，以及烟酸受体部分激动剂；代谢改变剂，包括胰岛素敏化剂和相关化合物，其用于治疗糖尿病，例如双胍类(例如，二甲双胍)、氯茴苯酸类(例如，瑞格列奈、那格列奈)、磺脲类(例如，氯磺丙脲、格列美脲、格列吡嗪、格列本脲、妥拉磺脲、甲苯磺丁脲)、噻唑烷二酮类也称为格列酮类(例如，吡格列酮、罗格列酮)、α葡糖苷酶抑制剂(例如，阿卡波糖、米格列醇)、二肽基肽酶抑制剂(例如，西他列汀(januvia®)、阿格列汀、维格列汀、沙格列汀、利格列汀、度格列汀(dutogliptin)、吉格列汀)、麦角生物碱(例如，溴麦角环肽)、组合药物如janumet®(西他列汀与二甲双胍)和可注射的糖尿病药物如艾塞那肽和醋酸普兰林肽；葡萄糖吸收抑制剂，如钠-葡萄糖转运体（sglt）抑制剂及其各种同种型，如sglt-1、sglt-2（例如asp-1941、ts-071、bi-10773、托格列净、lx-4211、卡格列净、达格列净、ertugliflozin、伊格列净、remogliflozin和sotagliflozin）和sglt-3；或与有益于预防或治疗上述疾病的其它药物，包括但不限于二氮嗪；并且包括化学上可能的游离酸、游离碱和药学上可接受的盐形式、前药形式例如酯，和上述药剂的前药的盐。提供上面提及的药物的商标名称是为了举例说明市售形式的活性剂；这样的药物可以用于单独剂型中，其用于与本发明化合物同时或顺序施用，或其中的一种或多种活性剂可以用于包括本发明化合物的固定剂量药物组合中。
与其它合适的抗血小板剂、抗凝剂或溶栓剂组合的本发明的因子xia抑制剂或因子xia/血浆激肽释放酶抑制剂的典型剂量可以与不共同施用另外的抗血小板剂、抗凝剂或溶栓剂的情况下施用的因子xia抑制剂的那些剂量相同，或者可以基本上少于不共同施用另外的抗血小板剂、抗凝剂或溶栓剂的情况下施用的凝血酶抑制剂的那些剂量，这取决于患者的治疗需要。
所述化合物以治疗有效量施用于哺乳动物。“治疗有效量”是指本发明化合物的量，当单独或与另外的治疗剂组合施用于哺乳动物时，其有效治疗(即预防、抑制或改善)血栓栓塞性和/或炎性疾病状况或治疗宿主中疾病的进展。
本发明化合物优选以治疗有效量单独施用于哺乳动物。然而，本发明化合物还可以以治疗有效量与如下定义的另外的治疗剂组合施用于哺乳动物。当以组合施用时，化合物的组合优选但不一定是协同组合。例如由chouandtalalay，adv.enzymeregul.1984，22，27-55所述，当组合施用时化合物的作用(在该情况下，为抑制期望靶标)大于当作为单一试剂单独施用时每种化合物的加和作用时，发生协同作用。通常，在化合物非最佳浓度下最明显地显示协同作用。协同作用可以是与单独的组分相比具有较低的细胞毒性、增加的抗凝作用或组合的一些其他有益作用。
“组合施用”或“联合治疗”是指将本发明化合物和一种或多种另外的治疗剂同时施用于正在治疗的哺乳动物。当组合施用时，每种组分可以同时施用或在不同时间点以任何顺序依次施用。因此，每种组分可以分开施用，但在时间上足够接近，以提供所需的治疗效果。
本发明的范围不限于实施例中公开的具体实施方案，其旨在作为本发明的几个方面的说明，并且功能上等同的任何实施方案在本发明的范围内。实际上，除了本文所示和所述的那些之外，本发明的各种修改对于相关领域的技术人员将是显而易见的，并且旨在落入所附权利要求的范围内。
为了本说明书的目的，以下缩写具有所示的含义：
缩写列表:
acn=乙腈
acoh或hoac=乙酸
aq=水性
boc=叔丁氧基羰基
dmf=二甲基甲酰胺
dcm=二氯甲烷
diad=偶氮二甲酸二异丙酯
diea=n,n-二异丙基乙胺
dipea=n,n-二异丙基乙胺
dmap=n,n-二甲基氨基吡啶
dppf=1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁
etoac=乙酸乙酯
etoh=乙醇
h或hr=小时
hex=己烷
hplc=高压液相色谱法
rphplc=反相高压液相色谱法
lcms=液相色谱法–质谱法
lhmds=六甲基二硅基氨基锂
lioh=氢氧化锂
me=甲基
meoh=甲醇
min=分钟
ms=质谱法
mcpba=间氯过氧苯甲酸
ncs=n-氯琥珀酰亚胺
rt或rt=室温
thf=四氢呋喃
satd=饱和
sem=2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基
sfc=超临界流体色谱法
sm=原材料
tbaf=四-正丁基氟化铵
tbs=叔丁基二甲基甲硅烷基
tea=三乙胺
tfa=三氟乙酸
vac=真空
hatu=2-(1h-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐甲铵盐。
此外，tlc是薄层色谱法；ts是甲苯磺酰基；uv是紫外线；w是瓦特；wt.%是重量百分比；℃是摄氏度；%w/v是前一试剂的重量相对于后一试剂的体积的百分比。
lcms条件：柱：supelcoascentisexpressc183x100mm,2.7µm。溶剂体系：a-0.05%tfa/水和b-0.05%tfa/乙腈。梯度条件：在3.5分钟内10%b至99%b。
方案1
<步骤1-1>式(i-c)所示的化合物可以使用常被称作suzuki偶联反应（miyaura,norio；suzuki,akira；chemicalreviews(1996),95,2457-2483）的方法制备。(i-a)类型的中间体可以在合适的钯催化剂，如1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(ii)等和弱碱，如碳酸钠、磷酸三钠等存在下用r1-b(oh)2(i-b)类型的硼酸（boronicacid）或r1-b(or)2类型的硼酸酯处理。该反应通常在惰性有机溶剂，如甲苯、乙醇或二氧杂环己烷和水的合适脱气混合物中在通常70℃至该溶剂混合物的沸点温度的升高的温度下进行3-24小时。或者，本领域技术人员可以在能在微波反应器中加热到过热反应温度（这可将反应时间减少到1分钟至1小时）的合适容器中进行上述suzuki反应。或者，该反应可以在室温下使用合适的钯预催化剂根据文献中最近报道的条件（kinzel,tom；zhang,yong；buchwald,stephenl.journaloftheamericanchemicalsociety(2010),132,14073-14075）进行。
<步骤1-2>式(i-d)所示的化合物可通过使中间体(i-c)与碱，如氢氧化锂、氢氧化钠或氢氧化钾通过本领域技术人员公知的方法反应制备。该反应可以在合适的溶剂，如thf、水、甲醇或乙醇或其混合物中进行。这一过程可以在室温至该溶剂的回流温度的温度下进行几分钟至几小时。
<步骤1-3>式(i-f)所示的化合物可通过使中间体(i-d)与适当取代的胺(i-e)通过公知方法或与公开文献，例如organicsynthesisiv,acids,aminoacids,andpeptides,第191-309页,1992,maruzenco.,ltd.中描述的类似的方法在缩合剂，如1,3-二环己基碳二亚胺（dcc）、1-乙基-3-(3'-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐（wsc·hcl或edchcl）、o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n’,n’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐（hatu）、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸盐（bop试剂）或双(2-氧代-3-噁唑烷基)膦酰氯（bop-cl）存在下在对该反应无活性的溶剂，如卤代溶剂，例如二氯甲烷或氯仿，醚类溶剂，例如二乙醚或四氢呋喃，芳烃溶剂，例如甲苯或苯，极性溶剂，例如n,n-二甲基甲酰胺，或醇类溶剂，例如甲醇、乙醇或2-丙醇中在存在或不存在碱，如三乙胺或n,n-二异丙基乙胺的情况下在0℃至溶剂回流温度的温度下反应制备。
<步骤1-4>式(i-g)所示的化合物可通过使式(i-f)的适当取代的吡啶与氧化试剂，如过氧化氢、mcpba、过硫酸氢钾（oxone）、二甲基二氧杂环丙烷或过乙酸在适当的溶剂，包括水、二氯甲烷或乙酸中反应制备。该反应通常在0℃至70℃的温度下进行几分钟至几天。在一些情况下，合适的催化剂，如甲基三氧化铼的使用可促进该氧化反应。此类方法类似于公开文献中描述的那些（例如参见deng,lisheng；sundriyal,sandeep；rubio,valentina；shi,zheng-zheng；song,yongcheng,journalofmedicinalchemistry(2009),52(21),6539-6542）。在一些实例中，在上述氧化反应的过程中或在合成程序中的更早步骤中也可能观察到羟基化类似物(i-h)。
方案2
<步骤2-1>式(ii-c)所示的化合物可以使用常被称作suzuki偶联反应（miyaura,norio；suzuki,akira；chemicalreviews(1996),95,2457-2483）的方法制备。(ii-a)类型的中间体可以在合适的钯催化剂，如1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(ii)等和弱碱，如碳酸钠、磷酸三钠、氟化铯等存在下用r1-b(oh)2(ii-b)类型的硼酸或r1-b(or)2类型的硼酸酯处理。该反应通常在惰性有机溶剂，如甲苯、乙醇或二氧杂环己烷和水的合适脱气混合物中在通常70℃至该溶剂混合物的沸点温度的升高的温度下进行3-24小时。或者，本领域技术人员可以在能在微波反应器中加热到过热反应温度（这可将反应时间减少到1分钟至1小时）的合适容器中进行上述suzuki反应。或者，该反应可以在室温下使用合适的钯预催化剂根据文献中最近报道的条件（kinzel,tom；zhang,yong；buchwald,stephenl.journaloftheamericanchemicalsociety(2010),132,14073-14075）进行。
<步骤2-2>式(ii-d)所示的化合物可通过使式(ii-c)的适当取代的吡啶与氧化试剂，如过氧化氢、mcpba、过硫酸氢钾、二甲基二氧杂环丙烷或过乙酸在适当的溶剂，包括水、二氯甲烷或乙酸中反应制备。该反应通常在0℃至70℃的温度下进行几分钟至几天。在一些情况下，合适的催化剂，如甲基三氧化铼的使用可促进该氧化反应。此类方法类似于公开文献中描述的那些（例如参见deng,lisheng；sundriyal,sandeep；rubio,valentina；shi,zheng-zheng；song,yongcheng,journalofmedicinalchemistry(2009),52(21),6539-6542）。
方案3
<步骤3-1>
式(iii-c)所示的化合物可通过使中间体(iii-a)与适当取代的胺(iii-b)通过公知方法或与公开文献，例如organicsynthesisiv,acids,aminoacids,andpeptides,第191-309页,1992,maruzenco.,ltd.中描述的类似的方法在缩合剂，如1,3-二环己基碳二亚胺（dcc）、1-乙基-3-(3'-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐（wsc·hcl或edchcl）、o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n’,n’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐（hatu）、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸盐（bop试剂）或双(2-氧代-3-噁唑烷基)膦酰氯（bop-cl）存在下在对该反应无活性的溶剂，如卤代溶剂，例如二氯甲烷或氯仿，醚类溶剂，例如二乙醚或四氢呋喃，芳烃溶剂，例如甲苯或苯，极性溶剂，例如n,n-二甲基甲酰胺，或醇类溶剂，例如甲醇、乙醇或2-丙醇中在存在或不存在碱，如三乙胺或n,n-二异丙基乙胺的情况下在0℃至溶剂回流温度的温度下反应制备。
<步骤3-2>式(iii-d)所示的化合物可通过使式(iii-c)的适当取代的吡啶与氧化试剂，如过氧化氢、mcpba、过硫酸氢钾、二甲基二氧杂环丙烷或过乙酸在适当的溶剂，包括水、二氯甲烷或乙酸中反应制备。该反应通常在0℃至70℃的温度下进行几分钟至几天。在一些情况下，合适的催化剂，如甲基三氧化铼的使用可促进该氧化反应。此类方法类似于公开文献中描述的那些（例如参见deng,lisheng；sundriyal,sandeep；rubio,valentina；shi,zheng-zheng；song,yongcheng,journalofmedicinalchemistry(2009),52(21),6539-6542）。
方案4
<步骤4-1>在(iv-b)类型的本发明的化合物含有附着在r3上的羧酸的具体情况下，可能如方案4中所示需要附加步骤。倒数第二个烷基酯中间体(iv-a)可根据公知方法或与公开文献，例如greene,t.w.等人,protectivegroupsinorganicsynthesis(2007),第4版中描述的类似的方法转化成相应的羧酸。在一些情况下，这种转化可以在酸，如三氟乙酸、甲酸、盐酸或乙酸存在下在对该反应无活性的溶剂，如卤代溶剂，例如二氯甲烷或氯仿，或醚类溶剂，例如二氧杂环己烷或四氢呋喃中在0℃至溶剂回流温度的温度下进行。在另一些情况下，这一过程可以在碱，如氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化锂存在下在溶剂，如四氢呋喃、乙醇或甲醇中在0℃至溶剂回流温度的温度下进行。
如上所述的通用反应方案可生成作为外消旋混合物或几种立体异构体的混合物的式(i-g)、(i-h)、(ii-d)、(iii-d)和(iv-b)的化合物。式(i-g)、(i-h)、(ii-d)、(iii-d)或(iv-b)的化合物可以使用手性拆分法，如手性制备hplc或手性sfc作为单一立体异构体获得。
方案5
<步骤5-1>可以通过用合适的氧化剂，如过氧化氢处理v-a类型的化合物以提供v-b类型的中间体来制备v-c类型的化合物。所述氧化反应通常在惰性溶剂，如乙酸中在室温至该溶剂的沸点温度的温度下进行。v-b类型的中间体n-氧化物可以在两步-一锅法程序中转化成v-c类型的化合物，其首先涉及用合适的乙酰化剂，优选乙酸酐处理n-氧化物（v-b）。该反应通常不掺杂地（neat）并在70℃至该溶剂的沸点温度的升高的温度下进行。
<步骤5-2>可以在本领域技术人员公知的水解条件下制备v-d类型的化合物。例如，可以在质子溶剂，如甲醇中在0℃至室温下用合适的碱，如碳酸钾或氢氧化钠等处理v-c类型的化合物。
<步骤5-3>可以通过使用mitsunobu反应（综述在castro,b.r.org.reactions,2004,第29卷中）制备v-e类型的化合物，其中使v-d类型的醇在邻苯二甲酰亚胺、三苯基膦和活化剂，如diad、偶氮二甲酸二-叔丁酯等存在下反应。该反应在合适的惰性有机溶剂，如苯、甲苯、thf或其混合物中在0℃至室温下进行，且该反应可能需要过夜或更长时间才能完成。
<步骤5-4>可通过用合适的亲核体，如肼处理v-e类型的化合物制备v-f类型的化合物。该反应通常在质子溶剂，如etoh等中，通常在50℃至该溶剂的沸点温度下进行。可以将所得v-f类型的胺加工成本发明的化合物（v-g）。
中间体
3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯
经注射器经15分钟向3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶（4.95克，25.0毫摩尔）在thf（250毫升）中的-78℃溶液中逐滴加入lhmds的1mthf溶液（62.5毫升，62.5毫摩尔）。将所得混合物在-78℃下搅拌65分钟，然后在-78℃下经注射器逐滴加入碳酸二乙酯。移除低温浴并将反应混合物在温热（warm）至室温下搅拌过夜。通过添加nh4cl饱和水溶液（60毫升）淬灭该反应。将该混合物分配在盐水（300毫升）和etoac（300毫升）之间。将有机层经mgso4干燥，过滤并在真空中浓缩。将产物通过硅胶色谱法（0-30%etoac/己烷）提纯以产生产物3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯。ms(esi)m/z270.56(m+h)。
3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸
向3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（2.1克，7.77毫摩尔）在thf（10毫升）中的溶液中加入氢氧化锂（4.66毫升，9.33毫摩尔）。将该反应混合物在50℃下加热30分钟。此后，lcms表明转化成所需羧酸。在真空下除去溶剂。将ph调节至ph3，然后将该混合物用etoac萃取三次。将有机层合并，干燥，过滤并浓缩以提供3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸的锂盐。ms(esi)m/z244.02(m+h)。
3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯
步骤1:3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-5-醇
在室温下向在乙醇（14毫升）中的3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-5-酮（300毫克，1.415毫摩尔）中逐份加入硼氢化钠（107毫克，2.83毫摩尔）。将反应混合物在室温下搅拌2.5小时，然后加入10%hcl水溶液。在真空下蒸发挥发物，将水层用1nnaoh水溶液处理。其随后用etoac（40.0毫升）萃取两次，将合并的有机层经na2so4干燥，过滤并在真空下浓缩以提供标题化合物。ms(esi)m/z216.0(m+h)。粗产物直接用于下一步骤。
步骤2:3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶
在室温下向3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-5-醇（303毫克，1.42毫摩尔）在thf（9.4毫升）和dmf（4.7毫升）中的混合物中加入咪唑（145毫克，2.12毫摩尔），接着加入tbs-cl（320毫克，2.123毫摩尔）。将该反应混合物在室温下搅拌过夜，并在真空下蒸发挥发物。将残留物用etoac稀释，用水、盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法（24gsio2）用0-25%etoac/己烷洗脱提纯以产生3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶。ms(esi)m/z330.2(m+h)。
步骤3:3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯
在-78℃下经注射器向在thf（12.5毫升）中的3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶（409毫克，1.246毫摩尔）缓慢加入lhmds(3.11毫升，3.11毫摩尔)。将该反应混合物在相同温度下搅拌1小时，然后经注射器逐滴加入碳酸二乙酯（379微升，3.11毫摩尔）。移除低温浴，将该反应混合物温热并在室温下搅拌过夜。加入饱和nh4cl水溶液以淬灭该反应，并在真空下蒸发溶剂。向残留物中加入etoac，将所得混合物用盐水洗涤。将有机层经na2so4干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法（24gsio2）用0-100%etoac/己烷洗脱提纯以产生3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯。ms(esi)m/z400.2(m+h)。
4-(3-溴-5,7-二羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯
步骤1:3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸
在室温下向3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（9890毫克，24.70毫摩尔）在thf（99毫升）中的混合物中加入2nlioh水溶液（25毫升，49.4毫摩尔）。将反应混合物在相同温度下搅拌过夜。在真空下蒸发溶剂，将水性残留物小心地用3nhcl水溶液酸化直至获得ph3。将该混合物用etoac（2x,150毫升）萃取。将合并的有机层经na2so4干燥，过滤并在真空下浓缩。粗3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸直接用于下一步骤。lcms:m/z372[m+h]+。
步骤2:4-(3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]-吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯
向3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸（4670毫克，12.54毫摩尔）、4-氨基苯甲酸叔丁酯（2424毫克，12.54毫摩尔）和dipea（6572微升，37.6毫摩尔）在thf（125毫升）中的混合物中加入hatu（4769毫克，12.54毫摩尔）。将该反应混合物在室温下搅拌2小时并在真空下浓缩。将该残留物用etoac稀释并用饱和nahco3水溶液洗涤。将有机层经na2so4干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法用0-20%etoac/己烷洗脱提纯，以产生4-(3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯。lcms:m/z547[m+h]+。
步骤3:4-(3-溴-5,7-二羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯
将4-(3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（6790毫克，12.40毫摩尔）和tbaf的1mthf溶液（25毫升，25毫摩尔）在thf（62毫升）中的溶液在室温下搅拌4小时。将该反应混合物在真空下浓缩。向残留物中加入水，然后将该混合物用etoac（2x,100毫升）萃取。将合并的有机层经na2so4干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法用0-90%etoac/己烷洗脱提纯，以产生4-(3-溴-5,7-二羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯。lcms:m/z449[m+h]+。
4-(3-溴-5,7-二氟-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯
4-(3-溴-5-氟-7-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯
在室温下向三乙胺三氢氟酸盐（407微升，2.422毫摩尔）和tea（169微升，1.211毫摩尔）在dcm（60.5毫升）中的溶液中相继加入二氟(吗啉代)锍四氟硼酸盐，xtalfluor-m（441毫克，1.816毫摩尔）和在dcm（4毫升）中的4-(3-溴-5,7-二羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（上述）（544毫克，1.211毫摩尔）。将该反应混合物在室温下搅拌24小时，用5%nahco3水溶液淬灭，并搅拌另外15分钟。然后将该混合物用dcm（2x,20.0毫升）萃取，将合并的有机层经na2so4干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法用0-100%etoac/己烷洗脱提纯，以产生4-(3-溴-5,7-二氟-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯。lcms:m/z453[m+h]+。也获得4-(3-溴-5-氟-7-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)-苯甲酸叔丁酯。lcms:m/z451[m+h]+。
3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸
步骤1:3-(2-氨基-5-氯苯基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯
在微波瓶中装入3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（5克，18.51毫摩尔）、4-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺（5.87克，23.14毫摩尔）、pdcl2(dppf)（2.71克，3.70毫摩尔）和k2co3（3.84克，27.8毫摩尔）。将该瓶加盖并用n2回填。在加入二氧杂环己烷（50毫升）和水（10毫升）后，将该混合物在100℃下加热2小时。将该混合物用水稀释并用ch2cl2/iproh（5:1,2x50毫升）萃取。将有机相经mgso4干燥，过滤，浓缩并在硅胶柱上用0-75%etoac/己烷提纯以产生3-(2-氨基-5-氯苯基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯.lcms:m/z317.14[m+h]+。
步骤2:3-(2-氨基-5-氯苯基)-7-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸
在0℃下将氢化钠（0.158克，3.95毫摩尔）部分添加到3-(2-氨基-5-氯苯基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（1.0克，3.16毫摩尔）在dmf（5毫升）中的溶液中。移除冰浴，然后将该混合物搅拌2小时。将该混合物用hcl（3.95毫升，3.95毫摩尔）中和并搅拌15分钟。将该混合物通过制备型反相hplc（c-18）用乙腈/水洗脱提纯，以产生3-(2-氨基-5-氯苯基)-7-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸。lcms:m/z305.12[m+h]+。
步骤3:3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]-吡啶-7-甲酸
将原甲酸三甲酯（1.045毫升，9.45毫摩尔）添加到3-(2-氨基-5-氯苯基)-7-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸（0.72克，2.363毫摩尔）在乙酸（10毫升）中的溶液中，接着在室温下搅拌30分钟。加入叠氮化钠（0.461克，7.09毫摩尔）并将反应混合物在室温下搅拌过夜。除去溶剂，将残留物通过制备型反相hplc（c-18）用乙腈/水洗脱提纯，以产生3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸。lcms:m/z358.09[m+h]+。
3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-胺
步骤1:3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基乙酸酯
向3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶（497毫克，2.509毫摩尔）在乙酸（1.5毫升）中的溶液中加入过氧化氢（0.220毫升，2.509毫摩尔）。将所得混合物在70℃下加热1.5小时，然后冷却至环境温度，并加入附加过氧化氢（0.220毫升，2.509毫摩尔）。在70℃下加热另外16小时后，通过添加饱和nahso3水溶液淬灭该反应并在真空中部分浓缩。将该残留物用na2co3(s)处理1小时，然后用chcl3研磨。将合并的有机研磨物（triturants）在真空中浓缩并将所得残留物悬浮在乙酸酐（2.0毫升，21.20毫摩尔）中并在90℃下加热16小时。将该混合物冷却至环境温度，在真空中浓缩到celite®上并通过基于硅胶的快速色谱法提纯（梯度洗脱；0%-100%etoac/己烷作为洗脱剂）以提供标题化合物。ms(esi)m/z=256[m+h]。
步骤2:3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-醇
向3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基乙酸酯（261毫克，1.02毫摩尔）在meoh（3.4毫升）中的溶液中加入k2co3（352毫克，2.55毫摩尔）在水（3.4毫升）中的溶液，并将所得混合物在环境温度下搅拌2小时。将该反应混合物用etoac稀释，用h2o和盐水洗涤。将有机物经mgso4干燥，过滤并在真空中浓缩以提供标题化合物。ms(esi)m/z=214[m+h]。
步骤3:2-(3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基)异吲哚啉-1,3-二酮
将3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-醇和邻苯二甲酰亚胺（106毫克，0.719毫摩尔）悬浮在thf（4.4毫升）中，加入三苯基膦（214毫克，0.818毫摩尔）并将该混合物冷却至0℃。逐滴加入偶氮二甲酸二叔丁酯（181毫克，0.785毫摩尔）在thf（1.5毫升）中的溶液。在5分钟后，移除冰浴并将该反应混合物温热至室温并将其搅拌36小时。将该反应混合物在真空中浓缩，将残留物通过基于硅胶的快速色谱法提纯（梯度洗脱；0%-50%etoac/己烷作为洗脱剂）以提供标题化合物。ms(esi)m/z=343[m+h]。
步骤4:3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-胺
将2-(3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基)异吲哚啉-1,3-二酮（252毫克，0.733毫摩尔）悬浮在etoh（6毫升）中并加入水合肼（120l，2.42毫摩尔）。将所得混合物回流30分钟，冷却至室温并倒入1nnaoh中。将所得混合物萃取w/dcm，将合并的有机物经mgso4干燥，过滤并在真空中浓缩以提供标题化合物。ms(esi)m/z=213[m+h]。
实施例1-4
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-1-氧负离子基（oxido）-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（实施例1）
步骤1:3-(5-氯-2-硝基苯基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（1-c）
在微波瓶中装入3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯(1-a)（1.0克，3.7毫摩尔）、(5-氯-2-硝基苯基)硼酸（1-b）（1.49克，7.40毫摩尔）、1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(ii)二氯甲烷配合物（0.605克，0.740毫摩尔）、thf（5毫升）和2m磷酸三钾水溶液（7.4毫升，14.8毫摩尔）。将该反应混合物在微波辐射下在100℃下加热60分钟。然后，通过lcms分析确定反应未完全。加入更多(5-氯-2-硝基苯基)硼酸（1.491克，7.40毫摩尔）并将反应混合物在120℃下加热60分钟。将该混合物冷却，经硅藻土过滤，将滤液分配在etoac和水之间。将有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。快速色谱法（80gsio2,0-100%etoac/己烷)产生标题化合物。ms(esi)m/z349.22(m+h)。
步骤2:3-(5-氯-2-硝基苯基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸（1-d）
向3-(5-氯-2-硝基苯基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（1-c）在thf（10毫升）中的溶液中加入2m氢氧化锂水溶液（1.38毫升，2.77毫摩尔）。将反应混合物在50℃下加热15分钟。然后，在真空下除去溶剂，通过添加甲苯和蒸发掉甲苯而将所得产物干燥以产生标题化合物的锂盐。ms(esi)m/z319.10(m+h)。该粗产物不经另外提纯立即用于下一步骤。
步骤3:4-(3-(5-氯-2-硝基苯基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（1-f）
向3-(5-氯-2-硝基苯基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸（1-d）在dmf中的溶液中加入4-氨基苯甲酸叔丁酯（1-e）（0.669克，3.46毫摩尔）和hatu（1.754克，4.61毫摩尔）。将该反应混合物在室温下搅拌1小时。将该混合物用水淬灭并用etoac萃取。将有机相用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩。将残留物通过基于硅胶（80g）的柱色谱法用etoac/己烷（0-80%）洗脱提纯，以提供标题化合物。ms(esi)m/z494.25(m+h)。
步骤4:4-(3-(2-氨基-5-氯苯基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（1-g）
将4-(3-(5-氯-2-硝基苯基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（1-f）（0.914克，4.05毫摩尔）、二水合氯化锡(ii)（0.50克，1.0毫摩尔）在etoac（4毫升）和etoh（2毫升）中的混合物在50℃下加热3小时。然后，lcms显示所需产物。将该混合物浓缩，然后用etoac稀释残留物。加入1nnaoh水溶液。取出有机相，然后用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩以提供标题化合物。ms(esi)m/z466.33(m+h)。粗产物不经另外提纯即用于下一步骤。
步骤5:4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]-吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（1-h）
将4-(3-(2-氨基-5-氯苯基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（1-g）（0.48克，0.828毫摩尔）与叠氮化钠（0.161克，2.483毫摩尔）合并，接着与三甲氧基甲烷（0.263克，2.483毫摩尔）和乙酸（6毫升）合并。将反应混合物在90℃下加热3小时。lcms显示形成所需产物。将该混合物冷却至室温并在真空下除去溶剂。将残留物用乙酸乙酯（50毫升）稀释，用水、盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并在减压下蒸发溶剂。将残留物通过基于40g硅胶的柱色谱法用etoac/己烷（0-50%）洗脱提纯以产生标题化合物。ms(esi)m/z517.29(m+h)。
步骤6:7-((4-(叔丁氧基羰基)苯基)氨基甲酰基)-3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶1-氧化物（1-i）
向4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（1-h）（140毫克，0.271毫摩尔）在meoh（3毫升）中的溶液中加入35%过氧化氢（0.237毫升，2.71毫摩尔）和甲基三氧化铼（trioxirhenium）(vii)（33.7毫克，0.135毫摩尔）。将反应混合物在室温下搅拌1小时。然后，lcms显示形成所需产物。将该混合物用etoac稀释，用10%nahso3水溶液洗涤。将有机相经na2so4干燥，过滤并浓缩。将该产物使用快速色谱法（0-100%etoac/己烷）提纯以产生标题化合物。一些柱级分含有过氧化副产物。使用反相hplc（gilson,waterssunfire™prepc18obd™5µm19x100mm柱，0-100%mecn/含0.05%tfa的水）实现进一步提纯以产生高纯度标题化合物。ms(esi)m/z533.40(m+h)。
步骤7:4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]-吡啶-7-基}-羰基)氨基]苯甲酸（实施例1）
将7-((4-(叔丁氧基羰基)苯基)氨基甲酰基)-3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶1-氧化物（75毫克，0.141毫摩尔）和1:1tfa在dcm中的溶液在室温下搅拌1小时。除去溶剂以提供粗产物。将少量粗产物使用反相hplc（gilson,waterssunfire™prepc18obd™5µm19x100mm柱,0-100%mecn/含0.05%tfa的水）提纯以产生高纯度标题化合物。ms(esi)m/z477.16(m+h)。1hnmr(dmso-d6)δ(ppm):9.68(s,1h),8.10(s,1h),7.78-7.95(m,6h),7.68(dd,2h),7.05(s,1h),4.40(t,1h),2.98(m,2h),2.35(m,2h)。
根据与上述那些类似的程序使用适当的原材料制备下列化合物并通过lcms表征。对于手性非外消旋化合物，通过手性sfc实现外消旋混合物的拆分。
实施例5-7
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5-羟基-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（实施例5–外消旋混合物）
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5-羟基-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（实施例6–外消旋混合物）
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5-羟基-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（实施例7–单一立体异构体）
步骤1:3-(2-氨基-5-氯苯基)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（5-c）
将3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（5-a）（1100毫克，2.75毫摩尔）、4-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺（5-b）（697毫克，2.75毫摩尔）、(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)二氯化钯(ii)（302毫克，0.412毫摩尔）和氟化铯（1252毫克，8.24毫摩尔）的混合物在圆底烧瓶中抽空并用n2吹扫。将这一过程重复三次。加入二氧杂环己烷（27.5毫升），并将该浆料混合物加热至110℃1小时。在冷却至室温后，将该反应混合物经硅藻土垫过滤，用etoac冲洗并将滤液在真空下浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法（40gsio2）用0-50%etoac/己烷洗脱提纯以产生3-(2-氨基-5-氯苯基)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯。ms(esi)m/z447.3(m+h)。
步骤2:3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-5-((叔丁基二甲基-甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（5-d）
在室温下将二碳酸二叔丁酯（602微升，2.59毫摩尔）添加到3-(2-氨基-5-氯苯基)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（5-c）（966毫克，2.161毫摩尔）、三乙胺（904微升，6.48毫摩尔）和dmap（52.8毫克，0.432毫摩尔）在dcm（21.6毫升）中的搅拌溶液中。该反应混合物在室温下搅拌过夜。在用lcms分析时观察到产物和原材料的混合物。加入另外0.50当量的二碳酸二叔丁酯。在另外3小时后，加入水。将该混合物用dcm（20.0毫升）萃取两次，将合并的有机层经na2so4干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法（40gsio2）用0-35%etoac/己烷洗脱提纯以产生标题化合物（ms(esi)m/z547.4(m+h)）以及显著量的二-boc保护产物，3-{2-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氯苯基}-5-{[叔丁基(二甲基)-甲硅烷基]氧基}-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（ms(esi)m/z647.4(m+h)）。该产物混合物不经进一步提纯即用于后续步骤。
步骤3:3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-5-((叔丁基二甲基-甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸（5-e）
向3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（5-d）（772毫克，1.411毫摩尔）和3-{2-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氯苯基}-5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（913毫克，1.411毫摩尔）在thf（7053微升）中的混合物中加入lioh（2821微升，5.64毫摩尔）。将该反应混合物在室温下搅拌4.5小时，然后在真空下蒸发挥发物。将残留物用etoac稀释，用1nhcl水溶液酸化直至实现ph4。将该混合物用水洗涤。将有机层经na2so4干燥，过滤并在真空下浓缩以提供标题化合物。ms(esi)m/z519.5(m+h)。含有显著量的二-boc材料的粗产物不经进一步提纯即直接用于下一步骤。
步骤4:4-(3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（5-g）
向3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-5-((叔丁基二甲基-甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸（5-e）（865毫克，1.397毫摩尔）、4-氨基苯甲酸叔丁酯（5-f）（270毫克，1.397毫摩尔）和dipea（732微升，4.19毫摩尔）在dmf（9313微升）中的混合物中一次性加入hatu（531毫克，1.397毫摩尔）并将反应混合物在室温下搅拌2小时。其随后用水淬灭，并在真空下浓缩。将水性残留物用etoac（40.0毫升）萃取两次，将合并的有机层经na2so4干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法用0-70%etoac/己烷洗脱提纯，以产生4-{[(3-{2-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氯苯基}-5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基)羰基]氨基}苯甲酸叔丁酯（ms(esi)m/z794.7(m+h)）和4-(3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（ms(esi)m/z694.9(m+h)）的混合物。该产物混合物不经另外提纯即用于下一步骤。
步骤5:4-(3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-5-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（5-h）
经注射器向在thf（5.2毫升）中的413毫克含有4-(3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)-氧基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（5-g）和4-{[(3-{2-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氯苯基}-5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基)羰基]氨基}苯甲酸叔丁酯的混合物中逐滴加入tbaf的1mthf溶液（676微升，0.676毫摩尔）。在加入水以淬灭该反应之前将该反应混合物在室温下搅拌2小时。在真空下蒸发挥发物，并将残留物再溶解在etoac中。在用饱和nacl水溶液洗涤后，将有机层经na2so4干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法（24gsio2）用0-70%etoac/己烷洗脱提纯以产生所需产物4-(3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-5-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（ms(esi)m/z580.4(m+h)）和4-{[(3-{2-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氯苯基}-5-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基)羰基]氨基}苯甲酸叔丁酯的混合物。该产物混合物不经进一步提纯即用于下一步骤。
步骤6:4-(3-(2-氨基-5-氯苯基)-5-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸（5-i）
在室温下经注射器向在dcm（5.16毫升）中的351毫克含有4-(3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-5-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（5-h）和4-{[(3-{2-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氯苯基}-5-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基)羰基]氨基}苯甲酸叔丁酯的混合物中逐滴加入tfa（3.00毫升，38.9毫摩尔）。将该反应混合物在相同温度下搅拌1小时，然后在真空下浓缩以提供标题化合物。ms(esi)m/z424.2(m+h)。将该粗残留物置于高真空下过夜并且不经进一步提纯即使用。
步骤7:4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-5-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]-吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸（5-j）
将4-(3-(2-氨基-5-氯苯基)-5-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸（5-i）（219毫克，0.517毫摩尔）、原甲酸三甲酯（171微升，1.55毫摩尔）和叠氮化钠（101毫克，1.55毫摩尔）在acoh（5.17毫升）中的混合物在室温下搅拌5小时。在真空下蒸发溶剂并向该粗产物中加入etoac。将有机层小心地用饱和nahco3水溶液洗涤（调节ph至6），经na2so4干燥，过滤并在真空下浓缩。粗产物4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-5-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸不经进一步提纯直接用于下一步骤。ms(esi)m/z477.2(m+h)。
步骤8:4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5-羟基-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（实施例5和实施例6）
向4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-5-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸（5-l）（246毫克，0.516毫摩尔）和甲基三氧化铼(vii)（64.3毫克，0.258毫摩尔）在meoh（5.16毫升）中的混合物中加入30%过氧化氢（527微升，5.16毫摩尔）。将该反应混合物在室温下搅拌1小时，然后加入10%nahso3水溶液以淬灭该反应。在真空下蒸发meoh。将该水性混合物用etoac（50.0毫升）萃取两次，将有机层经na2so4干燥，过滤并在真空下浓缩。将残留物通过反相hplc（waterssunfirec18柱,5u粒度,19x100mm,标准10%acn/h2o至37%acn/h2o，用0.16%tfa缓冲，流速25ml/min，经15分钟）提纯以产生作为4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5-羟基-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]-吡啶-7-基}羰基)-氨基]苯甲酸的两种单独的外消旋混合物的实施例5（ms(esi)m/z493.3(m+h)）（lcms保留时间=0.79min）和实施例6（(ms(esi)m/z493.2(m+h))（lcms保留时间=0.77min）。没有指定这两种产物的相对构型。
步骤9:4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5-羟基-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（实施例7）
对来自上文的更活性的外消旋混合物（实施例5）施以使用2x15cmad-h柱用30%etoh/co2（100巴，流速60ml/min）洗脱的手性sfc。分离4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5-羟基-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸的两种对映异构体，但只分离出一种（实施例7）。ms(esi)m/z493.3(m+h)（sfc保留时间=6.85min）。没有指定绝对构型。
实施例8-12
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二羟基-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（实施例8）
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二羟基-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（实施例9）
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二羟基-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（实施例10）
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二羟基-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（实施例11）
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二羟基-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（实施例12）
步骤1:4-(3-(2-氨基-5-氯苯基)-5,7-二羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]-吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（8-b）
将4-(3-溴-5,7-二羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（8-a）（1500毫克，3.34毫摩尔）、4-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺（1100毫克，4.34毫摩尔）、pdcl2(dppf)（366毫克，0.501毫摩尔）和氟化铯（1521毫克，10.02毫摩尔）的混合物在圆底烧瓶中在真空下抽空并用n2吹扫（该过程重复3次）。然后加入二氧杂环己烷（3.34e+04µl），并将该浆料混合物加热至110℃1小时。在冷却至室温后，将该反应混合物经硅藻土垫过滤，用etoac冲洗，将滤液在真空下浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法用0-100%etoac/己烷洗脱提纯，以产生4-(3-(2-氨基-5-氯苯基)-5,7-二羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（8-b）。lcms:m/z496[m+h]+。
步骤2:4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-5,7-二羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（8-c）
将4-(3-(2-氨基-5-氯苯基)-5,7-二羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（8-b）（1570毫克，3.17毫摩尔）、原甲酸三甲酯（1050微升，9.50毫摩尔）和叠氮化钠（617毫克，9.50毫摩尔）在acoh（32毫升）中的混合物在室温下搅拌过夜。在真空下蒸发溶剂，并向该粗产物中加入etoac。将有机层用饱和nahco3水溶液洗涤，经na2so4干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法用0-100%etoac/己烷洗脱提纯，以产生4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-5,7-二羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)-苯甲酸叔丁酯（8-c）。lcms:m/z549[m+h]+。
步骤3:4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二羟基-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（实施例8）
向4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-5,7-二羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（8-c）（1290毫克，2.350毫摩尔）和甲基三氧化铼（293毫克，1.175毫摩尔）在meoh（24毫升）中的混合物中加入过氧化氢（2057微升，23.50毫摩尔）。将该反应混合物在室温下搅拌3.5小时，然后加入10%nahso3水溶液以淬灭该反应。然后将合并的混合物用etoac（2x,50.0毫升）萃取，将有机层经na2so4干燥，过滤并在真空下浓缩。将粗产物直接用于下一步骤。lcms:m/z565[m+h]+。将该n-氧化物产物溶解在dcm（7.00毫升）中并经注射器逐滴加入2,2,2-三氟乙酸（7000微升，91毫摩尔）。将该反应物在室温下搅拌1.5小时，并在真空下浓缩。将该残留物通过rphplc（gilsonona19x100mm,watersxbridgec18柱,5µ粒度，线性梯度，标准5%acn/h2o至100%acn/h2o，用0.05%tfa缓冲@流速30ml/min，经15分钟）提纯以产生4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二羟基-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸的四种立体异构体的混合物（实施例8）。lcms:m/z509[m+h]+。
通过手性sfc进一步提纯（步骤1分离峰3和4–ic(3x15cm),50%meoh/co2,100bar,55ml/min；步骤2分离峰1和2–oz-h(2x25cm),60%meoh(0.1%dea)/co2,100bar,50ml/min）以下列sfc保留时间提供4种手性纯异构体：（实施例9rt=3.63min，实施例10rt=3.94min，实施例11rt=8.20min，实施例12rt=14.6min）。
实施例13-14
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5-氟-7-羟基-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（实施例13）
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5-氟-7-羟基-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（实施例14）
使用上文概述的用于合成实施例8的程序通过用13-a替代中间体8-a合成实施例13和14。通过反相hplc（gilsonona19x100mm,watersxbridgec18柱,5µ粒度，线性梯度，标准1%acn/h2o至100%acn/h2o，用0.05%tfa缓冲@流速30ml/min，经15分钟）提纯提供两种立体异构体的混合物。lcms:m/z511[m+h]+。通过手性sfc进一步提纯（as-h(2x15cm),35%meoh/co2,100bar,60ml/min）以下列sfc保留时间提供4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5-氟-7-羟基-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸的两种单独的立体异构体：（rt=1.93min（实施例13）,rt=2.68min（实施例14））。
实施例15-18
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二氟-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（实施例15）
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二氟-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（实施例16）
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二氟-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（实施例17）
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二氟-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（实施例18）
使用上述用于实施例8的程序通过用15-a替代中间体8-a合成实施例15-18。使用反相hplc（gilson,19x100mm,watersxbridgec18柱,5µ粒度,线性梯度，标准5%acn/h2o至100%acn/h2o，用0.05%tfa缓冲@流速30ml/min，经15分钟）产生作为4种立体异构体的混合物的15-d。lcms:m/z513[m+h]+。通过手性sfc进一步提纯（ic(4.6x250mm),50%2:1meoh:mecn/co2,100bar,2.1ml/min）以下列sfc保留时间提供4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二氟-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸的四种单独的立体异构体：（实施例15rt=2.78min,实施例16rt=3.24min,实施例17rt=4.43min,实施例18rt4=8.34min）。
实施例19
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-7-羟基-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸
步骤1:4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（19-b）
在0℃下将4-氨基苯甲酸叔丁酯（0.101克，0.524毫摩尔）在dmf（2毫升）中的溶液添加到3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]-吡啶-7-甲酸（19-a）（0.125克，0.349毫摩尔）、hunig碱（0.061毫升，0.349毫摩尔）和hatu（0.166克，0.437毫摩尔）在dmf（2毫升）中的溶液中，接着在室温下搅拌1小时。除去dmf，将该残留物在硅胶柱上用0-75%etoac/己烷提纯以产生4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯。lcms:m/z533.24[m+h]+。
步骤2:4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]-吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸（19-c）
将4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（19-b）（110毫克，0.206毫摩尔）在tfa（2.0毫升，26.0毫摩尔）和ch2cl2（2毫升）中的溶液在室温下搅拌1小时。除去溶剂并将残留物在真空中干燥以产生粗4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸（19-c），其不经进一步提纯即用于下一步骤。lcms:m/z477.13[m+h]+。
步骤3:4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-7-羟基-1-氧负离子基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]-吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（实施例19）
将4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-羟基-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸（19-c）（95毫克，0.2毫摩尔）和过乙酸（0.166毫升，1.000毫摩尔）在乙酸（2毫升）中的溶液在室温下搅拌过夜。除去溶剂，将残留物通过制备型反相hplc（c-18）用乙腈/水+0.1%tfa洗脱提纯，以产生标题化合物。lcms:m/z493.20[m+h]+。
实施例20
3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-(4-((甲氧基羰基)氨基)苯甲酰氨基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶1-氧化物
步骤1:(4-((3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基)氨基甲酰基)苯基)-氨基甲酸甲酯（20-a）
将3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-胺（121毫克，0.568毫摩尔）、4-((甲氧基羰基)氨基)苯甲酸（133毫克，0.681毫摩尔）和hatu（324毫克，0.852毫摩尔）悬浮在dmf（5毫升）中并加入diea（0.298毫升，1.704毫摩尔）。将所得混合物在室温下搅拌18小时。将该反应混合物用etoac稀释，用饱和licl水溶液、水和盐水洗涤。将有机层经mgso4干燥，过滤并在真空中浓缩。将残留物悬浮在dcm中，通过过滤分离固体沉淀物以产生标题化合物（20-a）。将该dcm滤液通过基于硅胶的快速色谱法进一步提纯（梯度洗脱；0%-50%etoac/己烷作为洗脱剂）以提供额外量的标题化合物（20-a）。ms(esi)m/z=390[m+h]。
步骤2:(4-((3-(2-氨基-5-氯苯基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基)氨基甲酰基)苯基)氨基甲酸甲酯（20-b）
在20毫升微波管中将(4-((3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基)氨基甲酰基)苯基)氨基甲酸甲酯（155毫克，0.397毫摩尔）、2-氨基-5-氯苯基硼酸、频哪醇酯（111毫克，0.437毫摩尔）、1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(ii)二氯甲烷配合物（58毫克，0.079毫摩尔）和氟化铯（181毫克，1.192毫摩尔）悬浮在1,4-二氧杂环己烷（7毫升）中。将该瓶压折（crimped），将该反应混合物用n2鼓泡（sparge），接着在油浴中在110℃下加热1小时。将该混合物冷却至室温，用etoac稀释，将所得混合物用水和盐水洗涤。分离层，将有机物经mgso4干燥，过滤并在真空中浓缩。将残留物通过基于硅胶的快速色谱法提纯（梯度洗脱；0%-50%etoac/己烷作为洗脱剂）以提供标题化合物（20-b）。ms(esi)m/z=437[m+h]。
步骤3:(4-((3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并-[b]吡啶-7-基)氨基甲酰基)苯基)氨基甲酸甲酯
将(4-((3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-基)氨基甲酰基)苯基)氨基甲酸甲酯（62毫克，0.142毫摩尔）、叠氮化钠（46毫克，0.710毫摩尔）和原甲酸三甲酯（78微升，0.710毫摩尔）悬浮在乙酸（3毫升）中并将该混合物在室温下搅拌18小时。将该反应混合物分配在etoac和水之间，分离层。将有机物用盐水洗涤，经mgso4干燥，过滤并在真空中浓缩，共蒸发w/甲苯。将该粗残留物通过基于硅胶的快速色谱法提纯（逐步梯度洗脱；2.2%-5%meoh/dcm作为洗脱剂）以提供标题化合物（20-c）。ms(esi)m/z=490[m+h]。
步骤4:3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-(4-((甲氧基羰基)氨基)苯甲酰氨基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶1-氧化物（实施例20）
根据之前在实施例1，步骤6中描述的用于制备化合物1-i的程序，用化合物20-c代替化合物1-h，制备实施例20。ms(esi)m/z=506[m+h]。
实施例21和22
7-((4-羧基苯基)氨基甲酰基)-3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-(环丙基甲基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶1-氧化物（实施例21和22）
步骤1:3-溴-7-(环丙基甲基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（21-a）
将3-溴-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（2.5克，9.3毫摩尔）溶解在thf（30毫升）中并冷却至-78℃。加入双(三甲基甲硅烷基)氨基锂（11毫升，11毫摩尔）。将该混合物搅拌1.5小时。缓慢加入(碘甲基)环丙烷（1.2毫升，13毫摩尔）。将该混合物在-78℃下搅拌1小时，然后在室温下搅拌过夜。通过添加饱和nh4cl水溶液（7毫升）淬灭该反应。将产物用乙酸乙酯萃取，并用盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥。在将其过滤和浓缩后，将粗产物通过基于80g预填充硅胶柱的柱色谱法用梯度0-30%etoac/异己烷洗脱提纯以产生产物(21-a)。ms(esi)m/z=325.9[m+h]。
步骤2:3-溴-7-(环丙基甲基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸锂盐（21-b）将meoh（15毫升）中的3-溴-7-(环丙基甲基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（21-a，1.5克，4.63毫摩尔）与lioh（6.94毫升，6.94毫摩尔）混合并加热至50℃30分钟。将该混合物浓缩至干，然后在真空炉中在50℃下进一步干燥3天。该产物不经进一步处理直接用于下一步骤。ms(esi)m/z=297.8[m+h]。
步骤3:4-(3-溴-7-(环丙基甲基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（21-c）
将dmf（1.50毫升）中的3-溴-7-(环丙基甲基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸锂（21-b，0.3克，1毫摩尔）与hatu（0.45克，1.2毫摩尔）混合。将该混合物加热至45℃。加入4-氨基苯甲酸叔丁酯（0.23克，1.2毫摩尔），然后将该混合物在45℃下加热过夜。在将其冷却至室温后，在搅拌的同时将该混合物倒入40毫升水中。将该产物用乙酸乙酯萃取。分离有机层并用盐水洗涤。在将其经无水硫酸钠干燥后，将该溶液浓缩。将粗产物通过基于50g预填充硅胶柱的柱色谱法用梯度0~60%etoac/异己烷洗脱提纯以产生产物(21-c)。ms(esi)m/z=472.9[m+h]。
步骤4:4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-(环丙基甲基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（21-d）
在微波反应瓶中将4-(3-溴-7-(环丙基甲基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（550毫克，1.17毫摩尔）与4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)（300毫克，1.17毫摩尔）、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)（171毫克，0.23毫摩尔）和乙酸钾（340毫克，3.5毫摩尔）混合。然后将该瓶加盖。通过真空除去空气，并用氮气回填（x3）。通过注射器引入1,4-二氧杂环己烷（5.5毫升）。然后将该混合物加热至110℃45分钟。在将其冷却至室温后，加入1-(4-氯-2-碘苯基)-1h-四唑（0.358克，1.167毫摩尔）和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)（0.085克，0.117毫摩尔）。将该反应瓶加盖。通过真空除去空气，并用氮气回填（x3）。用注射器引入k2co3溶液（1m，3.50毫升，3.50毫摩尔）。然后将该混合物加热至80℃2小时。将该混合物用乙酸乙酯稀释并过滤。分离有机层。在将其经无水硫酸钠干燥后，将该溶液浓缩。将粗产物通过基于100g预填充硅胶柱的柱色谱法用梯度10~100%etoac/异己烷洗脱提纯以产生产物(21-d)。ms(esi)m/z=571.1[m+h]。
步骤5:7-((4-(叔丁氧基羰基)苯基)氨基甲酰基)-3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-(环丙基甲基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶1-氧化物（21-e）
将dcm（3毫升）中的4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-(环丙基甲基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（300毫克，0.53毫摩尔）与mcpba（168毫克，0.68毫摩尔）混合，然后在室温下搅拌15小时。将该混合物浓缩并通过基于100g预填充硅胶柱的柱色谱法用0~80%梯度etoac/异己烷洗脱提纯以产生产物(21-e)。
ms(esi)m/z=587.1[m+h]。
步骤6:7-((4-羧基苯基)氨基甲酰基)-3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-(环丙基甲基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶1-氧化物（实施例21和22）
将dcm（2毫升）中的7-((4-(叔丁氧基羰基)苯基)氨基甲酰基)-3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-(环丙基甲基)-6,7-二氢-5h-环戊二烯并[b]吡啶1-氧化物（21-e，290毫克，0.49毫摩尔）与tfa（2.0毫升）混合，然后在室温下搅拌2小时。加入甲苯（15毫升）。将该混合物通过旋转蒸发器浓缩。将粗产物通过基于50g预填充硅胶柱的柱色谱法用0~8%梯度ch2cl2/meoh洗脱提纯以产生产物。通过基于ia柱的手性sfc色谱法用70%2:1meoh:mecn/co2洗脱分离该外消旋产物以产生两种对映异构体。实施例21是快速洗脱对映异构体，ms(esi)m/z=530.8[m+h]，且实施例22是缓慢洗脱对映异构体，ms(esi)m/z=530.8[m+h]。
因子xia测定
本发明化合物作为凝血因子xia抑制剂的有效性可以使用相关的纯化丝氨酸蛋白酶和合适的合成底物来测定。在不存在和存在本发明化合物的两种情况下测量相关丝氨酸蛋白酶对发色或荧光底物的水解速率。测定在室温或37℃下进行。底物的水解导致氨基三氟甲基香豆素(afc)的释放，通过在405nm激发下测量在510nm处的发射增加，通过荧光分光光度法监测。在抑制剂存在下荧光变化速率的降低指示酶抑制。这样的方法是本领域技术人员已知的。该测定的结果表示为抑制常数ki。
在ph7.4的含有150mmnacl、5mmcacl2和0.1%peg8000(聚乙二醇；jtbaker或fisherscientific)的50mmhepes缓冲液中进行因子xia测定。使用终浓度为40pm的纯化人因子xia(sekisuidiagnostics)和浓度为100μm的合成底物z-gly-pro-arg-afc，tfa盐(sigma#c0980)进行测定。
通过将底物储液稀释至含有酶或用抑制剂平衡的酶的溶液中至少十倍至终浓度≤0.1km进行活性测定。在对照实验中测定在酶和抑制剂之间实现平衡所需的时间。测量在不存在抑制剂(vo)或存在抑制剂(vi)时产物形成的初速度。假定为竞争性抑制，并且相比km/[s]、[i]/e和[i]/e(其中[s]、[i]和e分别代表底物、抑制剂和酶的总浓度)，个体可忽略不计，抑制剂从酶解离的平衡常数(ki)可以从vo/vi对[i]的依赖性获得，如下式所示。
vo/vi=1+[i]/ki
该测定显示的活性表明本发明化合物可以治疗上用于治疗或预防患有不稳定型心绞痛、急性冠状动脉综合征、难治性心绞痛、心肌梗死、短暂性脑缺血发作、心房颤动、中风例如血栓性中风或栓塞性中风、静脉血栓形成、冠状动脉和脑动脉血栓形成、脑和肺栓塞、动脉粥样硬化、深静脉血栓形成、弥散性血管内凝血、以及再通血管的再闭塞或再狭窄的患者的各种心血管和/或脑血管血栓栓塞性病状。
因子xia抑制
激肽释放酶测定
本发明化合物作为激肽释放酶抑制剂的有效性可以使用相关的纯化丝氨酸蛋白酶和合适的合成底物来测定。在不存在和存在本发明化合物的两种情况下测量相关丝氨酸蛋白酶对发色或荧光底物的水解速率。测定在室温或37℃下进行。底物的水解导致氨基三氟甲基香豆素(afc)的释放，通过在405nm激发下测量在510nm处的发射增加，通过荧光分光光度法监测。在抑制剂存在下荧光变化速率的降低指示酶抑制。这样的方法是本领域技术人员已知的。该测定的结果表示为抑制常数ki。
在ph7.4的含有150mmnacl、5mmcacl2和0.1%peg8000(聚乙二醇；fisherscientific)的50mmhepes缓冲液中进行激肽释放酶测定。使用终浓度为0.5nm的纯化人血浆激肽释放酶(enzymeresearchlaboratories)和浓度为100mm的合成底物乙酰基-k-p-r-afc(sigma#c6608)进行测定。
通过将底物储液稀释至含有酶或用抑制剂平衡的酶的溶液中至少十倍至终浓度≤0.2km进行活性测定。在对照实验中测定在酶和抑制剂之间实现平衡所需的时间。在线性进展曲线条件下进行反应，并在405ex/510emnm下测量荧光增加。将值转化为对照反应的抑制百分比(减去100%抑制值后)。ic50通过来自四参数对数曲线拟合的拐点确定。使用chengprusoff方程，ki=ic50/(1+([s]/km))计算ki。
该测定显示的活性表明本发明化合物可以治疗上用于治疗或预防患有不稳定型心绞痛、急性冠状动脉综合征、难治性心绞痛、心肌梗死、短暂性脑缺血发作、心房颤动、中风例如血栓性中风或栓塞性中风、静脉血栓形成、冠状动脉和脑动脉血栓形成、脑和肺栓塞、动脉粥样硬化、深静脉血栓形成、弥散性血管内凝血、以及再通血管的再闭塞或再狭窄的患者的各种心血管和/或脑血管血栓栓塞性病状。
激肽释放酶抑制