一种新型果胶纳米药物的制备方法与流程

本发明属于生物制药和纳米技术领域，涉及药物递送系统，具体涉及一种新型果胶纳米药物的制备方法。

背景技术：

果胶（Pectin）是存在于植物细胞壁中的多糖类大分子物质，它与聚乙二醇同为食品级高分子营养物质，疏水药物用高分子八臂聚乙二醇和果胶纳米载体共同包载，递送到靶细胞，可以达到缓慢释放药物的目的，自组装过程包裹另一种药物，达到互相促进的作用，可以实现两种药物的协同作用，从而增加疗效。

双氢青蒿素（DHA）是一种非生物碱倍半萜内脂，存在与从植物黄花蒿茎叶中，其作用方式是通过其内过氧化物（双氧）桥，经血红蛋白分解后产生的游离铁所介导，产生不稳定的有机自由基及/或其他亲电子的中介物，与体内蛋白质形成共价加合物，具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡、抗突变、保肝、调节机体免疫等多种生物活性。

技术实现要素：

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种新型果胶纳米药物的制备方法，果胶与载药多臂聚乙二醇在水介质中可自组装形成纳米粒子，解决DHA的水溶相差，生物利用度低等问题，使用果胶和八臂聚乙二醇为药物载体，靶向性好，载药量高，避免药物的不完全释放和突释情况对患者带来的毒副作用。

一种新型果胶纳米药物的制备方法的技术方案如下：

一种新型果胶纳米药物的制备方法，其特征在于，载有双氢青蒿素（DHA)的八臂聚乙二醇（8ARM-PEG-COOH）与果胶（PET）通过酯键相连。

所述的一种新型果胶纳米药物的制备方法，其纳米粒子中DHA的载药量为1%-40%，纳米粒子半径10-200nm。

本发明所述的一种新型果胶纳米药物的制备方法，包括以下步骤：

（1）用20ml四氢呋喃溶解1.0g的八臂聚乙二醇，加入1.0g激活剂 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC），0.12g催化剂4-二甲氨基吡啶（DMAP），搅拌，再加入0.1～10mol双氢青蒿素反应40～48h，反应物混合物旋蒸，透析过夜，透析液冷冻干燥，得到粉末A；

（2）取0.2g步骤（1）中的粉末A溶于DMSO，加入0.2g EDC和0.02g DMAP，反应30min，然后加入一定量的果胶，反应30～50h，得到反应混合液；

（3）将步骤（2）中得到的反应混合液加入乙醚，得到絮状沉淀，离心洗涤多次，真空干燥，得到果胶-载药八臂聚乙二醇粉末B；

（4）取20mg步骤（3）中粉末B和5mg 10-羟基喜树碱溶于5ml二甲基亚砜，溶解5min，然后逐滴滴入去离子水中，所得溶液透析过夜，冷冻干燥，得到所述果胶-多臂聚乙二醇纳米粒子。

优选地，步骤（1）步骤（2）所述的八臂聚乙二醇与双氢青蒿素的摩尔比为1:0.5～1:10；

优选地，步骤（2）所述的果胶与载药八臂聚乙二醇的摩尔比为0.1:0.01～0.1:1；

优选地，步骤（2）所述的果胶-多臂聚乙二醇自组装纳米粒子粒径10-200nm；

优选地，步骤（2）所述的果胶-多臂聚乙二醇自组装纳米粒子的质量百分比0.01%-90%；

优选地，（1）-（4）所述的一种新型果胶纳米药物的制备方法，具有缓释功能、癌靶向性及稳定的粒径大小。

本发明以果胶与八臂聚乙二醇为药物载体，DHA与亲水线性聚合物八臂聚乙二醇键接，所得的果胶-载药八臂聚乙二醇的聚合物自组装制备纳米粒子，结构比较稳定，制作工艺简单，实现药物的水溶性和缓释功能，以及对癌细胞的靶向性，并具有较高载药量，纳米药物的粒径为10-200nm。

相对现有技术，本发明具有以下有益效果：

本发明的一种新型果胶纳米药物具有癌靶向性，生物相容性好，毒副作用低，具有缓释功能，果胶-载药八臂聚乙二醇的聚合物在自组装的同时还包裹HCPT，增大了载药量，联合DHA和HCPT靶向作用于肿瘤部位，以达到诱导肿瘤凋亡的目的。本发明的药物合成及自组装成纳米药物过程操作简单，只需在水介质中形成纳米粒子，纳米粒子稳定。

附图说明

图1为合成高分子化合物PET-8ARM-PEG-DHA的核磁图

图2为纳米粒子的透射电镜形貌图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，对本发明作进一步说明。

实施例1、一种新型果胶纳米药物的制备方法：

（1）PET的乙酰化

取一定量的PET（酯化度50%～75%），缓慢加入冰醋酸、乙酸酐和硫酸，冰浴下反应一段时间，然后升温至50℃，搅拌至溶液澄清，混合物旋蒸，乙醇洗至中性，冷冻干燥，得到乙酰化果胶粉末A。

（2）8ARM-PEG-DHA的合成

用20ml四氢呋喃溶解1.0g的八臂聚乙二醇，加入1.0g激活剂 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC），0.12g催化剂4-二甲氨基吡啶（DMAP），搅拌，再加入2mol双氢青蒿素反应40～48h，反应物混合物旋蒸，透析过夜，透析液冷冻干燥，得到粉末B；

（3）PET-8ARM-PEG-DHA的合成

取0.2g步骤（2）中的粉末B溶于DMSO，加入0.2g EDC和0.02g DMAP，反应30min，然后加入0.1g果胶，反应30～50h，得到反应混合液；

（4）PET-8ARM-PEG-DHA的纯化

将步骤（3）中得到的反应混合液加入乙醚，得到絮状沉淀，离心洗涤多次，真空干燥，得到果胶-载药八臂聚乙二醇粉末C；

（5）PET-8ARM-PEG-DHA和HCPT的自组装

取30mg步骤（4）中粉末B和8mg 10-羟基喜树碱溶于5ml二甲基亚砜，搅拌溶解5min，然后逐滴滴入去离子水中，纳米粒子溶液在PBS溶液中透析12h，每3h换一次透析液，所得溶液透析过夜，冷冻干燥，得到所述果胶-八臂聚乙二醇纳米粒子，粒径大小为10～80nm。

实施例2、一种新型果胶纳米药物的制备方法：

在本实例中，通过与实施例1相同的合成方法及步骤，八臂聚乙二醇与双氢青蒿素的摩尔比为1:4，所述的果胶与载药八臂聚乙二醇的摩尔比为1:4测得粒径大小为20～100nm。